一種從田基黃中提取分離黃酮類化合物的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥材有效部位提取工藝技術領域，具體涉及一種從田基黃中提取分 離黃酮類化合物的方法。
【背景技術】
[0002] 田基黃為藤黃科金絲桃屬植物地耳草（HypercumjaponicumThunb.)的干燥全 草，屬一年生草本，野生于原野濕地，主產(chǎn)于廣西、廣東、湖南、江西、云南、浙江等省區(qū)，系 我國傳統(tǒng)中藥，味甘、微苦、性涼，歸肝、膽、大腸經(jīng)，具有清熱利濕、散瘀止痛、消腫解毒的功 效，民間應用較廣泛，多用于治療小兒黃疸或黃疸性肝炎、泄瀉、痢疾、毒蛇咬傷、癰癤腫痛、 跌打損傷等。現(xiàn)代藥理學實驗證明，田基黃具有多方面的藥理作用，包括抗腫瘤、免疫調節(jié)、 抑菌、保肝、抗病毒、止血、抗瘧等。臨床用于治療病毒性肝炎，目前田基黃提取物已被制成 注射劑用于治療急、慢性肝炎。
[0003] 田基黃次生代謝產(chǎn)物極為豐富，近年來，很多學者將研究重點放在田基黃成分分 析和鑒定方面，并取得了很大進展。采用不同的溶劑、不同的方法分別從田基黃藥材中分離 到了許多新的化合物。據(jù)報道[1.傅亢.田基黃活性成分的研究[D]第二軍醫(yī)大學碩士論 文.2005 ;2.金媛媛.田基黃的化學成分研究[D]浙江大學碩士論文.2006 ;3.黃園.藥 用植物田基黃化學成分的研究[D]廣西大學碩士論文.2006 ;4.郁建平，古練權，周欣.田 基黃莖、花葉揮發(fā)油化學成分的研究[J]中國藥學雜志，2001，36(3):199.]田基黃全草含 (類）黃酮類、內(nèi)酯類、間苯三酚衍生物（地耳草素A、B、C、D)、蒽醌類、萜類、揮發(fā)油、維生 素等多種成分，其中黃酮類化合物為其主要藥效成分。
[0004] 目前，田基黃中黃酮類化合物的提取工藝比較繁雜，提取成本較高，專利文獻 CN1943605A公開了一種田基黃提取物的制備方法，總黃酮含量大于50%，然而該方法采用 陶瓷膜和有機膜濾過，導致提取操作較復雜、成本較高，很難應用于工業(yè)化生產(chǎn)；尤其是水 提醇沉法中醇沉后的純化步驟，工藝更復雜、步驟更繁瑣。
[0005] 因此，研究一種操作簡便、提取工藝流程較短、收率較高、成本較低、綠色環(huán)保、易 于工業(yè)化生產(chǎn)的從田基黃中提取分離特定成分黃酮類化合物的方法具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為此，本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種操作簡便、提取工藝流程較短、收 率較高、成本較低、綠色環(huán)保、易于工業(yè)化生產(chǎn)的從田基黃中提取分離黃酮類化合物的方 法。
[0007] 為解決上述技術問題，本發(fā)明是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：
[0008] 本發(fā)明提供一種從田基黃中提取分離黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：
[0009] (1)稱取一定量的田基黃藥材，提取2-4次，每次加入8-12倍量水，每次加熱提取 0. 5-1. 5 小時；
[0010] (2)將所述步驟（1)的提取液進行過濾，收集合并濾液，濃縮至相對密度在1. 10~ 1. 40間的田基黃藥材稠膏，為提取物A;
[0011] (3)向所述提取物A中加入一定量乙醇或甲醇，至乙醇或甲醇濃度為60%-90%， 混勻，靜置分層后過濾上層溶液層，回收溶劑，濃縮至半固體狀浸膏，得提取物B;
[0012] (4)向所述提取物B中加入0.5-2.0倍量水，攪拌均勾，濾除不溶性物，濾液在 0°C~30°C放置2小時以上析出沉淀，過濾，收集濾餅，干燥，即得黃酮類化合物。
[0013] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：
[0014] (1)稱取一定量的田基黃藥材，提取3次，每次加入12倍量水，每次加熱提取0. 5 小時；
[0015] (2)將所述步驟（1)的提取液進行過濾，收集合并濾液，濃縮至相對密度在1. 20~ 1. 30間的田基黃藥材稠膏，為提取物A;
[0016] (3)向所述提取物A中加入一定量乙醇或甲醇，至乙醇或甲醇濃度為60%-80%， 混勻，靜置分層后過濾上層溶液層，回收溶劑，濃縮至半固體狀浸膏，得提取物B;
[0017] (4)向所述提取物B中加入0. 5-1. 0倍量水，攪拌均勻，濾除不溶性物，濾液在 0°C~20°C放置2小時以上析出沉淀，過濾，收集濾餅，干燥，即得黃酮類化合物。
[0018] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：
[0019] (1)稱取一定量的田基黃藥材，提取2次，每次加入12倍量水，每次加熱提取0. 5 小時；
[0020] (2)將所述步驟（1)的提取液進行過濾，收集合并濾液，濃縮至相對密度在1. 40的 田基黃藥材稠膏，為提取物A;
[0021] (3)向所述提取物A中加入一定量乙醇或甲醇，至乙醇或甲醇濃度為70% -80%， 混勻，靜置分層后過濾上層溶液層，回收溶劑，濃縮至半固體狀浸膏，得提取物B;
[0022] (4)向所述提取物B中加入1. 0-2. 0倍量水，攪拌均勾，濾除不溶性物，濾液在 10°C~20°C放置2小時以上析出沉淀，過濾，收集濾餅，干燥，即得黃酮類化合物。
[0023] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，所述干燥采用冷凍干燥法、噴霧干燥 法或真空干燥法。
[0024] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，所述濃縮包括常壓或減壓條件下的煎 煮濃縮、薄膜蒸發(fā)及旋轉蒸發(fā)。
[0025] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，所述黃酮類化合物的含量為>70%。
[0026] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，所述黃酮類化合物的含量為>80 %。
[0027] 本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法，還包括一種黃酮類化合物的質量檢測 方法：精密稱取恒重后白前苷B對照品（經(jīng)柱色譜純化自制）約10mg于10ml容量瓶，加 少量甲醇超聲溶解后，定容至刻度線，混勻即為白前苷B對照品溶液。精密稱取制備得到 的田基黃黃酮類化合物，樣品約25mg，加甲醇溶于25ml容量瓶，加少量甲醇超聲溶解后，定 容至刻度線，混勻即為供試品溶液。進行HPLC法檢測（色譜條件：色譜柱：DioneX，C18， 3*150mm，3ym;流動相：甲醇：水（醋酸調pH值=2. 7) = 40:60 ;柱溫：30°C;檢測波長： 255nm;流速0. 4ml/min;進樣量5y1)，槲皮素相對白前苷B的校正因子為0. 74。黃酮類化 合物樣品色譜圖如圖1。本發(fā)明上述提取分離黃酮類化合物的方法制備得到的黃酮類化合 物。
[0028] 本發(fā)明的上述技術方案相比現(xiàn)有技術具有以下優(yōu)點：
[0029] 本發(fā)明提取分離黃酮類化合物的方法，通過選擇加水量、提取時間、提取次數(shù)、提 取所用乙醇或甲醇的濃度、最后一步放置時間、干燥方法、濃縮方法等，通過4步即可以較 高含量從田基黃中提取分離黃酮類化合物，更為重要的是，對于一般的中草藥來說，水提醇 沉濾液回收后得到的浸膏是非常容易溶解于水的，而田基黃的水提醇沉物并不易溶于水， 因而影響了后續(xù)的純化步驟，而發(fā)明人通過簡單的方法達到了快速純化、純化收率高的效 果。對于在天然產(chǎn)物中含量約為0. 1 %左右的成分，通過單純的水提醇沉及后續(xù)的簡單純化 步驟，就可得到較高純度的提取物。操作簡便，縮短了提取工藝流程，降低了提取成本，綠色 環(huán)保，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0030] 圖1黃酮類化合物樣品色譜圖
【具體實施方式】
[0031] 實施例1
[0032] 本實施例提取分離黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：
[0033] (1)稱取1000g田基黃藥材，提取3次，每次加入12倍量水，每次加熱提取0. 5小 時；
[0034] (2)將所述步驟（1)的提取液進行過濾，收集合并濾液，濃縮至相對密度為1. 30的 田基黃藥材稠膏，為提取物A;
[0035] (3)向所述提取物A中加入一定量乙醇，至乙醇濃度為70%，混勻，靜置分層后過 濾上層溶液層，回收溶劑，濃縮至半固體狀浸膏，得提取物B;
[0036] (4)向所述提取物B中加入2. 0倍量的水，攪拌均勾，濾除不溶性物，濾液在30°C 放置2小時析出沉淀，過濾，收集濾餅，真空干燥法干燥，即得黃酮類化合物，所述黃酮類化 合物的含量為>80%。
[0037] 實施例2
[0038] 本實施例提取分離黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：
[0039] (1)稱取1000g田基黃藥材，提取2次，每次加入12倍量水，每次加熱提取0. 5小 時；
[0040] (2)將所述步驟（1)的提取液進行過濾，收集合并濾液，濃縮至相對密度為1. 10的 田基黃藥材稠膏，為提取物A;
[0041] (3)向所述提取物A中加入一定量乙醇，至乙醇濃度為60%，混勻，靜置分層后過 濾