一種兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于多肽自組裝領(lǐng)域，特別涉及一種安全性高的氨基酸制備的寡聚多肽用作主要構(gòu)筑材料，與抗腫瘤藥物偶聯(lián)，制備為寡聚多肽藥物結(jié)合物(Amphiphilic peptidedrug conjugate:APD)〇
【背景技術(shù)】
[0002]在我國，肝癌在各類腫瘤的年發(fā)病率中位居第三，達25.7/10萬人，因肝癌死亡人數(shù)達23.7/10萬人，是危害我國人民健康的重大疾病之一。由于肝癌患者常并發(fā)肝纖維化，難以實施手術(shù)切除，故常用放化療進行治療。動脈栓塞是臨床上常用的肝癌化療手段，可在阻斷腫瘤組織血液供應(yīng)同時實現(xiàn)化療藥物的局部蓄積。然而，由于肝門靜脈血供的存在以及腫瘤部位血管組織和枝化狀況的高度紊亂，動脈栓塞難以完全阻斷肝癌部位的血液供應(yīng)，而化療藥物的低選擇性導(dǎo)致藥物在殺傷腫瘤細胞同時損害正常肝組織，導(dǎo)致肝功能損傷進一步加劇。此外，肝癌細胞膜多藥耐藥蛋白(如Ρ-糖蛋白)表達較高，能將各種抗腫瘤藥物(也包括分子靶向藥物，如索拉非尼)從胞內(nèi)轉(zhuǎn)運至胞外，表現(xiàn)出天然的耐藥特性，且化療藥物可誘導(dǎo)這些蛋白的表達，進一步加劇肝癌細胞耐藥能力，降低藥物的治療效果。因此，如何實現(xiàn)化療藥物的精確性給藥，并克服肝癌細胞的天然耐藥性是肝癌治療的重要研究方向。
[0003]阿霉素具有良好的體外抗腫瘤活性，然而其臨床應(yīng)用往往受限于其載體和藥物本身蓄積于非病灶部位所帶來的嚴重副作用。有鑒于此，通過共價鍵或非共價鍵修飾方式改善其體內(nèi)藥物動力學(xué)行為的研究已成為抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點之一。
[0004]選擇性地使用大劑量抗腫瘤藥物殺滅腫瘤，是抗腫瘤治療追求的目標。由于實體腫瘤生長過程存在著血管供應(yīng)相對較少、間質(zhì)張力高、血液灌注不良等生理特征，使實體腫瘤在生長過程中受到一定的制約，但也給腫瘤的藥物治療帶來了一定的困難。常規(guī)的全身性系統(tǒng)化療往往無法在腫瘤組織中達到有效的藥物濃度，要提高腫瘤組織中藥物濃度必須加大藥物劑量，而傳統(tǒng)意義上的抗腫瘤藥都具有一定的全身毒副作用，加大藥物劑量勢必使病人不能耐受，長時間化療還會產(chǎn)生腫瘤耐藥等問題。還有的腫瘤組織所在的臟器與人體的內(nèi)環(huán)境之間存在著一些屏障，如血腦屏障等，故即使進行區(qū)域性動脈灌注化療，有時也不一定能達到有效療效。但是如果在腫瘤內(nèi)直接注射抗腫瘤藥，就有可能克服現(xiàn)有化療方法的許多不足之處。
[0005]目前許多人認為抗腫瘤藥物持續(xù)性靜脈滴注療效好于靜脈推注，即理想的用藥方法是使抗腫瘤藥以一定的濃度和時間在腫瘤組織內(nèi)充分發(fā)揮作用，同時減少毒副作用。并且隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，先進的醫(yī)療儀器和醫(yī)療診斷技術(shù)的不斷提高，都為肝癌的瘤內(nèi)注射治療提供了有利的條件支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有藥物抗腫瘤制劑不足的問題，提供一種載藥量高、生物相容性好、在病變部位駐留時間長的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，該兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物能夠在疏水作用、氫鍵和靜電作用的引導(dǎo)下，在溶液中自發(fā)形成高度有序的納米結(jié)構(gòu)，且隨著環(huán)境的變化可以進一步形成凝膠。
[0007]技術(shù)方案:為了達到以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下:
[0008]一種兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，藥物通過化學(xué)結(jié)構(gòu)上的羥基或氨基直接與寡聚多肽c端的羧基縮合形成酯鍵或酰胺鍵，或者藥物通過化學(xué)結(jié)構(gòu)上的羧基與寡聚多肽N端的氨基縮合形成酰胺鍵，或者藥物通過一定的鏈接分子與寡聚多肽結(jié)合。
[0009]作為優(yōu)選方案，以上所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，所述的藥物為阿霉素，紫杉醇及其衍生物。
[0010]作為優(yōu)選方案，以上所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，所述的寡肽含有5種氨基酸，分別為芴甲氧羰?；Ｗo的賴氨酸，甘氨酸，苯丙氨酸，精氨酸和色氨酸。
[0011]作為優(yōu)選方案，以上所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，其特征在于，所述的氨基酸的數(shù)目為5個。
[0012]本發(fā)明所述的種兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，優(yōu)選如下結(jié)構(gòu)如:DoX-FmoC-KGFRWR(阿霉素-芴甲氧羰?；Ｗo的賴氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-色氨酸-精氨酸)可以很好的形成纖維，進一步形成凝膠。作為優(yōu)選方案，以上所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物，所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物能夠自組裝形成纖維或形成凝膠。
[0013]—種腫瘤原位注射制劑，它含有本發(fā)明所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物。
[0014]本發(fā)明提供的腫瘤原位注射制劑，所述寡聚多肽藥物結(jié)合物能夠在體內(nèi)發(fā)生緩慢降解，釋放藥物發(fā)揮藥效。
[0015]本發(fā)明所述的腫瘤原位注射制劑，所述寡聚多肽藥物結(jié)合物能夠用于實體瘤原位注射。
[0016]本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明所述的兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物在制備具有抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，如用于制備治療實體瘤藥物中的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明所述的原位制劑在制備抗腫瘤藥物中達到緩釋長效治療腫瘤的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明另一個發(fā)明目的在于提供寡聚多肽藥物結(jié)合物的制備方法。
[0019]有益效果:本發(fā)明提供的寡聚多肽藥物結(jié)合物及其制備方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
[0020](1)本發(fā)明的制備方便快捷、操作簡單和產(chǎn)率較高。
[0021](2)本發(fā)明以安全性高的氨基酸制備的寡聚多肽為主要構(gòu)筑材料，與抗腫瘤藥物偶聯(lián)，制備為寡聚多肽藥物結(jié)合物，具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，載藥量高，且均勻可控等特點。
[0022](3)本發(fā)明提供了一種利用新型多肽藥物結(jié)合物自組裝構(gòu)建納米凝膠，豐富了腫瘤原位注射的制劑的種類。
【附圖說明】
[0023]圖1為實施例1制備的Dox-Fmoc-KGFRWR的結(jié)構(gòu)式。
[0024]圖2為實施例1制備的Dox-Fmoc-KGFRWR高效液相色譜圖。
[0025]圖3為實施例1制備的Dox-Fmoc-KGFRWR質(zhì)譜圖。
[0026]圖4為實施例2中Dox-Fmoc-KGFRWR建立的標準曲線。
[0027]圖5為實施例3中Dox-Fmoc-KGFRWR在不同pH值下自組裝的透射電鏡顯微鏡檢測圖。
[0028]圖6為實施例4中Dox-Fmoc-KGFRWR在不同pH值下對自組裝體電位的影響。
【具體實施方式】
[0029]實施例1:由芴甲氧羰?；Ｗo的賴氨酸，甘氨酸，苯丙氨酸，精氨酸以及色氨酸和抗腫瘤藥物阿霉素制備兩親性寡聚多肽藥物結(jié)合物(Dox-Fmoc-KGFRWR:阿霉素-芴甲氧羰?；Ｗo的賴氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-色氨酸-精氨酸)
[0030]1、材料
[0031]用芴甲氧羰?；?Fmoc)和4_甲基-三苯甲基(Mtt)保護的賴氨酸(K)、叔丁氧羰基(Boc)保護的甘氨酸(G)、Boc保護的苯丙氨酸、Boc保護的精氨酸以及色氨酸、N，N’_ 二異丙基碳二亞胺(DIC、99% )、1-羥基苯并三唑(H0Bt、99% )、2_(1Η_苯并三唑)-Ν，Ν，Ν’，Ν’-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU、99% )、Ν，Ν-二甲基氨基吡啶(DMAP、99%)、9-芴甲氧羰基(Fmoc、99%