一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用

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一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：黃芪100?150重量份，黨參80?120重量份，丹參60?100重量份，葛根60?100重量份，淫羊藿60?100重量份，山楂60?100重量份，地黃40?80重量份，當歸40?80重量份，黃連40?80重量份，醋延胡索40?80重量份，靈芝40?80重量份，人參20?30重量份，炙甘草20?30重量份。本發(fā)明藥物直接抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成；干擾巨噬細胞中NOD1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化；抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP?1；顯著上調(diào)巨噬細胞表面CD16和CD68的表達，促進巨噬細胞由M1型向M2型轉(zhuǎn)變。
【專利說明】
一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物的新用途，具體地，本發(fā)明涉及一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，屬于中藥應用領域。
【背景技術】
[0002] 動脈粥樣硬化(AS)是一組稱為動脈硬化的血管病中最常見，最重要的一種，是導致冠心病等心腦血管疾病的最主要的致病因素，是發(fā)達國家的主要死亡原因、也是我國的主要死亡原因。
[0003] 動脈粥樣硬化的病因及發(fā)病機制極為復雜，目前關于動脈粥樣硬化的病因較為一致的看法是因脂質(zhì)代謝紊亂、炎癥細胞浸潤、氧化應激、血管內(nèi)皮細胞損傷、平滑肌細胞激活等多種機制相互作用的結果，最終導致斑塊的破裂，造成嚴重心腦血管疾病。
[0004] 目前主要的治療手段是使用血管生成抑制劑和降脂藥物，雖然介入治療可以使血管再通，但是再狹窄仍然是目前無法解決的醫(yī)學難題，尤其是遠期療效并無明顯優(yōu)勢。在現(xiàn) 代醫(yī)學尚無理想治療藥物的情況下，傳統(tǒng)醫(yī)學，尤其是中醫(yī)藥在防治動脈粥樣硬化的研究已成為該領域研究的熱點。
[0005] 本發(fā)明是在CN 101953935專利的基礎上進行的改進發(fā)明，本發(fā)明引用的專利文件記載的內(nèi)容。上述專利未公開該藥物在治療抗動脈粥樣硬化中的應用以及該藥物的抗動脈粥樣硬化的相關機制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一個目的是提供一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：
[0007] 黃芪100-150重量份，黨參80-120重量份，丹參60-100重量份，葛根60-100重量份，淫羊藿60-100重量份，山楂60-100重量份，地黃40-80重量份，當歸40-80重量份，黃連40-80 重量份，醋延胡索40-80重量份，靈芝40-80重量份，人參20-30重量份，炙甘草20-30重量份。
[0008] 本發(fā)明的第二個目的是提供該藥物在制備抑制巨噬細胞攝取脂質(zhì)的藥物中的應用。
[0009] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述的巨噬細胞為THP-1源性巨噬細胞，所述脂質(zhì)為氧化型低密度脂蛋白（〇x-LDL)。
[0010] 經(jīng)過大量的實驗驗證和分析，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物能明顯抑制巨噬細胞對脂質(zhì)的攝取。
[0011]本發(fā)明的第三個目的是提供該藥物在制備使N0D1和Rip2mRNA在巨噬細胞中的表達下調(diào)的藥物中的應用。
[0012] 經(jīng)過大量的實驗驗證和分析，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的藥物干預后，N0D1和Rip2mRNA在巨噬細胞中的表達下調(diào)。
[0013] 本發(fā)明的第四個目的是提供該藥物在制備使Rip2蛋白在巨噬細胞中的表達下調(diào) 的藥物中的應用。
[0014]經(jīng)過大量的實驗驗證和分析，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的藥物干預后，Rip2蛋白表達下降。
[0015]本發(fā)明的第五個目的是提供該藥物在制備抑制巨噬細胞分泌MCP-1和/或MIF的藥物中的應用。
[0016] 經(jīng)過大量實驗驗證和分析，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的藥物能顯著抑制巨噬細胞分泌MCP-1和/ 或 MIF。
[0017] 本發(fā)明的第六個目的是提供該藥物在制備提高巨噬細胞表面抗原CD68和/或CD16 含量的藥物中的應用。該藥物的濃度為〇~1 〇〇ug/ml時，使得⑶68和⑶16的表達上調(diào)。
[0018] 優(yōu)選的，該藥物由如下重量份的原料藥制成：黃苗120重量份黨參100重量份丹參80重量份葛根80重量份淫羊藿80重量份山楂80重量份
[0019] 地黃60.重量份當歸60重量份黃連60重量份醋延胡索60重量份靈芝60重量份人參25重量份炙甘草25重量份。
[0020] 或，黃苗140重量份黨參90重量份丹參70重量份葛根90重量份淫羊藿90重量份山楂70重量份
[0021] 地黃50重量份當歸70重量份黃連70重量份醋延胡索50重量份靈芝50重量份人參28重量份炙甘草28重量份。
[0022]或，黃苗110重量份黨參110重量份丹參90重量份葛根70重量份淫羊藿70重量份山楂90重量份
[0023] 地黃70重量份當歸50重量份黃連50重量份醋延胡索70重量份靈芝70重量份人參22重量份炙甘草22重量份。
[0024] 或，黃苗130重量份黨參100重量份丹參60重量份葛根60重量份淫羊藿70重量份山楂60重量份
[0025] 地黃40重量份當歸45重量份黃連40重量份醋延胡索46重量份 .靈芝50重量份人參26重量份炙甘草23重量份。
[0026] 取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床可接受的片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體制劑或凍干粉針劑。
[0027] 本發(fā)明藥物的制備方法包括如下步驟：
[0028] 取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山楂與一半量的黃芪，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃芪加水煎煮1-3次，每次1-3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90-95 °C時相對密度為1.05~1.15，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90-95 °C 時相對密度為1.15~1.25的清膏，與上述藥粉混合，制成片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體制劑或凍干粉針劑。
[0029] 本發(fā)明藥物的制備方法優(yōu)選包括如下步驟：
[0030] 取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山楂與一半量的黃芪，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃芪加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90 °C時相對密度為1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90°C時相對密度為1.20~1.22的清膏，與上述藥粉混合，制成片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑、緩釋劑、□服液體制劑或凍干粉針劑。
[0031 ]本發(fā)明藥物制劑中滴丸的制備方法包括如下步驟：
[0032]取原料藥，用8-12重量倍的水浸40-80分鐘，煮沸1-3小時，取出藥液，藥渣再加6-10重量倍的水煎煮70-110分種，合并二次藥液，濾過;藥液通過已處理好的JD-l(WLD)大孔吸附樹脂柱，樹脂用量為原料藥重量的1-3倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完畢，用水沖洗樹脂柱至流出液澄清后，用樹脂重量2-4倍的60-90%乙醇洗脫，收集洗脫液，后用1-2體積倍水沖洗，合并洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05-1.20，噴霧干燥，得提取物噴霧干燥藥粉，加入常規(guī)輔料制備得滴丸。
[0033] 本發(fā)明藥物制劑中滴丸的制備方法優(yōu)選包括如下步驟：
[0034] 取原料藥，用10重量倍的水浸60分鐘，煮沸2小時，取出藥液，藥渣再加8重量倍的水煎煮90分鐘，合并二次藥液，濾過;藥液通過已處理好的JD-l(WLD)大孔吸附樹脂柱，樹脂用量為原料藥重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完畢，用水沖洗樹脂柱至流出液澄清后，用樹脂重量3倍的70 %乙醇洗脫，收集洗脫液，后用1.5體積倍水沖洗，合并洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.08-1.15，噴霧干燥，得提取物噴霧干燥藥粉，加入常規(guī)輔料制備得滴丸。
[0035]其中，上述制備方法中噴霧干燥的條件控制為:進料速度為35-40ml/min，霧化速度：25000-35000rpm，進風溫度：130-160°C，出風溫度：70-80°C。
[0036] 其中，上述制備方法中噴霧干燥的條件控制優(yōu)選為:進料速度為37ml/min，霧化速度:30000rpm，進風溫度：145~147 °C，出風溫度:71~76 °C。
[0037] 其中，上述制備方法中得提取物后，滴丸的制備方法還可以為：
[0038] 稱取聚乙二醇-4000,于60-90 °C下水浴至徹底溶脹，加入上述提取物噴霧干燥藥粉，加入質(zhì)量比例為藥粉:聚乙二醇-4000 = 1:2-6，于80-90 °C下保溫攪拌均勻，使藥粉完全溶解分散在聚乙二醇-4000中；移入滴丸機中，保持滴距和滴溫，調(diào)整滴制參數(shù)為：油浴溫度:80-90°C，藥液溫度:75-85°C，滴盤溫度:85-90 °C，制冷溫度：10-15°C，管口溫度:35-40 °C，滴頭口徑為:3_/5_，滴速:1滴/1秒-1滴/7秒;調(diào)節(jié)開關使液滴適速滴入冷凝劑二甲基硅油或液體石蠟中，藥滴經(jīng)過冷凝收縮成滴丸，收集滴丸，以轉(zhuǎn)速1000-4000轉(zhuǎn)/分離心脫油，再進入篩選干燥機進行篩選干燥，即得本發(fā)明藥物滴丸。
[0039] 其中，上述制備方法中得提取物后，滴丸的制備方法還可以優(yōu)選為：
[0040] 稱取聚乙二醇-4000,于80-85 °C下水浴至徹底溶脹，加入上述提取物噴霧干燥藥粉，加入質(zhì)量比例為藥粉:聚乙二醇-4000 = 1:4，于85°C下保溫攪拌均勻，使藥粉完全溶解分散在聚乙二醇-4000中；移入滴丸機中，保持滴距和滴溫，調(diào)整滴制參數(shù)為：油浴溫度:85 °C，藥液溫度:80 °C，滴盤溫度：87 °C，制冷溫度：12 °C，管□溫度：37 °C，滴頭□徑為：3謹/ 5mm，滴速：1滴/2秒-1滴/5秒;調(diào)節(jié)開關使液滴適速滴入冷凝劑二甲基硅油或液體石蠟中，藥滴經(jīng)過冷凝收縮成滴丸，收集滴丸，以轉(zhuǎn)速1500-3000轉(zhuǎn)/分離心脫油，再進入篩選干燥機進行篩選干燥，即得本發(fā)明藥物滴丸。
[0041] 本發(fā)明的有益效果是：
[0042]本發(fā)明的藥物在抗動脈粥樣硬化效果顯著，能從多個角度調(diào)控動脈粥樣硬化的發(fā) 生與發(fā)展，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的藥物直接抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌 MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。本發(fā)明的藥物能從以4個上途徑綜合起到防治動脈粥樣硬化。
【附圖說明】
[0043]圖1是巨噬細胞對脂質(zhì)攝取的情況:ox-LDL刺激24h。
[0044]圖2是巨噬細胞對脂質(zhì)攝取的情況:本發(fā)明藥物預處理12h后ox-LDL刺激24h。
[0045] 圖3是oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中NOD 1和Rip2mRNA表達的影響結果圖，圖中條帶表不：oxLDL的濃度從左至右依次為Omg/1，10mg/l，25mg/l，50mg/l，10mg/l，25mg/l， 5〇11^/1，1〇11^/1，2511^/1，5〇11^/1，時間從左至右依次為811，811，811，811，1611，1611，1611，2411， 24h，24h。
[0046] 圖4是本發(fā)明藥物干預后，oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中NODI和Rip2mRNA表達的影響結果圖，圖中條帶表示:本發(fā)明藥物的濃度從左至右依次為〇ug/ml，10ug/ml，50ug/ml， 100ug/ml，200ug/ml。
[0047] 圖5是oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中Rip2蛋白表達的影響結果圖，圖中條帶表示： oxLDL的濃度從左至右依次為0mg/l，10mg/l，25mg/l，50mg/l，10mg/l，25mg/l，50mg/l， 1〇11^/1，2511^/1，5〇11^/1，時間從左至右依次為811，811，811，811，1611，1611，1611，2411，2411，2411。
[0048] 圖6是本發(fā)明藥物干預后，oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中Rip2蛋白表達的影響結果圖，圖中條帶表示：圖中條帶表示:本發(fā)明藥物的濃度從左至右依次為〇ug/ml，10ug/ml， 50ug/ml，100ug/ml，200ug/ml。
[0049] 圖7:不同濃度的oxLDL刺激THP-1源性巨噬細胞24h，用ELISA法測定細胞培養(yǎng)物上清液中MIF濃度。
[0050] 圖8:50mg/l的oxLDL分別刺激THP-1源性巨噬細胞0、8、16和24h，用ELISA法測定細胞培養(yǎng)物上清液中MIF濃度。
[0051 ] 圖9:不同濃度的oxLDL刺激THP-1源性巨噬細胞24h，用ELISA法測定細胞培養(yǎng)物上清液中MCP-1濃度。
[0052] 圖10:50mg/l的oxLDL分別刺激THP-1源性巨噬細胞0、8、16和24h，用ELISA法測定細胞培養(yǎng)物上清液中MCP-1濃度。
[0053]圖11:本發(fā)明藥物對oxLDL刺激激活的THP-1源性巨噬細胞分泌MIF的影響。
[0054]圖12:本發(fā)明藥物對oxLDL刺激激活的THP-1源性巨噬細胞分泌MCP-1的影響。
[0055] 圖13-1~圖13-8: oxLDL對THP-1源性巨噬細胞表面抗原的影響，其中圖13-1:空白對照（平均熒光強度25.2);圖13-2 : oxLDL 10mg/l (平均熒光強度28.3);圖13-3 : oxLDL25mg/l (平均熒光強度23 · 7);圖 13-4: oxLDL 50mg/l (平均熒光強度22 · 3);圖 13-5:本發(fā)明藥物1〇呢/1111(平均熒光強度54.7);
[0056]圖13-6:本發(fā)明藥物50ug/ml (平均熒光強度60.7);圖13-7:本發(fā)明藥物100ug/ml (平均熒光強度91.6);圖13-8:本發(fā)明藥物200ug/ml(平均熒光強度72.1)。
[0057] 圖14-1~圖14-8:本發(fā)明藥物干預后，oxLDL對THP-1源性巨噬細胞表面CD16抗原的影響，圖14-1:空白對照（平均熒光強度29.8);圖14-2 : oxLDL 10mg/l (平均熒光強度 30 · 9);圖 14-3:oxLDL 25mg/l(平均熒光強度29 · 9);圖 14-4:oxLDL 50mg/l (平均熒光強度 26· 9);圖14-5:本發(fā)明藥物10ug/ml(平均熒光強度71 · 2);圖14-6:本發(fā)明藥物50ug/ml (平均熒光強度92.7);圖14-7:本發(fā)明藥物100ug/ml (平均熒光強度96);圖14-8:本發(fā)明藥物 200ug/ml(平均熒光強度80 · 6)。
【具體實施方式】
[0058] 實施例1
[0059] 用于抗動脈粥樣硬化的藥物片劑由如下重量份的原料藥制成：黃苗120g 黨參100g 丹參80g 葛根80g 淫羊藿80g 山楂80g
[0060] 地黃6〇g 當歸60g 黃連 6〇g 醋延胡索60_g靈芝60g 人參25g 炎甘草25g:。
[0061] 所述藥物片劑的制備方法，包括以下步驟:取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山楂與一半量的黃芪，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃芪加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90°C時相對密度為1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90°C時相對密度為1.20~1.22的清膏，與上述藥粉混合，制成顆粒，干燥，壓制成1000片(小片），包糖衣或薄膜衣片，或壓制成500片(大片），包薄膜衣，即得。小片每片重〇.3g，每日服用3次，一次4~6片;大片每片重0.6g，每日服用3次，一次2~3片。
[0062] 用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌 MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0063] 實施例2
[0064] 用于抗動脈粥樣硬化的藥物膠囊劑由如下重量份的原料藥制成：黃芪140g 黨參9〇g 丹參70g
[0065] 葛根9:0g 淫羊藿9% 山楂70g 地黃50g 當歸70g 黃連70g
[0066] 醋延胡索50g 靈芝5Qg 人參28g 炙甘草28g。
[0067] 所述藥物膠囊劑的制備方法，包括以下步驟:取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山楂與一半量的黃芪，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃芪加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90 °C時相對密度為1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90 °C時相對密度為1.20~1.22的清膏，與上述藥粉混合，制成膠囊劑。用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、具有明顯的抗動脈粥樣硬化的作用。用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0068] 實施例3
[0069] 用于抗動脈粥樣硬化的藥物顆粒劑由如下重量份的原料藥制成：設芪ll〇g 黨參110g 竹參9〇g 葛根70g 淫羊藿70g 山楂90g
[0070] 地黃7.0g 當歸.5.0g 黃連50g 醋延胡索70g 靈芝70g 人參22g 炙甘草22g。
[0071] 所述藥物顆粒劑的制備方法，包括以下步驟:取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山楂與一半量的黃芪，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃芪加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90 °C時相對密度為1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90 °C時相對密度為1.20~1.22的清膏，與上述藥粉混合，制成顆粒劑。用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、具有明顯的抗動脈粥樣硬化的作用。用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0072] 實施例4
[0073]用于抗動脈粥樣硬化的藥物丸劑由如下重量份的原料藥制成：故芪丨30g 黨參100g 丹參6Qg 葛根60g 淫羊藿70g 山楂60g
[0074] 地黃40g 當歸45g 黃連40g 醋延胡索46g 靈芝50g 人參26g 炙甘草23g。
[0075] 所述藥物丸劑的制備方法，包括以下步驟:取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成丸劑。用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、具有明顯的抗動脈粥樣硬化的作用。用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中 N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用;顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0076] 實施例5
[0077] 用于抗動脈粥樣硬化的藥物口服液由如下重量份的原料藥制成： ?Λ??ζ 120g 立 # 100g j'J'# 80g 葛根80g 淫羊蕾80g 山楂80g
[0078] 地黃6〇g 當歸60g 黃連60g 醋延胡索6〇g靈芝6_ 人參25g 炎甘草25g,_>
[0079] 所述藥物口服液的制備方法，包括以下步驟:取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成口服液。用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、具有明顯的抗動脈粥樣硬化的作用。用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0080] 實施例6
[0081] 用于抗動脈粥樣硬化的藥物注射劑由如下的原料藥制成： w it； 140g 黨參 9〇g 丹參
[0082] 葛根90g 淫羊藿90g 山楂70g 地黃50g 當歸70g 黃連70g
[0083] 醋延胡索50g 靈芝5〇:g 人參2:8g 炙甘草28g。
[0084] 所述藥物注射劑的制備方法，包括以下步驟:取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成注射劑。用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、具有明顯的抗動脈粥樣硬化的作用。用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0085] 實施例7
[0086] 用于抗動脈粥樣硬化的藥物滴丸由如下重量份的原料藥制成：黃芪120g 黨參l()0g 丹參80g 葛根80g 淫羊藿80g 山楂80g
[0087] 地黃60:g 當歸60g 黃連60g: 醋延胡索60g靈芝60g 人參25g 炙甘草25g。
[0088] 所述藥物滴丸的制備方法，包括以下步驟：
[0089] 取原料藥，用10重量倍的水浸60分鐘，煮沸2小時，取出藥液，藥渣再加8重量倍的水煎煮90分鐘，合并二次藥液，濾過;藥液通過已處理好的JD-1 (WLD)大孔吸附樹脂柱，
[0090] 樹脂用量為原料藥重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完畢，用水沖洗樹脂柱至流出液澄清后，用樹脂重量3倍的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，后用1.5體積倍水沖洗，合并洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.08-1.15,噴霧干燥，得提取物噴霧干燥藥粉，加入常規(guī)輔料制備得滴丸，丸重49-52mg/粒，□服，一次10粒，一日3次。用于制備抗動脈粥樣硬化藥物、具有明顯的抗動脈粥樣硬化的作用。用于抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制 Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面⑶16和⑶68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0091] 實驗例
[0092] 為闡明本發(fā)明藥物抗動脈粥樣硬化及其作用機制，用按上述實施例1方法制備得到的片劑（以下稱本發(fā)明藥物)進行下列實驗以證明其療效，但不能對本發(fā)明的范圍構成任何限制。
[0093] 1實驗材料與儀器
[0094]人單核細胞系THP-1購自中科院上海細胞庫;胎牛血清購自（蘭州民海生物公司）； RPMI1640培養(yǎng)基(Hyclone和Gibco);0X-LDL(北京欣源佳和生物科技有限公司）；RNA提取試劑盒（寶生物工程有限公司）；引物合成（BI0NEER公司）；佛波酯（Sigma);逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 (BI0NEER);鼠抗人β-actin、兔抗鼠 i3-actin(江蘇碧云天生物技術研究所）；兔抗人N0D1多克隆抗體、羊抗兔多克隆抗體、兔抗人Rip2多克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology Inc); RIP A裂解液、金雞納酸（B C A)蛋白濃度測定試劑盒、蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟化物 (PMSF)、蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)熒光檢測試劑盒(BeyoECL Plus江蘇碧云天生物技術研究所）；人MIF ELISA試劑盒(上海細胞生物公司），人MCP-1 ELISA試劑盒(達科為生物技術有限公司）。流式細胞儀（美國BD公司Facscalibar)，流式細胞抗體CD16-FITC、 CD68-FITC、IgG2a-FITC(美國BD公司），其他試劑為國產(chǎn)或進口分析純。
[0095] 2實驗方法
[0096] 2.1發(fā)明藥物對THP-1源性巨噬細胞的毒性實驗
[0097] THP1細胞用含10 %胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基于37°C，5 %C02培養(yǎng)箱中，每24- 48h按懸浮細胞傳代方法1:2~1:3傳代一次。選取傳3~4代以后細胞，以IX 107/ml細胞密度接種于培養(yǎng)皿，加入終濃度160nmol/L的PMA，刺激24h后細胞由懸浮狀態(tài)轉(zhuǎn)化為貼壁狀態(tài)。形態(tài)學上呈梭形、橢圓形或伸出偽足，細胞體積增大，表明THP-1細胞已轉(zhuǎn)化為巨噬細胞。用MTT法檢驗了發(fā)明藥物對THP-1源性巨噬細胞的毒性作用。實驗重復三次，分別以發(fā)明藥物終濃度分別為500ug/ml、400ug/ml、200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml、10ug/ml，刺激THP-1 源性巨噬細胞24小時。觀察有無毒性。
[0098] 2.2發(fā)明藥物對THP-1源性巨噬細胞脂質(zhì)攝取的抑制
[0099] 用50mg/L的ox-LDL刺激THP-1源性巨噬細胞24小時，用油紅0染色法觀察巨噬細胞對脂質(zhì)攝??；用1 〇〇ug/ml的發(fā)明藥物液預處理THP-1源性巨噬細胞12小時，再用50mg/L的 ox-LDL刺激THP-1源性巨噬細胞24小時，用油紅0染色法觀察巨噬細胞對脂質(zhì)攝取。
[0100] 2.3oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中N0D1和Rip2mRNA表達的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0101] 分別用oxLDL以10mg/l、25mg/l和50mg/l刺激THP-1源性巨噬細胞8h、16h和24h，用 RT-PCR法檢測N0D1和Rip2的mRNA表達情況。
[0102] 以本發(fā)明藥物終濃度1(^8/!111、5(^8/1111、10(^8/1111和20(^8/1111預處理1'冊-1源性巨噬細胞12h，以ox-LDL50mg/l刺激THP-1源性巨噬細胞24h，細胞分為5組：空白對照組，本發(fā) 明藥物l〇μg/ml處理組，本發(fā)明藥物50μg/ml處理組，本發(fā)明藥物100μg/ml處理組和本發(fā)明藥物200μg/ml處理組。用TRIZ0L試劑（TAKARA公司）提取各組樣本總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合cDNA，進行PCR循環(huán)。Bioneer公司合成引物序列RIP2-F: 5 ' 一TCCTGGAAATCACAGTTGG-3 '，RIP2-R: 5'-TGAGGTCCTTGTAGGCTTG -3'PCRif 1 bp； N0D-F GCTGAAGGGTGACTAAACGG-3 '，N0D-R: 5 ' 一ATGAGCGGGCAAGAGGAC-3 ' PCR擴增產(chǎn)物長度為 148bp。內(nèi)參照采用GAPDH。取RT-PCR產(chǎn)物在1 %瓊脂糖凝膠電泳中電泳，樣品上樣量均10μ1， DNA marker 5μ1，溴化乙徒染色，100v200mA，25min電泳。
[0103] 2.4.(?〇^對1'冊-1源性巨噬細胞中勵01和1^?2蛋白表達的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0104] 分別用 oxLDL 以 10mg/l、25mg/l 和 50mg/l 刺激 THP-1 源性巨噬細胞 8h、16h 和 24h， 2ml胰酶消化細胞，收集細胞。1500rmp離心10min棄上清，2ml PBS洗滌，4°C2000rmp離心 5min，加入細胞裂解液裂解細胞，冰上靜置10min后，4°C 14000rmp離心15min』CA法進行蛋白定量。加等體積SDS loading煮沸使蛋白變性。電泳分離蛋白質(zhì)，220mA lOOrnin。將蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。孵育一抗(購自Santa Cruz公司）4°C過夜，TBST洗膜10分鐘三次，孵育二抗，室溫2h，TBST洗膜10min三次。Wsetern blot熒光檢測試劑激發(fā)熒光，顯示于X光片，顯影，定影后進行圖像分析。
[0105] 以本發(fā)明藥物終濃度1(^8/!111、5(^8/1111、10(^8/1111和20(^8/1111預處理1'冊-1源性巨噬細胞12h，以ox-LDL50mg/l刺激THP-1源性巨噬細胞24h，細胞分為5組：空白對照組，本發(fā) 明藥物l〇μg/ml處理組，本發(fā)明藥物50μg/ml處理組，本發(fā)明藥物100μg/ml處理組和本發(fā)明藥物200μg/ml處理組。2ml胰酶消化細胞，收集細胞。1500rmp離心10min棄上清，2ml PBS洗滌，4 °C 2000rmp離心5min，加入細胞裂解液裂解細胞，冰上靜置lOmin后，4 °C 14000rmp離心 15mindBCA法進行蛋白定量。加等體積SDS loading煮沸使蛋白變性。電泳分離蛋白質(zhì)， 220mA lOOmin。將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。孵育一抗(購自Santa Cruz公司）4°C過夜，TBST 洗膜10分鐘三次，孵育二抗，室溫2h，TBST洗膜lOmin三次。Wsetern blot熒光檢測試劑激發(fā) 熒光，顯示于X光片，顯影，定影后進行圖像分析。
[0106] 2.50XLDL對THP-1源性巨噬細胞培養(yǎng)物上清液中炎癥因子的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0107] 分別用10mg/L、25mg//L和50mg/L的oxLDL刺激THP-1源性巨噬細胞24小時，收集培養(yǎng)物的上清液，儲存在-20 °C冰箱。按照ELISA試劑盒說明書方法，將試劑盒提供的原倍標準品在EP管中加入標準品稀釋液倍比稀釋，分別設空白孔、標準品孔、待測樣品孔。在標準孔中加標準品1〇〇μ1，待測樣品1〇〇μ1，37°C溫箱孵育90min，洗板5次，除空白孔外加入生物素化抗體工作液，封板膠封孔，37 °C溫箱孵育60min，洗板5次，除空白孔外，加入酶結合物工作液，封板膠封孔，37 °C溫箱避光孵育30min。洗板5次，加入顯色液，37 °C溫箱避光孵育15min，迅速加入終止液，混勻后即刻在450nm波長下讀值，測定MIF、MCP-1的濃度。結果發(fā)現(xiàn)oxLDL 能以劑量依賴的方式誘導THP-1源性巨噬細胞表達巨噬細胞移動抑制因子(MIF)(見圖3); 我們用50mg/L的oxLDL分別刺激THP-1源性巨噬細胞8小時、16小時和24小時，發(fā)現(xiàn)oxLDL能以時間依賴的方式誘導THP-1源性巨噬細胞表達巨噬細胞移動抑制因子(MIF)
[0108] 以本發(fā)明藥物終濃度1(^8/!111、5(^8/1111、10(^8/1111和20(^8/1111預處理1'冊-1源性巨噬細胞12h，以ox-LDL50mg/l刺激THP-1源性巨噬細胞24h，細胞分為5組：空白對照組，本發(fā) 明藥物l〇μg/ml處理組，本發(fā)明藥物50μg/ml處理組，本發(fā)明藥物100μg/ml處理組和本發(fā)明藥物200μg/ml處理組。收集培養(yǎng)物的上清液，儲存在-20 °C冰箱。用ELI SA法測定細胞培養(yǎng)物上清液中MIF和MCP-1的濃度。
[0109] 2.6oxLDL對THP-1源性巨噬細胞表面抗原的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0110] 分別用1〇、25和50mg/L的oxLDL刺激THP-1源性巨噬細胞24小時，以空白做對照，以本發(fā)明藥物終濃度10、50、100和20(^8/1111預處理1'冊-1源性巨噬細胞1211，以(《-〇^5011^/1 刺激細胞24h，采用流式細胞儀(FACSCalibar，美國BD公司）測定細胞表面CD16、CD68的表達水平。在流式專用試管中分別加入20μ1熒光素標記的CD16、CD68單克隆抗體(美國BD公司）， 100μ1細胞懸液振蕩混勻，室溫避光15min孵育，加入溶血素2ml，震蕩混勻，室溫避光孵育 lOmin，2500rpm離心3分鐘，棄上清，加入roS(PH 7.4)0.5ml混勻，重懸細胞上機檢測。以熒光素標記的IgG2a-FITC(美國BD公司）作為同型對照。用CelQuest軟件分析結果，以熒光陽性的細胞的平均熒光強度來表示。
[0111] 2.7數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學方法
[0112] 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)土標準差(i±s)表示，應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，兩組計量資料，方差齊性的組間比較采用成組t檢驗，方差不齊釆用秩和檢驗。多組計量資料方差齊性的釆用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。
[0113] 3實驗結果
[0114] 3.1本發(fā)明藥物對THP-1源性巨噬細胞的毒性實驗
[0115] 結果顯示所有濃度本發(fā)明藥物對細胞均無毒性作用，但低濃度(50ug/ml和10ug/ ml)和高濃度（500ug/ml)對細胞生長有輕度抑制作用，中等濃度（400ug/ml、200ug/ml和 lOOug/ml)對細胞生長有輕度增殖作用，但差異均無統(tǒng)計學意義。根據(jù)此實驗結果，考慮到本發(fā)明藥物終濃度400ug/ml和500ug/ml在臨床應用時可能存在劑量過大的問題，因此本研究中本發(fā)明藥物預處理的終濃度確定為l〇ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml。
[0116] 3.2本發(fā)明藥物對THP-1源性巨噬細胞脂質(zhì)攝取的抑制
[0117] 用50mg/L的ox-LDL刺激THP-1源性巨噬細胞24小時，用油紅0染色法觀察巨噬細胞對脂質(zhì)攝?。▓D1)，光鏡下可見成堆吞噬oxLDL的巨噬細胞。用100ug/ml的本發(fā)明藥物液預處理THP-1源性巨噬細胞12小時，再用50mg/L的ox-LDL刺激THP-1源性巨噬細胞24小時，用油紅0染色法觀察巨噬細胞對脂質(zhì)攝?。▓D2)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明藥物能明顯抑制巨噬細胞對脂質(zhì) 的攝取。
[0118] 3.3 oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中N0D1和Rip2mRNA表達的影響及本發(fā)明藥物干預研
[0119] 究
[0120] oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中N0D1和Rip2mRNA表達的影響結果如圖3所示，結果顯示不同濃度的oxLDL刺激THP-1源性巨噬細胞均能誘導N0D1和Rip2mRNA的表達。
[0121] 本發(fā)明藥物干預后mRNA水平，如圖4所示，隨著本發(fā)明藥物預處理濃度的增加， N0D1和Rip2的表達下調(diào)。
[0122] 3.4 oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中N0D1和Rip2蛋白表達的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0123] oxLDL對THP-1源性巨噬細胞中N0D1和Rip2蛋白表達的影響結果如圖5所示，與RT-PCR結果不同的是，無論是否受ox-LDL刺激，THP-1源性巨噬細胞中沒有N0D1蛋白的表達，但 N0D1下游的Rip2信號能夠被ox-LDL以時間和濃度依賴的方式誘導表達，在24h時達到高峰。
[0124] 本發(fā)明藥物干預后未見N0D1蛋白表達，如圖6所示，隨著本發(fā)明藥物預處理濃度增加，Rip2蛋白表達下降。
[0125] 3.5oxLDL對THP-1源性巨噬細胞培養(yǎng)物上清液中炎癥因子的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0126] oxLDL對THP-1源性巨噬細胞培養(yǎng)物上清液中炎癥因子的影響結果見圖7-圖8。
[0127] oxLDL能以濃度和時間依賴的方式誘導THP-1源性巨噬細胞表達單核細胞趨化因子(MCP-1)，見圖 9,圖 10。
[0128] 本發(fā)明藥物對oxLDL激活THP-1源性巨噬細胞培養(yǎng)物上清液中炎癥因子的影響見圖11 MIF和MCP-1的濃度。結果顯示本發(fā)明藥物能顯著抑制oxLDL刺激激活的THP-1源性巨噬細胞分泌MIF(見圖11)。如圖11所示，盡管100μg/ml和200μg/ml的本發(fā)明藥物的抑制效果無統(tǒng)計學差異，但明顯優(yōu)于50μg/ml的本發(fā)明藥物。而50μg/ml的本發(fā)明藥物抑制效果明顯優(yōu)于l〇μg/ml的本發(fā)明藥物。10μg/ml的本發(fā)明藥物雖能抑制THP-1源性巨噬細胞分泌MIF，但差異無統(tǒng)計學意義。
[0129] 同樣本發(fā)明藥物能顯著抑制oxLDL刺激激活的THP-1源性巨噬細胞分泌MCP-1 (見圖⑵。
[0130] 如圖12所示，盡管100μg/ml和200μg/ml的本發(fā)明藥物的抑制效果無統(tǒng)計學差異，但明顯優(yōu)于50μg/ml的本發(fā)明藥物。50μg/ml與10μg/ml的本發(fā)明藥物的抑制效果無統(tǒng)計學差異。
[0131] 3.6 oxLDL對THP-1源性巨噬細胞表面抗原的影響及本發(fā)明藥物干預研究
[0132] oxLDL對THP-1源性巨噬細胞表面抗原的影響及本發(fā)明藥物干預研究結果如圖13-1~圖13-8所示，從圖中我們可以看出，低濃度oxLDL刺激對THP-1源性巨噬細胞表面⑶68的表達有輕度上調(diào)，隨著刺激濃度的增加，CD68的表達下調(diào)，以50mg/L最為明顯。用本發(fā)明藥物預處理后，能上調(diào)⑶68的表達，并有濃度依賴性，在100ug/ml時達到高峰，但隨著濃度的進一步增加，⑶68的表達下降。
[0133] 從圖14-1~圖14-8中我們可以看出，大劑量的oxLDL刺激能引起THP-1源性巨噬細胞表面⑶16表達下調(diào)。用不同濃度的本發(fā)明藥物預處理后，能顯著上調(diào)THP-1源性巨噬細胞表面CD16的表達，并有濃度依賴性，在100ug/ml時達到高峰，但隨著濃度的進一步增加， ⑶16的表達下降。
[0134] 4實驗結論
[0135] 單核細胞和巨噬細胞在動脈粥樣硬化進展中具有重要作用。一旦進入病變，單核細胞產(chǎn)生趨化因子如IL-8和細胞因子如IL-1，它們能進一步加重局部炎癥。單核細胞能分化成為巨噬細胞，吞噬oxLDL顆粒，變成泡沫細胞。巨噬細胞與oxLDL結合也能調(diào)節(jié)單核細胞功能。激活的巨噬細胞能產(chǎn)生多種炎癥因子、趨化因子、粘附分子和多種酶的激動劑和抑制劑，連接先天和獲得性免疫，調(diào)節(jié)脂質(zhì)蓄積，促進血栓形成，參與血管的重構和斑塊的失穩(wěn) 定。
[0136] 本研究以人單核細胞株THP-1細胞為基礎，研究本發(fā)明藥物對巨噬細胞中N0D1/ Rip2信號通路的調(diào)節(jié)機制及對巨噬細胞表型和脂質(zhì)攝取功能的影響，為進一步闡明本發(fā)明藥物防治冠心病的機制提供實驗依據(jù)。
[0137] 本發(fā)明藥物直接抑制巨噬細胞吞噬脂質(zhì)，干擾泡沫細胞的形成，延緩動脈粥樣硬化的形成;干擾巨噬細胞中N0D1/Rip2信號通路的表達，抑制Rip2的表達，從而抑制巨噬細胞的炎性活化，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的形成;抑制活化的巨噬細胞分泌MIF和MCP-1，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用；顯著上調(diào)巨噬細胞表面CD16和CD68的表達，促進巨噬細胞由Ml型向 M2型轉(zhuǎn)變，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。
[0138] 另外，當本發(fā)明藥物濃度為0ug/ml時，此時加入一定濃度的對比例1~4中的藥物，產(chǎn)生的結果與當本發(fā)明藥物濃度為〇ug/ml時的結果相同，說明以特定的配方和配比關系組成的藥物才具有抗動脈粥樣硬化的作用以及上述作用機制。
【主權項】
1. 一種藥物在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，其特征是，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：黃巧100-150重量份，黨參80-120重量份，丹參60-100重量份，葛根60-100重量份，淫羊蕾60-100重量份，山植60-100重量份，地黃40-80重量份，當歸40-80重量份，黃連40-80重量份，醋延胡索40-80重量份，靈芝40-80重量份，人參20-30重量份，炙甘草20-30重量份。2. 權利要求1所述的藥物在制備抑制巨隧細胞攝取OX-U3L的藥物中的應用和/或藥物在制備使NOD1和化p2mRNA在巨隧細胞中的表達下調(diào)的藥物中的應用和/或在制備使Rip2蛋白在巨隧細胞中的表達下調(diào)的藥物中的應用和/或在制備抑制巨隧細胞分泌MCP-1和/或 MIF的藥物中的應用和/或在制備提高巨隧細胞表面抗原CD68和/或CD16含量的藥物中的應用。3. 如權利要求1或2所述的應用，其特征是，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：黃巧120重量份覺參100重量份丹參80重量份葛根80重量份淫羊蕾80重量份山檀溯重量份地黃60重量份當向60重量份黃連60重量份醋延胡索60重量份靈芝60重量份人參25重量份炙甘草25重量份。4. 如權利要求1或2所述的應用，其特征是，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：黃苗140重量份覺參90重量份丹參70重量份葛根90重量份淫羊蕾90重量份山植70重量份地黃50重量份當掃70重量份黃連70重量份醋延胡索50重量份靈芝50重量份人參28重量份炙甘草28重量份。5. 如權利要求1或2所述的應用，其特征是，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：黃巧11:0垂量粉覺參110重量條丹參90重量份葛根70重量份淫羊馨70壁量份山稽90重量份地黃70重童份當歸50重量份黃連50重量份醋延胡秦70重量份靈芝70重量份人參22重量份炙甘草22重量份。6. 如權利要求1或2所述的應用，其特征是，所述藥物由如下重量份的原料藥制成：黃巧]30重量份黨參100重量份丹參60重量份葛根60重量份淫羊蕾70重量份山梭60重量份地黃40重量份當因45重量化黃連40重量份醋延胡索46重量份靈芝50重量份人參26重量份炙甘草23重量份。7. 如權利要求1或2所述的應用，其特征是，所述藥物的制備方法包括W下步驟:取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山植與一半量的黃巧，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃巧加水煎煮1-3次，每次1-3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90-95 °C時相對密度為1.05~ 1.15，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90-95 °C時相對密度為 1.15~1.25的清膏，與上述藥粉混合，制成片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體制劑或凍干粉針劑。8. 如權利要求7所述的應用，其特征是，所述藥物的制備方法包括W下步驟:取原料藥中的人參、黃連、醋延胡索、山植與一半量的黃巧，粉碎成細粉，其余八味原料藥與剩余黃巧加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90°C時相對密度為1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并濃縮至90°C時相對密度為1.20~1.22的清膏，與上述藥粉混合，制成片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體制劑或凍干粉針劑。9. 如權利要求1或2所述的應用，其特征是，所述藥物的滴丸制劑的制備方法包括如下步驟：取原料藥，用10重量倍的水浸60分鐘，煮沸2小時，取出藥液，藥渣再加8重量倍的水煎煮90分鐘，合并二次藥液，濾過;藥液通過已處理好的JD-1大孔吸附樹脂柱，樹脂用量為原料藥重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完畢，用水沖洗樹脂柱至流出液澄清后，用樹脂重量3倍的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，后用1.5體積倍水沖洗，合并洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.08-1.15，噴霧干燥，得提取物噴霧干燥藥粉，加入常規(guī)輔料制備得滴丸。10. 如權利要求9所述的應用，其特征是，所述噴霧干燥的條件為：進料速度為35- 40ml/min，霧化速度:25000-35000巧m，進風溫度：130-160 °C，出風溫度:70-80 °C。11. 如權利要求10所述的應用，其特征是，所述噴霧干燥的條件為：進料速度為37ml/ min，霧化速度:30000巧m，進風溫度：145~147 °C，出風溫度:71~76 °C。12. 如權利要求9所述的應用，其特征是，在得提取物物噴霧干燥藥粉后，按如下方法制備成滴丸：稱取聚乙二醇-4000，于80-85 °C下水浴至徹底溶脹，加入上述提取物噴霧干燥藥粉，加入比例為藥粉:聚乙二醇-4000 = 1:4,于85°C下保溫攬拌均勻，使藥粉完全溶解分散在聚乙二醇-4000中；移入滴丸機中，保持滴距和滴溫，調(diào)整滴制參數(shù)為：油浴溫度:85°C，藥液溫度：80°C，滴盤溫度：87°C，制冷溫度：12°C，管口溫度：37°C，滴頭口徑為：3mm/5mm，滴速：1 滴/2秒一1滴/5秒;調(diào)節(jié)開關使液滴適速滴入冷凝劑二甲基硅油或液體石蠟中，藥滴經(jīng)過冷凝收縮成滴丸，收集滴丸，W轉(zhuǎn)速1500-3000轉(zhuǎn)/分離屯、脫油，再進入篩選干燥機進行篩選干燥，即得本發(fā)明藥物滴丸。
【文檔編號】A61P9/10GK105935390SQ201610466113
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年6月23日
【發(fā)明人】丁彥春, 姜作玲, 王輝, 張冬雪, 蔡妍, 侯亮
【申請人】上海醫(yī)藥集團青島國風藥業(yè)股份有限公司

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