阿掏比克酸三唑基與1h?四氮唑基衍生物的組合物用于制備抗骨質(zhì)疏松藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域。本發(fā)明公開并提供了一種由Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物按照質(zhì)量比為25：75組成的組合物以及將上述化合物按照25：75的質(zhì)量比進行混合從而制備本發(fā)明組合物的方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明提供的這種組合物能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，同時可以提高血鈣濃度，有利于骨的沉積。對于由于雌激素缺乏導致的骨質(zhì)疏松具有防治作用，并且無雌激素樣副作用。因此本發(fā)明還提供了Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物按照質(zhì)量比為25：75組成的組合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途。
【專利說明】
阿掏比克酸三唑基與1H-四氮唑基衍生物的組合物用于制備 抗骨質(zhì)疏松藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨質(zhì)疏松是一種全身性的、代謝性的骨疾病，其特征是骨量減少和丟失，骨脆性和 骨折危險性增加。隨著人口的老齡化，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率也隨著迅速增加，已經(jīng)成為危害人 類健康的重要疾病，并給全球帶來了巨大的社會和經(jīng)濟負擔。盡管國內(nèi)外相關(guān)專家學者對 此病的防治十分重視，但該病尚缺乏有效的治療藥物。
[0003] 目前臨床上常用的防治骨質(zhì)疏松的藥物包括雌激素替代藥物，雙膦酸鹽類，選擇 性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，維生素 D，甲狀旁腺素和人重組甲狀旁腺激素（1-34)等。雙磷酸鹽類 藥物雖然效果不錯，但可導致頌骨壞死、肌肉骨骼痛和腎功能衰竭等嚴重不良反應(yīng);激素替 代療法雖然是防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的重要方法，但長期使用有導致乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的 潛在危險且發(fā)生血栓的風險也增加;而選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑可以使血栓性事件明顯增 加。其他藥物或價格昂貴，或遠期療效不確切，均不夠理想。由于骨質(zhì)疏松是一種慢性病，需 要長期服藥，因此價格便宜，毒副作用小的中草藥已成為研究治療骨質(zhì)疏松的熱點之一。
[0004] 骨質(zhì)疏松的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋 找化合物或先導化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重 要價值。
[0005] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al .， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily·Tetrahedron Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗骨質(zhì)疏松活性進行了評價，其具有抗骨質(zhì) 疏松活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為25%和75%。
[0007]
[0008] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0009] 本發(fā)明提供組合物的抗骨質(zhì)疏松新用途。
[0010] 本發(fā)明通過體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)組合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。
[0011] 進一步，所述的骨質(zhì)疏松是由于雌激素缺乏導致。
[0012] 本發(fā)明通過體內(nèi)試驗發(fā)現(xiàn)組合物有顯著的預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用。組合物能夠抑制 去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，同時可以提高血鈣濃度，有利于骨的沉積。是一種 理想的防治骨質(zhì)疏松的藥物。
[0013] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1化合物Artalbic acid的制備
[0015] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0016]
[0017] 實施例2Artalbic acid的O-溴乙基衍生物（II)的合成
[0018] 將化合物I(266mg，1.00mmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然 后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0019] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0020] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0021] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0022]
2 · 5mmol)，鵬化鉀（84mg，O · 5mmol)和I，2，3-三氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集淡黃色集中洗脫 帶即得到化合物III的淡黃色膠狀固體(124.5mg，69% )。
[0025] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5l6.23(s,lH) ,7.99(d,J = 29.4Hz,2H) ,6.11(s,lH), 5.82(s,lH),4.76(d J=17.3Hz,2H),4.62(s,1H),4.24(s,1H),4.18(s,1H),3.84(s,2H), 2.70(s,lH),2.52(d J=16.3Hz,4H),2.02(s,lH),1.69(s,3H),1.62(s,2H),1.51(s,lH), 1.02(s,3H).
[0026] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5201.95(s),175.95(s),149.17(s),148.18(s),136.99 (s),120.76(s),117.09(s),109.44(s),81.89(s),65.54(s),57.72(s),46.43(s),41.30 (s),39.08(s),38.89(s),35.71(s),30.77(s),20.46(s),18.43(s).
[0027] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for Ci9H28N3〇4:362.2080;found:362.2085〇
[0028]
[0029] 實施例4Artalbic acid的0_(IH-四氮唑基）乙基衍生物的合成 [0030] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀（84mg，0 · 5mmo 1)和IH-四氮唑（140 Img，20mmo 1)，混合物加熱回流5h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。因為互 變異構(gòu)作用，在反應(yīng)條件下會生成IH-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產(chǎn)物。產(chǎn)物粗品用 硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.5，v/v)，收集黃色集中洗脫帶，再將洗脫 帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100: 〇. 5，v/v)，依次收集兩個淡黃色 的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物IV的淡黃色固體(41.6mg，23%)。
[0031] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sll.50(s，lH)，10.04(s，lH)，6.07(s，lH)，5.78(s，lH)， 4.69(d ,J=11.0Hz,2H) ,4.58(s, 1H) ,4.22(s , 1H) ,4.15(s, 1H), 3.84(s , 2H), 2.66(s, 1H), 2.52(s,2H),2.45(s,2H),2.20(s,lH),1.65(d,J=8.0Hz,5H),1.44(s,lH),0.98(s,3H).
[0032] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.92(s),175.93(s),149.14(s),148.15(s),145.18 (S),117.08(s),109.40(s)，81.85(s)，65.53(s),57.68(s),46.71(S)，41.29(s),39.04 (s),38.85(s),35.70(s),30.73(s),20.42(s),18.42(s).
[0033] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for Ci8H27N4〇4:363.2032;found:363.2029〇
[0034]
[0035] 實施例5組合物抗骨質(zhì)疏松作用的檢測
[0036] 1、材料與方法
[0037] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的25mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的75mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0038]將十周齡健康SD雌鼠（30只，江蘇省動物中心）隨機分成5組，每組6只：假手術(shù)組 (Sham)、卵巢切除模型組(OVX)、組合物組、化合物III組和化合物IV組。飼養(yǎng)條件:溫度為 (23±2)°C，光照：黑暗為12:12。讓各組大鼠適應(yīng)環(huán)境2周后開始骨質(zhì)疏松造模手術(shù):各組大 鼠均經(jīng)腹腔注射20 %烏拉坦麻醉(6ml/kg體重），Sham組開腹后關(guān)腹，其余兩組行雙側(cè)卵巢 切除術(shù)。術(shù)后第4周起，Sham組和OVX組每天進食標準飼料和去離子水，組合物組、化合物III 組和化合物IV組每天進食標準飼料和去離子水，同時分別灌胃給與組合物、化合物III和化 合物IV 10mg/kg，連續(xù)3個月，每周稱一次體重。實驗結(jié)束后，用烏拉坦麻醉，摘取眼球采血， 2000r/min離心，吸取上清（即血清）。摘除大鼠子宮，迅速稱重。取出大鼠雙側(cè)股骨和雙側(cè)脛 骨，剔除軟組織。兩脛骨經(jīng)800°C高溫爐（由南京大學化學化工學院提供）中灰化8h，冷卻后 稱灰重。用研缽碾碎成灰狀，取0.1 g骨灰溶于Iml，6mol/l鹽酸中，測骨|丐和骨磷時取0.2ml 用超純水稀釋至lml，用全自動生化分析儀檢測骨鈣和骨磷含量。左股骨用骨密度儀測量骨 密度(BMD)。血清生化指標測定：取血清0.5ml，用全自動生化分析儀檢測血清堿性磷酸酶 (ALP)、鈣(Ca)和磷(P)。
[0039] 2、結(jié)果
[0040] (1)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的的影響
[0041] 表1可以看出去卵巢后，模型組大鼠血清堿性磷酸酶活性增加。去卵巢后，體內(nèi)雌 激素缺乏，導致骨轉(zhuǎn)化率增加，與絕經(jīng)后婦女的高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松癥一致。給予組合物3個 月后，堿性磷酸酶活性顯著下降，可見組合物可以抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率的增加，減少 骨質(zhì)的破壞。表中還顯示與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清鈣明顯下降，而組合物可顯著提 升血清鈣濃度。血清鈣是骨形成的重要標記物，說明組合物可以有效逆轉(zhuǎn)由于卵巢切除導 致的血清鈣的降低，有利于骨的形成。而化合物III和化合物IV沒有組合物的作用。
[0042]表1組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的影響 L0044」 *P〈0.05vs OVX組
[0045] (2)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影響
[0046] 表2可以看出去卵巢后模型組大鼠左股骨骨密度較假手術(shù)組顯著下降，給予組合 物3個月后，骨密度顯著增加。而化合物III和化合物IV沒有此作用。
[0047] 表2組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影響 L〇〇49」 *P〈0.05vs OVX組
[0050] (3)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠雙側(cè)脛骨參數(shù)的影響
[0051] 表3可以看出與假手術(shù)組相比，模型組大鼠雙脛骨灰重顯著降低，而組合物組較模 型組顯著升高。組合物也能顯著升高骨鈣和骨磷含量。而化合物III和化合物IV沒有此作 用。
[0052] 表3組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠雙側(cè)脛骨參數(shù)的影響
[0054] *P〈0.05vs OVX組
[0055] 結(jié)論:組合物能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，同時可以提高血 鈣濃度，有利于骨的沉積。對于由于雌激素缺乏導致的骨質(zhì)疏松具有防治作用，并且無雌激 素樣副作用。組合物可以用于骨質(zhì)疏松的防治?；衔颕II和化合物IV不能夠抑制去卵巢引 起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，不可以提高血鈣濃度，不利于骨的沉積，對于由于雌激素缺 乏導致的骨質(zhì)疏松不具有防治作用，不可以用于骨質(zhì)疏松的防治。
[0056]實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0057]取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0058]實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0059]取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為25%和75%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為25%和75%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述骨質(zhì)疏松為 雌激素缺乏引起的骨質(zhì)疏松。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述雌激素缺乏 是由卵巢功能缺失引起的。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物抑制 雌激素缺乏引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物提高 血清ALP、血清化和血清P的濃度。8. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物提高 股骨骨密度。9.如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物提高 雙腔骨骨巧和雙腔骨骨憐。
【文檔編號】A61K31/41GK106074536SQ201610348631
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司