專利名稱：：維甲類(lèi)化合物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的維甲類(lèi)化合物，如香豆素維甲類(lèi)化合物和/或嘌呤維甲類(lèi)化合物及其組合物。這些化合物對(duì)癌及癌前病變具有治療效果或生物活性，與合成這些化合物有關(guān)的方法也屬于本發(fā)明范疇之內(nèi)。相關(guān)的
背景技術(shù)：
：說(shuō)明維甲類(lèi)化合物不僅在上皮細(xì)胞的發(fā)育與分化過(guò)程，而且在逆轉(zhuǎn)癌前病變過(guò)程中起著重要作用。臨床資料顯示N-(4-羧苯基)維甲酰胺可用于治療一些癌前病變，如口腔白斑、外陰白斑、宮頸及胃粘膜不典型增生及相似的疾病(Han等InVivo，4153-160(1990))。其它維甲類(lèi)化合物如isoretinoin及etretinate，作為處方藥用于痤瘡及牛皮癬的治療(Gander等，美國(guó)專利4,126,693)。然而，維甲類(lèi)化合物有一定的毒性，用已知的維甲類(lèi)化合物進(jìn)行治療，在用藥的同時(shí)會(huì)發(fā)生一定的毒副作用，因此有必要提供一些新的化合物，這些化合物具有維甲類(lèi)活性，但只具有較低的毒副作用。Smith等(J.Clin.Oncol.10(5)839～864(1992))回顧了維甲類(lèi)化合物在癌癥治療中的應(yīng)用，強(qiáng)調(diào)主要應(yīng)用于急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)的抗癌作用。Smith等報(bào)道了自然界存在的維甲類(lèi)全反式維甲酸能誘導(dǎo)急性粒細(xì)胞白血病(AML)、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、畸胎瘤、黑色素瘤及鼠橫紋肌肉瘤的分化作用。維甲酸同時(shí)也在上皮細(xì)胞的正常分化過(guò)程中起著必不可少的作用。Smith等在表6中列出了在皮膚病學(xué)研究中，應(yīng)用全反式維甲酸所致的臨床毒性，從參考文獻(xiàn)的文中披露維甲類(lèi)化合物被認(rèn)為是很強(qiáng)的致畸劑。Kizaki等在SeminarsinOncology，19(1)95-105(1992)上報(bào)道，維甲類(lèi)化合物在多種實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭芯哂泻軓?qiáng)的抗致癌作用，能抑制轉(zhuǎn)化腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其分化。很多文獻(xiàn)都專門(mén)報(bào)道了維甲酸衍生物作為抗癌劑。Just等(美國(guó)專利4,385,175)發(fā)現(xiàn)維甲酸的酯類(lèi)與azetidinones的化合物可用作抗癌劑。Philippe等(美國(guó)專利5,096,713)公開(kāi)了L-克拉定糖的維甲酸酯具有抗腫瘤活性。Paust(加拿大專利1,127,170)針對(duì)N-羧基-苯酰胺維甲酸和7，8-脫氫-維甲酸N-羧基苯酰胺進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)維甲類(lèi)化合物主要用于癌的預(yù)防，同時(shí)也可用于膀胱癌、乳腺癌、皮膚癌及粘膜癌的治療。很多文獻(xiàn)報(bào)道維甲類(lèi)化合物可用于癌的預(yù)防或作細(xì)胞分化的誘導(dǎo)劑。例如，Newton等(CancerRes.403413-3425(1980))報(bào)道了一系列維甲酸脂類(lèi)、胺類(lèi)和酰胺類(lèi)具有癌的預(yù)防作用，但未報(bào)道類(lèi)黃酮和查爾酮類(lèi)。Du等(Inst.Mater.Med.ChineseAcad.Med.Sci.Beijing17331-337(1982))報(bào)道了維甲酸胺類(lèi)RII(N-4(羥基羧酸基苯)維甲酰胺和RI(4-(乙酸苯基)-維甲酰胺)和它們作為防癌劑的應(yīng)用。Songetal.，(Inst.Mater.Med.ChineseAcad.Med.Sci.Beijing19576-581(1984))報(bào)道RI和RII具有細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑的一些特性。Shealy的專利(美國(guó)專利5,124,083)披露了維甲酸衍生物可作為細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑用于癌的預(yù)防及治療。Shealy等報(bào)道(J.Med.Chem.311124-1130(1988))雙功能維甲酸酯具有化學(xué)預(yù)防作用。Dawson(J.Med.Chem.271516-1531(1984))，Dawson等(J.Med.Chem.24583-592(1981))，Kagechika等(J.Med.Chem.24583-592(1981))，Kagechika等(J.Med.Chem.321098-1108(1989))，Skrede等(Eur.J.Clin.Investig.21574-579(1991))及Loev等(美國(guó)專利4,523,042)都公開(kāi)了各種具有誘導(dǎo)細(xì)胞分化的化合物。Gander(美國(guó)專利4,323,581)公開(kāi)了N-(4-羥基苯)-全反式維甲酰胺可以用于治療乳腺癌，同樣在美國(guó)專利4,310,546中，Gander公開(kāi)了N-(4-酰氧基苯)-全反式維甲酰胺可以用于上皮癌的預(yù)防。Gander等人的美國(guó)專利(專利號(hào)4,126,693和4,190,594)涉及維甲酸酯和維甲酸酰胺類(lèi)的其它特性。此外，Blazeek等(Biomed.Pharmacother.45169-177(1991))，Degos(Biomed.Pharmacother.46201-209(1992))，Castaigne等(Blood76(9)1704-1709(1990))，Chomienne等(Blood76(9)1710-1717(1990))及LoCoco等(Blood77(8)1657-1659(1991))都披露維甲酸可以用于急性早幼粒白血病(APL)的分化治療。一些黃酮類(lèi)及查爾酮類(lèi)被發(fā)現(xiàn)具有抗癌特性。Middleton等(Biochem.Pharmacol.431167-1179(1992))報(bào)道有關(guān)黃酮類(lèi)的抗腫瘤作用。Harrey等(J.Org.Chem.533936-3943(1988))及J.Org.Chem.556161-6166(1990))和Nair等(Carcinogenesis12(1)65-69(1991))報(bào)道具有抗致癌作用的香豆素及黃酮類(lèi)化合物。Jing等(中國(guó)藥理毒理雜志6(4)278-280(1992))發(fā)現(xiàn)異黃酮、diadzein能抑制黑色素瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。Ishizuka等(美國(guó)專利5,096,924)報(bào)道一種取代2-benzopyrinone具有抗癌活性。Ito等(美國(guó)專利4,960,908)，Briet等人(美國(guó)專利4,602,034、4,783,533及5,116,954)Kramer等(美國(guó)專利4,713,465)均發(fā)現(xiàn)benzopyrirone化合物可作為抗癌劑。Preuss-Ueberscher等(DrugRes.341305-1313(1984))發(fā)現(xiàn)benzopyrones包括香豆素沒(méi)有致畸作用。Egan等人對(duì)香豆素相關(guān)的化合物的藥理活性進(jìn)行了詳細(xì)論述，他指出香豆素相關(guān)的化合物能抑制致癌物的致癌作用，可以用于黑色瘤的治療。Edwands等(J.Med.Chem.331948-1954(1990))報(bào)道了查爾酮類(lèi)的抗有絲分裂作用。Cassady等、Ito等(中國(guó)北京國(guó)際化學(xué)生物學(xué)癌癥研究進(jìn)展論文集，1991年5-6頁(yè)和68-69頁(yè))報(bào)道了關(guān)于各種黃酮類(lèi)，其中包括biochaninA的抗有絲分裂作用。Han等(中國(guó)癌證研究，2(3)51-53(1990))報(bào)道了一種在中國(guó)應(yīng)用的中藥葛根的活生成份S86019的藥理活性。S86019的結(jié)構(gòu)尚未見(jiàn)報(bào)道。在另一發(fā)表的文獻(xiàn)invivo，4153-160(1990)中，Han等評(píng)價(jià)了維甲胺酸RII作為癌的預(yù)防及癌的化學(xué)治療劑的可能性，并討論了維甲胺酸與S86019聯(lián)合用藥誘導(dǎo)HC-60細(xì)胞的分化作用。維甲胺酸及S86019在誘導(dǎo)的細(xì)胞分化方面具有協(xié)同作用。據(jù)報(bào)道這種聯(lián)合用藥能減低患者的毒性，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。以上引用的任一文件并非想要承認(rèn)這些文件是適當(dāng)?shù)囊延屑夹g(shù)，或者看做是對(duì)本專利申請(qǐng)任一權(quán)利要求具有專利性的技術(shù)資料。關(guān)于這些文件的內(nèi)容和日期的任何說(shuō)法都要根據(jù)申請(qǐng)人在提請(qǐng)注冊(cè)的時(shí)間得到的信息來(lái)定，而不構(gòu)成對(duì)這種說(shuō)法正確性的承認(rèn)。本發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明的目的是要克服維甲類(lèi)化合物相關(guān)技術(shù)一個(gè)或一個(gè)以上的缺點(diǎn)，特別是要克服與維甲類(lèi)化合物相關(guān)的致畸作用。本發(fā)明的另一目的是要提供具有體外抗腫瘤活性的新維甲類(lèi)化合物，如香豆素維甲類(lèi)化合物和嘌呤維甲類(lèi)化合物。本發(fā)明再一個(gè)目的是要提供具有體內(nèi)抗腫瘤活性的新維甲類(lèi)化合物，如香豆素維甲類(lèi)化合物或嘌呤維甲類(lèi)化合物。本發(fā)明還有一個(gè)目的是用本發(fā)明的方法提供新的維甲類(lèi)化合物和組合物，該化合物和/或組合物對(duì)于哺乳類(lèi)動(dòng)物，特別是人在研究和藥物應(yīng)用上都是有用的?，F(xiàn)在要求權(quán)利保護(hù)的維甲類(lèi)化合物和組合物是將維甲類(lèi)化合物和組合物細(xì)胞分化誘導(dǎo)作用與香豆素類(lèi)化合物的抗致癌特性協(xié)同結(jié)合在一起。本發(fā)明的一個(gè)用途是用維甲類(lèi)化合物作為一種對(duì)照物或組分比較其它化合物體外抗腫瘤活性試驗(yàn)。這種維甲類(lèi)化合物也用作體外、原位和/或體內(nèi)的化學(xué)治療劑。然而，本發(fā)明另一目的是提供一種合成方法，根據(jù)這種方法(結(jié)構(gòu)I、結(jié)構(gòu)II)可以獲得在此所述的維甲類(lèi)化合物。再有，本發(fā)明也針對(duì)一種方法，對(duì)患者病理學(xué)上癌前期或癌癥病人，通過(guò)給至少一種維甲類(lèi)化合物和/或組合物其含有或基本含有香豆素維甲類(lèi)和/或嘌呤維甲類(lèi)化合物，進(jìn)而還任選含有或基本含有至少一種抗癌藥物和/或免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)行治療。本發(fā)明的其他特征、優(yōu)點(diǎn)、實(shí)施方式、狀況和目的對(duì)于那些熟悉有關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
的人員，根據(jù)在此提出的說(shuō)明，講授和引導(dǎo)，都會(huì)是明了的。附圖的簡(jiǎn)短說(shuō)明圖1表示維甲類(lèi)化合物對(duì)巴豆油誘導(dǎo)鼠表皮ODC(鳥(niǎo)氨酸脫羧酶)的抑制作用(x±SD，n＝3)。較佳實(shí)施方式的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明提供一類(lèi)新的具有生物活性的維甲類(lèi)化合物，這類(lèi)化合物顯示癌化學(xué)預(yù)防活性。這些衍生物包括但不限于式I的化合物，如香豆素維甲類(lèi)化合物，或式II的化合物，如嘌呤維甲類(lèi)化合物。其中R1＝H，C1-C18烷基或COR7，其中R7＝H，OH，C1-C18烷氧基(優(yōu)選C1-C2烷氧基)或NHR8，其中R8＝H，C1-C18烷基(優(yōu)選C1-C2烷基)，或未取代或取代的苯基(苯環(huán)上的取代基優(yōu)選為OH，COOH，OCH3，和NO2)；R2上H，OH，C1-C18烷基(優(yōu)選為甲基)或OR，其中R＝維甲?；?；R3是H，CH3，COR7，OR或CH2OOR，這里R和R7如上述規(guī)定；R4是H，鹵素(優(yōu)選為C1)，C1-C18烷基，OH，OR或COR7，其中R和R7如上述規(guī)定；R5是H，或OR，其中R如上述規(guī)定；以及R6是H，CH3，OR，或COR7，其中R和R7如上述規(guī)定；在上述式I化合物的基團(tuán)R2-R6中至少有一個(gè)含有維甲?；８鶕?jù)本發(fā)明通式I的化合物(I-1)-(I-38)列于表1，但不限于這些例示，其中的R＝維甲?；?</tables>根據(jù)本發(fā)明嘌呤維甲類(lèi)化合物有以下通式(II)其特征是R＝上面這些化合物(II-A)-(II-L)只是提供了按照通式(II)的例示，但不局限于這些實(shí)例。這些化合物，或其異構(gòu)體可以任何組合方式作為本發(fā)明的化合物或組合物。本發(fā)明的這些維甲類(lèi)化合物是意外發(fā)現(xiàn)有抗癌活性的，這樣，對(duì)治療與癌相關(guān)聯(lián)的疾病提供的適宜化合物和組合物可任意添加藥物活性成分，如抗病毒劑，化療藥物和/或免疫刺激物，抗病毒抗體和/或其片斷，可在體外和/或體內(nèi)使用。本發(fā)明所說(shuō)的與癌有關(guān)的疾病包括，但不局限于，腫瘤和病理上與腫瘤形成有關(guān)的疾病、白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、肉瘤、與病毒有關(guān)的癌以及任何其他已知的癌。術(shù)語(yǔ)“抗癌活性”是指對(duì)下面三種至少一種的能力，這三種是(1)對(duì)轉(zhuǎn)化、突變、癌前或癌細(xì)胞的生長(zhǎng)或有絲分裂的抑制作用；(2)促進(jìn)細(xì)胞程序性死亡；(3)對(duì)血管生成的抑制作用。根據(jù)本發(fā)明所說(shuō)的術(shù)語(yǔ)抑制或刺激，作為一個(gè)量值，抑制是在10和100％之間，刺激是在10和1000％之間，這些都是與相應(yīng)對(duì)照相比，這些對(duì)照但不局限于，除了現(xiàn)有或一種或多種本發(fā)明的維甲類(lèi)化合物外，要在相同條件下使用相同的細(xì)胞和動(dòng)物。為獲得依據(jù)式(I)或式(II)的維甲類(lèi)化合物，本發(fā)明也提供其合成方法，該方法對(duì)于本專業(yè)普通技術(shù)人員按照在此提供的講解和指導(dǎo)，結(jié)合相關(guān)專業(yè)領(lǐng)域已知技術(shù)都會(huì)是很清楚的。一般說(shuō)來(lái)，合成香豆素或嘌呤化合物和/或維甲?；衔锟勺鳛樵?，加上適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)，改變或用適當(dāng)已知的化學(xué)反應(yīng)步驟，就可提供出式(I)或式(II)的維甲類(lèi)化合物?？拱┗钚栽囼?yàn)有許多已知的體外試驗(yàn)用來(lái)測(cè)定給出的化合物和/或組合物是否有抗癌活性。這些方法在技術(shù)上是人們熟知的，并且在技術(shù)測(cè)定方面是普通技術(shù)人員熟悉的一種方法，應(yīng)用常規(guī)實(shí)驗(yàn)測(cè)定本發(fā)明給出的化合物是否有對(duì)給出的與癌有關(guān)的病理模型有活性。為測(cè)定至少一種藥效，現(xiàn)將用于篩選式(I)或式(II)香豆素維甲類(lèi)化合物和嘌呤維甲類(lèi)化合物方法的實(shí)施例列于下述，基于這里所講的和所指導(dǎo)的沒(méi)有不適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)。體外試驗(yàn)抗癌活性不受限制的實(shí)施例包括，但不局限于(1)對(duì)TPA(Tetradecanoylphorbol-13-acetate)促進(jìn)的磷脂磷酸化的拮抗作用作為抗促癌效果的篩選試驗(yàn)(參閱Shibata，StemCells1244-52(1994))；(2)軟瓊脂克隆試驗(yàn)(如Rangeletal.，CancChemother，Pharmacol.33460-464(1994))；(3)對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性(參看Rajalaetal.，Ann，Chir.Gynacol.Supp1.20650-53(1993))；對(duì)人胃癌細(xì)胞繁殖的抑制作用(Shibata，見(jiàn)上引)；(3)對(duì)癌細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞毒活性(參看Ngassapaetal.，J.Nat.Prod.15561676-1681(1993)；Sanyaletal.，Neoplasma40219-222(1993)；Perezetal.，CancerChemother.Pharmacol.33245-250(1993)；Hahnetal.，Canncer722705-2711(1993))；(4)對(duì)腫瘤克隆形成單位的抑制作用(參看ECKardtetal.，J.Nat′lCancerInst.8630-33(1994)；Chenetal.，AnticancerDrugs4447-457(1993)；(5)對(duì)人髓性白血病細(xì)胞的分化作用；和(6)抑制細(xì)胞的MTT試驗(yàn)，參看這里引證的全部參考文獻(xiàn)。體內(nèi)抗癌活性不受限制的實(shí)施例包括，但不局限于(1)抑制小鼠皮膚瘤形成的活性；(參看Shibata，StemCells1244-52(1994))；(2)抑制動(dòng)物致癌模型系統(tǒng)的活性(參看Kennedy，Prov.Med.22769-811(1993))；Johnsonetal.，CancerChemother.Pharmacol.32339-346(1993))；如對(duì)裸鼠或嵌合體裸鼠致癌模型系統(tǒng)的活性(參看Toppetal.，Blood822837-2844(1993)；Sailkawaetal.，Jpn.J.CancerRes.84787-793(1993))；(3)對(duì)單核細(xì)胞活化試驗(yàn)的活性(Shietal.，CancerRes.533986-3991(1993)；(4)血清瘤壞死活性試驗(yàn)(Shietal.，CancerRes.533986-3991(1993))；(5)對(duì)巴豆油誘發(fā)鼠耳腫脹的抑制活性和(6)對(duì)巴豆油誘發(fā)的小鼠表皮鳥(niǎo)胺酸脫羧酶活性升高的抑制活性。這里列入的全部參考文獻(xiàn)都可供參考。另外，預(yù)測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)和人工智能可用于提供計(jì)算機(jī)程序，這種程序可計(jì)算活性模式，整合整體數(shù)據(jù)，結(jié)構(gòu)閥和分子靶點(diǎn)的細(xì)胞表達(dá)，結(jié)合篩選數(shù)據(jù)和構(gòu)效關(guān)系的藥物設(shè)計(jì)和試驗(yàn)以預(yù)期所給出化合物的作用機(jī)理(Weinsteinetal.，StemCells1222-(1994)，參考這里收入的全部文獻(xiàn)。藥物組合物藥物組合物由本發(fā)明香豆素維甲類(lèi)化合物和/或嘌呤維甲類(lèi)化合物組成，包括全部組合物，其中至少含有一種能達(dá)到預(yù)期目的的有效量藥物或組合物。另外，由至少一種本發(fā)明的藥物或組合物構(gòu)成的藥物組合物可以含有適當(dāng)?shù)挠少x形劑和輔助劑組成的藥用載體，這些載體有助于使活性的藥物制成藥用制劑。本發(fā)明的藥物組合物也包含有抗癌藥和/或免疫調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明的藥物或藥物組合物可進(jìn)一步主要包括或由單鏈核糖體(能阻斷與癌有關(guān)的受體細(xì)胞或組織中的與癌相關(guān)蛋白的表達(dá))，細(xì)胞激動(dòng)素或生長(zhǎng)因子當(dāng)中的至少一種組成。由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞激動(dòng)素稱為淋巴激活素，而由單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的肽類(lèi)取名單核細(xì)胞激動(dòng)素。因此，術(shù)語(yǔ)細(xì)胞激動(dòng)素、淋巴激活素和白細(xì)胞素可交互使用稱謂這些肽分子，這些激動(dòng)素可調(diào)節(jié)宿主對(duì)外來(lái)抗原的反應(yīng)，或者宿主受傷時(shí)，用于調(diào)節(jié)白細(xì)胞或其他細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和分化。根據(jù)本發(fā)明所使用的激動(dòng)素適用于增加本發(fā)明組合物中的活性成分的那些激動(dòng)素。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，細(xì)胞毒劑或化療藥物可進(jìn)一步包括在本發(fā)明的藥物組合物中，進(jìn)而任意包括一個(gè)傳媒體，該傳媒優(yōu)先結(jié)合于，或有助于使藥物/診斷藥或組合物結(jié)合于癌靶細(xì)胞。這種類(lèi)型的治療靶點(diǎn)也可以是生長(zhǎng)因子受體、分化抗原、或其他與癌或癌前細(xì)胞有關(guān)的非典型性細(xì)胞表面抗原。藥物組合物也可包括用于注射或口服給藥的溶液，并且含有由大約0.001到99％的活性成分，含20到75％活性成分更好?？诜乃幬锝M合物包括片劑和膠囊。直腸給藥的組合物包括栓劑?；钚猿煞值乃幬镙d體，可以是噴霧型的或非噴霧型的。非噴霧型可以是半固體或固體型，由有助于局部應(yīng)用，由動(dòng)力學(xué)粘度最好大于水的載體組成。另外，適于全身或局部，特別是粘膜和肺部應(yīng)用的是噴霧型霧劑，其中活性成分最好是與固體或液體型惰性載體物質(zhì)成結(jié)合狀態(tài)。氣霧劑除含有本發(fā)明的維甲類(lèi)化合物或組合物外，還可含有溶劑、緩沖液、表面活性劑、香料和/或抗氧化劑。藥物用法為達(dá)到用藥目的，如治療或預(yù)防癌或癌前病變，本發(fā)明的藥物或組合物的藥物用法，可用任何方法給藥。術(shù)語(yǔ)“保護(hù)(Protection)”(如防止癌或癌前病變)在這里使用包含著“預(yù)防(Prevention)”，“抑制(Suppression)”或“治療(Treatment)”，“預(yù)防”是在疾疾誘發(fā)之前給藥物組合物，“抑制”包括在臨床出現(xiàn)病以前給藥物組合物，“治療”包括在病出現(xiàn)以后給保護(hù)組合物。應(yīng)當(dāng)理解，由于最終對(duì)病人誘發(fā)的進(jìn)程無(wú)法知道，潛伏期如何，直到病人發(fā)生的進(jìn)程在很久以后才確定，所以總是無(wú)法辨別人和獸藥的“預(yù)防(Prevention)”和“抑制(Suppression)”之間的區(qū)別。因此，為與“治療″(Treatment)相區(qū)別，共同用術(shù)語(yǔ)“預(yù)防(Prophylaxis)來(lái)包括這里定義的預(yù)防(Preventing)和抑制(Suppressing)。這里使用的術(shù)語(yǔ)“保護(hù)(Protection)”其意思包括“預(yù)防(Prophylaxis)”。參閱Berkowetal.，eds.，TheMerckManual，16theditionMerckandCo.，Rahway，N.J.1992；Goodmanetal.，eds.，GoodmanandGilman’sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，8thedition，PergamonPress，Inc.，Elmeford，N.Y.，(1990)；Katzung，BasicandClinicalPharmacology，AppletonandLange，Norwalk，Conn.(1992).參看這里收集的所有文獻(xiàn)也包括其他地方引證的參考文獻(xiàn)。所說(shuō)的“保護(hù)”不需要是絕對(duì)的，亦即疾病不必是全部預(yù)防或根除，只要與對(duì)照人群相比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有改善(P＝0.05)就是有保護(hù)作用。保護(hù)可限制在減輕病癥發(fā)作的嚴(yán)重性或急劇性。像以前敘述的那樣使用藥物組合物，為達(dá)到預(yù)期目的，可用任何方法服用本發(fā)明的至少一種維甲類(lèi)化合物或組合物。例如，可經(jīng)各種非腸道給藥，像皮下、靜脈注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射、腹膜注射、鼻內(nèi)給藥、顱內(nèi)給藥、透皮給藥、頰內(nèi)給藥。非腸道給藥也可用團(tuán)塊注射或慢慢灌注。可交替或同時(shí)口服給藥。使用本發(fā)明的藥物或組合物的另一種方式是局部用藥。本發(fā)明的藥物或組合物可混入局部用賦形劑像軟膏或油膏內(nèi)使用。典型的治療或預(yù)防方案包括服用有效量的藥物，療程是一天或幾天，直至一周到6個(gè)月之間。當(dāng)然，服用本發(fā)明的藥物或組合物的劑量將取決于服藥者的年齡、性別、健康狀況和體重，同時(shí)治療的種類(lèi)(如果有的話)，治療次數(shù)，所希望藥效的性質(zhì)。這里所提出的有效劑量的范圍是不受限制的，代表優(yōu)選劑量范圍。然而，對(duì)個(gè)別的受試者將制定最佳劑量，如所了解的，這種最佳劑量是用熟練的相應(yīng)技術(shù)測(cè)定的。參看Kerkowetal.，Supra，Goodmanetal.，SupraandKatzung，Supra；Avery′sDrugTreatmentPrinciplesandPracticeofClinicalPharmacologyandTherapeutics，3rdedition，ADISPress，LTD.，WilliamsandWilkins，Baltimore，MD，(1987)，Ebadi，Pharacology，Little，BrownandCo.，Boston(1985)，參考這里引證的全部文獻(xiàn)。每一種治療所需總劑量可以分成多次或按一次劑量給藥，藥物或組合物可單獨(dú)服用或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用。本發(fā)明的藥物或組合物的有效量是從大約0.001μg至大約100mg/kg體重，優(yōu)選是從大約5mg/kg至100mg/kg體重，最好是大約20mg/kg至50mg/kg體重，給藥間隔4-72小時(shí)，療程2天至5年。本發(fā)明的藥物或組合物優(yōu)選給受試者哺乳動(dòng)物服用，最好是給受試人服用?，F(xiàn)在對(duì)本發(fā)明已作了一般的敘述，通過(guò)下面作為說(shuō)明的實(shí)施例將更容易理解，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。實(shí)施例1根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物3-乙?；?5-羧基-7-維甲酰氧基香豆素(I-4)的制備。將100ml圓底瓶裝以電磁攪拌器，帶有氯化鈣干燥管的冷凝管，其中放入0.6g(0.002M)維甲酸，20ml苯和0.12ml(0.002M)PCl3，在室溫N2保護(hù)下攪拌1小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，剩余物溶于20ml絕對(duì)無(wú)水乙醚備用。在100ml三頸瓶中加入0.5g(0.002M)3-乙?；?5-羧基-7-羥基香豆素，0.5ml吡啶和20ml絕對(duì)無(wú)水乙醚。在室溫?cái)嚢柘碌渭由鲜鼍S甲酰氯的絕對(duì)無(wú)水乙醚溶液，加完后再攪拌2小時(shí)，濾集固體，干燥，以乙醇重結(jié)晶，得0.7克純產(chǎn)物，并有以下特性熔點(diǎn)145-147℃，’HNMRCDCL3δ1.03(s，6H，1′-雙-CH3)；1.38-2.14(m，6H，脂環(huán)-CH2)；1.71(s，3H，5′-CH3δ)；2.02(s，3H，9′-CH3)；2.42(s，3H，13′-CH3)；2.70(s，3H，3-COCH3)；4.76(b，1H，5-CO2H)；5.93-6.41和6.97-7.26(m，6H，維甲?；碾p鍵氫)；7.40(d，1H，8-H)；7.85(d，1H，6-H)，9，51(s，1H，4-h)；MSC32H34O7＝530(M+)，282(維甲?；?，248(香豆素)，233(100，248-CH3)。實(shí)施例2根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物3-乙?；?5-乙氧羰基-7-維甲酰氧基香豆素(I-11)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.56g(0.002M)3-乙?；?5-乙氧羰基-7-羥基香豆素和0.6g(0.002M)維甲酸(乙醇精制)得到0.5g產(chǎn)物。熔點(diǎn)162-64℃；’HNMRCDCL3δ1.04(s，6H-1′-雙-CH3)；1.44(t，3H，5-酯CH3)；1.14-2.12(m，6H，脂環(huán)-CH2-)；1.72(s，3H，5′-CH3)；2.03(s，3H，9′-CH3)；2.42(s，3H，13′-CH3)；2.70(s，3H，3-COCH3)；4.24(q，2H，5-酯-CH2)；5.88-6.48和6.98-7.25(m，6H，維甲?；碾p鍵氫)；7.36(d，1H，8-H)；7.73(d，1H，6-H)；9.47(s，1H，4-H)；MsC34H38O7＝558(M+，近基峰)，283，276，261，233，231，175(100，231-28-28)。實(shí)施例3根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-維甲酰氧基-6-叔丁基-香豆素(I-28)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.6g4-羥基-6-叔丁基-香豆素和1g維甲酸得0.6g產(chǎn)物(產(chǎn)率43％)，熔點(diǎn)1.42-44℃，′HNMRδ(CDCL3)1.05(s，6H，1′-2CH3)，1.37(s，9H，叔丁基-3CH3)，1.48，1.62和2.04(m，6H，環(huán)-CH)，1.73(s，3H，5′-CH3)，2.05(s，3H，9′-CH3)，2.46(s，3H，13′-CH3)，6.06(s，1H，3-H)，6.16-6.52和7.16-7.26(m，6H，雙鍵-H)，7.30(d，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，MS500(M+)，282，218，203，175，161。實(shí)施例4根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-維甲酰氧基-7-甲基香豆素(I-37)的制備是與實(shí)施例1相同的條件下，由0.4g4-羥基-7-甲基香豆素和1.0g維甲酸得到0.5g產(chǎn)物(產(chǎn)物50％)。熔點(diǎn)115-117℃，′HNMRδ(CDCL3)1.03(s，6H，1′-2CH3)，1.32-2.14(m，6H，環(huán)-CH2)，1.71(s，3H，5′-CH3)，2.03(s，3H，9′-CH3)，2.42(s，6H，7，13′-2CH3)，5.92(s，1H，3-H)，5.96-6.50和6.92-7.26(m，6H，烯烴-H)，7.10(m，2H，Ar-H)7.48(d，1H，Ar-H)，MS458(M+)，430，355，321，307，282，267，175，159，147。實(shí)施例5根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4，8-二甲基-7-維甲酰氧基-香豆素(I-32)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.57g4-甲基-7-羥基-香豆素和1.0g維甲酸得到0.54g產(chǎn)物(產(chǎn)率39％)，溶點(diǎn)178-80℃，’HNMRδ(CDCl3)，1.04(s，6H，1′-2CH3)，1.16-2.28(m，6H，環(huán)CH2，H3)，1.73(s，3H，5′-CH3)，2.01(s，3H，9′-CH3)，2.28(s，3H，8-CH3)，2.41(s，6H，4，13′-2CH3)，5.99(s，1H，3H)，6.01-6.56和6.86-7.28(m，6H，烯烴-H)，7.06(d，1H，Ar-H)，7.40(d，1H，Ar-H)，MS472(M+)，283，190，175，161。實(shí)施例6根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-甲基-6-乙基-7-維甲酰氧基香豆素(I-31)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.61g4-甲基-6-乙基-7-羥基香豆素和1.0g維甲酸得到0.43g產(chǎn)物(產(chǎn)率43％)，溶點(diǎn)120-2℃，′HNMRδ(CDCl3)，1.05(s，6H，1′-2CH3)，1.22(t，3H，6-Et-CH3)，1.16-2.24(m，6H，環(huán)-CH2)，1.72(s，3H，5′-CH3)，2.02(s，3H，9′-CH3)，2.41(s，3H，13′-CH3)，2.66(q，2H，6-Et-CH2)，6.00(s，1H，3-H)，6.06-6.50和6.88-7.26(m，6H，烯烴-H)，7.07(s，1H，Ar-H)，7.41(s，1H，Ar-H)，MS486(M+)，470，363，283，204，189，175，161。實(shí)施例7根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-甲基-7-維甲酰氧基香豆素的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.4g4-甲基-7-羥基香豆素和0.9g維甲酸得0.64克產(chǎn)物(產(chǎn)率61.5％)，容點(diǎn)154-6℃，′HNMR，δ(CDCl3)1.04(s，6H，1′-2CH3)，1.47，1.62和1.94(m，6H，環(huán)-CH2)，1.72(s，3H，5′-CH3)，2.03(s，3H，9′-CH3)，2.42-2.44(d，6H，4，13′-2CH2)，5.98(s，1H，3-H)，6.15-6.39和7.09-7.12(m，6H，烯烴-H)，7.15(m，2H，Ar-H)，7.60(d，1H，Ar-H)，MS458(M+)，283，175，161，148。實(shí)施例8根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-甲基-5，7-二維甲酰氧基-香豆素(I-33)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.52g4-甲基-5，7-二羥基-香豆素和2g維甲酸得0.75g產(chǎn)物(產(chǎn)率36％)，熔點(diǎn)134-136℃，’HNMRl，δ(CDCl3)1.04(s，12H，1’，1”-4CH3)，1.48，1.62和2.00((m，12H，雙-(環(huán)-CH2))，1.73(s，6H，5’，5”-2CH3)，2.04(s，6H，9’，9”-2CH3)，2.48(d，6H，13’，13”-2CH3)，5.97(s，1H，3-H)，6.15-6.40和6.93-7.17(m，12H，烯烴-H)，7.13(d，1H，Ar-H)，7.16(d，1H，Ar-H)，MS474(M+-282)，283，192，175，161。實(shí)施例9根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-甲基-6-己基-7-維甲酰氧基香豆素(I-34)的制備在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.7g4-甲基-6-己基-7-羥基香豆素和1.0g維甲酸得到1.0g產(chǎn)物(產(chǎn)率41％)，熔點(diǎn)114-5℃，’HNMR，δ(CDCL3)0.87(t，3H，6-己基-CH3)，1.04(s，6H，1’-2CH3)，1.02-2.63)(m，14H，6己基和環(huán)-CH2)，1.73(s，3H，5’-CH3)，2.03(s，3H，9’-CH3)，2.42(s，6H，4，13’，2CH3)，2.58(m，2H，6-己基-CH2)，6.02(s，1H，3-H)，6.16-6.41和7.06-7.40(m.6H，烯烴-H)，7.10(s，1H，Ar-H)，7.42(s，1H，Ar-H)，MS542(M+)，527，283，260，189，175，161，135。實(shí)施例10根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-維甲酰氧基-6-甲基-香豆素I-35的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.5g4-羥基-6-甲基香豆素和1.0g維甲酸得產(chǎn)物0.73g(產(chǎn)率56.3％)，熔點(diǎn)104-6℃’HNMR，δ(CDCl3)1.04(s，6H，1′-CH3)，1.42，1.62，和2.03(m，6H，環(huán)-CH2)，1.73(s，3h，5′-CH3)，2.04(s，3H，9′-CH3)，2.43(d，6H，6，13′-2CH3)，6.05(s，1H，3-H)，6.17-6.50和7.16(m，6H，烯烴-H)，7.25(m，2H，Ar-H)，7.37(d，1H，Ar-H)，MS458(M+)，444，430，282，176，161。實(shí)施例11根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-甲基7，8-二維甲酰氧基-香豆素(I-36)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，由0.57g4-甲基-7，8-二羥基-香豆素和2g維甲酸得1.65g產(chǎn)物(產(chǎn)率73.5％)熔點(diǎn)106-8℃，’HNMR，δ(CDCl3)，1.03(s，12H，1′1″-4CH3)，1.10-2.61(m，12H，環(huán)-CH2)，1.66(s，6H，5′5″-2CH3)，2.00(s，6H，9′，9″-2CH3)，2.17(s，6H，13′，13″-2CH3)，2.24(s，3H，4-CH3)，5.92(s，1H，3-H)，6.04-6.91和6.84-7.14(m，12H，烯烴-H)，7.18(d，1H，Ar-H)，7.44(d，1H，Ar-H)，MS474(M-282)，283，192，175，161。實(shí)施例12根據(jù)式I的香豆素維甲類(lèi)化合物4-維甲酰氧基-香豆素(I-38)的制備是在與實(shí)施例1相同的條件下，0.8g4-羥基香豆素和2.0g維甲酸得產(chǎn)物0.65g(產(chǎn)物30％)，溶點(diǎn)88-91℃，′HNMRδ(CDCL3)，1.04(s，6H，1′-CH3)，1.48-2.62(m，6H′環(huán)-CH2)，1.64(s，3H，5′CH3)，2.04(s，3H，9′-CH3)，2.36(s，3H，13′-CH3)，6.03(s，1H，3-H)，6.13-6.5和7.01-7.21(m，6H，烯輕-H)，7.27-7.69(m，4H，Ar-H)，MS444(M+)，429，416，282，255，175，161，159，135。實(shí)施例13根據(jù)式II嘌呤維甲類(lèi)化合物的制備為制備所要的化合物，將全反式維甲酸(0.01M)和三氯化磷(0.003M)合并于圓底燒瓶中，并且加入60ml石油醚攪拌，反應(yīng)混合物在瓶中以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀加熱，在這一步產(chǎn)生的氯化氫隨著反應(yīng)溶液揮發(fā)而逸出，得淺黃褐色透明液體。把反應(yīng)液倒出蒸餾除去溶劑，剩余物溶于乙酸乙酯。把帶有氨基或羥基的嘌呤化合物(0.01M)溶于適當(dāng)溶劑中，在室溫下攪拌將制備的維甲酰氯滴入，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)液變深，反應(yīng)繼續(xù)2小時(shí)，室溫放置過(guò)夜。濾集產(chǎn)物，以水洗或重結(jié)晶，濾液濃縮后通過(guò)重結(jié)晶或?qū)游鰜?lái)純化。產(chǎn)物通過(guò)薄板層析和化合物的溶點(diǎn)檢查，化合物的溶點(diǎn)也被研究了。嘌呤維甲類(lèi)化合物II-A的結(jié)構(gòu)鑒定參數(shù)如下紫外光譜(UV)λmax-EtOH340nmE＝5180紅外光譜(IR)KBrCm-1690-CONHR，1670-CON＜質(zhì)譜(MS)m/2700M+，699(M-1)核磁共振氫譜(′HNMR)CDCl3δppm1.05(12H，s，CH3)1.5-1.7(8H，m，CH2)1.75(6H，s，CH3)2.05(6H，s，CH3)2.55(6H，s，CH3)2.05(4H，t，CH2)元素分析計(jì)算值C75.28，H8.28，N9.75測(cè)定值C75.27，H8.55，N9.33實(shí)施例14香豆素維甲類(lèi)對(duì)細(xì)胞分化活性將人的早幼粒白血病細(xì)胞(HL-60)培養(yǎng)在RPMI-1640培養(yǎng)基加10％熱滅活小牛血清及100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素中。細(xì)胞培養(yǎng)在5％CO2、37℃溫箱中，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于小瓶中，每瓶接種5ml培養(yǎng)液及1.2×105到1.2×105個(gè)細(xì)胞/ml，每組三瓶，分別加入不同濃度的香豆素維甲類(lèi)，不同時(shí)期取少量培養(yǎng)液，用臺(tái)盼蘭排斥法在光鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞。根據(jù)形態(tài)及NBT還原能力判斷細(xì)胞分化程度。NBT還原活性測(cè)定取少量香豆素維甲類(lèi)處理不同時(shí)期的細(xì)胞。離心，每管加0.5ml0.1％NBT(含100ngTPA)。將小管置溫箱中37℃，溫孵1小時(shí)，然后，每管取細(xì)胞涂片，并用Wright-Giemsa染色，油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。含有蘭黑色顆粒為NBT陽(yáng)性細(xì)胞，50％的分化或有效濃度(ED50或EC50)以香豆素維甲類(lèi)克分子濃度表示。細(xì)胞形態(tài)的測(cè)定將香豆素維甲類(lèi)不同濃度、不同時(shí)間處理的細(xì)胞涂片，以Wright-Giema染色，將染色的細(xì)胞在油鏡下分類(lèi)計(jì)數(shù)。香豆素維甲類(lèi)處理后的HL-60其形態(tài)向成熟粒細(xì)胞方向分化，表現(xiàn)為細(xì)胞體積縮小，核漿比例縮小，核仁變小或消失，染色質(zhì)集中，一定比例的中、晚幼粒，桿狀或分葉核細(xì)胞。表2化合物濃度(M)NBT(+)％EC50(M)I-1110-4773×10-610-57210-64910-78I-1910-4929×10-610-58410-65I-210-5842×10-510-63810-72I-1210-5821×10-810-64710-73010-8010-90I-106.4×10-6991.3×10-86.4×10-7966.4×10-8826.4×10-9336.4×10-1010表2(續(xù))化合物濃度(M)NBT(+)％EC50(M)I-610-4966×10-710-58110-67810-73110-82I-710-5857.5×10-710-66510-712I-2710-5885.5×10-710-68010-717I-810-5985.9×10-810-66910-75510-834I-910-5966.5×10-810-68810-75510-831I-1510-5932.6×10-710-68410-74610-812表2(續(xù))化合物濃度(M)NBT(+)％EC50(M)I-2110-5942.5×10-710-68010-74110-817I-2610-5978.0×10-810-69110-75310-834I-510-5892.8×10-710-46910-741I-410-5927×10-810-68410-77310-815I-1810-5441×10-510-68I-1710-5841×10-610-65410-72I-310-5888×10-710-67710-712實(shí)施例15維甲類(lèi)對(duì)小鼠胚胎吸收的抗致畸作用在雌雄鼠合籠的第二天早晨，用含涂抹法檢查雌鼠陰道，若有精液或陰栓，雌鼠就被認(rèn)為是孕鼠。在受孕第七天開(kāi)始給藥，每天一次，至第20天。此時(shí)，當(dāng)雌鼠被鑒定為孕鼠時(shí)，脫椎處死小鼠，檢查兩側(cè)子宮，計(jì)數(shù)死胎、活胎及吸收胎，活胎進(jìn)一步檢查其骨骼異常情況。表3I-10對(duì)小鼠胚胎吸收的影響表4I-9對(duì)小鼠胚胎吸收的影響表5II對(duì)小鼠胚胎吸收的影響</tables>實(shí)施例16香豆素維甲類(lèi)化合物對(duì)巴豆油誘發(fā)的小鼠表皮鳥(niǎo)氨酸脫羧酶活性的影響。6-8周齡ICR小鼠，預(yù)先給予香豆素維甲類(lèi)化合物。第3天取0.2ml含1％的巴豆油的丙酮涂于小鼠皮膚上。涂敷后5小時(shí)處死動(dòng)物，用52℃簡(jiǎn)單熱處理30秒鐘，把表皮分離下來(lái)，再用一攪拌器將其絞碎。細(xì)胞懸浮液和肉液以30000xg30秒離心分離，取得上清液。通過(guò)測(cè)量從L-(14C)-鳥(niǎo)氨酸釋放出的CO2來(lái)測(cè)定鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)酶活性并以CO2/30min/mg蛋白來(lái)表示，其結(jié)果香豆素維甲類(lèi)化合物I-10和I-6示于附圖1。從附圖可以看出，香豆素維甲類(lèi)化合物能顯著抑制由巴豆油引起的ODC活性。ODC活性是檢驗(yàn)癌化學(xué)預(yù)防或助長(zhǎng)的一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。實(shí)施例17香豆素維甲類(lèi)化合物的抗氧化作用將1mMFeSO4和10mM半胱氨酸加入鼠肝微粒體來(lái)誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化，反應(yīng)是在一含有10mM磷酸緩沖液(pH7.4)的反應(yīng)混合物在溫度37℃下進(jìn)行30分鐘。通過(guò)加入0.3ml的20％三氯乙酸溶液來(lái)終止反應(yīng)。然后加硫代巴比土酸，將此混合物煮沸10分鐘，在水龍頭下冷卻試管后，在532nm處測(cè)量光密度。處理組和對(duì)照組的脂質(zhì)過(guò)氧化兩者都以nmolMDA/mg蛋白表示。抑制百分率便表明受試的香豆素維甲類(lèi)化合物的抗氧化特性。實(shí)施例18香豆素維甲類(lèi)化合物抗致突變作用抗致突變?cè)囼?yàn)是根據(jù)Ames等用鼠沙門(mén)氏菌TA102及TA100和哺乳動(dòng)物微粒體酶方法改進(jìn)而成。β-萘黃酮和苯巴比妥誘導(dǎo)的鼠肝上清液(900xg離心，S-9部分)用作代謝激活的酶源。將簽定的菌液(由Ames教授贈(zèng)送)接種于平皿上，并在37℃溫箱中溫孵15小時(shí)。從每一平皿取0.1ml菌液加入無(wú)菌試管中，每管加0.1ml不同濃度的香豆素維甲類(lèi)化合物和0.5ml、S-9混合液或磷酸緩沖液，在37℃水浴30分鐘，然后加2ml瓊脂液。完全混合后將溶液轉(zhuǎn)移到平皿上，再次在37℃溫孵48小時(shí)。溫孵后計(jì)數(shù)每平皿的菌落數(shù)。比較對(duì)照組及處理組細(xì)菌回復(fù)突變數(shù)，并計(jì)算出抑制率。表6I-6和I-5對(duì)Fe2+/Cys引起的鼠肝微粒體過(guò)氧化反應(yīng)(n＝3)</tables>*P＜0.05**P＜0.01表7I-6對(duì)MMS致突物(0.5μl/平皿)誘發(fā)的鼠沙門(mén)氏菌TA100和TA102(n＝3)組氨酸/回復(fù)突變的影響實(shí)施例19香豆素維甲類(lèi)化合物對(duì)巴豆油引起的鼠耳腫脹的影響取體重18-20克的ICR小鼠，每組10只。對(duì)處理組每日給予表8所示的香豆素維甲類(lèi)化合物劑量共10天。經(jīng)三次劑量處理后，處理組和對(duì)照組小鼠左耳都涂上0.05ml乙醚中的20％巴豆油。6小時(shí)后處死全部小鼠，其雙耳用角膜刀穿孔，然后稱重，計(jì)算每只小鼠兩耳重量之差。用t測(cè)驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)上計(jì)算。巴豆油誘發(fā)鼠耳腫脹是評(píng)估促癌的一種經(jīng)典方法。表8I-10和I-6對(duì)巴豆油引起鼠耳腫脹的抑制作用實(shí)施例20維甲類(lèi)化合物對(duì)胎鼠骨骼異常的抗致畸效應(yīng)如實(shí)施例15所述從雌鼠體內(nèi)取出活胚胎置于95％的乙醇中直至固定，然后放入茜素染料中染紅。在鼠胎成為透明時(shí)，剖開(kāi)鼠胎，在顯微鏡下觀察檢查其骨骼。表9I-10對(duì)鼠胎骨質(zhì)異常的作用表10-9對(duì)胎鼠骨骼異常的影響表11II-A對(duì)胎鼠骨骼異常的影響實(shí)施例21香豆素維甲類(lèi)化合物對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用用人癌細(xì)胞系(KB，A2780，MCF-7，HL-60，A549)做此試驗(yàn)。為單層培養(yǎng)，將0.5ml胰蛋白酶溶液(0.3gm/ml)加入多個(gè)燒瓶中進(jìn)行消化。微量滴定板(96孔)用于細(xì)胞培養(yǎng)，把200μl細(xì)胞懸浮物(1200腫瘤細(xì)胞)置于每一孔中并在37℃下孵育24小時(shí)。接著添加試驗(yàn)化合物，將對(duì)照燒瓶和處理燒瓶都置于一個(gè)CO2溫箱內(nèi)培訓(xùn)5天。為進(jìn)行MTT試驗(yàn)，將200μlMTT溶液(5mg在10ml磷酸緩沖劑中)加上培養(yǎng)基都加進(jìn)再溫孵另外4小時(shí)。隨著溫孵，去掉上清液，把200μlDMSO(二甲基亞砜)加到每一孔中。稍加攪拌用MR700Elisa在570nm處(參考波長(zhǎng)為450nm)測(cè)OD(光密度)值。該化合物的ED50(半數(shù)有效劑量)和腫瘤細(xì)胞存活率計(jì)算出抑制的百分比。表12HL-60細(xì)胞MTT試驗(yàn)結(jié)果實(shí)施例22維甲類(lèi)化合物對(duì)大鼠軟骨肉瘤生長(zhǎng)的影響移植的軟骨肉瘤獲自霍夫曼-拉羅奇分子生物學(xué)研究所Dr.Trown，而Wistar大鼠則由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供。依據(jù)文獻(xiàn)CancerTreatmentReports60(11)1647-1653(1976)所說(shuō)明的常規(guī)移植方法，用套管針把軟骨肉瘤的許多小碎片皮下移植入大鼠右側(cè)腹股溝。帶瘤的大鼠隨機(jī)分到對(duì)照組和處理組，每組10只大鼠，按指定劑量只飼該化合物12天。植入后60天處死大鼠，測(cè)定腫瘤重量，抑制率按下式計(jì)算表13I-10對(duì)大鼠軟骨肉瘤生長(zhǎng)的影響</tables>*給藥**P＜0.05表14II-A對(duì)大鼠軟骨肉瘤生長(zhǎng)的影響</tables>實(shí)施例23維甲類(lèi)化合物對(duì)癌細(xì)胞分化和癌細(xì)胞存活的影響用實(shí)施例14和21的記錄資料分別做NBT和MTT試驗(yàn)。表15香豆素維甲類(lèi)化合物對(duì)HL-60細(xì)胞的影響</tables>表16嘌呤維甲類(lèi)化合物對(duì)HL-60、HCT-8、A2780、KB和BEL7402細(xì)胞系的影響</tables>由于本發(fā)明已作了充分描述，本專業(yè)人員會(huì)懂得只要不脫離本發(fā)明的精神和范圍，不采用不適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)方法，在相同參數(shù)、濃度和條件的一整套范圍內(nèi)都能做出相同的結(jié)果。雖然本發(fā)明結(jié)合其具體的實(shí)施例已經(jīng)作了說(shuō)明，但應(yīng)該理解它可以作進(jìn)一步改進(jìn)。本申請(qǐng)要涵蓋本發(fā)明的一切變動(dòng)、用途和修改，總之，按照本發(fā)明的原理包括離開(kāi)現(xiàn)在披露的本應(yīng)屬于本發(fā)明已知的或通常操作的范圍之內(nèi)，以及可以適用于下文基本特征的下列所附的權(quán)利要求之內(nèi)。在此所引用的文獻(xiàn)，包括期刊上的文章和摘要，已經(jīng)發(fā)表的或相應(yīng)在美國(guó)或其他國(guó)家的專利申請(qǐng)，或任何其他參考文獻(xiàn)，都完全結(jié)合在此文獻(xiàn)之內(nèi)，包括已提供的引用文獻(xiàn)的所有數(shù)據(jù)、表格、附圖和正文，也一并包括文獻(xiàn)之內(nèi)。關(guān)于已知的方法步驟、常規(guī)方法步驟、已知的方法和常規(guī)方法一概不能容納在本發(fā)明所公開(kāi)的、所講授或提示的相關(guān)技術(shù)的見(jiàn)解、說(shuō)明或?qū)嵤┓绞椒秶鷥?nèi)。上述具體實(shí)施例方式的說(shuō)明把本發(fā)明總的性質(zhì)提示得如此充分使得他人通過(guò)應(yīng)用其所擅長(zhǎng)的技術(shù)知識(shí)，包括引用在此的文獻(xiàn)內(nèi)容，可以很容易地變換這些具體的實(shí)施方式并/或把這些具體實(shí)施方式改編成各種各樣的應(yīng)用，而并沒(méi)有超越的一套實(shí)驗(yàn)工作，也沒(méi)有脫離出本發(fā)明總的基本原理。所以，這樣的改編和變換都要被看做根據(jù)在此提供的講授和指導(dǎo)，是在已公開(kāi)實(shí)施方式的等同意義和范圍之內(nèi)。不言而喻，此處表達(dá)方式和名詞術(shù)語(yǔ)是為了說(shuō)明書(shū)的目的而不受其所限，因此本說(shuō)明書(shū)的名詞術(shù)語(yǔ)和表達(dá)方式是想要熟練的工作者按照這里提供的講授和指導(dǎo)，結(jié)合本專業(yè)的普通知識(shí)加以理解。權(quán)利要求1.根據(jù)式(I)的化合物其特征是R1＝H，C1-C18烷基，或COR7，其中R7＝H，OH，C1-C18烷氧基，或NHR8，其中R8＝H，C1-C18烷基，未取代苯基，或由OH，CO2H，OCH3或NO2取代的苯基；R2＝H，OH，C1-C18烷基，或OR，其中R＝維甲?；籖3＝H，CH3，COR7，OR，或CH2OR，其中R和R7如上所規(guī)定；R4＝H，鹵素，OH，C1-C18烷基，COR7，或OR，其中R和R7如上所規(guī)定；R5＝H或OR，其中R如上所規(guī)定；和R6＝H，CH3，COR7或OR，其中R和R7如上所規(guī)定；在以上情況下，R2-R6中至少有一個(gè)含有維甲?；?。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R1＝H或COR7，其中R7是CH3，C2H5，NH2或OH。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R2＝H，OR或CH3，其中R＝維甲酰基。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R3＝H，CH3，OR，CH2OR或COR7，其中R＝維甲?；蚏7＝OH，C2H5或OC12H25。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R4＝H，Cl，COOH，C2H5，C6H13，COCH3或COC6H5。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R5＝H或OR，其中R＝維甲?；?。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R6＝H，COOH，COCH3，CH3或OR，其中R＝維甲酰基。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于該化合物是選自由(I-1)，(I-2)，(I-3)，(I-4)，(I-5)，(I-6)，(I-7)，(I-8)，(I-9)，(I-10)，(I-11)，(I-12)，(I-13)，(I-14)，(I-15)，(I-16)，(I-17)，(I-18)，(I-19)，(I-20)，(I-21)，(I-22)，(I-23)，(I-24)，(I-25)，(I-26)，(I-27)，(I-28)，(I-29)，(I-30)，(I-31)，(I-32)，(I-33)，(I-34)，(I-35)，(I-36)，(I-37)，(I-38)及其異構(gòu)體組成的一族化合物。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R1＝COCH3，R2＝R3＝R4＝H和R5＝R6＝OR，其中R＝維甲?；?0.一藥物組合物包含的根據(jù)權(quán)利要求1所述的一化合物，和一藥物可接受的載體。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，還包含有一選自抗癌化合物或組合物或免疫調(diào)節(jié)劑的藥物。12.一種抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織中癌前或與癌相關(guān)病變的方法，包含服用根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物對(duì)癌前或癌有效抑制量的方法。13.根據(jù)式(II)的化合物其特征在于R是嘌呤衍生物。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物，其特征在于該化合物是選自由(II-A)，(II-B)，(II-C)，(II-D)，(II-E)，(II-F)，(II-G)，(II-H)，(II-I)，(II-J)，(II-K)，(II-L)及其異構(gòu)體組成的一族化合物。15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物，其特征是16.一種藥物組合物包含有一根據(jù)權(quán)利要求13所述的一化合物和一藥物可接受的載體。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的一藥物組合物，還包含有一選自抗癌化合物或組合物或一免疫調(diào)節(jié)制劑的藥物。18.一種抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織中的癌前或與癌相關(guān)病變的方法，包含服用根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物組合物對(duì)癌前或癌的有效抑制量的方法。全文摘要本發(fā)明提供新的維甲素化合物,如香豆素維甲類(lèi)化合物和/或嘌呤維甲類(lèi)化合物及它們的組合物,對(duì)于癌或癌前細(xì)胞呈現(xiàn)出治療學(xué)和/或生物學(xué)活性,同時(shí)也提供這些化合物的使用方法。文檔編號(hào)C07D311/00GK1187193SQ96194472公開(kāi)日1998年7月8日申請(qǐng)日期1996年6月7日優(yōu)先權(quán)日1996年6月7日發(fā)明者韓銳,徐世平,袁占亮申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所