專利名稱：4'－三氟甲基聯(lián)苯基－2－羧酸[2－(2h－[1,2,4]三唑－3－基甲基)－1,2,3,4－四氫 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及如下式Ⅰ表示的4’-三氟甲基聯(lián)苯基-2-羧酸[2-(2H-[1,2,4]三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氫-異喹啉-6-基]-酰胺，特別涉及到用于制備化合物Ⅰ的改良方法和中間體?；衔铫袷俏⒘ｓw甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白C和/或載脂蛋白B(Apo B)分泌的抑制劑，化合物Ⅰ由于可降低血清脂，因而可用于預(yù)防和治療動脈粥樣硬化及其臨床表現(xiàn)和相關(guān)疾病。
微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白(MTP)可催化甘油三酯、膽固醇酯和磷脂的轉(zhuǎn)運，已被認為能參與含有脂蛋白的Apo B集合物的形成，該生物分子與動脈粥樣硬化病灶的形成有關(guān)。參見歐洲專利申請0643057A1,0584446A2和Wetterau等，科學(xué)，258,999-1001,(1992)。因此，能抑制MTP和/或Apo B分泌的化合物可用于動脈粥樣硬化的治療，也可用于治療其他的可通過抑制MTP和Apo B的分泌，降低血清膽固醇和甘油三酯水平而緩解的疾病，如高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、胰腺炎和肥胖癥，和與胰腺炎、肥胖癥、糖尿病有關(guān)的高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥和高脂血癥。
本發(fā)明提供了制備式Ⅰ表示的化合物的方法，
包括用a)或b)中化合物處理式Ⅲ化合物
其中R表示H或R2,R2選自烯丙基或取代的甲基，其中取代基包括一至三個(C6-C12)芳基，其中芳基可被一或多個選自硝基和(C1-C6)烷氧基的取代基取代；a)式Ⅹ化合物
其中J代表離去基團，如鹵素，疊氮基團，(C1-C6)酰氧基或(C6-C12)芳酰氧基，優(yōu)選氯或溴原子；b)當R代表R2時，步驟a)產(chǎn)物用酸進一步用酸，如三氟乙酸(TFA)，對甲苯磺酸(PTSA)，甲磺酸或三氟甲磺酸，乙酸中HBr，優(yōu)選三氟乙酸處理。
“雜環(huán)”指的是含有至少一個雜原子的任意單環(huán)或稠合環(huán)系統(tǒng)，其中雜原子獨立選自O(shè),N,S。因此含有一或多個飽和的、部分不飽和的或芳香的(通常是苯環(huán))的稠合碳環(huán)的多環(huán)稠合環(huán)系統(tǒng)在雜環(huán)的定義內(nèi)，只要該系統(tǒng)也含有至少一個稠合環(huán)，該稠合環(huán)中含至少一個前述雜原子。作為取代基，該雜環(huán)可以與碳環(huán)(如苯環(huán))或雜環(huán)分子的余下部分相連接。
含“一或多個環(huán)”的部分指的是含有單環(huán)或稠合環(huán)的部分，這些環(huán)可以是飽和的或部分不飽和的，芳香的或非芳香的碳環(huán)或雜環(huán)。
稠合的多環(huán)系統(tǒng)或基團指的是系統(tǒng)中所有的環(huán)都是稠合的。
“鹵素”除非特別說明，指的是氟，氯，溴，碘?！胺蓟〈?如(C6-C12)芳基)指的是環(huán)或取代基是碳環(huán)。含有一個或多個雜原子的芳香部分包括在如上討論的術(shù)語“雜環(huán)”的定義中。
“酰基”取代基指的是一個通過取代基鍵合與羰基相連的脂肪族或環(huán)狀的烴部分。
“烷基”和“烷氧基”包括當含有兩個以上碳原子時，直鏈或支鏈環(huán)鏈基團，但應(yīng)理解單個基團如“丙基”或“丙?；眱H包括直鏈基團(“正?！?，而如“異丙基”或“異丙氧基”的支鏈異構(gòu)體稱為特殊。
下式表示的一些中間體
和它們的互變異構(gòu)體是本發(fā)明的另一特征，其中Y代表NH2或NO2。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，上述化合物可以幾種互變異構(gòu)體形式存在，這些互變異構(gòu)體也包括在本發(fā)明中。本發(fā)明提供的另一個中間體是式Ⅱ化合物
其中R代表R2，優(yōu)選CH3OC6H4CH2-。
在下面反應(yīng)路線和描述中，R,R2,J,K和Y及式Ⅰ至Ⅹ均如上定義。
路線1
路線2
路線3
如路線Ⅰ中所示，化合物Ⅸ是在堿性條件下通過1,2,4-三唑與式R2K(其中K代表定義如上鹵素)化合物反應(yīng)而制備的。R2K優(yōu)選為4-甲氧基芐基氯。反應(yīng)在室溫于極性溶劑中進行，極性溶劑如N,N-二(C1-C6)烷基羧酰胺，如二甲基乙酰胺(DMAC)和二甲基甲酰胺(DMF)；酮，如丙酮和甲基乙基酮；(C1-C6)烷醇，如乙醇，甲醇，異丙醇；和其混合物。用于本發(fā)明實施的堿包括堿金屬氫氧化物，碳酸鹽和碳酸氫鹽。優(yōu)選DMF和NaOH。
化合物Ⅷ通過在熱水中將化合物Ⅸ與甲醛一起加熱而制備，反應(yīng)應(yīng)用大約100至135℃外部熱源在回流溫度下進行，反應(yīng)用的過量甲醛可直接用37％的水溶液(也稱為福爾馬林)或線性多聚體(多聚甲醛)和三聚體(三氧雜環(huán)己烷)。多聚甲醛在熱水中分解，三氧雜環(huán)己烷在含有強酸的水溶液中變成甲醛。優(yōu)選福爾馬林。
在三苯基膦和二(C1-C6)烷基或二哌啶基偶氮基羧酸酯存在的條件下，將化合物Ⅷ與苯鄰二甲酰亞胺進行Mitsunobu反應(yīng)而得到化合物Ⅶ，優(yōu)選的二哌啶基偶氮基羧酸酯是二異丙基酯。反應(yīng)可以在非質(zhì)子溶劑如四氫呋喃(THF)，異丙基醚和二噁烷中，在大約0-65℃溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選THF和15℃。
將化合物Ⅶ懸浮在非質(zhì)子懸浮介質(zhì)如(C1-C6)烷醇(如甲醇，乙醇或異丙醇)中用肼處理可轉(zhuǎn)變成化合物Ⅵ。肼優(yōu)選用它的水合形式，優(yōu)選懸浮介質(zhì)為甲醇。反應(yīng)可在室溫至65℃溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選室溫。
在堿和非質(zhì)子溶劑中，用式Ⅴ化合物處理化合物Ⅵ可形成化合物Ⅳ(R=R2)，
其中Y選自鹵素和選擇取代的(C1-C6)烷基-或(C1-C6)芳磺酰氧基，優(yōu)選CH3SO3(甲磺酰氧基)。反應(yīng)可在惰性氣氛如氮氣或氬氣中，在環(huán)境溫度至溶劑的回流溫度下進行。堿可以選有機堿如三(C1-C6)烷胺，吡啶和N-甲基嗎啉。非質(zhì)子溶劑包括THF，CH2Cl2和DMF。反應(yīng)優(yōu)選在THF，氮氣和溶劑的回流溫度下進行，優(yōu)選的堿是三乙基胺。在低溫和惰性氣氛中，在(C1-C6)鹵代烷烴中，在堿存在的條件下，將Y代表OH的化合物Ⅴ與甲磺酰氯反應(yīng)可制備Y代表甲磺酰氧基的化合物Ⅴ，該處堿的選擇和惰性氣氛的選擇參見上述。溫度在大約-40至0℃，反應(yīng)條件優(yōu)選在氮氣，于30℃，在三乙基胺存在下進行。
如路線3所示，用酸如三氟乙酸(TFA)，對甲苯磺酸，甲磺酸或三氟甲磺酸和HBr的乙酸溶液，優(yōu)選三氟乙酸，處理化合物Ⅳ(R=R2)可轉(zhuǎn)變成化合物Ⅳ(R=H)，該反應(yīng)可在室溫至60℃溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選室溫，TFA可以用純的或溶于二氯甲烷中。
在氫化催化劑和有機溶劑存在下，在大約1至3個大氣壓下用氫氣處理R代表H的化合物Ⅳ可得到R代表H的化合物Ⅲ，氫化催化劑包括Pd,Pt和阮內(nèi)Ni，這些金屬可以鹽的形式使用如Pd(OH)2，或在載體上如碳。氫化反應(yīng)可在大約室溫至50℃溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選室溫。優(yōu)選氫化反應(yīng)催化劑是10％Pd/C，優(yōu)選的溶劑是甲醇。
R代表H的化合物Ⅲ在溶劑和堿存在下，用4’-三氟甲基聯(lián)苯基-2-羰基源處理可轉(zhuǎn)變成化合物Ⅰ，這些源選自氯化物，疊氮化物和混合的酸酐。該反應(yīng)可在大約室溫至50℃溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選室溫，所使用的溶劑包括如上所述的非質(zhì)子溶劑，鹵代烷烴和其混合物，優(yōu)選THF和二氯甲烷的混合溶劑，當羰基化合物的二氯甲烷溶液加到化合物Ⅲ(R=H)的THF溶液中時，就形成了該混合溶劑。
另外，如路線3所示，將R代表R2的化合物Ⅲ與如上定義的4’-三氟甲基聯(lián)苯基-2-羧基源反應(yīng)形成式Ⅱ化合物后，再用酸如三氟乙酸TFA，對甲基苯磺酸，甲磺酸或三氟甲基磺酸和氫溴酸的乙酸溶液，優(yōu)選如上所述的三氟乙酸處理也可制備化合物Ⅰ。優(yōu)選R2代表p-CH3OC6H4CH2-，且4’-三氟甲基聯(lián)苯基-2-羰基源為氯化物。
式Ⅰ化合物和其互變異構(gòu)體形成酸加成鹽或表達為藥用鹽，這些鹽包括但并不局限于鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，乙酸鹽，琥珀酸鹽，檸檬酸鹽，甲基磺酸鹽，和對甲苯磺酸鹽。也可形成多元加成鹽。
將式Ⅰ化合物的堿形式與適當?shù)乃岱磻?yīng)，可制備式Ⅰ化合物和其互變異構(gòu)體的酸加成鹽，當鹽源于一元酸(如鹽酸，氫溴酸，對甲苯磺酸，乙酸)，二元酸的一氫酸形式(如硫酸氫鹽，琥珀酸鹽)，或三元酸的二氫酸形式(如磷酸二氫鹽，檸檬酸鹽)時，酸的用量至少為一個摩爾當量，通常為摩爾過量。然而，當需要這樣的鹽是硫酸鹽，半琥珀酸鹽，磷酸氫鹽或磷酸鹽時，酸的適宜的或確切的化學(xué)當量一般將會用到。游離堿和酸通常在助溶劑中結(jié)合，生成的鹽形成沉淀或通過濃縮和/或加入不溶的溶劑而分離。
式Ⅰ化合物，及其互變異構(gòu)體和其藥用鹽(今后稱活性化合物)可口服，相應(yīng)地可與適用于口服劑型的藥用載體或稀釋劑結(jié)合。適宜的藥用載體包括惰性固體填充劑，稀釋劑和無菌水或有機溶液。該活性化合物在藥物組合物中以足夠量存在以提供下述的劑量范圍。因此該化合物的口服制劑可混有適宜的固體或液體載體或稀釋劑，以形成膠囊，片劑，粉劑，糖漿，溶液，懸浮劑等，如果需要，藥物組合物還可含其它成份如調(diào)味劑，甜味劑，賦形劑等，含有該活性化合物的藥物組合物適用于治療動脈粥樣硬化，胰腺炎，肥胖癥，高膽固醇血癥，高甘油三酯血癥，高脂血癥和糖尿病，其包括如上所述的式Ⅰ化合物和藥用載體。
該活性化合物可能通過抑制MTP而抑制或降低apo B的分泌，盡管可能還會有其他機制。該化合物用于任何可引起apo B，血清膽固醇和/或甘油三酯水平升高的疾病或癥狀，因此，本發(fā)明進一步提供了治療選自(動脈粥樣硬化，胰腺炎，肥胖癥，高膽固醇血癥，高甘油三酯血癥，高脂血癥和糖尿病的癥狀的方法，其包括給予需治療的哺乳動物，特別是人，足夠降低載脂蛋白B分泌的量的如上定義式Ⅰ化合物。前述疾病亞類包括動脈粥樣硬化，肥胖癥，胰腺炎和糖尿病，更具體的亞類包括動脈粥樣硬化。
此處對活性化合物來說，術(shù)語“治療”有預(yù)防和治療的意思。
片劑，丸劑，膠囊等也可含有粘合劑，如樹膠，阿拉伯膠，玉米淀粉，或明膠；賦形劑，如磷酸二鈣；崩解劑，如玉米淀粉，土豆淀粉，藻酸；潤滑劑，如硬脂酸鎂；和甜味劑，如蔗糖，乳糖或糖精。當劑量單位是膠囊時，除了可以含有上述類型的物質(zhì)外，還可含有液體載體，如脂肪油。
各種其它物質(zhì)也可加入，如包衣或修飾劑量單位的物理形式的物質(zhì)。例如，片劑可以用紫膠，糖或二者來包衣，糖漿或酏劑除了活性成分還可含有作為甜味劑的蔗糖，作為防腐劑的對羥苯甲酸甲酯或丙酯，染料和調(diào)味劑如櫻桃或橙子香精。
該活性化合物也可胃腸道外給藥，該化合物的胃腸外制劑可以加入無菌水或有機介質(zhì)以形成可注射的溶液或懸浮劑，這些活性化合物的溶液或懸浮劑可以在水中與適宜的表面活性劑如羥基丙基纖維素混合而制備，分散劑也可在芝麻或花生油，乙醇，水，多元醇(如甘油，丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)，它們的適宜混合物，植物油，N-甲基葡糖胺，聚乙烯吡咯烷酮，或它們的油混合物及該化合物可溶性藥用鹽的水溶液中制備。在一般的貯存和使用條件下，這些制劑可含防腐劑以防微生物生長。以該方式制備的注射液可靜脈注射，腹腔注射，皮下注射或肌肉注射。
適用于注射的藥物劑型包括無菌水液或無菌注射溶液或分散劑的臨時制備的分散劑和無菌粉末。所有情況中，制劑必須被滅菌，必須容易從注射器中流出，在制備和貯存條件下必須穩(wěn)定，必須防腐以防止微生物如細菌和霉菌的污染。
活性化合物所用劑量一般可按本領(lǐng)域已知的原則如所治療疾病的嚴重程度和給藥途徑而改變，通常，活性化合物給予溫血動物(如人)，其有效劑量，可接受的單次或分次服用的日劑量大約為0.1至15mg/kg體重，優(yōu)選大約1-5mg/kg體重?？偟目山邮艿娜談┝客ǔＴ?-1000mg之間，優(yōu)選5-350mg之間。
該活性化合物也可與其它藥物包括其它的降脂制劑結(jié)合。這樣的制劑包括膽固醇生物合成抑制劑，特別是HMG CoA還原酶抑制劑和鯊烯合成酶抑制劑；膽汁酸多價螯合劑；纖溶酶(fibrates)；膽固醇吸收抑制劑；和煙酸。
如果受試化合物在下列篩選中是活性的，則認為該化合物是有活性的。
活性化合物的活性可通過測定對HepG2細胞分泌apo B的抑制作用來評估。
HepG2細胞在含10％胎牛血清的修飾的Dulbecco’s Eagles培養(yǎng)液(Gibco)中生長，用96孔培養(yǎng)板，在5％二氧化碳的潮濕環(huán)境下，直到70％鋪滿。受試化合物溶于二甲基亞砜，濃度為10-20mM，然后在生長培養(yǎng)液中稀釋到1uM。再在生長培養(yǎng)液中1∶1稀釋該貯液，分別取100μl加到含有HepG2細胞的96孔板分開孔中，24小時后收集生長培養(yǎng)液，用對apoB特異的ELISA分析，用apo A1濃度做對照，抑制劑為這樣的的化合物，即減少apo B向介質(zhì)中分泌而不影響apo A1的分泌。apo B的ELISA測定按下述進行抗人apo B的單克隆抗體(Chemicon)用磷酸鹽緩沖液/疊氮化物(PBS+0.02％疊氮Na)稀釋到5ug/mL，取100μl加到96孔板(NUNC Maxisorb)的每個孔中，室溫孵育過夜，除去抗體液，每孔用PBS/疊氮化物洗三次。用于PBS/疊氮化物中制備的1％(w/v)的小牛血清白蛋白(BSA)溶液孵育1-3小時的方法來阻斷塑料表面上的非特異結(jié)合位點，加100μl來源于HepG2細胞或apo B標準物(用0.004％吐溫20/1％BSA的PBS/疊氮化物制備)到每個孔中并孵育18個小時。將各孔吸干，用0.1％吐溫20的PBS溶液洗三次，然后加100μl1/1000稀釋的第二抗體-山羊抗人apo B(Chemicon)。室溫孵育3個小時，吸干溶液，再如上所述洗三次。加100μl 1∶1600稀釋的(在PBS/1％BSA/2mM MgCl2中)與堿磷酸酶(Sigma)共軛的兔抗山羊IgG到每孔中。室溫孵育1小時后，再吸干，每孔如上所述洗四次，加100μl 1mg/mL對硝基苯磷酸(pNPP；Sigma)的25mM碳酸氫鈉2mM MgCl2溶液，pH9.5，到每個孔中孵育20-30分鐘，然后加50μl 0.2N的NaOH終止反應(yīng)。在405nM讀每一孔的吸收值，650nM的吸收值作為本底。從標準曲線上算出Apo B的濃度，用平行測定的純化的LDL標準來構(gòu)建Apo B標準曲線，Apo A1的測定除了使用Apo A1抗體(Chemicon)代替apo B抗體抗原培養(yǎng)是在37℃而不是在室溫外，按相似方法進行。
如果受試化合物直接抑制MTP活性，也可確認其活性。
化合物抑制MTP的活性可通過在人的可溶性MTP存在中，觀察放射標記的甘油三酯從源囊到受體囊的轉(zhuǎn)移抑制來測定，MTP的制備方法源于Wetterau和Zilversmit的方法(Biochem.Biophys.Acra(1986)857∶610)，該方法簡述如下人的肝組織塊于-80℃C冷凍，在冰上解凍，剁碎，用冰冷的0.25M蔗糖沖洗數(shù)次，所有步驟均在冰上操作，用Potter-Elvehjem聚四氟乙烯勻漿器制備0.25M蔗糖的50％勻漿液，用0.25M蔗糖1∶1稀釋勻漿液，并于4℃以10,000xg離心20分鐘。用蔗糖重新懸浮沉淀，于10,000xg再離心20分鐘，合并上清液，于105,000xg離心75分鐘收集微粒體沉淀。棄去上清，用最小體積的0.25M蔗糖懸浮微粒體沉淀，用0.15M Tris-HCl(pH8.0)稀釋到3mL/起始肝重g。將懸浮液分成12份，105,000xg離心75分鐘。棄去上清，將微粒體沉淀凍存于-80℃至用時。要在進行測定之前制備MTP，用12mL冷的50mM Tris-HCl,50mM KCl,5mM MgCl2,pH7.4懸浮解凍的沉淀和將1.2mL 0.54％去氧膽酸鹽(pH7.4)緩慢加入溶液混合，以破壞微粒體膜。在溫和混合且在冰上孵育30分鐘后，于105,000xg離心該懸浮液75分鐘。含有可溶的MTP蛋白的上清液可用四種測定緩沖液(150mM Tris-HCl,40mMNaCl,1mM EDTA,0.02％NaN3,pH7.4)，在2-3天內(nèi)進行分析。人的肝MTP在4℃貯存，臨用前用測定緩沖液5倍稀釋。MTP制備物貯存30天沒有明顯的轉(zhuǎn)移活性丟失。
脂質(zhì)體可在室溫，氮氛下，400 uM卵磷脂酰膽堿(PC)，75uM小牛心磷脂，和0.82uM14C-三油酸甘油酯(110 Ci/mol)的分析緩沖液的分散體超聲浴中制備。氯仿中的質(zhì)脂在與測定緩沖液水合之前，按適量加入并在氮蒸氣中干燥。脂質(zhì)體受體可在室溫，氮氛條件下，1.2uM PC,2.3uM三油酸甘油酯和30pM3H-PC(50Ci/mol)分析緩沖液的分散體超聲浴中制備。脂質(zhì)體的源和受體在7℃，于160,000xg離心2小時，含有小的單片兒脂質(zhì)體的頂端80％的上清液被小心移出，4℃貯存，待用于轉(zhuǎn)移測定。
通過可溶性的MTP和受試化合物一起與源和受體小泡混和起動。轉(zhuǎn)移測定以此來檢測MTP活性。往100μl 5％BSA(對照)或含有受試化合物的5％BSA中加入500μl測定緩沖液，100μl脂質(zhì)體源，200μl脂質(zhì)體受體和100μl稀釋的MTP蛋白。37℃孵育45分鐘后，通過加入500μl 50％(w/v)DEAE纖維素的測定緩沖液的懸浮液終止甘油三酯的轉(zhuǎn)移。振搖4分鐘后，結(jié)合到DEAE纖維素上的脂質(zhì)體源通過低速離心被選擇沉淀等份含有脂質(zhì)體受體上清液被計數(shù)，3H和14C計數(shù)用于計算脂質(zhì)體受體的回收百分數(shù)和甘油三酯按一級動力學(xué)的轉(zhuǎn)移百分數(shù)，與無受試化合物存在的對照組相比，因為14C的放射活性明顯降低，說明受試化合物對甘油三酯轉(zhuǎn)移有抑制作用。
受試化合物作為MTP抑制劑的活性也可在體內(nèi)測定，方法如下雄性小鼠(20-30g.；雜系)口腔管飼(0.25mL/25g.體重)受試化合物的0.5％甲基纖維素懸液，一天幾次，連續(xù)幾天，或?qū)⑿∈舐樽碇?0分鐘給藥一次，采血制備血清，用經(jīng)濟的酶測定法(甘油三酯G:Wako Fine Chemicals)測血清中甘油三酯濃度。用僅喂賦形劑的小鼠作對照，用降低血清甘油三酯的能力鑒定MTP抑制劑。
本發(fā)明擬通過下列實施例來說明，然而應(yīng)該指出的是本發(fā)明并不局限在這些實施例的具體描述中。
本領(lǐng)域人員已知的純化和分離方法和/或技術(shù)均可用于本發(fā)明化合物的分離。這些技術(shù)包括所有類型的層析(HPLC，用一般的吸附劑如硅膠的柱層析，薄層層析)，重結(jié)晶，和差異提取技術(shù)(如液-液提取)。
制備方法11-(4-甲氧基芐基)-1,2,4-三唑?qū)?,2,4-三唑(7.5g,0.109mol)溶于二甲基甲酰胺(50mL)中，并在氮氣氛下于10℃冰浴中攪拌，當部分氫氧化鈉(17.5g,0.438mol)顆粒被加入時，導(dǎo)致放熱，溫度升到大約25℃。于25℃逐滴加入4-甲氧基芐基氯(15mL,0.111mol)的DMF溶液，用時5分鐘。室溫攪拌4小時后，加入乙酸乙酯和水。分層，水相用乙酸乙酯提取，合并有機相，用水洗四次，鹽水洗一次，硫酸鎂干燥。過濾混合物，減壓蒸發(fā)過濾液中溶劑，得到油狀標題產(chǎn)物，產(chǎn)率69％；14.14g；1H NMR(CDCl3)δ8.00(s,1),7.93(s,1),7.19(d,2),6.88(d,2),5.23(s,2),3.78(s,3)。質(zhì)譜m/z109(M+1)。
制備方法25-(羥基甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,2,4-三唑?qū)⒅苽浞椒?標題產(chǎn)物(7.6g,40mmol)溶于37％甲醛水溶液(25mL)中，在130℃油浴中加熱回流四天。此羥甲基化過程用硅膠TLC監(jiān)測，洗脫液為乙酸乙酯氯仿3∶1。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，傾入水中，用乙酸乙酯提取兩次。合并有機相，用1N NaOH，水和鹽水依次洗滌，硫酸鎂干燥，蒸發(fā)，得到的粗產(chǎn)物與少量2-丙醇在己烷中漿化得到標題產(chǎn)物4.9g(產(chǎn)率56％),mp95-100℃。1H NMR(CDCl3)δ7.72(s,1),7.21(d,2),6.85(d,2),5.70(bs,1,OH),5.32(s,2),4.69(s,2),3.78(s,3)。13C NMR(CDCl3)δ159.6,149.8,145.6,129.2,127.0,114.3,55.3,54.9,52.0。IR(KBr)1610,1585,1512cm-1。質(zhì)譜m/z 220(M+1)。
C11H13N3O2元素分析理論值C,60.26；H,5.98；N,19.17。實測值C,60.30；H,6.16；N,19.66。
用單晶X-射線確認結(jié)構(gòu)。
制備方法35-(鄰苯二甲酰亞氨基甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,2,4-三唑?qū)⒅苽浞椒?標題產(chǎn)物(8.5g,38.8mmol)，三苯基膦(11.2g,42.7mmol)和鄰苯二甲酰亞胺(6.3g,42.7mmol)在室溫溶于四氫呋喃(125mL)中得到霧狀溶液。逐滴加入二異丙基偶氮羧酸酯(8.4mL,42.7mmol)的四氫呋喃(40mL)溶液，至少在40分鐘加完，用冰水浴將溫度控制在15℃。在滴加過程中白色固體狀產(chǎn)物沉淀出來。室溫攪拌反應(yīng)混合液過夜，然后用己烷(125mL)稀釋。攪拌30分鐘后，收集白色固體標題產(chǎn)物，己烷洗滌，真空干燥，得產(chǎn)物12.2g，產(chǎn)率91％；mp167-72℃。1H NMR(CDCl3)δ7.85(s,1),7.81(m,2),7.69(m,2),7.09(d,2),6.77(d,2),5.43(s,2),4.89(s,2),3.72(s,3)。13C NMR(CDCl3)δ150.9,145.6,134.2,131.8,128.3,127.0,123.6,114.3,112.9,112.1,55.2,52.0,32.8。IR(KBr)1772,1720,1689,1612,1586,1519cm-1。質(zhì)譜m/z349(M+1)。
C19H16N4O3元素分析理論值C,65.50；H,4.63；N,16.08。實測值C,65.35；H,4.80；N,16.18。
制備方法45-(氨基甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,2,4-三唑?qū)⒅苽浞椒?標題產(chǎn)物(5g,14.4mmol)懸浮于甲醇(50mL)中，伴隨攪拌加入水合肼(1.6mL,32 mmol)。幾分鐘后得到透明溶液，室溫攪拌反應(yīng)混合物過夜，在這個過程中鄰苯二甲酰肼沉淀出來。用二氯甲烷(50mL)稀釋，肼化物的漿狀物被攪拌45分鐘，過濾，用二氯甲烷洗滌固體。濾液被減壓蒸發(fā)，殘留物被溶于二氯甲烷和1N NaOH中，水層pH為12，分離各層，水層用二氯甲烷提取，合并有機層。有機層用鹽水洗滌后，硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)溶劑得到無色油狀的標題產(chǎn)物3g，產(chǎn)率97％。1H NMR(CDCl3)δ7.79(s,1),7.12(d,2),6.81(d,2),5.27(s,2),3.88(s,2),3.74(s,3)1.59(bs,2,NH2)。13C NMR(CDCl3)δ150.3,145.6,130.4,129.0,128.8,127.3,114.3,55.3,51.7,37.7。
制備方法52-[-(4-甲氧基芐基)-2H-(1,2,4)三唑-3-基-甲基]-6-硝基-1,2,3,4-四氫-異喹啉1)氮氣下將2-(2-羥乙基)-5-硝基苯基醇(6.38g,32.4mmol)和三乙基胺(11.3mL,81mmol)懸浮在二氯甲烷(100mL)中，然后伴隨攪拌冷卻到-30℃。滴加甲磺酰氯(5.5mL,71.2mmol)的二氯甲烷(32mL)溶液，至少用15分鐘。30分鐘后，移去冷浴，加入1N HCl(130mL)，混合物攪拌10分鐘，分層。用水，飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌有機層，硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)濾液，得到不需進一步純化的黃色固體10.7g，產(chǎn)率94％。1H NMR(CDCl3)δ8.17(m,2),7.66(d,1),5.39(s,2),4.50(t,2),3.28(t,2),3.10(s,3),3.00(s,3)。
2)氮氣氛下將制備方法4標題產(chǎn)物(1.1g,5mmol)和三乙胺(1.8mL,12.7mmol)溶于四氫呋喃(15mL)中，滴加步驟1)產(chǎn)物(1.75g,5mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液進行處理，室溫攪拌反應(yīng)混合物2小時，然后回流過夜。冷卻反應(yīng)混合物，加入二氯甲烷和1N NaOH。分層，用另外的二氯甲烷提取水相，合并有機相，用水，鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，從二氯甲烷得到的粗產(chǎn)物用硅膠層析純化，洗脫液為30％乙酸乙酯r氯仿液，得產(chǎn)物1.2g，產(chǎn)率63％，產(chǎn)物為黃色油狀物，可緩慢固化。1H NMR(CDCl3)δ7.98(m,2),7.88(s,1),7.10(m,3),6.76(d,2),5.40(s,2),3.81(s,2),3.73(s,3),3.63(s,2),2.95(t,2),2.80(t,2)。13C NMR(CDCl3)δ159.4,151.4,150.4,145.6,141.5,135.6,129.0,127.4,123.7,123.7,120.8,114.1,112.1,55.5,55.2,53.1,52.1,50.1,29.0。IR(KBr)1610,15.84,1517 cm-1。質(zhì)譜m/z380(M+1)。
制備方法62-[2H-(1,2,4)三唑-3-基-甲基]-6-硝基-1,2,3,4-四氫-異喹啉將制備方法5標題產(chǎn)物(8.8g,23.2mmol)溶于三氟乙酸(88mL)中，室溫攪拌過夜。減壓蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，將得到的油狀物溶于二氯甲烷，用1N HCl溶液提取該溶液兩次，合并酸提取液，用二氯甲烷洗一次，加新鮮的二氯甲烷使酸提取液分層，用10％碳酸鈉水溶液調(diào)pH至10，標題產(chǎn)物沉淀，收集沉淀，用水和二氯甲烷洗滌，得產(chǎn)物3.99g，產(chǎn)率66％；mp163-6℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.20(s,1),7.97(d,1),7.92(dd,1),7.30(s,1),3.82(s,2),3.73(s,2),2.92(t,2),2.76(t,2)。13CNMR(DMSO-d6)δ147.8,146.2,143.2,136.5,128.2,123.8,120.8,55.1,53.4,49.6,28.9。質(zhì)譜m/z 260(M+1)。
C12H13N5O2(0.15 CH2Cl2)元素分析理論值C,53.65；H,4.93；N,25.98。實測值C,53.65；H,4.93；N,25.75。
實施例16-氨基-2-[2H-(1,2,4)三唑-3-基-甲基]-1,2,3,4-四氫-異喹啉將制備方法6標題產(chǎn)物(4.46g,17.4mmol)溶于甲醇(220mL)中，在50psi(大約345kPa)壓力下，在10％鈀碳(2.23g)上，進行氫化反應(yīng)4小時，用Celite過濾除去催化劑，減壓蒸除濾液中甲醇，得到白色固狀的標題產(chǎn)物3.56g，產(chǎn)率91％，mp191-3℃。1H NMR(DMSO-d6)δ6.65(d,1),6.32(dd,1),6.28(d,1),4.79(s,2),3.71(s,2),3.41(s,2),3.34(s,2)。13C NMR(DMSO-d6)δ155.9,147.0,134.5,127.1,122.4,113.8,112.7,55.4,53.9,50.9,29.2。IR(KBr)1633,1612,1584,1513cm-1。質(zhì)譜m/z 230(M+1)。
C12H15N5元素分析理論值C,62.86；H,6.59；N,30.55；實測值C,62.49；H,6.39；N,30.45。
實施例24’-三氟甲基-二苯基-2-羧酸-2-(2H-1,2,4-三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氫-異喹啉-6-基-酰胺(Ⅰ)A)將實施例1產(chǎn)物(3.3g,14.5mmo1)和三乙胺(2.23mL,15.9mmol)懸浮于二氯甲烷(100mL)和四氫呋喃(40mL)中，室溫攪拌該懸浮液，同時滴加4’-三氟甲基-聯(lián)苯基-2-酰氯(4.13g,14.5mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液，反應(yīng)混合物攪拌過夜，再加入碳酸鈉(17g,0.2mol)的水溶液(440mL)，攪拌混合物15分鐘。分層，用二氯甲烷提取水層兩次，合并有機層，用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)，得到泡沫樣標題產(chǎn)物。鑒定，1H NMR(CDCl3)δ13.88(bs,1),10.21(s,1),7.74(d,2),7.67-7.48(m,6),7.31(s,1),7.20(dd,1),6.91(d,1),3.73(s,2),3.56(s,2),2.73(m,4)。IR(KBr)1651,1618,1603,1545,1510cm-1。質(zhì)譜m/z478(M+)。
B)將實施例4標題產(chǎn)物(0.49g,8.2mmol)溶于三氟乙酸(5mL)中，室溫攪拌過夜，減壓除去揮發(fā)性組分，用乙酸乙酯溶解殘留物，往其中加10％碳酸鈉水溶液。分層，用鹽水洗滌有機層，硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得到標題產(chǎn)物，用步驟A得到的標題產(chǎn)物鑒定。
實施例36-氨基-2-(2-(4-甲氧基芐基)-2H-[1,2,4-三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氫異喹啉2-(2-(4-甲氧基芐基)-2H-[1,2,4-三唑-3-基-甲基)-6-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(0.5g,1.3mmol)在甲醇中，在50psi(大約345kPa)壓力下，在10％Pd/C(0.25g)上，進行氫化反應(yīng)3小時。過濾反應(yīng)混合物，減壓蒸除溶劑，加乙酸乙酯和水，用碳酸鈉固體調(diào)pH至10。分層，用另外的乙酸乙酯提取水層，合并有機層，用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)，得到油狀產(chǎn)物0.4g，產(chǎn)率87％。1H NMR(CDCl3)δ7.86(s,1)，7.18(d,2),6.79(m,3),6.48(m,2),5.42(s,2),3.76(s,3),3.73(s,2),3.50(s,2),2.80(m,2),2.69(m,2)。IR(KBr)1613,1587,1513cm-1。質(zhì)譜m/z 348(M+-1)。
實施例44’-三氟甲基二苯基-2-羧酸(2-(2-(4-甲氧基芐基)-2H-1,2,4-三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氫-異喹啉-6-基)-酰胺(Ⅰ)將實施例3標題產(chǎn)物(0.38g,1.1mmol)和三乙胺(0.17mL,1.2mmol)溶于二氯甲烷(14mL)中,室溫攪拌，逐滴加入4’-三氟甲基聯(lián)苯基-2-酰氯(0.31g,1.1mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液，4小時后，加10％碳酸鈉水溶液，攪拌30分鐘。用鹽水洗滌二氯甲烷層，硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)，得到硬泡沫樣標題產(chǎn)物0.63g，產(chǎn)率97％。1H NMR(CDCl3)δ7.79(s,1),7.72(d,1),7.64(d,2),7.58-7.34(m,6),7.12(d,2),7.01(s,1),6.90-6.72(m,4),5.38(s,2),3.73(s,3),3.69(s,2),3.50(s,2),2.79(t,2),2.68(t,2)。IR(KBr)1668,1615,1599,1567,1536,1514cm-1。質(zhì)譜m/z 598(M++1)。
權(quán)利要求
1．制備式Ⅰ化合物的方法，其包括
用a)和b)中化合物處理式Ⅲ化合物，
其中R表示H或R2,R2選自烯丙基或取代的甲基，其中取代基包括一至三個(C6-C12)芳基，其中芳基可被一或多個選自硝基和(C1-C6)烷氧基的取代基選擇性取代；a)式Ⅹ化合物
其中J代表離去基團，如鹵素，疊氮基團，(C1-C6)酰氧基或(C6-C12)芳酰氧基，優(yōu)選氯或溴原子；和b)當R代表R2時，步驟a)產(chǎn)物用酸進一步處理。
2．權(quán)利要求1的方法，其中所說的酸選自三氟乙酸(TFA)，對甲苯磺酸(PTSA)，甲磺酸或三氟甲基磺酸，氫溴酸乙酸溶液。
3．權(quán)利要求2的方法，其中所說的酸為三氟乙酸。
4．權(quán)利要求1的方法，其中式Ⅲ化合物通過用a)或b)處理式Ⅳ化合物而制備，其中R的定義如上所述，
a)在氫化反應(yīng)催化劑存在下，使用氫氣形成R代表R2的式Ⅲ化合物；b)1)使用酸；和2)在氫化反應(yīng)催化劑存在的條件下，用氫氣處理步驟1)產(chǎn)物，得到R代表H的式Ⅲ化合物。
5．權(quán)利要求書4的方法，其中式Ⅳ化合物通過在堿存在下用式Ⅴ化合物處理式Ⅵ化合物來制備
其中R代表R2，
其中Y定義如上。
6．式Ⅰ化合物的制備方法包括如下步驟a)通過在堿存在下用式Ⅴ化合物處理式Ⅵ化合物制備式Ⅳ化合物。
其中Y定義如上。b)如下所示處理式Ⅳ化合物(R=R2)1)ⅰ)用TFA處理形成Ⅳ(R=H)；ⅱ)在氫化反應(yīng)催化劑存在的條件下，用氫處理Ⅳ(R=H)得到Ⅲ(R=H)；ⅲ)用X處理Ⅲ(R=H)；2)ⅰ)在氫化反應(yīng)催化劑存在的條件下，用氫處理，得到Ⅲ(R=R2)；ⅱ)用X處理Ⅲ(R=R2)，得到Ⅱ(R=R2)；ⅲ)用TFA處理Ⅱ(R=R2)。
7．權(quán)利要求4的方法，其中所說的氫化反應(yīng)催化劑選自Pd/C,Pd(OH)2，阮內(nèi)鎳和PtO2。
8．權(quán)利要求7的方法，其中所說的氫化反應(yīng)催化劑為Pd/C。
9．下式化合物及其互變異構(gòu)體
其中Y代表NH2或NO2。
10．權(quán)利要求9的化合物和它的互變異構(gòu)體，其中Y代表NH2。
11．與權(quán)利要求9的化合物和它的互變異構(gòu)體，其中Y代表NO2。
12．式Ⅱ化合物
其中R代表R2,R2如上定義。
13．權(quán)利要求12的化合物，其中R2代表CH3OC6H4CH2-。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物的制備方法,其包括用a)和b)處理式(Ⅲ)化合物,其中R代表H或R
文檔編號C07D401/06GK1216988SQ97194209
公開日1999年5月19日 申請日期1997年3月13日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月30日
發(fā)明者F·J·厄本 申請人:輝瑞大藥廠