本發(fā)明屬于化學(xué)藥物領(lǐng)域，具體涉及5-(硫醚基)嘧啶類化合物及其藥用組合物和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

據(jù)報(bào)道，目前人類惡腫瘤引起的死亡率已經(jīng)超越所有其他疾病位于疾病死亡率的首位，中國(guó)每年死于癌癥的總?cè)丝诮咏?00萬(wàn)人。據(jù)衛(wèi)生部2013年統(tǒng)計(jì)年鑒數(shù)據(jù)顯示，惡性腫瘤在我國(guó)2012年城市和農(nóng)村主要死亡疾病中均占據(jù)第一位，在疾病死因構(gòu)成中分別達(dá)到26.81％和22.96％。

目前，臨床實(shí)踐中針對(duì)腫瘤患者的主要治療藥物分為兩大類，其中，一類為傳統(tǒng)的化療藥物，包括烷化劑、抗代謝藥、抗癌抗生素、植物類激素等，它們對(duì)腫瘤細(xì)胞有很強(qiáng)的殺傷作用，統(tǒng)稱為細(xì)胞毒類藥物；近年來(lái)，腫瘤的靶向藥物治療是腫瘤治療的主要方向，其主要利用腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間分子生物學(xué)上的差異(包括基因，酶，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等)，選擇性地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致其死亡；相對(duì)于傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類藥物，靶向抗腫瘤藥具備特異性高、選擇性強(qiáng)、毒副作用較輕等優(yōu)點(diǎn)，聯(lián)合使用時(shí)，顯現(xiàn)出可增強(qiáng)傳統(tǒng)化療、放療的療效，及減少術(shù)后復(fù)發(fā)的效果，目前，靶向抗腫瘤藥物以伊馬替尼甲磺酸鹽(STI571)(Novartis，2001)、吉非替尼(ZD1839)(AstraZeneca,2003)、厄羅替尼(OSI774)(Genetechand OSIP，2004)、索拉非尼對(duì)甲苯磺酸鹽(Bay 43-9006)(Bayer and Onyx，2005)、舒尼替尼蘋果酸鹽(SU11248)(Pfizer,2006)以及達(dá)沙替尼(BMS-354825)(Bristol-Myers Squibb，2006)為代表。

在分子靶向藥物的研發(fā)中，酪氨酸激酶家族是研究最為深入的領(lǐng)域之一。它包含90多個(gè)家族成員，分為受體型和非受體型。它們通過(guò)對(duì)靶蛋白酪氨酸位點(diǎn)的磷酸化參與到細(xì)胞內(nèi)各種信號(hào)通路的調(diào)控，如細(xì)胞轉(zhuǎn)移、細(xì)胞周期、增殖、凋亡和分化。激酶活性的異常直接導(dǎo)致不同信號(hào)通路的失調(diào)，在腫瘤發(fā)展中起著重要的作用。

EGFR屬于受體酪氨酸激酶家族ErbB(又名EGFR家族)的一員，它與ErbB2(HER2)、ErbB3(HER3)和ErbB4(HER4)同屬該家族。EGFR主要位于細(xì)胞膜表面，與配體結(jié)合后構(gòu)象改變，受體發(fā)生同源或異源二聚化，進(jìn)一步通過(guò)別構(gòu)激活效應(yīng)，其胞內(nèi)區(qū)發(fā)生自磷 酸化，激活其激酶活性，進(jìn)而激活多條下游信號(hào)通路，比如Ras/Raf/MEK/ERK/MAPK通路、PI3K/PDK1/Akt(PKB)通路、PLC-γ通路、JAK/STAT通路等。阻斷EGFR的活化已被臨床驗(yàn)證為主導(dǎo)的方法來(lái)靶向治療腫瘤。

EGFR作為抗腫瘤的重要靶點(diǎn)，目前已經(jīng)有多種藥物應(yīng)用于臨床，其中包括6種酪氨酸激酶小分子抑制劑(Gefitinib,Erlotinib,Lapatinib,Vandetanib,Icotinib，Afatinib)和2種針對(duì)胞外結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體(Cetuximab,Panitumumab)。

吉非替尼與厄羅替尼分別于2003、2004年被批準(zhǔn)用于臨床。早期的Ⅱ期臨床研究表明吉非替尼和厄羅替尼作為一線治療用于未經(jīng)選擇的病人，其最好療效僅為癥狀適度緩解，響應(yīng)率(response rate，RR)僅為4-23％，無(wú)進(jìn)展生存期(progress free survival，PFS)為1.6-3.5個(gè)月，總生存期為5-13個(gè)月，與安慰劑組相比其療效微弱。但是隨后針對(duì)取得較好療效的亞群進(jìn)行回顧性分析，發(fā)現(xiàn)該類人群響應(yīng)率達(dá)到13-43％，無(wú)進(jìn)展生存期達(dá)到4-5.6個(gè)月，相比其他患者療效有顯著性提高。該類人群主要包括東亞地區(qū)不吸煙的女性非小細(xì)胞患者。分子水平的分析表明，對(duì)吉非替尼和厄羅替尼獲益最多的患者存在EGFR敏感突變，其中最常見的是19號(hào)外顯子的缺失突變E746-750(19del)與21號(hào)外顯子的點(diǎn)突變L858R，它們占到已報(bào)道所有突變的85％。EGFR激酶結(jié)構(gòu)域的突變高度激活激酶，使得腫瘤細(xì)胞的生存對(duì)突變激酶具有依賴性。隨后臨床研究表明，發(fā)生EGFR敏感突變的患者對(duì)EGFR-TKI的反應(yīng)率顯著高于EGFR野生型NSCLC患者，無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期也顯著延長(zhǎng)。盡管吉非替尼和厄羅替尼治療EGFR敏感突變的NSCLC患者效果明顯，但是大部分患者的PFS不超過(guò)12-14個(gè)月，即對(duì)TKI發(fā)生了耐藥。耐藥問(wèn)題成為制約該類抑制劑臨床應(yīng)用最嚴(yán)重的威脅。

有研究顯示，EGFR的耐藥機(jī)制主要為原發(fā)性耐藥和獲得性耐藥，原發(fā)性耐藥并非由使用EGFR抑制劑誘發(fā)的耐藥，包括EGFR原發(fā)性耐藥突變，KRAS突變，PI3K/AKT信號(hào)通路的活化，胰島素樣生長(zhǎng)因子受體1(IGF1R)高表達(dá)及NF-κB信號(hào)通路異常活化；獲得性耐藥是指長(zhǎng)時(shí)間使用EGFR抑制劑而誘導(dǎo)的耐藥，如EGFR耐藥突變，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(MET)擴(kuò)增，與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)高表達(dá)，細(xì)胞形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)變，IGF1R與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)高表達(dá)等，而60％的TKI獲得性耐藥的患者其EGFR存在耐藥突變?nèi)鏣790M、L747S、D761Y、T854A，其中T790M占絕大多數(shù)，達(dá)總耐藥人數(shù)的50％。

有研究發(fā)現(xiàn)T790M突變可以使EGFR對(duì)ATP的親和力明顯增加，使得第一代的TKI競(jìng)爭(zhēng)不過(guò)ATP而失效；為了克服該缺陷，能與靶標(biāo)形成共價(jià)結(jié)合的二代抑制劑被研發(fā)， 它們相對(duì)于一代抑制劑，能與靶標(biāo)形成不可逆結(jié)合，從而有效克服EGFR T790M突變后對(duì)ATP親和力增加帶來(lái)的影響，同時(shí)作用更持久。目前處于臨床研究階段的EGFR二代抑制劑如表1所示。

表1.EGFR二代抑制劑

Disc.:discontinued；MBC:Metastatic breast cancer

Afatinib與2013年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，但是臨床使用情況表明，該類抑制劑不僅能不可逆的結(jié)合在發(fā)生T790M突變的EGFR上，也能作用于野生型的EGFR。由于人表皮和胃黏膜分布大量野生型的EGFR，沒有選擇性的不可逆持續(xù)抑制會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的皮疹腹瀉等3-4級(jí)不良反應(yīng)。目前該藥僅用于含EGFR敏感突變的NSCLC的治療，其中的沒有選擇性成為制約該類抑制劑發(fā)展的瓶頸因素。

基于現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，本申請(qǐng)的發(fā)明人擬提供具有高選擇性的新一代的TKI，以解決二代抑制劑的選擇性問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，基于EGFR抑制劑的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀，提供一種5-(硫醚基)嘧啶類化合物，尤其涉及式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子：

其中，

m表示0,1,2；

n表示0,1,2，m和n不同時(shí)為0；

X表示N或者CH，

L表示共價(jià)鍵或者C_1-3烷基，NH，O，S，-C(O)-或-SO₂-；

R₁表示C_1-4烷基或-L₁-R₅，

L₁表示-(C_1-4烷基)-，

R₅表示3-7元環(huán)烷基，苯基或5-6元雜芳基；

所述C_1-4烷基部分，環(huán)烷基，苯基，雜芳基可以進(jìn)一步被1-4個(gè)Q₁取代，

Q₁表示氫原子，鹵素原子，-CN，-CF₃，-NH₂，-NH(C_1-3烷基)，-OH,-O(C_1-3烷基)，-C(0)-(C_1-3烷基)，-S(C_1-3烷基)或-SO₂(C_1-3烷基)，其中Q₁可以相同或者不同；

所述環(huán)烷基上的碳原子可以被1-4個(gè)相同或者不同的N,NH,N(C_1-3烷基),O,C(O)或SO₂替換；

R₂表示氫，鹵素或-O(C_1-4烷基),

所述C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟原子取代；

R₃表示-C(O)-C_1-4烷基，-SO₂-C_1-4烷基,-C(O)NH₂，-SO₂NH₂，-C(O)-C_1-4烷基-OH，-SO₂-C_1-4烷基-OH或NH₂，

其中，C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟取代；

R₄表示氫，鹵素，氨基，羥基，氰基，硝基，C_1-4烷基，C_3-7環(huán)烷基，芳基，或者選自以下結(jié)構(gòu)：

W表示CH₂，CH₂CH₂，O，S，NH或NR₇；R₇表示烷基或者芳基；

R₆表示氫，鹵素，C_1-4烷基，C_3-7環(huán)烷基或芳基。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，其具有式(Ⅱ)結(jié)構(gòu)：

R₁,R₂,R₃,L,X如權(quán)利要求1所述；

R₈,R₉,R₁₀表示氫，CH₃，CH₂CH₃；

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，其具有式(Ⅲ)結(jié)構(gòu)：

m表示0,1,2；

n表示0,1,2，m和n不同時(shí)為0；

X表示N或者CH；

L表示共價(jià)鍵或者C_1-3烷基，NH，O，S，-C(O)-，-SO₂-；

R₂表示氫，鹵素，-O(C_1-4烷基),

所述C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟原子取代；

R₃表示-C(O)-C_1-4烷基,-SO₂-C_1-4烷基,-C(O)NH₂，-SO₂NH₂，-C(O)-C_1-4烷基-OH，-SO₂-C_1-4烷基-OH或NH₂，

其中，C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟取代；

R₈,R₉,R₁₀表示氫，CH₃，CH₂CH₃；

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受 的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，其具有式(Ⅳ)結(jié)構(gòu)：

m表示0,1,2；

n表示0,1,2，m和n不同時(shí)為0；

X表示N或者CH；

L表示共價(jià)鍵或者C_1-3烷基，NH，O，S，-C(O)-，-SO₂-；

R₂表示氫，鹵素，-O(C_1-4烷基),

所述C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟原子取代；

R₃表示-C(O)-C_1-4烷基，-SO₂-C_1-4烷基,-C(O)NH₂，-SO₂NH₂，-C(O)-C_1-4烷基-OH,-SO₂-C_1-4烷基-OH或NH_2。

其中，C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟取代。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，其具有式(Ⅴ)結(jié)構(gòu)：

R₂表示氫，鹵素，-O(C_1-4烷基),

所述C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟原子取代。

R₃表示-C(O)-C_1-4烷基，-SO₂-C_1-4烷基,-C(O)NH₂，-SO₂NH₂，-C(O)-C_1-4烷基-OH，-SO₂-C_1-4烷基-OH或NH₂。

其中，C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟取代。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，其具有式(Ⅵ)結(jié)構(gòu)：

R₂表示氫，鹵素，-O(C_1-4烷基),

所述C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟原子取代。

R₃表示-C(O)-C_1-4烷基，-SO₂-C_1-4烷基，-C(O)NH₂，-SO₂NH₂，-C(O)-C_1-4烷基-OH，-SO₂-C_1-4烷基-OH或NH_2。

其中，C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟取代。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，其具有式(Ⅶ)結(jié)構(gòu)：

R₂表示氫，鹵素，-O(C_1-4烷基),

所述C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟原子取代。

R₃表示-C(O)-C_1-4烷基，-SO₂-C_1-4烷基,-C(O)NH₂，-SO₂NH₂，-C(O)-C_1-4烷基-OH，-SO₂-C_1-4烷基-OH或NH_2。

其中，C_1-4烷基部分可以進(jìn)一步被1-4個(gè)氟取代。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，所述化合物選自下列分子：

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述的5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子，所述化合物選自下列分子：

本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供一種治療腫瘤的藥用組合物。

該治療腫瘤的藥用組合物，其由所述5-(硫醚基)嘧啶類化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或其前藥分子與藥學(xué)上可接受的載體組成。

本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供所述5-(硫醚基)嘧啶類化合物的在制藥中的用途；尤其是所述5-(硫醚基)嘧啶類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體或其前藥分子在制備治療腫瘤的藥物中的用途；

本發(fā)明中，所述腫瘤為非小細(xì)胞肺癌，小細(xì)胞肺癌，肺腺癌，肺鱗癌，胰腺癌，乳腺癌，前列腺癌，肝癌，皮膚癌，上皮細(xì)胞癌，胃腸間質(zhì)瘤，白血病，組織細(xì)胞性淋巴癌，鼻咽癌中的任一種。

本發(fā)明經(jīng)行了細(xì)胞試驗(yàn)，結(jié)果顯示，所述的通式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的5-(硫醚基)嘧啶類化合物，能抑制多種腫瘤細(xì)胞，尤其能選擇性作用于EGFR L858R/T790M以及EGFR E745A750/T790M肺癌細(xì)胞；相對(duì)于野生型癌細(xì)胞，該類化合物的IC50要高十倍甚至幾十倍的差別，進(jìn)一步的，該類化合物可用于制備新的能夠克服現(xiàn)有EGFR-TKI耐藥的并具有選擇性的蛋白激酶抑制劑。

本發(fā)明所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，可以有效抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并對(duì)EGFR,Her家族其他蛋白酶產(chǎn)生抑制作用；進(jìn)一步的，可用于制備抗腫瘤藥物，并克服現(xiàn)有藥物吉非替尼，厄羅替尼等誘發(fā)的耐藥。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，本申請(qǐng)所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可用于制備治療人類及其它哺乳動(dòng)物的腫瘤等過(guò)度增值性疾病。

本發(fā)明所述化合物中，當(dāng)任何變量(例如R₁，R等)在任何組分中出現(xiàn)超過(guò)一次，則其每次出現(xiàn)的定義獨(dú)立于其它每次出現(xiàn)的定義。同樣，允許取代基及其變量的組合，只要這種組合是化合物穩(wěn)定。要理解本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可選擇本發(fā)明化合物的取代基及取代形式而提供化學(xué)上穩(wěn)定的并可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)和下列提出的讓發(fā)自可容易獲得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身超過(guò)一個(gè)基團(tuán)取代，應(yīng)理解這些基團(tuán)可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

本發(fā)明中，所用術(shù)語(yǔ)“烷基”意指包括具有特定碳原子數(shù)目的支鏈的和直鏈的飽和脂肪烴基。例如，“C_1-4烷基”中“C_1-4”的定義包括以直鏈或支鏈排列的具有1、2、3或4個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如，“C_1-4烷基”具體包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指具有特定碳原子數(shù)目的單環(huán)飽和脂肪烴基。例如“環(huán)烷基”包括環(huán)丙基，甲基-環(huán)丙基，2,2-二甲基-環(huán)丁基，2-乙基-環(huán)戊基，環(huán)己基等。

本發(fā)明中，所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基”代表環(huán)中多達(dá)6個(gè)原子的穩(wěn)定的單環(huán)或每個(gè)環(huán)中多達(dá)6個(gè)原子雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)為芳香環(huán)且含有1-4個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子。本定義范圍內(nèi)的雜芳基包括但不限于：咪唑基，三唑基，吡唑基，呋喃基，噻吩基，惡唑基，異惡唑基，吡嗪基，噠嗪基，吡啶基，嘧啶基，吡咯基。對(duì)于下列雜芳基的定義，“雜芳基”也理解為包括任何含有氮的雜芳基的N-氧化物衍生物。在雜芳基取代基是雙環(huán) 的且有一個(gè)環(huán)為非芳香性或不含有雜原子的例子中，應(yīng)理解各自經(jīng)芳香環(huán)或經(jīng)含雜原子環(huán)連接。

正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，本發(fā)明中所用“鹵素”或“鹵素”意指包括氟，氯，溴和碘。

本發(fā)明包括式Ⅰ-Ⅶ化合物以及XQ-1～XQ-9化合物的游離形式，也包括其藥學(xué)上可接受的鹽及立體異構(gòu)體。本發(fā)明中一些特定的示例性化合物為胺類化合物的質(zhì)子化了的鹽。術(shù)語(yǔ)“游離形式”指以非鹽形式的胺類化合物，包括在內(nèi)的藥學(xué)上可接受鹽包括所有式Ⅰ-Ⅶ化合物以及XQ-1～XQ-9化合物的游離形式的典型的藥學(xué)上可接受的鹽。可使用本領(lǐng)域已知技術(shù)分離所述化合物特定鹽的游離形式，例如，可通過(guò)適當(dāng)?shù)膲A稀水溶液例如氫氧化鈉稀水溶液，碳酸鉀稀水溶液，稀氨水及碳酸氫鈉稀水溶液處理該鹽使游離形式再生；游離形式在某些物理性質(zhì)例如在極性溶劑中溶解度上與其各自鹽形式多少有些區(qū)別，但是為了發(fā)明的目的這種酸鹽以及堿鹽在其它藥學(xué)方面與其各自游離形式相當(dāng)。

可通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法自含有堿性部分或酸性部分的本發(fā)明化合物合成本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽。通常，通過(guò)例子交換色譜或通過(guò)游離堿和化學(xué)計(jì)算量或過(guò)量的所需鹽形式的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸在適當(dāng)溶劑或多種溶劑的組合中反應(yīng)制備堿性化合物的鹽，類似的，通過(guò)和適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)形成酸性化合物的鹽。

本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括通過(guò)本發(fā)明的堿性化合物和有機(jī)或無(wú)機(jī)酸反應(yīng)形成的本發(fā)明化合物的常規(guī)無(wú)毒鹽，例如，常規(guī)的無(wú)毒鹽包括自無(wú)機(jī)酸例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸，硝酸等的鹽，也包括自有機(jī)酸例如乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，沒乳酸，蘋果酸，酒石酸，檸檬酸，抗敗血酸，撲酸，馬來(lái)酸，羥基馬來(lái)酸，苯乙酸，谷氨酸，苯甲酸，水楊酸，對(duì)氨基苯磺酸，2-乙酰氧基-苯甲酸，富馬酸，甲苯磺酸，甲磺酸，乙烷二磺酸，草酸，羥乙基磺酸，三氟乙酸等制備的鹽。

如果本發(fā)明化合物為酸性的，則適當(dāng)?shù)摹八帉W(xué)上可接受的鹽”指通過(guò)藥學(xué)上可接受的無(wú)毒堿包括無(wú)機(jī)堿及有機(jī)堿制備的鹽，得自無(wú)機(jī)堿的鹽包括鋁鹽，銨鹽，鈣鹽，銅鹽，鐵鹽，亞鐵鹽，鋰鹽，鎂鹽，鈉鹽，鋅鹽等。特別優(yōu)選銨鹽，鈣鹽，鎂鹽，鉀鹽和鈉鹽。得自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無(wú)毒堿的鹽，所述堿包括伯胺，仲胺，叔胺的鹽，取代的胺包括天然存在的取代胺，環(huán)狀胺及堿性離子交換樹脂例如精氨酸，甜菜堿，咖啡因，膽堿，N,N-二芐基乙二胺，二乙胺，2-二甲基氨基乙醇，氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基嗎啉，N-乙酰哌啶，葡萄糖胺，氨基葡萄糖，組氨酸，羥鈷胺，異丙基胺，賴氨酸，甲 基葡萄糖胺，嗎啉，哌嗪，哌啶，呱咤，多胺樹脂，普魯卡因，嘌呤，可可堿，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨基丁三醇等。

Berg等，“Pharmaceutical Salts,”J.Pharm.Sci.1997:66:1-19更詳細(xì)描述了上文中所述藥學(xué)上可接受的鹽及其它典型的藥學(xué)上可接受的鹽的制備，在此將其內(nèi)容引入本發(fā)明中。

由于在生理?xiàng)l件下化合物脫質(zhì)子化的酸性部分例如羧基可為陰離子的，而這種帶有電荷然后可被內(nèi)部帶有陽(yáng)離子的質(zhì)子化了的或烷基化了的堿性部分例如四價(jià)氮原子平衡抵消，所以應(yīng)注意本發(fā)明化合物時(shí)潛在的內(nèi)鹽或兩性離子。

除在文獻(xiàn)中已知的或在實(shí)驗(yàn)程序中例證的標(biāo)準(zhǔn)方法外，可采用如下列實(shí)施方案中顯示的反應(yīng)制備本發(fā)明化合物。因此，下列說(shuō)明性實(shí)施方案是為說(shuō)明目的而不是局限于所列化合物或任何特定的取代基。實(shí)施方案中顯示的取代基數(shù)目并不必需符合權(quán)利要求中所用的數(shù)目，且為清楚起見，顯示單取代基連接到在上文式Ⅰ的定義下允許有多取代基的化合物上。

具體實(shí)施方式

如發(fā)明所述式Ⅰ-Ⅶ化合物以及XQ-1～XQ-9化合物，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)和所具備的常識(shí)，可以由2,4-二氯-5-(甲硫基)嘧啶為起始原料通過(guò)幾步反應(yīng)合成(具體合成步驟見實(shí)施例1)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N利用具有式Ⅰ-Ⅶ化合物以及XQ-1～XQ-9化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽治療人或其它哺乳動(dòng)物腫瘤等過(guò)度增殖性疾病或癥狀的應(yīng)用。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本申請(qǐng)所涉及的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以用于治療或者控制非小細(xì)胞肺癌，小細(xì)胞肺癌，肺腺癌，肺鱗癌，胰腺癌，乳腺癌，前列腺癌，肝癌，皮膚癌，上皮細(xì)胞癌，胃腸間質(zhì)瘤，白血病，組織細(xì)胞性淋巴癌，鼻咽癌等過(guò)度增殖性疾病。

本申請(qǐng)所涉及的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的代謝產(chǎn)物，以及可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)楸旧暾?qǐng)所涉及的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的結(jié)構(gòu)的前藥，也包含在本申請(qǐng)的權(quán)利要求中。

以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-1)

步驟1 叔丁基(3-((2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1)

在50mL底部預(yù)先裝有磁力攪拌器的圓底燒瓶中，加入叔丁基(3-羥基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.88g，9.0mmol)和異丙醇(18.0mL)。反應(yīng)混合物冷卻至0℃。2,4-二氯-5-(甲硫基)嘧啶(1.75g，9.0mmol)在0℃下滴加到上述反應(yīng)混合物中。再將DIPEA(1.9mL，10.8mmol)逐滴加入到上述反應(yīng)混合物中，將反應(yīng)混合物在90℃油浴中攪拌4小時(shí)。通過(guò)TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后。將固體沉淀濾出并用異丙醇(6mL)洗滌濾餅。所得白色固體在40℃減壓下干燥1小時(shí)。(1.3g，產(chǎn)率：40％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.22(s,1H),7.44(brs.,1H),7.32(t,J＝8.1Hz,1H),7.10(d,J＝7.9Hz,1H),6.84(d,J＝6.8Hz,1H),6.57(s,1H),2.53(s,3H),1.51(s,9H).ES/MS(M+H)⁺＝367.9

步驟2 1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(2)

將1-(哌嗪-1-基)乙-1-酮(3.59g,28mmol))和碳酸鉀(3.88g,28mmol)加入N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中，然后向該懸浮液中加入4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(4.09g,23mmol)并在80℃攪拌過(guò)夜。將混合物傾入水中，將固體沉淀濾出。所得固體在50℃真空中干燥，得黃色固體(3.5g,產(chǎn)率：45％)

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.92(d,J＝9.4Hz,1H),6.60(dd,J＝9.4,2.4Hz,1H),6.54(d,J＝2.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.60-3.58(m,4H),3.55–3.53(m,2H),3.49–3.47(m,2H),2.06(s,3H).ES/MS(M+H)+＝280.1

步驟3 1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(3)

將1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(3.5g,12.5mmol)溶解于50mL乙醇中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入10％鈀碳(350mg)。將充滿氫氣的氣球裝在反應(yīng)瓶上，并抽真空3次，直至反應(yīng)體系中充滿氫氣。室溫下攪拌過(guò)夜。用硅藻土濾去反應(yīng)體系中的不溶物，并用甲醇洗滌。濾液減壓旋蒸濃縮，得到黑色油狀物。(3.1g,定量轉(zhuǎn)化)

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ6.54(d,J＝1.9Hz,1H),6.53(d,J＝7.9Hz,1H),6.32(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),4.34(brs.,2H),3.75(s,3H),3.58–3.50(m,4H),2.97–2.91(m,2H),2.90–2.84(m,2H),2.03(s,3H).ES/MS(M+H)+＝250.2

步驟4 叔丁基(3-((2-((4-(4-乙?；哙?1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(4)

將叔丁基(3-((2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(550mg,1.5mmol)和1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(250mg,1.0mmol)溶于二氧六環(huán)(10mL)中，然后加入催化量的三氟乙酸。將反應(yīng)體系置于90℃的油浴中攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)液減壓旋蒸濃縮后通過(guò)柱層析純化(二氯甲烷：甲醇20:1作為洗脫劑)得到橘黃色固體。(174mg,收率:34％)

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.31(s,1H),7.67(s,1H),7.55(s,1H),7.34(s,1H),7.29(s,1H),6.95–6.84(m,1H),6.63(s,1H),6.46(d,J＝1.7Hz,1H),6.21(d,J＝8.2Hz,1H),3.82(s,3H),3.81–3.65(m,2H),3.70–3.50(m,2H),3.22–2.93(m,4H),2.44(s,3H),2.14(s,1H),1.49(s,9H).ES/MS(M+H)+＝580.9

步驟5 1-(4-(4-((4-(3-氨基苯氧基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(5)

將叔丁基(3-((2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(174mg,0.3mmol)溶于二氯甲烷4mL中，在冰浴條件下，向其中加入5mL三氟乙酸。反應(yīng)體系移至室溫，并在室溫條件下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)液被減壓旋蒸濃縮，然后重新用二氯甲烷溶解，并用1mol/L的碳酸鈉水溶液洗滌，接著用鹽水洗滌，有幾層用無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓旋蒸濃縮得到橘黃色固體。(96mg,定量轉(zhuǎn)化)

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.88(s,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H),6.61(d,J＝2.5Hz,1H),6.49(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),6.36(t,J＝2.1Hz,1H),6.33–6.28(m,2H),5.29(brs.,2H),3.78(s,3H),3.59–3.56(m,4H),3.12–3.04(m,2H),3.05–2.98(m,2H),2.40(s,3H),2.05(s,3H).ES/MS(M+H)+＝481.0

步驟6 N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-1)

在冰浴條件下丙烯酰氯(9μL,0.11mmol)滴加到1-(4-(4-((4-(3-氨基苯氧基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(48mg,0.10mmol)和二異丙基乙胺(26μL,0.15mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中。然后在冰浴條件下繼續(xù)攪拌1小時(shí)，將反應(yīng)液減壓旋蒸濃縮，并先后用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓旋蒸濃縮，柱層析純化(二氯甲烷：甲醇20:1做為流動(dòng)相)得到白色固體(35mg,收率:65％)

¹H NMR(600MHz,DMSO)δ10.31(s,1H),8.30(s,1H),7.96(s,1H),7.59(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),6.94(d,J＝7.6Hz,1H),6.57(s,1H),6.43(dd,J＝16.7,10.1Hz,1H),6.27(d,J＝16.9Hz,1H),6.19(brs.,1H),5.78(d,J＝10.1Hz,1H),3.75(s,3H),3.56–3.54(m,4H),3.06–3.04(m,2H),2.99–2.97(m,2H),2.42(s,3H),2.04(s,3H).ES/MS(M+H)+＝535.3。

實(shí)施例2

N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-(甲基磺?；?哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-2)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(600MHz,DMSO)δ10.31(s,1H),8.30(s,1H),7.98(s,1H),7.60(s,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.41(t,J＝8.1Hz,1H),7.34(d,J＝8.5Hz,1H),6.94(d,J＝7.9Hz,1H),6.58(s,1H),6.43(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.27(d,J＝16.9Hz,1H),6.22(brs.,1H),5.78(d,J＝10.2Hz,1H),3.75(s,3H),3.23–3.21(m,4H),3.16–3.14(m,4H),2.93(s,3H),2.42(s,3H).ES/MS(M+H)+＝571.2。

實(shí)施例3

N-(3-((2-((4-(4-乙?；?1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-3)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.30(s,1H),8.02(brs.,1H),7.60(t,J＝9.6Hz,1H),7.49(s,1H),7.41–7.34(m,3H),6.97(d,J＝8.1Hz,1H),6.43(dd,J＝17.0,2.3Hz,1H),6.30(dd,J＝16.8,10.0,1H),6.19(s,1H),5.92(brs.,1H),5.74(dd,J＝10.0,2.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.74(t,J＝5.3Hz,1H),3.63-3.61(m,1H),3.57(d,J＝4.6Hz,1H),3.53–3.51(m,2H),3.51-3.44(m,2H),3.36(t,J＝6.1Hz,1H),2.44(s,3H),2.04(s,3H),1.98–1.93(m,1H),1.92–1.87(m,1H).ES/MS(M+H)+＝549.2。

實(shí)施例4

N-(3-((2-((4-((1-乙?；哙?4-基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-4)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.35(s,1H),7.77(brs.,1H),7.39(t,J＝8.1Hz,1H),6.99(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H),6.40–6.36(m,4H),6.34(dd,J＝17.0,2.3Hz,1H),5.86(dd,J＝16.8,10.3Hz,1H),5.79–5.65(m,1H),5.46(dd,J＝10.4,2.3Hz,1H),5.00–4.59(m,2H),3.80(s,3H),3.81–3.79(m,1H),3.25–3.14(m,1H),2.68–2.55(m,1H),1.99(s,3H),1.88–1.74(m,2H),1.21–1.07(m,2H).ES/MS(M+H)+＝549.3。

實(shí)施例5

N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-丙?；哙?1-基)苯基)氨基)-5-(甲硫基) 嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-5)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.31(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(brs.,1H),7.56(s,1H),7.49(s,1H),7.43(t,J＝8Hz,1H),7.42(s,1H),6.98(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.44(dd,J＝16.8,1.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.4Hz,1H),6.23(dd,J＝16.8,10.2Hz,1H),6.17(s,1H),5.77(dd,J＝10.2,1.1Hz,1H),3.80(s,3H),3.75–3.73(m,2H),3.60–3.58(m,2H),3.03–3.00(m,4H),2.44(s,3H),2.39(dd,J＝14.9,7.4Hz,2H),1.17(t,J＝7.4Hz,3H).ES/MS(M+H)+＝549.0。

實(shí)施例6

N-(3-((2-((4-(4-異丁酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-6)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.32(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(brs.,1H),7.56(s,1H),7.49(s,1H),7.43(t,J＝8Hz,1H),7.42(s,1H),6.98(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.44(dd,J＝16.8,1.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.4Hz,1H),6.23(dd,J＝16.8,10.2Hz,1H),6.17(s,1H),5.77(dd,J＝10.2,1.1Hz,1H),3.81(s,3H),3.76–3.74(m,2H),3.65–3.63(m,2H),3.04–3.00(m,4H),2.90–2.73(m,1H),2.44(s,3H),1.15(d,J＝6.8Hz,6H).ES/MS(M+H)+＝563.0。

實(shí)施例7

N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-新戊酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧 啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-7)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.29(brs.,1H),8.26(s,1H),7.94(s,1H),7.55(s,1H),7.54(d,J＝8.9Hz,1H),7.38(t,J＝7.8Hz,1H),7.29(d,J＝8.5Hz,1H),6.91(d,J＝7.6Hz,1H),6.53(s,1H),6.39(dd,J＝16.6,10.0Hz,1H),6.22(d,J＝15.9Hz,1H),6.15(d,J＝7.8Hz,1H),5.74(d,J＝11.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.68–3.59(m,4H),3.04–2.91(m,4H),2.39(s,3H),1.19(s,9H).ES/MS(M+H)+＝577.3。

實(shí)施例8

N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-(2,2,2-三氟乙?；?哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-8)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.33(s,1H),7.69(m,2H),7.51(brs.,1H),7.44(t,J＝8.2Hz,1H),7.40(s,1H),7.37(s,1H),6.99(dd,J＝7.7,1.8Hz,1H),6.44(dd,J＝16.8,1.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.4Hz,1H),6.22(dd,J＝16.8,10.2Hz,1H),6.20(s,1H),5.79(dd,J＝10.2,1.0Hz,1H),3.82(s,3H),3.83-3.80(m,2H),3.78–3.71(m,2H),3.14–3.06(m,4H),2.44(s,3H).ES/MS(M+H)+＝589.0。

實(shí)施例9

N-(3-((2-((4-(4-乙?；哙?1-基)-2-(二氟甲氧基)苯基)氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(XQ-9)

合成方法如實(shí)施例1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.32(s,1H),7.71(d,J＝8.9Hz,1H),7.64(d,J＝7.8Hz,1H),7.49(s,1H),7.45(s,1H),7.41(d,J＝8.2Hz,1H),7.22(s,1H),6.97(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),6.63(d,J＝2.7Hz,1H),6.44(dd,J＝16.8,1.2Hz,1H),6.44(t,J＝79.6Hz,1H),6.25(dd,J＝16.8,10.2Hz,1H),5.79(dd,J＝10.2,1.1Hz,1H),3.77–3.70(m,2H),3.66–3.52(m,2H),3.11–2.97(m,4H),2.45(s,3H),2.13(s,3H).ES/MS(M+H)+＝571.0。

實(shí)施例10

5-(硫醚基)嘧啶類化合物對(duì)EGFR野生型和EGFR L858R/T790M雙突變的激酶IC50測(cè)試，

EGFR WT為野生型表皮生長(zhǎng)因子受體，EGFR L858R/T790M為帶有第858位氨基酸有亮氨酸突變成精氨酸以及790位氨基酸有蘇氨酸突變成甲硫氨酸的表皮生長(zhǎng)因子受體，

激酶活性檢測(cè)：

用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測(cè)激酶磷酸化底物的能力，計(jì)算化合物對(duì)激酶活性的抑制作用，采用Bac-to-Bac^TM桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)進(jìn)行野生型EGFR和EGFR T790M/L858R突變的激酶區(qū)表達(dá)，經(jīng)鎳柱(QIAGEN Inc.,Valencia,CA,USA)純化。ELISA主要步驟如下：酶反應(yīng)底物Poly(_Glu,Tyr)4:1用無(wú)鉀離子的PBS(10mM磷酸鈉緩沖液，150mM NaCl,pH 7.2-7.4)稀釋成20μg/mL，于37℃反應(yīng)12-16h包被酶標(biāo)板，然后用含0.1％Tween-20的PBS(T-PBS)洗板，每孔加入用反應(yīng)緩沖液(50mM HEPES pH 7.4,50mM MgCl₂,0.5mM MnCl₂,0.2mM Na₃VO₄,1mM DTT)稀釋的ATP(終濃度5μM)溶液，加入不同濃度的待測(cè)化合物或溶劑對(duì)照，然后分別加入相應(yīng)激酶啟動(dòng)反應(yīng)，37℃搖床反應(yīng)1h，T-PBS洗板三次，加入抗體PY99100μL/孔(用含BSA的T-PBS稀釋)于37℃搖床反應(yīng)0.5h，T-PBS洗板后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠的IgG 100μL/孔(用含BSA的T-PBS稀釋)，37℃搖床反應(yīng)0.5h，再次洗板后，加入2mg/mL的OPD顯色液100μL/孔，25℃避光反應(yīng)1-10min，加入2M H₂SO₄終止反應(yīng)，用可調(diào)波長(zhǎng)微孔板酶標(biāo)儀SPECTRA MAX 190讀數(shù)，波長(zhǎng)為492nm，IC₅₀值由抑制曲線得到。表2顯示了化合物激酶活性。

表2

實(shí)施例11EGFR活性的細(xì)胞水平測(cè)試

采用磺酰羅丹明B(sulforodamine B，SRB)法檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用，選用EGFR依賴細(xì)胞株：人表皮細(xì)胞癌A431細(xì)胞株和人非小細(xì)胞肺癌NCI-H1975細(xì)胞株(均購(gòu)自ATCC)。細(xì)胞以一定密度接種于96孔板，貼壁過(guò)夜，加入不同濃度化合物作用72h，用預(yù)冷的10％三氯乙酸于4℃固定1h，蒸餾水洗去固定液后烘干，使用4mg/mL的SRB溶液(溶于1％醋酸)室溫染色15分鐘，洗去多余染色液，室溫烘干，在使用酶標(biāo)儀檢測(cè)前加入10mmol/L Tris 100μL每孔，約15分鐘后，SRB完全溶解，使用多功能酶標(biāo)儀(VERSAmax,Molecular Devices)測(cè)定515nm的吸收波長(zhǎng)，抑制率計(jì)算公式為：[1–(A515_treated/A515_control)]×100％。表3顯示了化合物細(xì)胞活性。

表3