本發(fā)明涉及一種藻類保存方法，更具體的說(shuō)是涉及一種海洋餌料微藻的保存方法。
背景技術(shù)：
：微藻是一類在陸地、海洋分布廣泛，營(yíng)養(yǎng)豐富、光合利用度高的自養(yǎng)植物，細(xì)胞代謝產(chǎn)生的多糖、蛋白質(zhì)、色素等，使其在食品、醫(yī)藥、基因工程、液體燃料等領(lǐng)域具有很好的開發(fā)前景。藻類個(gè)體大小懸殊，其中，只有在顯微鏡下才能分辨其形態(tài)的微小藻類類群被人們稱為微藻(microalgae)，故此微藻不是一個(gè)分類學(xué)上的名稱。微藻種類繁多，微藻細(xì)胞中含有：蛋白質(zhì)、脂類、藻多糖、β-胡蘿卜素、多種無(wú)機(jī)元素(如Cu，F(xiàn)e，Se，Mn，Zn等)等高價(jià)值的營(yíng)養(yǎng)成分和化工原料。微藻的蛋白質(zhì)含量很高，是單細(xì)胞蛋白(SCP)的一個(gè)重要來(lái)源。微藻所含的維生素A、維生素E、硫氨素、核黃素、吡多醇、維生素B12、維生素C、生物素、肌醇、葉酸、泛酸鈣和煙酸等增加了其作為SCP的價(jià)值。藻中類胡蘿卜素含量較高，具有著色和營(yíng)養(yǎng)的作用，可用來(lái)防治癌癥、抗輻射、延緩衰老，增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理作用?；瘜W(xué)合成均為反式的β-胡蘿卜素，對(duì)人體有致癌、致畸的作用，而順式異構(gòu)體在抗癌、抗心血管疾病功能比全反式異構(gòu)體高，藻粉中β-胡蘿卜素含量高達(dá)14％。藻細(xì)胞中甘油含量較高，是優(yōu)質(zhì)的化妝品原料，也是化工、輕工和醫(yī)藥工業(yè)中用途極廣的有機(jī)中間體。同時(shí)，也是海產(chǎn)品飼養(yǎng)中較好的飼料。但是在當(dāng)做飼料使用過程中，很難一直會(huì)有新鮮的微藻，現(xiàn)有技術(shù)中缺乏對(duì)于微藻保存的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種海洋餌料微藻的保存方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養(yǎng)步驟1-1：培養(yǎng)微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級(jí)培養(yǎng)：控溫室恒溫培養(yǎng)；步驟1-3微藻的擴(kuò)大培養(yǎng)：將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)后，采用半封閉式充氣培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；步驟2：微藻的濃縮采用無(wú)機(jī)絮凝劑對(duì)擴(kuò)大培養(yǎng)的藻液進(jìn)行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加3-5g/L的甘油，置于4-5℃的冰箱內(nèi)冷藏保存。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟步驟1-2中，微藻的初級(jí)培養(yǎng)：微藻采用3-5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養(yǎng)，溫度為25±2℃，光照周期12∶12，每天搖藻3次。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟1-3中，將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)7-10天后，接種到50-60L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養(yǎng)，接種比例為1∶8-1∶20，光照為室外太陽(yáng)光，室外溫度為25±5℃。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2：停止對(duì)塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3-0.9g/L，絮凝時(shí)間為30-120min，微藻沉淀度為50-95％。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2中絮凝劑種類為聚合氯化鋁、明礬、復(fù)合絮凝劑中至少一種。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述復(fù)合絮凝劑包括下列重量份組成：硅藻土：10份丙烯酰胺：2份硫酸銨：0.05份硅酸鈉：10份丙烯基氯化二甲基硅烷：1份烯丙胺基三甲基硅烷：1份丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯：1份聚合氯化鋁：3份硅藻糖：1份。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述復(fù)合絮凝劑包括下述方法制備：步驟A：將硅藻土搗碎，與硅酸鈉充分混合，在50℃恒溫條件下保溫1小時(shí)；步驟B：將丙烯酰胺、硫酸銨、丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷加入到保溫后的混合物中，之后升高溫度至120℃進(jìn)行聚合，1小時(shí)；步驟C：降溫至80℃，將聚合氯化鋁、丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯、硅藻糖加入，在80℃下保溫1小時(shí)，得到復(fù)合絮凝劑。本發(fā)明的有益效果，能夠?qū)ξ⒃暹M(jìn)行一個(gè)長(zhǎng)時(shí)期的保存。經(jīng)過保存后的微藻經(jīng)過恢復(fù)后仍然具有較好的活性。首先是步驟1中，取出作為微藻保存的載體的海水，進(jìn)行初步處理，能夠防止海水中的有害物質(zhì)會(huì)對(duì)微藻造成損害。另外，中在控溫環(huán)境下對(duì)微藻進(jìn)行初級(jí)培養(yǎng)，使得微藻能夠處于一個(gè)生長(zhǎng)期，微藻在生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生生長(zhǎng)素，之后在進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，在半封閉式充氣的條件下，能夠最大程度保證生長(zhǎng)素不會(huì)被破壞，從而促使后期微藻恢復(fù)后仍然具有較好的活性。步驟2中加入絮凝劑，使得微藻能夠凝聚在一起，這樣便于對(duì)微藻的收集，同時(shí)也減小了微藻的保存體積，方便運(yùn)輸和儲(chǔ)藏。而在絮凝劑上可以選用常見的聚合氯化鋁和明礬。同時(shí)本申請(qǐng)也提供一種自制的復(fù)合絮凝劑。復(fù)合絮凝劑，以硅藻土、丙烯酰胺、硅酸鈉為主體，首先配置硅藻土與硅酸鈉的混合物，在保溫過程中，使得硅藻土和硅酸鈉更好地混合，同時(shí)也能偶使得硅藻土和硅酸鈉上的活性基團(tuán)處于一個(gè)活化狀態(tài)，之后加入丙烯酰胺與其發(fā)生聚合反應(yīng)，同時(shí)加入丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷作為偶聯(lián)劑，使得載體上形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，特別是選用丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷能夠進(jìn)一步保護(hù)生長(zhǎng)素的穩(wěn)定性，提高微藻的存活率。加入聚合氯化鋁之后，能夠使得聚合氯化鋁在80℃下能夠附著在整個(gè)高分子載體上，使得絮凝效果更佳集中，同時(shí)在載體本身也具有較好的絮凝效果，這樣就可以提高絮凝效果。而丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯的加入能夠起到一個(gè)很好的分散劑的作用，使得在聚合前，各物料之間能夠均勻混合在一起，使得聚合出來(lái)的絮凝劑在性質(zhì)上能夠更加均勻，同時(shí)丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯也作為一個(gè)中間媒介，參與整個(gè)聚合反應(yīng)中去，能夠降低整個(gè)聚合反應(yīng)的溫度，各通過丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯相互交聯(lián)在一起。硅藻糖本身的結(jié)構(gòu)就與本發(fā)明的載體具有較好的相容性，因此加入過程后能夠在短時(shí)間內(nèi)分散均勻，同時(shí)海藻糖本身具有對(duì)微藻具有保護(hù)作用，能夠使得微藻在經(jīng)過保存供以后，長(zhǎng)時(shí)間存放后仍然具有較好的活性。具體實(shí)施方式實(shí)施例一：一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養(yǎng)步驟1-1：培養(yǎng)微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級(jí)培養(yǎng)：控溫室恒溫培養(yǎng)；步驟1-3微藻的擴(kuò)大培養(yǎng)：將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)后，采用半封閉式充氣培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；步驟2：微藻的濃縮采用無(wú)機(jī)絮凝劑對(duì)擴(kuò)大培養(yǎng)的藻液進(jìn)行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加5g/L的甘油，置于5℃的冰箱內(nèi)冷藏保存。所述步驟步驟1-2中，微藻的初級(jí)培養(yǎng)：微藻采用5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養(yǎng)，溫度為25±2℃，光照周期12∶12，每天搖藻3次。所述步驟1-3中，將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)19天后，接種到50L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養(yǎng)，接種比例為1∶10，光照為室外太陽(yáng)光，室外溫度為25±5℃。所述步驟2：停止對(duì)塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3g/L，絮凝時(shí)間為60min，微藻沉淀度為80％。所述步驟2中絮凝劑種類為聚合氯化鋁。所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。實(shí)施例二一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養(yǎng)步驟1-1：培養(yǎng)微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級(jí)培養(yǎng)：控溫室恒溫培養(yǎng)；步驟1-3微藻的擴(kuò)大培養(yǎng)：將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)后，采用半封閉式充氣培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；步驟2：微藻的濃縮采用無(wú)機(jī)絮凝劑對(duì)擴(kuò)大培養(yǎng)的藻液進(jìn)行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加5g/L的甘油，置于5℃的冰箱內(nèi)冷藏保存。所述步驟步驟1-2中，微藻的初級(jí)培養(yǎng)：微藻采用5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養(yǎng)，溫度為25±2℃，光照周期12∶12，每天搖藻3次。所述步驟1-3中，將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)19天后，接種到50L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養(yǎng)，接種比例為1∶10，光照為室外太陽(yáng)光，室外溫度為25±5℃。所述步驟2：停止對(duì)塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3g/L，絮凝時(shí)間為60min，微藻沉淀度為80％。所述步驟2中絮凝劑種類為明礬。所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。實(shí)施例三一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養(yǎng)步驟1-1：培養(yǎng)微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級(jí)培養(yǎng)：控溫室恒溫培養(yǎng)；步驟1-3微藻的擴(kuò)大培養(yǎng)：將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)后，采用半封閉式充氣培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；步驟2：微藻的濃縮采用無(wú)機(jī)絮凝劑對(duì)擴(kuò)大培養(yǎng)的藻液進(jìn)行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加5g/L的甘油，置于5℃的冰箱內(nèi)冷藏保存。所述步驟步驟1-2中，微藻的初級(jí)培養(yǎng)：微藻采用5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養(yǎng)，溫度為25±2℃，光照周期12：12，每天搖藻3次。所述步驟1-3中，將初級(jí)培養(yǎng)的藻種培養(yǎng)19天后，接種到50L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養(yǎng)，接種比例為1∶10，光照為室外太陽(yáng)光，室外溫度為25±5℃。所述步驟2：停止對(duì)塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3g/L，絮凝時(shí)間為60min，微藻沉淀度為80％。所述步驟2中絮凝劑種類為復(fù)合絮凝劑。所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。所述復(fù)合絮凝劑包括下列重量份組成：硅藻土：10份丙烯酰胺：2份硫酸銨：0.05份硅酸鈉：10份丙烯基氯化二甲基硅烷：1份烯丙胺基三甲基硅烷：1份丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯：1份聚合氯化鋁：3份硅藻糖：1份。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述復(fù)合絮凝劑包括下述方法制備：步驟A：將硅藻土搗碎，與硅酸鈉充分混合，在50℃恒溫條件下保溫1小時(shí)；步驟B：將丙烯酰胺、硫酸銨、丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷加入到保溫后的混合物中，之后升高溫度至120℃進(jìn)行聚合，1小時(shí)；步驟C：降溫至80℃，將聚合氯化鋁、丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯、硅藻糖加入，在80℃下保溫1小時(shí)，得到復(fù)合絮凝劑。將實(shí)施例一、實(shí)施例二、實(shí)施例三中，選用的微藻為微綠球藻，分別保存1個(gè)月、3個(gè)月、半年、1年的時(shí)間后，對(duì)其進(jìn)行藻類恢復(fù)試驗(yàn)，并記錄藻液中藻密度，并計(jì)算存活率。藻液中活藻密度采用平板藻落計(jì)數(shù)法，測(cè)定方法參考《工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)手冊(cè)》(中國(guó)輕工業(yè)出版社，1997)。藻類恢復(fù)方法為：配置營(yíng)養(yǎng)液：硝酸銨30～150毫克磷酸二氫鉀2毫克檸檬酸鐵5毫克海水(過濾煮沸)1000毫升。直接將實(shí)施例中藻類放入到營(yíng)養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)即可。藻類存活率一個(gè)月三個(gè)月半年一年實(shí)施例一96％91％88％80％實(shí)施例二94％90％89％83％實(shí)施例三95％93％92％88％本發(fā)明的有益效果，能夠?qū)ξ⒃暹M(jìn)行一個(gè)長(zhǎng)時(shí)期的保存。經(jīng)過保存后的微藻經(jīng)過恢復(fù)后仍然具有較好的活性。首先是步驟1中，取出作為微藻保存的載體的海水，進(jìn)行初步處理，能夠防止海水中的有害物質(zhì)會(huì)對(duì)微藻造成損害。另外，中在控溫環(huán)境下對(duì)微藻進(jìn)行初級(jí)培養(yǎng)，使得微藻能夠處于一個(gè)生長(zhǎng)期，微藻在生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生生長(zhǎng)素，之后在進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，在半封閉式充氣的條件下，能夠最大程度保證生長(zhǎng)素不會(huì)被破壞，從而促使后期微藻恢復(fù)后仍然具有較好的活性。步驟2中加入絮凝劑，使得微藻能夠凝聚在一起，這樣便于對(duì)微藻的收集，同時(shí)也減小了微藻的保存體積，方便運(yùn)輸和儲(chǔ)藏。而在絮凝劑上可以選用常見的聚合氯化鋁和明礬。同時(shí)本申請(qǐng)也提供一種自制的復(fù)合絮凝劑。復(fù)合絮凝劑，以硅藻土、丙烯酰胺、硅酸鈉為主體，首先配置硅藻土與硅酸鈉的混合物，在保溫過程中，使得硅藻土和硅酸鈉更好地混合，同時(shí)也能偶使得硅藻土和硅酸鈉上的活性基團(tuán)處于一個(gè)活化狀態(tài)，之后加入丙烯酰胺與其發(fā)生聚合反應(yīng)，同時(shí)加入丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷作為偶聯(lián)劑，使得載體上形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，特別是選用丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷能夠進(jìn)一步保護(hù)生長(zhǎng)素的穩(wěn)定性，提高微藻的存活率。加入聚合氯化鋁之后，能夠使得聚合氯化鋁在80℃下能夠附著在整個(gè)高分子載體上，使得絮凝效果更佳集中，同時(shí)在載體本身也具有較好的絮凝效果，這樣就可以提高絮凝效果。而丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯的加入能夠起到一個(gè)很好的分散劑的作用，使得在聚合前，各物料之間能夠均勻混合在一起，使得聚合出來(lái)的絮凝劑在性質(zhì)上能夠更加均勻，同時(shí)丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯也作為一個(gè)中間媒介，參與整個(gè)聚合反應(yīng)中去，能夠降低整個(gè)聚合反應(yīng)的溫度，各通過丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯相互交聯(lián)在一起。硅藻糖本身的結(jié)構(gòu)就與本發(fā)明的載體具有較好的相容性，因此加入過程后能夠在短時(shí)間內(nèi)分散均勻，同時(shí)海藻糖本身具有對(duì)微藻具有保護(hù)作用，能夠使得微藻在經(jīng)過保存供以后，長(zhǎng)時(shí)間存放后仍然具有較好的活性。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅局限于上述實(shí)施例，凡屬于本發(fā)明思路下的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理前提下的若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3