吲哚哌嗪-二酮,其制備及治療作用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及了 U-PA抑制劑（3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2， 5_二酮，涉及它的制備方法和作為u-PA抑制劑在抑制腫瘤侵襲和迀移、抗腫瘤和抗炎方面 的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 纖溶酶原激活系統(tǒng)由纖溶酶原激活劑（PAs)、纖溶酶原激活抑制劑（PAI s)和細(xì)胞 外纖溶酶原激活劑受體（PAR)組成。纖溶酶原激活系統(tǒng)涉及到細(xì)胞迀移、血管生成、傷口愈 合、胚胎發(fā)育、腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移等一系列過程。在哺乳動物體內(nèi)主要有兩種纖溶酶原激 活劑：組織型纖溶酶原激活劑（t-PA)和尿激酶型纖溶酶原激活劑（u-PA)。
[0003] 尿激酶型纖溶酶原激活劑（U-PA)是從人尿或腎細(xì)胞組織培養(yǎng)液中提取的一種絲 氨酸蛋白酶，屬雙鏈尿激酶型纖溶酶原活化劑（tcu-PA)，其分子量為55000或33000,是外 源性纖維溶解系統(tǒng)的激活劑。u-PA可以直接裂解纖溶酶原的精氨酸（560)-纈氨酸（561) 肽鍵，使無活性的單鏈纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘碾p鏈纖溶酶。
[0004] 在腫瘤組織中，U-PA激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，纖溶酶直接或間接的造成細(xì)胞 外基質(zhì)降解，進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移和血管生成，促進(jìn)腫瘤的增殖。
[0005] 在炎癥應(yīng)答過程中，u-PA通過與炎癥細(xì)胞表面的u-PAR結(jié)合，參與調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞 對血管和組織的滲透能力，促進(jìn)炎癥細(xì)胞向炎癥部位迀移，促進(jìn)炎癥反應(yīng)以及炎癥因子的 釋放，而炎癥因子的釋放又會誘導(dǎo)u-PA表達(dá)上升。
[0006] 由于u-PA的酶活性貫穿在腫瘤-纖溶-炎癥復(fù)雜的交叉聯(lián)系中，所以影響u-PA 的活性會影響復(fù)雜的交叉聯(lián)系。也就是說，發(fā)明優(yōu)秀活性的u-PA抑制劑對于抑制u-PA在 腫瘤-血栓-炎癥交叉聯(lián)系有重要意義。這種意義體現(xiàn)在70%以上癌癥病人死于癌轉(zhuǎn)移； 有大約10%的癌癥晚期病人出現(xiàn)出血癥狀，例如出現(xiàn)幾乎無法預(yù)測鼻，咽，肺或胃腸道大 出血；摘除腫瘤手術(shù)發(fā)生的出血，也惡化病人的預(yù)后。針對這種狀況，本發(fā)明提出了（3R， 6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮，其制備及治療作用。
[0007] 此前，發(fā)明人曾報(bào)道下面結(jié)構(gòu)的二酮哌嗪包括CIPPC是u-PA抑制劑（結(jié)構(gòu)見圖 1)，有優(yōu)秀的止血活性。lnmol/kg劑量下，CIPPC能顯著降低小鼠鼠尾出血時(shí)間[33,34]。 不幸的是，在10nm〇l/kg劑量下CIPPC能促進(jìn)血栓生成。血栓是腫瘤本人重要的并合癥， 是造成腫瘤本人死亡的重要因素。CIPPC能促進(jìn)血栓生成的作用為腫瘤病人帶來了新的威 脅。對比之下，（3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮的意想不到 的優(yōu)勢是，除了與CIPPC-樣有優(yōu)秀的止血活性外，還有抑制腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移，抑制腫 瘤本人并發(fā)炎癥作用，同時(shí)不會引起血栓形成。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的第一個(gè)內(nèi)容是提供結(jié)構(gòu)式4代表的u-PA抑制劑；
[0009]
[0010] 本發(fā)明的第二個(gè)內(nèi)容是提供結(jié)構(gòu)式4代表的U-PA抑制劑的制備方法，該方法包 括：
[0011] (1)在DCC和HOBt存在下D-Trp-〇Bzl在無水四氫呋喃中與D-Boc-Lys(z)縮合為 D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl ；
[0012] (2)在氯化氫-乙酸乙酯溶液中D-Boc-Lys (Z) -D-Trp-OBzl脫去Boc生成 D-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl ；
[0013] (3)在乙酸乙酯和 5 % NaHC03存在下 D-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl 生成（3R， 6R)-3-(4-丁氨基芐基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮；
[0014] (4)在Pd/C和H2存在下，在甲醇中（3R，6R) -3- (4- 丁氨基芐基）-6-(吲哚-3-乙 基）-哌嗪-2, 5-二酮脫去芐基生成（3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2， 5-二酮。
[0015] 本發(fā)明的第三個(gè)內(nèi)容是評價(jià)結(jié)構(gòu)式4代表的u-PA抑制劑在抑制腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn) 移和抗腫瘤轉(zhuǎn)移方面，以及在制作抗腫瘤和抗炎藥物方面的作用。
【附圖說明】
[0016] 圖 1.合成路線 1. i)DCC，HOBt，NMM，THF ;ii)HCl/EA(4N) ;iii)EA，TEA，8(TC ;iv) CH30H，Pd/C，H2。
[0017] 圖2. (3R，6R)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮體外對UK激 活纖溶酶原活力的影響。其中為單組分的人纖溶酶原（PLG) ;2為UK與PLG的共孵育組 分；3 為 200 μ g (3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二酮、UK 與 PLG 的共孵育組分；4為100 μ g (3R，6R) -3- (4- 丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2，5-二 酮、通與？1^的共孵育組分；5為5(^8(31?，61?)-3-(4-丁氨基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌 嗪-2, 5-二酮、UK與PLG的共孵育組分；6為500 μ g的EACA、UK與PLG的共孵育組分；7為 250 μ g的EACA、UK與PLG的共孵育組分。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
[0019] 實(shí)施例 1 制備 D-Boc-Lys (Z) -D-Trp-〇Bzl (1)
[0020] 將1. 9g(5. Ommol)D-Boc-Lys(Z)混懸于20mL無水四氫咲喃，室溫?cái)嚢柘孪蛉芤褐?加入0. 675g(5. 0mmol)H0Bt，冰浴攪拌下加入1. 133g(5. 5mmol)DCC，得到反應(yīng)液I，冰浴下 攪拌30分鐘。將1. 47g(5. 0mmol)D-Trp-0Bzl混懸于20mL無水四氫咲喃中，然后逐漸加入 NMM，調(diào)節(jié)pH至8-9,得到反應(yīng)液II。將反應(yīng)液II加入反應(yīng)液I中，先在冰浴下攪拌lh，再在 室溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測至原料點(diǎn)消失。后處理：減壓過濾除去DCU，將濾液減壓濃縮除去四氫呋 喃，殘留物用150mL乙酸乙酯溶解，將得到的溶液置于250mL分液漏斗中，依次用5% KHS04 水溶液洗和飽和NaCl水溶液各洗3次，乙酸乙酯層用無水Na2S04干燥30min，減壓過濾， 濾液減壓濃縮至干，得到的黃色泡狀物，經(jīng)硅膠柱層析純化（CH 2C12 : CH30H = 100 : 1~ 20 : 1)，得到 2.919g(89%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/e) :657[M+H] +。
[0021] 實(shí)施例 2 制備 D-Lys (Z) -D-Trp-〇Bzl (2)
[0022] 將純品 2. 62g(4. Ommol)D-Boc-Lys(Z)-D_Trp-〇Bzl (1)置于 50mg 前瓶中，冰浴攪 拌下緩慢向反應(yīng)瓶中滴加30mL 4N氯化氫-乙酸乙酯溶液，加干燥管，冰浴攪拌下反應(yīng)4小 時(shí)后TLC監(jiān)測原料點(diǎn)消失，終止反應(yīng)。后處理：攪拌下用水栗將反應(yīng)液減壓抽干，加乙酸乙 酯溶解后再次用水栗減壓抽干，重復(fù)三次；加無水乙醚充分混懸后靜置，傾倒出乙醚，抽干 產(chǎn)物，重復(fù)三次，得2.046g(93%)標(biāo)題化合物，為淡黃色粉末。ESI-MS(m/e) :557[M+H] +。
[0023] 實(shí)施例3制備（3R，6R)-3-(4-丁氨基芐基）-6-(吲哚-3-乙基）-哌嗪-2, 5-二 酮⑶
[0024] 將 1. 83g(3. 29mmol)化合物 D-Lys(Z)-D-Trp-〇Bzl ⑵以 80mL 乙酸乙酯溶解，用 三乙胺調(diào)pH至9,油浴80°C反應(yīng)6小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)基本消失。后處理：將反應(yīng)液直 接用硅膠拌樣，硅膠柱層析純化（CH 2C12: CH30H= 100 : 1-20 : 1)，得到1.3g(88. 3%) 標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/e) :449[M+H]VH NMR(300MHz，DMS0-d6) :δ/ρρπι = 10. 89(s，1Η)，8· 03(s，1Η)，7· 85(s，1Η)，7· 56(d，J = 9· 0Hz，1Η)，7· 35(m，6H)，7· 19(t，J = 6. 0Hz，1H)，7. 05(m，2H)，6. 95(t，J = 6. 0Hz，1H)，4. 99(s，2H)，4. 07(s，1H)，3. 25(dd，J = 3. 0Hz，J = 15. 0Hz，1H)，3. 09 (dd，J = 3. 0Hz，J = 15.