一種微藻油脂色素脫除方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及油脂純化技術(shù)領(lǐng)域，具體說一種微藻油脂色素脫除的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 微藻具有種類多、光合作用效率高、生物產(chǎn)量高、生長周期短及自身油脂含量高等 優(yōu)點，被認為是制備生物柴油最佳的生物質(zhì)能源原料之一，因此在微藻培養(yǎng)及生產(chǎn)過程中 脂質(zhì)分析對微藻的調(diào)控培養(yǎng)及代謝研究都具有重要意義。此外微藻中富含多不飽和脂肪 酸，尤其是二十二碳六烯酸（DHA)和二十碳五烯酸（EPA)在營養(yǎng)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有較高的 作用，微藻多不飽和脂肪酸的提取，從純種培養(yǎng)到精煉都需嚴格消毒，無菌操作，所生產(chǎn)的 DHA、EPA純度高、無污染，不含魚腥味，質(zhì)量遠勝魚油DHA。但微藻中色素含量高，影響油脂 色澤及品質(zhì)，因此微藻油脂色素的脫除為油脂分離分析及多不飽和脂肪酸生產(chǎn)工藝中必不 可少的步驟。目前針對于油脂的脫色工藝主要采用物理吸附脫色和漂白劑脫色。吸附劑脫 色是利用某些具有較強選擇性吸附作用的物質(zhì)，在一定條件下吸附色素和其它雜質(zhì)以進 行凈化的方法，相比于漂白劑的脫色，吸附脫色可去除色素及雜質(zhì)的干擾，從本質(zhì)上改變油 脂品質(zhì)與純度。常用的脫色材料包括活性炭、活性白土、雙氧水，且脫色溫度一般在60-150 ° C，吸附時間15-40min，攪拌下對色素進行吸附，然后經(jīng)過過濾、離心等操作進行樣品與 吸附劑的分離，此過程較繁瑣、耗能、費時，且色素脫除率較低，在50-80%。
[0003] 石墨化碳是由特種碳黑材料經(jīng)獨特的表面活化工藝制備而得，其表面的正六元環(huán) 結(jié)構(gòu)，使其對平面分子有極強的親和力，具有高凈化效果，高回收率和高重現(xiàn)性的優(yōu)良特 性，已應(yīng)用于農(nóng)殘分析中，特別是蔬菜水果等色素較高的樣品的前處理中。本發(fā)明以石墨化 碳固相萃取柱為材料，對微藻油脂中色素進行吸附脫除。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種適用于微藻油脂色素脫除的方法。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案內(nèi)容為：
[0006] (1)色素脫除
[0007] 首先將石墨化碳固相萃取柱（200mg-1000mg)用l-5mL樣品溶劑活化，溶劑自然流 出。
[0008] 上樣油脂質(zhì)量為石墨化碳填料的2% -10%，可多次上樣，上樣量或上樣次數(shù)以吸 附后所要求的色素脫除率為標準。洗脫液為油脂溶劑，負壓抽真空保證洗脫液液約10-20 滴/min流出，洗脫體積為柱體積的10-15倍。
[0009] (2)色素脫除率計算
[0010] 因為微藻中同時存在葉綠素類和類胡蘿卜素類兩大類色素，且不同的微藻兩類色 素的最大吸收波長存在差異，所以根據(jù)微藻的種類全掃描確定兩類色素的兩個最大吸收波 長，并計算色素脫除率。
[0011]
[0012] 式中A。為脫色前油脂的吸光值;A 脫色后油脂的吸光值
[0013] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：
[0015] 1.方法簡單：只需固相萃取裝置一套，與現(xiàn)有色素脫除工藝相比無需進行加熱， 攪拌等操作，無需吸附反應(yīng)釜和過濾，無色素吸附時間。
[0016] 2.色素脫除率高：色素脫除率高達92%以上，高于雙氧水、活性炭和活性白土的 色素脫除率。
[0017] 3.避免多不飽和脂肪酸的氧化：本方法可采用常溫或低溫操作，避免了加熱或使 用氧化性脫色劑引起的多不飽和脂肪酸的氧化。
【附圖說明】
[0018] 圖1石墨化碳固相萃取對湛江等鞭金藻色素脫除
[0019] 油脂上樣量對脫色率的影響（a)和脫色前后油脂的對比（b) 1 :脫色前；2 :脫色后
[0020] 圖2石墨化碳固相萃取對微擬球藻色素脫除
[0021] 油脂上樣量對脫色率的影響（a)和脫色前后油脂的對比（b) 1 :脫色前；2 :脫色后
[0022] 圖3石墨化碳固相萃取對角毛藻色素脫除
[0023] 油脂上樣量對脫色率的影響（a)和脫色前后油脂的對比（b) 1 :脫色前；2 :脫色 后。
[0024] 圖4石墨化碳固相萃取對螺旋藻色素脫除
[0025] 油脂上樣量對脫色率的影響。
【具體實施方式】
[0026] 下面通過具體實施例對本發(fā)明的方法和結(jié)果進行說明。
[0027] 實施例1
[0028] 所用微藻為湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangensis)，色素脫除步驟如下
[0029] (1)微藻油脂提取
[0030] 稱取IOOmg微藻藻粉，加入提取溶劑氯仿-甲醇-水（1:2:0. 8 v/v/v) 3. 8mL進行 超聲破碎提?。?00w,超聲5s，間隔5s，超聲5次），加入ImL氯仿和ImL水混合均勾，離心 分層后，取氯仿層定容于2mL容量瓶。
[0031] (2)色素脫除
[0032] 首先將石墨化碳固相萃取柱（填料200mg)用2mL氯仿活化，上樣油脂質(zhì)量分別為 4. 86、7. 29、9. 72、12. 15mg，分別為石墨化碳填料的 2. 43%、3. 65%、4. 86%、6. 08%，洗脫溶 劑氯仿的體積為柱體積的10倍。
[0033] (3)色素脫除率計算
[0034] 因為微藻中同時存在葉綠素類和類胡蘿卜素類兩大類色素所以，而且不同的微藻 兩類色素的最大吸收波長存在差異，所以根據(jù)微藻的種類全掃描確定兩類色素的兩個最大 吸收波長，在湛江等鞭金藻中葉綠素和類胡蘿卜素的最大吸收波長分別為662nm和466nm， 并計算色素脫除率。
[0035]
[0036] 式中A。為脫色前油脂的吸光值;A 脫色后油脂的吸光值
[0037] (4)色素脫結(jié)果
[0038] 圖Ia顯示上樣量對色素脫除率的影響，在上樣量2. 43%-6. 08%范圍內(nèi)，石墨化 碳對葉綠素類脫除率達99. 8%以上。上樣量增加時類胡蘿卜素的脫除率下降，當(dāng)上樣量為 6. 08%時，石墨化碳填料對湛江等鞭金藻中葉綠素類的脫除率達到99. 8%，類胡蘿卜素類 的脫除率為92. 4%。圖Ib顯示脫色前后油脂的變化，顯示脫色前后油脂基本無變化
[0039] 實施例2
[0040] 所用微藻為微擬球藻（Nannochloropsis oceanica IMET1)，色素脫除步驟如下
[0041] (1)微藻油脂提取
[0042] 稱取IOOmg微藻藻粉，加入提取溶劑氯仿-甲醇-水（1:2:0. 8 v/v/v) 3. 8mL進行 超聲破碎提?。?00w,超聲5s，間隔5s，超聲5次），加入ImL氯仿和ImL水混合均勾，離心 分層后，取氯仿層定容于2mL容量瓶。
[0043] (2)色素脫除<