一種環(huán)阿爾廷型三萜烯及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種環(huán)阿爾廷型三萜烯及其醫(yī)藥用途，提供了該化合物結(jié)構(gòu)，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。該化合物為首次報道，是一種結(jié)構(gòu)新穎的環(huán)阿爾廷型三萜烯，可以從白芍根中提取、分離純化得到。藥理試驗(yàn)證明，該化合物可以提高HepG2對葡萄糖的消耗量，降低糖尿病小鼠的血糖；該化合物還可以抑制肝癌移植瘤的生長。由此可見，該化合物可以開發(fā)成治療糖尿病或肝癌的藥物，為臨床上糖尿病和肝癌的治療提供新的治療方案。
【專利說明】
一種環(huán)阿爾廷型三萜烯及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種新的天然產(chǎn)物，具體涉及一種從白芍根中分 離出的環(huán)阿爾廷型三萜烯及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 白芍(學(xué)名:Paeonia lactiflora Pall.)也稱白花芍藥，是毛茛科芍藥屬植物。在 中國已有悠久的栽培歷史，馳名中外，其稱白花芍藥。其根可入藥。多年生草本或亞灌木，生 于山坡、山谷的灌木叢或草叢中。我國大部分地區(qū)均有栽植。
[0003] 白芍為多年生草本，高50~80厘米。根肥大，通常圓柱形或略呈紡錘形。莖直立，光 滑無毛。葉互生;具長柄；2回3出復(fù)葉，小葉片橢圓形至披針形，長8~12厘米，寬2~4厘米， 先端漸尖或銳尖，基部楔形，全緣，葉緣具極細(xì)乳突，上面深綠色，下面淡綠色，葉脈在下面 隆起，葉基部常帶紅色。花甚大，單生于花莖的分枝頂端，每花莖有2~5朵花，花莖長9~11 厘米;萼片3,葉狀;花瓣10片左右或更多，倒卵形，白色、粉紅色或紅色;雄蕊多數(shù)，花藥黃 色；心皮3~5枚，分離。朞莢果3~5枚，卵形，先端鉤狀向外彎。花期5~7月。果期6~7月。白 芍生于山坡、山谷的灌木叢或草叢中。分布黑龍江、吉林、遼寧、河北、河南、山東、山西、陜 西、內(nèi)蒙古等地。
[0004] 白芍的飲片呈圓柱形，平直或稍彎曲，兩端平截，長5~18cm，直徑1~2.5cm。表面 類白色或淡紅棕色，光潔或有縱皺紋及細(xì)根痕，偶有殘存的棕褐色外皮。質(zhì)堅實(shí)，不易折斷， 斷面較平坦，類白色或微帶棕紅色，形成層環(huán)明顯，射線放射狀。氣微，味微苦、酸。
[0005] 白芍的根含芍藥甙、牡丹酚、芍藥花甙，苯甲酸約1.07%、揮發(fā)油、脂肪油、樹脂、鞣 質(zhì)、糖、淀粉、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、谷留醇和三萜類。另四川產(chǎn)者含一種酸性物質(zhì)，對金黃色葡 萄球菌有抑制作用?；êS芪甙、山柰酚3，7-二葡萄糖甙，多量沒食子鞣質(zhì)（10%以上）、除 蟲菊素0.13%、13_甲基十四烷酸、β-谷甾醇、廿五碳烷等。葉含鞣質(zhì)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種從白芍的干燥根中分離得到的環(huán)阿爾廷型三萜 烯化合物，該化合物為首次從自然界發(fā)現(xiàn)；
[0007] 本發(fā)明的第二目的在于提供上述環(huán)阿爾廷型三萜烯的制備方法；
[0008] 本發(fā)明的第三目的在于提供上述環(huán)阿爾廷型三萜烯的醫(yī)藥用途。
[0009] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0010] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0011]
[0012] -種藥物組合物，含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受 的載體。
[0013] 所述的化合物（I)的制備方法包含以下操作步驟：（a)將白芍的干燥根粉碎，用乙 醇水溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正 丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇 取物用大孔樹脂除雜，先用25%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫12個柱體積，收集 70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相 硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組 分；⑷步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓 濃縮得到化合物(I)。
[0014] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0015] 進(jìn)一步地，步驟(a)中所述乙醇水溶液為75~85 %乙醇。
[0016] 進(jìn)一步地，步驟(a)中所述乙醇水溶液為80 %乙醇。
[0017] 所述的化合物(I)在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 所述的藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
[0019] 所述的化合物(I)在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0020] 所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0021] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0022] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0023]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0024] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0025] 本發(fā)明提供的化合物為首次報道，具有治療糖尿病和肝癌的作用，可以開發(fā)成治 療糖尿病和肝癌的藥物，為臨床上糖尿病和肝癌的治療提供新的治療方案。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0027]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0028]制備方法：（a)將白芍的干燥根(2kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取（15L X 3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的正 丁醇（3LX 3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用25%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙 醇洗脫10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70% 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (10個柱體積）、45:1 (8個柱體積）、 25:1(10個柱體積）和15:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟 (c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1(10個柱體積）、15:1(8個柱體積） 和1:1(6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~16 個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (415mg，HPLC歸一化純度大于98% )。 [0029] 結(jié)構(gòu)確證:黃色粉末;冊431-]\^顯示[]\1+!1]+為111/2 583.3235，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C34H46〇8，不飽和度為12。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ΡΡπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (5 · 99， d，J=12.4Hz)，H-2(5.87，d，J=12.4Hz)，H-4(4.55，qd，J = 6.6,4.2Hz)，H-5(2.53，d，J = 4.2Hz)，H-7(2.23，dd，J=13.1，4.9Hz)，H-7(2.46，dd，J=13.1，12.4Hz)，H-8(1.75，dd，J = 12·4,4·8Ηζ)，H-11(1.42，m)，Η-11(2·19，dd，J=11.6,6.7Hz)，H-12(1.71，m，2H)，H-15 (1.32，dd，J=14. l，4.2Hz)，H-15(2.33，dd，J=14. l，8.0Hz)，H-16(5.32，td，J = 7.4， 4.2Hz)，H-16b(2.07，s)，H-17(2.47，m)，H-18(1.13，s)，H-19(0.99，d，J=4.4Hz)，H-19 (2.01，d，J = 4.4Hz)，H-20(2.50，m)，H-21(0.82，d，J = 6.9Hz)，H-22(5.52，br，s)，H-22b (2.16，s)，H-24a(5.92，s)，H-24a(6.05，s)，H-25(2.97，m)，H-26(1.04，d，J=6.8Hz)，H-27 (1.10，(1，了 = 6.6泡），!1-28(1.30，(1，了 = 6.6他），!1-30(0.95,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯111， DMS0-d6，150MHz):151.8(CH，l-C)，119.3(CH，2-C)，168.2(C，3-C)，79.2(CH，4-C)，48.7 (CH，5-C)，206.2(C，6-C)，36.9(CH2,7-C)，40.6(CH，8-C)，30.2(C，9-C)，37.0(C，10-C)， 28.5(CH2，11-C)，32.6(CH2，12-C)，45.6(C，13-C)，47.3(C，14-C)，46.9(CH 2，15-C)，76.3 (CH，16-C)，170.2(C，16a-C)，22.7(CH3，16b-C)，50.5(CH，17-C)，18.5(CH 3，18-C)，32.0 (CH2，19-C)，32.5(CH，20-C)，12.6(CH3,21-C)，77.7(C，22-C)，170.8(C，22a-C)，21.2(CH 3， 22b-C)，197.2(C，23-C)，152.6(C，24-C)，121.7(CH2,24a-C)，29.1(CH，25-C)，22.0(CH 3,26- 〇,21.8(013,27-〇，18.3(013,28-〇,20.4(013,3〇-〇。11?譜圖中的1715〇11- 1與1694〇11-1吸 收帶表明該化合物結(jié)構(gòu)中存在羰基與共輒羰基;UV譜圖中的最大吸收207nm與245nm說明結(jié) 構(gòu)中存在共輒雙鍵。氫譜核磁數(shù)據(jù)表明該結(jié)構(gòu)中不飽和度是由兩個C-C雙鍵結(jié)構(gòu)，五個羰基 結(jié)構(gòu)以及五個環(huán)狀骨架組成。碳譜核磁數(shù)據(jù)與DEPT譜數(shù)據(jù)表明該化合物結(jié)構(gòu)中含有34個 碳，包含八個甲基0。22.7、18.5、12.6、21.2、22.〇、21.8、18.3與2〇.4)，六個亞甲基（3。36.9、 28.5、32.6、46.9、32.〇與121.7)，十個次甲基0。151.8、119.3、79.2、48.7、4〇.6、76.3、 5〇.5、32.5、77.7與32.〇)，十個季碳0。168.2、2〇6.2、3〇.2、37.〇、45.6、47.3、17〇.2、17〇.8、 197.2與 152.6)，其中有兩個酮基（δ&06· 2與97.2)，三個酯羰基（SG168.2、170.2與170.8)， 三個連氧碳(知79.2,76.3與77.7)，四個烯碳說151.8與119.3;152.6與121.7)。核磁數(shù)據(jù)表 明該化合物含有一個甲基側(cè)鏈的α，β_不飽和七元內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)RH5.99(d，J=12.4Hz，H-l)， 5.87(dJ=12.4Hz,H-2),4.55(qdJ = 6.6,4.2Hz,H-4),2.53(dJ = 4.2Hz,H-5)a.30(3H, d，J = 6·6Hz，H-28);SC151.8(01)，119.3(02)，168.2(C-3)，79.2(C-4)，48.7(C-5)，37.0 (〇10)，18.3(〇28)]，一個環(huán)丙烷結(jié)構(gòu)[3[10.99((1，了 = 4.4抱，!1-19)，2.01((1，了 = 4.4!^，!1- 19) ;Sc30.2(C-9)，37.0(C-10)，32.0(019)]，兩個乙酰氧基[SH2.07(s，H-16b，3H);S C170.2 (016&)，22.7(01613)以及5[12.16(8，!1-2213,3!0;3。170.8((：-22&)，21.2((：-2213)]。冊8(：譜中 Η-16(δΗ5.32)與C-16a(Sc170.2)，以及Η-22(δΗ5.52)與C-22a(S c170.8)的相關(guān)性表明C-16 (δ〇76.3)和C-22(Sc77.7)位分別連有一個乙酰氧基。通過N0ESY譜數(shù)據(jù)解析Η-4(δΗ4.55)、 Η3-28 (δΗ1.30)與Η-5 (δΗ2.53)的關(guān)系可以說明Η3-28相對立體構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜 和N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn) 一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式和碳原子編號如 下：
[0030]
[0031]實(shí)施例2:對糖尿病的治療作用 [0032] 1、材料與方法
[0033] 1.1試驗(yàn)儀器
[0034] Thermo 6500二氧化碳培養(yǎng)箱，EosBravoW全自動生化分析儀，金凈JJ-CJ-2F潔凈 工作臺，BioTekELX800酶標(biāo)儀，ZEISSAxiovert40CFL倒置顯微鏡。
[0035] 1.2材料與試劑
[0036]化合物（I)自制，制備方法見實(shí)施例1。人肝癌胚胎瘤細(xì)胞HepG2購自中國典型培養(yǎng) 物保藏中心。特級胎牛血清、RPMI1640培養(yǎng)基購自Gibco公司。葡萄糖酶法測定試劑盒購自 南京建成生物工程研究所。胰蛋白酶，購自Sigma公司。人注射用胰島素購自萬邦生化醫(yī)藥 公司。清潔級昆明種小鼠，體質(zhì)量18~22g，第三軍醫(yī)大學(xué)動物室提供。
[0037] 1.3細(xì)胞降糖試驗(yàn)
[0038]將消化并稀釋好的HepG2細(xì)胞加入到96孔板中，待細(xì)胞鋪滿率達(dá)80%，換掉原培養(yǎng) 基，用PBS緩沖液清洗1次，將96孔板隨機(jī)分組，分別為正常對照組和化合物（I)組(5yg · mL <)。每組每孔加入250μ1含藥或不含藥的培養(yǎng)液。24h后利用葡萄糖酶法測定試劑盒于全自 動生化分析儀中利用終點(diǎn)法，在505nm波長下檢測培養(yǎng)液中葡萄糖剩余量。
[0039] 1.4動物降血糖實(shí)驗(yàn)
[0040]清潔級昆明種小鼠，體質(zhì)量18~22g，購自第三軍醫(yī)大學(xué)動物室。小鼠平衡飼養(yǎng)3d 后，饑餓12h，然后尾部靜脈注射四氧嘧啶（70mg · 后，檢測血糖。取血糖為10~ 25mmol/L的小鼠作為高血糖模型小鼠，按照血糖分為4組，每組10只。分別為正常對照組、模 型對照組、陽性對照組（胃鹽酸胍，l〇〇mg · kg<)和化合物（I)組(80mg · kg<)。高糖模型對 照組灌胃蒸餾水，灌胃藥物7d，饑餓12h，測定空腹血糖值。
[0041 ] 1.5統(tǒng)計方法
[0042] 用SPSS19.0做顯著性檢驗(yàn)。
[0043] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0044] 2.1對HepG2降糖實(shí)驗(yàn)的影響
[0045]與正常對照組比較，化合物（I)組對葡萄糖的消耗量明顯增加(P<0.01)，顯示出 明顯的降糖作用。結(jié)果見表1。
[0046] 2.2對糖尿病模型小鼠血糖的影響
[0047] 小鼠給予四氧嘧啶后，可以觀察到小鼠血糖增加。與正常對照組比較，模型對照組 小鼠血糖升高(P<〇.01)，說明造模成功;與模型對照組比較，化合物（I)組和陽性藥對照組 血糖顯著降低(P<〇.01)。結(jié)果見表2。
[0048]表1對HepG2葡萄糖消耗量的影響(X土s) Γ00491
L0050」表2對糖尿病小鼠血糖的影響（x±s)
[0051 ]_
[0052] 上述結(jié)果表明，本發(fā)明提供的化合物（I)可以提高HepG2對葡萄糖的消耗量，降低 糖尿病小鼠的血糖，可以開發(fā)成防治糖尿病的藥物。
[0053] 實(shí)施例3:對肝癌的治療作用
[0054] 1、材料和方法
[0055] 1.1細(xì)胞及動物
[0056] 實(shí)驗(yàn)室符合DB44/61-94清潔級標(biāo)準(zhǔn)。人肝癌細(xì)胞株Bel-7402來源于廣州醫(yī)學(xué)院微 生物免疫學(xué)教研室。裸鼠（BALB/C-nu/nu)由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，雄性，鼠齡4- 6周，體質(zhì)量20-25g，平均（23.28 ± 1.62)飼養(yǎng)于SPF環(huán)境中。
[0057] 1.2試劑與樣品
[0058]化合物（I)自制，制備方法見實(shí)施例1。
[0059] 1.3小鼠分組及模型制備
[0060] 移植瘤裸鼠動物模型復(fù)制:將凍存于液氮罐中肝癌細(xì)胞株Bel-7402取出，復(fù)蘇，體 外培養(yǎng)于RPM11640中，加入體積分?jǐn)?shù)為0.1的小牛血清，青霉素 10萬單位/L，鏈霉素 100mg/ L，單層培養(yǎng)于〇)2恒溫孵育箱內(nèi)，細(xì)胞為上皮樣貼壁生長，每兩三天傳代1次，取對數(shù)生長期 細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。用體積分?jǐn)?shù)為〇. 1的小牛血清的RPM11640培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞至含瘤1 X 101QL '在裸鼠左前上肢腋窩皮下接種0.2mL。
[0061] 分組：12只接種肝癌細(xì)胞株的裸鼠單純隨機(jī)分成正常對照組和化合物（I)組 (60mg · kg^1)共2組。所有裸鼠自接種肝癌細(xì)胞株第3天起開始灌胃給藥，正常對照組為等量 生理鹽水灌胃，隔日1次，灌胃20次。停藥1周后，脫頸處死:完整取出瘤塊，檢測瘤體質(zhì)量。按 以下公式計算腫瘤抑制率：
[0062] 腫瘤抑制率=(對照組平均瘤質(zhì)量-給藥組平均瘤質(zhì)量）/對照組平均瘤質(zhì)量X 100%〇
[0063] 1.4微血管密度的測定
[0064]采用二步法染色:標(biāo)本經(jīng)甲醛固定后，進(jìn)行3um連續(xù)切片:將石蠟切片脫蠟至水:高 壓煮沸抗原修復(fù)3min，體積分?jǐn)?shù)為0.03的H2〇2室溫孵育lOmin，滴加兔抗人第珊因子相關(guān)抗 體，4攝氏度過液，滴加1:200生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG，37攝氏度孵育30min，二氨基聯(lián)苯胺 顯色5min，以0.01m〇l/L磷酸鹽緩沖液代替一抗作為空白對照，以血管瘤為陽性對照。微血 管密度的測定參照 C1 i n i ca 1 importance ofthe determination of tumor angiogenesisin breast carcinoma：much more than a new prognostictool的方法。在 低倍視野下檢查微血管染色情況：以新生血管內(nèi)皮染為棕黃色為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，取癌巢間 質(zhì)血管最多的視野，在200倍視野下，按雙盲法由3位觀察者分別計數(shù)3個視野:觀察染成棕 色的單個細(xì)胞和細(xì)胞叢，并以此作為一個血管:血管腔和腔內(nèi)紅細(xì)胞不作為計數(shù)，如有肌層 的血管或管腔>50著者應(yīng)排除，取3人計數(shù)平均值作為該例的微血管密度。
[0065] 1.5裸鼠生存質(zhì)量評價
[0066]通過裸鼠精神狀態(tài)、活動狀況、對刺激的反應(yīng)、體質(zhì)量下降幅度、食欲和尿、便6項(xiàng) 指標(biāo)的觀察，評價裸鼠生存質(zhì)量和藥物毒副反應(yīng)。
[0067] 1.6統(tǒng)計學(xué)分析
[0068]由本課題組應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，腫瘤抑制率、微血管密度均值采 用F分析進(jìn)行組間比較，P〈0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0069] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0070] 2.1對肝癌移植瘤裸鼠生存質(zhì)量的影響
[0071] 治療方案結(jié)束時：化合物（I)組6只裸鼠均存活，正常對照組只有4只存活。所有死 亡裸鼠均已解剖排除了由于實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)致死的可能，裸鼠死亡是由腫瘤本身惡化或藥物 毒副反應(yīng)所致?；衔铮↖)組裸鼠精神狀態(tài)、活動狀況、對刺激的反應(yīng)、體質(zhì)量下降幅度、食 欲和尿便等未見明顯異常，狀態(tài)優(yōu)于正常對照組。
[0072] 2.2對裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用
[0073]與正常對照組比較，化合物（I)組對腫瘤抑制作用明顯較強(qiáng)，表現(xiàn)為平均瘤質(zhì)量減 少(P<0.01)，腫瘤抑制率較高(P<0.01)。結(jié)果見表3。
[0074] 2.3對腫瘤血管形成的影響
[0075]與正常對照組比較，化合物（I)組對腫瘤抑制作用明顯較強(qiáng)，表現(xiàn)為微血管密度降 低(P<0.01)。結(jié)果見表3。
[0076] 表3對裸鼠肝癌移植瘤和腫瘤血管形成的影響
[0077]
[0078] 上述結(jié)果表明，化合物（I)能顯著抑制肝癌移植瘤的生長，可開發(fā)成治療肝癌的藥 物。
[0079] 實(shí)施例4:片劑的制備
[0080] 按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦 形劑，制粒壓片。
[0081 ]實(shí)施例5: 口服液的制備
[0082]按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
[0083]實(shí)施例6:膠囊劑或顆粒劑的制備
[0084]按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦 形劑，制成膠囊或顆粒劑。
[0085]實(shí)施例7:注射液的制備
[0086]按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無機(jī)酸如鹽酸或磷酸制成的鹽，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。 [0087]實(shí)施例8:無菌粉針的制備
[0088] 按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，將其溶于無菌注射用水中，攪拌使溶，用 無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。
[0089] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種藥物組合物，其特征在于:含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將白 巧的干燥根粉碎，用乙醇水溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙 酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物； (b)步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用25 %乙醇洗脫8個柱體積，再用70 %乙醇洗 脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、 15:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~16個柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中所述乙醇水溶 液為75~85 %乙醇。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中所述乙醇水溶 液為80 %乙醇。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2所述的藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07J73/00GK105837656SQ201610203075
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月1日
【發(fā)明人】胡文杰
【申請人】胡文杰