具有抑制癌細(xì)胞生長活性的肽及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種具有抑制癌細(xì)胞生長活性的肽，屬于醫(yī)藥生物領(lǐng)域，所述肽包含如下的氨基酸序列：EDYHWFWLWYQQCPK，其編碼基因包含核苷酸序列g(shù)aagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa。本發(fā)明的肽具有抑制癌細(xì)胞生長活性的作用，尤其對(duì)肺癌細(xì)胞或子宮頸癌細(xì)胞的生長具有抑制活性。
【專利說明】
具有抑制癌細(xì)胞生長活性的肽及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物領(lǐng)域，本發(fā)明更具體涉及了一種具有抑制癌細(xì)胞生長活性的 肽及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在癌癥發(fā)生與治療的過程中，化學(xué)治療一直屬于主體部分。現(xiàn)有的臨床使用的化 療藥物，如環(huán)磷酰胺、順鉑、阿糖胞苷、阿霉素和長春新堿等，它們主要是用來破壞細(xì)胞的周 期的，RNA、DNA和蛋白質(zhì)都是此類藥物的靶向目標(biāo)。近年來，As 203在對(duì)于白血病的治療上取 得了很大的進(jìn)展，但是，該藥物和其他化療藥物，其本身都有自己的毒性，不管是一種化療 藥物單獨(dú)使用還是幾種化療藥物結(jié)合運(yùn)用在臨床治療上，其在對(duì)癌癥有明顯療效，殺傷殺 死癌細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)損害病人的正常細(xì)胞。化療藥物的副作用最普遍的就是對(duì)病人的骨 髓產(chǎn)生極度抑制，造成病人的極大痛苦，甚至引起死亡。
[0003] 目前對(duì)于癌癥的治療主要有以下幾種:手術(shù)治療，對(duì)于良性腫瘤療效較好，但是對(duì) 于沒有包膜包裹的癌癥組織和擴(kuò)散性腫瘤難以完全根除;放射性治療，是利用某些腫瘤對(duì) 射線敏感的特點(diǎn)選擇性地殺死癌細(xì)胞，但是對(duì)于不敏感型以及易擴(kuò)散型癌細(xì)胞療效較差， 而且在治療過程中也會(huì)造成正常細(xì)胞的死亡;化學(xué)治療，是將對(duì)細(xì)胞有毒、有害的藥物經(jīng)由 循環(huán)系統(tǒng)帶到全身，雖然對(duì)于擴(kuò)散型癌細(xì)胞也有一定療效，但是這種治療方法對(duì)于全身的 正常細(xì)胞也會(huì)造成極大傷害，使癌癥病人在治療癌癥過程中承受巨大的生理和心理的折 磨。因此開發(fā)出一種療效好、應(yīng)用范圍廣、副作用小的抗癌藥物是癌癥患者和醫(yī)學(xué)工作者的 共同心愿。盡管近幾十年來化療藥物在治療癌癥方面取得了很大的進(jìn)展，但當(dāng)前化療藥物 存在的問題仍然很多，如存在的毒性、特異性較低以及易產(chǎn)生耐藥性，探討新型療法成為當(dāng) 前的研究熱點(diǎn)。
[0004] 生物活性肽通常含有2~20個(gè)氨基酸殘基，其活性隨著組成它們的氨基酸不同以 及氨基酸排列順序不同而發(fā)生改變。肽具有多種生理功能，如抗氧化、抗增殖、抗微管蛋白 和細(xì)胞毒性，肽的這些活性使得它們具有抗癌潛能，這將在癌癥治療中有所貢獻(xiàn)。由于肽具 有很強(qiáng)的穿透腫瘤組織的能力，因此不僅可以到達(dá)原發(fā)性腫瘤的靶點(diǎn)，還可以到達(dá)繼發(fā)性 腫瘤的靶點(diǎn)，這些分子主要通過破壞細(xì)胞膜的完整性從而迅速殺死靶細(xì)胞，所以一般不產(chǎn) 生耐藥性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的是針對(duì)上述問題，提供一種具有抑制癌細(xì)胞生長活性的肽及其應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的目的在于提供了一種抑制癌細(xì)胞生長的肽，其包含氨基酸序列的肽 EDYHWFWLWYQQCPK；
[0007] 作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的肽的序列為EDYHWFWLWYQQCPK。
[0008] 本發(fā)明還提供了編碼該短肽的核苷酸序列。
[0009] 作為一種優(yōu)選方案，編碼上述肽的核苷酸序列包含 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇
[0010] 作為一種優(yōu)選方案，編碼上述肽的核苷酸序列為 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇
[0011] 本發(fā)明的肽可用于制備具有治療實(shí)體腫瘤的藥物。
[0012] 采用化學(xué)合成的方法合成本發(fā)明的肽，即本領(lǐng)域熟知的已經(jīng)非常成熟的固相肽合 成方法，可采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護(hù)的氨基酸逐個(gè)偶聯(lián)到 惰性固相載體上去，然后利用強(qiáng)酸將肽鏈從載體上裂解下來，同時(shí)去除側(cè)鏈保護(hù)。
[0013] 本發(fā)明的肽具有抑制癌細(xì)胞生長活性的作用，尤其對(duì)肺癌細(xì)胞或子宮頸癌細(xì)胞的 生長具有抑制活性。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1
[0015] 本發(fā)明肽的合成：
[0016] 本發(fā)明采用采用化學(xué)合成的方法制備所述的肽，即本領(lǐng)域熟知的已經(jīng)非常成熟的 固相肽合成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護(hù)的氨基 酸逐個(gè)偶聯(lián)到惰性固相載體上去，然后利用強(qiáng)酸將肽鏈從載體上裂解下來，同時(shí)去除側(cè)鏈 保護(hù)。
[0017] 具體而言，使用Perkin-Elmer公司的ABI433A型多肽合成儀、選用Fmoc/HOBt/ DCCO.lOmmol模式，采用多肽固相合成法進(jìn)行活性肽單體和酰胺化肽鏈的合成，合成中所用 氨基酸用Fmoc保護(hù)，合成用樹脂為HMP樹脂。合成結(jié)束后用含0.70g結(jié)晶酚，0.25ml二巰基乙 醇，0.8ml硫代苯甲醚，0.5ml去離子水，15mlTFA三氟乙酸的切割試劑將肽從樹脂上切割下 來。用反相高效液相色譜，在C 18柱上進(jìn)行肽的純化。制備得到氨基酸序列為 EDYHWFWLWYQQCPK 的肽。
[0018] 實(shí)施例2
[0019] 抑制癌細(xì)胞的試驗(yàn)：
[0020] 本實(shí)施例的目的在于試驗(yàn)所述肽在一系列腫瘤細(xì)胞中的作用，實(shí)驗(yàn)將以生理鹽水 作為陰性對(duì)照。選用細(xì)胞系為A549(ATCC，U.S.A，目錄號(hào)：CCL-185)，Hela，人成骨細(xì)胞瘤細(xì) 胞系U-20S(P53+，RB-;ATCC，U. S.A，目錄號(hào)：HTB-96)，在24孔板培養(yǎng)皿中種入1 X 105腫細(xì) 胞，培養(yǎng)液為10%FBS DMEM，第二天吸去液體，按照0.005mg/ml的量加入實(shí)施例1制備的肽 或生理鹽水，輕輕晃動(dòng)液體3次，在37°C、5 %C02中孵育180分鐘。加入含1 %FBS DMEM培養(yǎng)基 至lml，將細(xì)胞放置于37°C、5 % C02中孵育3-10天，觀察細(xì)胞狀態(tài)。
[0021] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1所示：
[0022] 表1肽抑制腫瘤細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0023]
[0024]由上表可以看出本發(fā)明的肽對(duì)A549和He la細(xì)胞更敏感。
[0025] 實(shí)施例3
[0026] 抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的實(shí)驗(yàn)：
[0027]取對(duì)數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞細(xì)胞株，在無菌條件下制備成lX107/ml細(xì)胞懸液，以 0.1ml接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下。用游標(biāo)卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長至100-200mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。使用測量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直 徑的測量次數(shù)為每1天測1次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對(duì)照組注射等量生理鹽水， 每天1次；恩度組3 . Omg/kg，每天給藥1次；實(shí)施例1中肽的高中低劑量組分別以10mg/kg、 5mg/kg、lmg/kg為給藥劑量，每天給藥1次。試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠處死，手術(shù)剝?nèi)×鰤K稱重。其結(jié) 果見下表2所示：
[0028] 表2肽抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(每組裸鼠數(shù)量n = 5)
[0029]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種肽，其特征在于:所述肽具有抑制癌細(xì)胞生長活性，尤其是抑制肺癌細(xì)胞或子宮 頸癌細(xì)胞的活性。2. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的肽，該肽包含如下的氨基酸序列:EDYHWFWLWYQQCPK。3. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的肽，該肽的氨基酸序列如下所示:EDYHWFWLWYQQCPK。4. 一種編碼根據(jù)權(quán)利要求1所述肽的核苷酸。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的核苷酸，其特征在于該核苷酸序列包含 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的核苷酸，其特征在于該核苷酸序列為 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇7. 權(quán)利要求1-3中的所述肽的應(yīng)用，其特征在于該應(yīng)用為抑制腫瘤細(xì)胞生長的活性。8. 根據(jù)權(quán)利要求7中所述的應(yīng)用，所述的腫瘤細(xì)胞是指肺癌細(xì)胞或子宮頸癌細(xì)胞。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK106084012SQ201610538669
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年7月9日
【發(fā)明人】王艷瑋, 施放, 王萍萍, 孫明, 周東超, 楊凱, 孫大鵬
【申請(qǐng)人】青島大學(xué)