一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置。
【背景技術(shù)】
[0002] 變性梯度聚丙烯酰胺凝膠電泳（DGGE)是分析核酸分子的堿基差異，有效檢測(cè)基 因突變和復(fù)雜微生物群落成分的必備實(shí)驗(yàn)技術(shù)，是微生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研宄的 有力工具。
[0003] 目前克隆測(cè)序法和DGGE法均為分析微生物群落的結(jié)構(gòu)和種群多樣性變異的分子 遺傳學(xué)手段。這兩種技術(shù)的優(yōu)勢(shì)均為通過(guò)核酸信息對(duì)微生物群落進(jìn)行表征測(cè)定，比傳統(tǒng)的 菌種分離培養(yǎng)方法更快捷，可鑒定出難培養(yǎng)或不能培養(yǎng)分離的菌種。DGGE法比克隆測(cè)序更 為快捷，由于省去了將PCR產(chǎn)物連接到載體并克隆擴(kuò)增的步驟，因此實(shí)驗(yàn)周期更短，費(fèi)用更 低。并且可對(duì)DGGE條帶切割分離后進(jìn)行DNA序列分析，或與特異性探針雜交分析鑒定微生 物種屬，現(xiàn)有配制該凝膠的有一種梯度混合儀，而在制備過(guò)程中，常常因?yàn)榫酆戏磻?yīng)過(guò)快， 造成制備凝膠的各組成還沒(méi)充分混均，凝膠便已經(jīng)聚合，這樣部分濃度會(huì)不均一，同時(shí)易產(chǎn) 生氣泡；此外，商用的混合儀一般價(jià)格較高。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0004] 本實(shí)用新型的目的是提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、造價(jià)低廉、容易操作的變性梯度聚丙烯 酰胺凝膠配制裝置。
[0005] 為了達(dá)成上述目的，本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案：
[0006] 一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，包括由高到低、按照設(shè)定高度梯度依次 設(shè)置的1號(hào)瓶，2號(hào)瓶和制膠板，1號(hào)瓶與2號(hào)瓶之間、2號(hào)瓶與制膠板之間分別設(shè)置聯(lián)通管， 1號(hào)瓶上設(shè)置與外界相通的空氣聯(lián)通管，在2號(hào)瓶的底部放置磁力攪拌器，1號(hào)瓶與2號(hào)瓶 的瓶口設(shè)置密封塞。
[0007] 1號(hào)瓶和所述2號(hào)瓶均為帶膠塞的玻璃瓶。
[0008] 磁力攪拌器帶有磁力攪拌棒。
[0009] 該裝置的具體制作步驟是：將2個(gè)25mL帶膠塞玻璃瓶與制膠板按設(shè)定梯度放置 好，在2個(gè)玻璃瓶之間、第二個(gè)玻璃瓶和制膠板之間設(shè)置聯(lián)通管，第一玻璃瓶?jī)?nèi)設(shè)置與空氣 相通的空氣聯(lián)通管，第一個(gè)玻璃瓶即1號(hào)瓶?jī)?nèi)放置低變性濃度丙烯酰胺溶液，第二個(gè)玻璃 瓶即2號(hào)瓶?jī)?nèi)放置高變性濃度丙烯酰胺溶液，在使用過(guò)程中，整個(gè)裝置的工作動(dòng)力來(lái)自于 玻璃瓶?jī)?nèi)液體的自動(dòng)虹吸作用，且使用中要保持瓶塞與瓶口之間以及瓶塞與聯(lián)通管之間的 密封性。
[0010] 本實(shí)用新型的有益效果是：
[0011] 1)整個(gè)裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、造價(jià)低廉、容易操作；
[0012] 2)該裝置利用的是玻璃瓶?jī)?nèi)的自動(dòng)虹吸作用，除攪拌外不需要借助外力，非常環(huán) 保；
[0013] 3)可隨意調(diào)整凝膠內(nèi)的變性劑濃度梯度以滿足不同的分析目的；
[0014] 4)經(jīng)過(guò)計(jì)算發(fā)現(xiàn)凝膠內(nèi)變性劑濃度梯度呈指數(shù)變化，能顯著提高核酸分子的分離 效果。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)原理圖；
[0016] 其中，L空氣聯(lián)通管；2.1號(hào)瓶；3.聯(lián)通管；4. 2號(hào)瓶；5.磁力攪拌棒；6.磁力攪拌 器；7.制膠板。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面將結(jié)合本實(shí)用新型實(shí)施例中的附圖，對(duì)本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行 清楚、完整的描述。
[0018] 如圖1所示，一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，包括由高到低、按照設(shè)定高 度梯度依次設(shè)置的1號(hào)瓶2, 2號(hào)瓶4和制膠板7,1號(hào)瓶2與2號(hào)瓶4之間、2號(hào)瓶4與制 膠板7之間分別設(shè)置聯(lián)通管3,1號(hào)瓶上設(shè)置與外界相通的空氣聯(lián)通管1，在2號(hào)瓶的底部 放置磁力攪拌器6,1號(hào)瓶與2號(hào)瓶的瓶口設(shè)置密封塞，在實(shí)際應(yīng)用中，聯(lián)通管的前側(cè)要沒(méi)入 1號(hào)瓶液體液面以下位置，聯(lián)通管的后側(cè)設(shè)置在2號(hào)瓶液體液面以上位置，另一聯(lián)通管的前 側(cè)要沒(méi)入2號(hào)瓶液體液面以下位置。
[0019] 1號(hào)瓶和所述2號(hào)瓶均為帶膠塞的玻璃瓶。
[0020] 磁力攪拌器帶有磁力攪拌棒5,磁力攪拌棒的上端固定在磁力攪拌器上，磁力攪拌 棒為一塊順磁性鐵氧體棒或者普通的鐵棒，外裹一層聚四氟乙烯塑料，外形接近長(zhǎng)橢圓形。
[0021] 該裝置的具體制作步驟是：將2個(gè)25mL帶膠塞玻璃瓶與制膠板按設(shè)定梯度放置 好，在2個(gè)玻璃瓶之間、第二個(gè)玻璃瓶和制膠板之間設(shè)置聯(lián)通管，第一玻璃瓶?jī)?nèi)設(shè)置與空氣 相通的空氣聯(lián)通管，第一個(gè)玻璃瓶即1號(hào)瓶?jī)?nèi)放置低變性濃度丙烯酰胺溶液，第二個(gè)玻璃 瓶即2號(hào)瓶?jī)?nèi)放置高變性濃度丙烯酰胺溶液，在使用過(guò)程中，整個(gè)裝置的工作動(dòng)力來(lái)自于 玻璃瓶?jī)?nèi)液體的自動(dòng)虹吸作用，且使用中要保持瓶塞與瓶口之間以及瓶塞與聯(lián)通管之間的 密封性；再者，使用該裝置時(shí)，根據(jù)事先確定的變性梯度范圍，可以確定1號(hào)瓶和2號(hào)瓶?jī)?nèi)應(yīng) 設(shè)置的溶液體積，具體推導(dǎo)過(guò)程如下：
[0022] 設(shè)定1號(hào)瓶?jī)?nèi)低變性濃度丙烯酰胺溶液變性濃度為a，2號(hào)瓶?jī)?nèi)高變性濃度丙烯酰 胺溶液初始濃度為bmax，體積為V tl。由于制膠過(guò)程中2號(hào)瓶中的液體流入速度和流出速度 相等，故Vtl保持恒定。輸液管的容積忽略不計(jì)。設(shè)制膠板的有效容積為V。
[0023] 制膠過(guò)程可以等效為2號(hào)瓶中的高變性濃度膠液被1號(hào)瓶中的低變性濃度膠液連 續(xù)等比例稀釋。為便于計(jì)算，假設(shè)共作η次稀釋，所以每次稀釋時(shí)2號(hào)瓶中的入液量和出液 量均為V/n，
[0024] 稀釋一次后2號(hào)瓶中膠液濃度：
[0026] 每次的稀釋比：
[0028] 灌膠完成后制膠板中最上層濃度：
[0030] 由于液體的流動(dòng)是連續(xù)的，相當(dāng)于在整個(gè)制膠過(guò)程中共對(duì)2號(hào)瓶中的膠液作無(wú)限 多次稀釋，即η -c?，制膠完成時(shí)制膠板最上端的膠液變性梯度最低，其值為：
[0032] 制膠板最下端的膠液變性梯度最高且等于2號(hào)瓶?jī)?nèi)膠液的初始變性濃度，因此變 性梯度
[0033] 范圍是 bmin- b max。
[0034] 為了解本方法所配制變性膠的濃度變化規(guī)律，可假設(shè)制膠板的高度為h，與高垂直 的截面積為s，則式（4)可寫為：
[0036] 由式（5)可見(jiàn)用此裝置制作的凝膠變性梯度在垂直方向上呈指數(shù)變化，隨著電泳 過(guò)程的進(jìn)行，條帶內(nèi)核酸分子迅速到達(dá)高變性濃度區(qū)域，能顯著提高核酸分子的分離效果， 而商業(yè)制膠設(shè)備制作的凝膠其變性梯度為線性變化。
[0037] 而商業(yè)制膠設(shè)備制作的凝膠其變性梯度為線性變化。
[0038] 由式（5)可知，在已知V。，b_，a，s，h的情況下，可算得I^niin;反之，如事先確定變 性梯度的范圍值，也可通過(guò)計(jì)算得出高變性濃度溶液量的體積。
[0039] 以上所述，僅為本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，但本實(shí)用新型的保護(hù)范圍并不局限 于此，任何未違背本實(shí)用新型的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的變化或替換，都包含在本實(shí)用新 型的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本實(shí)用新型的保護(hù)范圍應(yīng)以權(quán)利要求書所限定的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，其特征在于，包括由高到低、按照設(shè)定高度 梯度依次設(shè)置的1號(hào)瓶，2號(hào)瓶和制膠板，1號(hào)瓶與2號(hào)瓶之間、2號(hào)瓶與制膠板之間分別設(shè) 置聯(lián)通管，1號(hào)瓶上設(shè)置與外界相通的空氣聯(lián)通管，在2號(hào)瓶的底部放置磁力攪拌器，1號(hào)瓶 與2號(hào)瓶的瓶口設(shè)置密封塞。2. 如權(quán)利要求1所述的一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，其特征在于，所述1號(hào) 瓶和所述2號(hào)瓶均為帶膠塞的玻璃瓶。3. 如權(quán)利要求1所述的一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，其特征在于，所述磁 力攪拌器帶有磁力攪拌棒。
【專利摘要】本實(shí)用新型提供的一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，包括由高到低、按照設(shè)定高度梯度依次設(shè)置的1號(hào)瓶，2號(hào)瓶和制膠板，1號(hào)瓶與2號(hào)瓶之間、2號(hào)瓶與制膠板之間分別設(shè)置聯(lián)通管，1號(hào)瓶上設(shè)置與外界相通的空氣聯(lián)通管，在2號(hào)瓶的底部放置磁力攪拌器，1號(hào)瓶與2號(hào)瓶的瓶口設(shè)置密封塞。本實(shí)用新型的有益效果是：整個(gè)裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、造價(jià)低廉、容易操作；該裝置利用的是玻璃瓶?jī)?nèi)的自動(dòng)虹吸作用，除攪拌外不需要借助外力，非常環(huán)保。
【IPC分類】C12M1/02
【公開(kāi)號(hào)】CN204676067
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520356431
【發(fā)明人】王希娣, 姜國(guó)勝, 劉振東, 張華 , 成麗娟, 刁玉濤, 趙穎馨
【申請(qǐng)人】山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
【公開(kāi)日】2015年9月30日
【申請(qǐng)日】2015年5月28日