一種梯度膠及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種梯度膠及其制備方法，該梯度膠為SDS-PAGE梯度膠，由輕液和重液組成，輕液和重液均由以下成分(以體積百分比計(jì))組成：凝膠緩沖液(3.5×)：20-35％；A液：15-70％，雙蒸水：0-60％，甘油：0-15％，AP：0.15-0.40％，TEMED：0.015-0.04％，且輕液和重液組成成分及含量不同，通過(guò)膠液配制、灌膠、清洗、聚合、拆膠、修整和封裝制成。本發(fā)明制成的梯度膠外觀較好，分辨率高，對(duì)樣品分子組成的分析更為細(xì)致，獲得更清晰的樣品分子區(qū)帶且穩(wěn)定性好，無(wú)論是在電場(chǎng)繼續(xù)作用下，還是存放一定時(shí)間后，各區(qū)帶之間相對(duì)位置基本不變。
【專利說(shuō)明】一種梯度膠及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種凝膠及其制備方法，尤其涉及一種梯度膠及其制備方法。
[0002]本申請(qǐng)中下列定義是指:
[0003]輕液:梯度膠中濃度較低的膠液；
[0004]重液:梯度膠中濃度較高的膠液；
[0005]凝膠緩沖液(3.5X):是指將配制的凝膠緩沖液標(biāo)準(zhǔn)液稀釋3.5倍制得，本發(fā)明中其它類似表示意義均相同。

【背景技術(shù)】
[0006]隨著泳動(dòng)距離的增加，單一濃度的凝膠在一些情況下難以發(fā)揮較好的作用，無(wú)法檢測(cè)、分離全部樣品分子。因此，目前梯度膠已廣泛取代了單一濃度的凝膠。樣品分子在這種梯度膠中泳動(dòng)時(shí)，起初由于樣品分子在孔徑比它大的凝膠區(qū)域中泳動(dòng)，各種大小不同的樣品分子以各自不同的泳動(dòng)率在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)；但后來(lái)，當(dāng)樣品分子達(dá)到凝膠孔徑小于樣品分子大小的區(qū)域中時(shí)，樣品分子就被凝膠孔限所阻，不同大小的樣品分子之間形成穩(wěn)定的區(qū)帶，因此，梯度膠對(duì)樣品分子組成的分析更為細(xì)致，獲得更清晰的樣品分子區(qū)帶，即使電場(chǎng)在繼續(xù)作用時(shí)，各區(qū)帶之間也保持相對(duì)位置不變。因此，梯度膠不僅能進(jìn)一步提高凝膠電泳的分辨率，還能在同一凝膠板中同時(shí)分離，分析大小相差很大的樣品分子。同時(shí)，由于這種梯度膠系統(tǒng)中，凝膠的孔徑大小成相應(yīng)的梯度，用這種方法樣品分子遷移后也不易再擴(kuò)散，是一種較好的分析方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，提出了一種外觀、分辨率、重復(fù)性和穩(wěn)定性好的梯度膠。
[0008]本發(fā)明的目的可通過(guò)下列技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):一種梯度膠，所述梯度膠為SDS-PAGE梯度膠，所述SDS-PAGE梯度膠由輕液和重液組成，所述輕液和重液均由以下成分(以體積百分比計(jì))組成:凝膠緩沖液(3.5X):20-35%汸液:15-70%，雙蒸水:0-60%，甘油:0-15%, AP:0.15-0.40%, TEMED:0.015-0.04%，且所述輕液和重液組成成分及含量不同。
[0009]在上述的一種梯度膠中，所述凝膠緩沖液是通過(guò)將262gBis_Tris溶于去礦物質(zhì)水配制成IL的標(biāo)準(zhǔn)液，pH為6.2-6.6。
[0010]在上述的一種梯度膠中，所述A液為30%的Acr-BiS水溶液，其中Acr與Bis的質(zhì)量比為19:1。
[0011]在上述的一種梯度膠中，所述梯度膠為4% -20% SDS-PAGE梯度膠。
[0012]在上述的一種梯度膠中，所述4% -20% SDS-PAGE梯度膠的輕液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5X):23mL ;A 液:14mL，雙蒸水:43mL, AP:300 μ L，TEMED:30 μ L ;重液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5Χ):20mL ；A 液:46mL,甘油:4mL, AP:200 μ L，TEMED:20 μ L。
[0013]在上述的一種梯度膠中，所述梯度膠為8% -16% SDS-PAGE梯度膠。
[0014]在上述的一種梯度膠中，所述8% -16% SDS-PAGE梯度膠的輕液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5X):20mL ;A 液:15mL，雙蒸水:39mL, AP:135 μ L，TEMED:13 μ L ;重液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5Χ):20mL ；A液:30mL，雙蒸水:7.5mL，甘油:7.5mL, AP:135 μ L，TEMED:13μ L。
[0015]本發(fā)明另一個(gè)目的在于提供上述梯度膠的制備方法，所述制備方法主要包括膠液配制、灌膠、清洗、聚合、拆膠、修整和封裝；
[0016]其中，所述膠液配制是按上述配方配制梯度膠的輕液和重液，其中，TEMED和AP在灌膠前加入，且添加順序依次為TEMED、AP ；
[0017]所述灌膠的具體過(guò)程為:將配制好的梯度膠的輕液、重液置于梯度混合儀的相應(yīng)容器內(nèi)，同時(shí)打開(kāi)磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，然后排除灌膠管內(nèi)氣體后當(dāng)重液和輕液的高度一致時(shí)，打開(kāi)梯度混合儀中間的閥門進(jìn)行灌膠，液體達(dá)到灌膠槽頂部后停止灌膠。
[0018]本發(fā)明梯度膠的制備過(guò)程中，灌膠前還要進(jìn)行拼裝夾具等準(zhǔn)備工作，將膠夾表面的碎屑清理干凈，扣緊卡扣，然后將梳子插好，梳子的光滑面朝向板子背面。然后將拼裝好的夾具以數(shù)個(gè)為單位放入灌膠槽，保證有孔道標(biāo)記的一面(背面)靠近灌膠槽的背面，且所有的膠夾保持同一方向，防止取膠時(shí)損壞膠孔。如留有空隙用擋板填充，安裝灌膠閥門，確保連接處不漏液，然后加水檢測(cè)確保灌膠槽不漏液，然后用清水清洗梯度混合儀，保證儀器通暢。
[0019]本發(fā)明膠液是由丙烯酰胺聚合形成的高分子，而聚合反應(yīng)是通過(guò)自由基聚合，因此就需要自由基，而本發(fā)明加入的AP就是作為引發(fā)劑產(chǎn)生自由基，TEMED則是催化AP產(chǎn)生自由基，從而加速丙烯酰胺凝膠的聚合。因此，在膠液配置過(guò)程中，TEMED和AP必須在灌膠前才加入膠液中，而且必須嚴(yán)格按照先添加TEMED而后添加AP的順序，以保證聚合效果。
[0020]本發(fā)明在灌膠過(guò)程中，先使膠液流出3-5滴后再將灌膠管接在灌膠槽閥上，以排除灌膠管內(nèi)的氣體，防止將氣泡引入膠內(nèi)。當(dāng)重液和輕液的高度達(dá)到一致時(shí)，打開(kāi)梯度混合儀中間的閥門進(jìn)行灌膠，閥門一般控制在55-65度傾斜，當(dāng)液體達(dá)到頂部后關(guān)閉，停止灌膠。在灌膠后采用清水清洗儀器，避免管道堵塞。
[0021]灌膠完成后保證2_3h的聚合時(shí)間，聚合時(shí)不能移動(dòng)灌膠槽，以免在膠未聚合前由于移動(dòng)而影響所形成的梯度。聚合結(jié)束后將膠拆下并用清水沖洗干凈。然后對(duì)膠進(jìn)行修整，修整前首先進(jìn)行目測(cè)，檢查膠體是否有明顯缺陷，包括:①、檢查膠內(nèi)是否含有氣泡，若有氣泡要把氣泡趕走、檢查膠體表面是否有條紋現(xiàn)象(有條紋現(xiàn)象則屬于次品)、檢查膠體下邊緣是否完整且平整、檢查膠板卡口是否干凈(若不干凈則用水沖洗干凈)、檢查膠孔是否在一直線上。膠體都符合要求后，才開(kāi)始拔梳齒，且在拔梳齒時(shí)保證均勻用力，不能拔斷，拔出后把氣泡趕干凈，同時(shí)檢查膠柱是否完整豎直，切掉突出的膠柱部分，然后進(jìn)行封裝。
[0022]在上述的一種梯度膠的制備方法中，所述封裝是將修整后的梯度膠進(jìn)行真空封裝后置于4-8°C進(jìn)行保存，且封裝時(shí)加入300-500 μ L儲(chǔ)存緩沖液。
[0023]在上述的一種梯度膠的制備方法中，所述儲(chǔ)存緩沖液由以下成分(以體積百分比計(jì))組成:凝膠緩沖液(3.5Χ):20-35% ;甘油:l-8%，100mmol/L 的 EDTA:0.1_5%，余量為去礦物質(zhì)水。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):
[0025]1.本發(fā)明梯度膠外觀較好，表面無(wú)殘膠，膠柱無(wú)傾斜并且所有膠柱的頂端和膠孔的底端都分別在同一水平線上，膠體表面無(wú)條紋，膠體底部無(wú)缺損。
[0026]2.本發(fā)明梯度膠分辨率高，對(duì)樣品分子組成的分析更為細(xì)致，獲得更清晰的樣品分子區(qū)帶。
[0027]3.本發(fā)明梯度膠穩(wěn)定性好，無(wú)論是在電場(chǎng)繼續(xù)作用下，還是存放一定時(shí)間后，各區(qū)帶之間相對(duì)位置基本不變。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1和2制備得到的梯度膠和對(duì)比例的單一濃度的凝膠的電泳檢測(cè)結(jié)果示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0029]以下是本發(fā)明的具體實(shí)施例，并結(jié)合【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。
[0030]實(shí)施例1:
[0031]首先，配制4% -20% SDS-PAGE梯度膠的輕液和重液，其中，梯度膠的輕液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5X):23mL 汸液:14mL，雙蒸水:43mL，AP:300 μ L,TEMED:30μ L ；重液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5 X):20mL ；A液:46mL，甘油:4mL，AP:200 μ L，TEMED:20 μ L。原料中的凝膠緩沖液是通過(guò)將262g Bis-Tris溶于去礦物質(zhì)水配制成IL的標(biāo)準(zhǔn)液，pH為6.4 ;A液為30%的Acr-Bis水溶液，Acr與Bis的質(zhì)量比為19:1。按以上配方配制4^-20% SDS-PAGE梯度膠的輕液和重液，而TEMED和AP在各液體加完后在灌膠前加入,且添加順序依次為TEMED、AP。
[0032]在配制膠液的同時(shí)，進(jìn)行膠夾的拼接，將膠夾表面碎屑清理干凈，扣緊各卡扣，然后將梳子插好，梳子的光滑面朝向板子背面。拼裝好的膠夾以12個(gè)為單位放入灌膠槽，保證有孔道標(biāo)記的一面(背面)靠近灌膠槽的背面，且所有的膠夾保持同一方向，防止取膠時(shí)損壞膠孔。如留有空隙用擋板填充，安裝灌膠閥門，確保連接處不漏液。然后擰緊膠槽各螺絲，以防漏液。最后加水檢測(cè)確保灌膠槽不漏液后，打開(kāi)恒流泵，將流速調(diào)整到最大，用水清洗梯度混合儀，確保儀器暢通后，關(guān)閉恒流泵。
[0033]然后將配制好的膠液按輕液，重液分別置于梯度混合儀相應(yīng)容器內(nèi)(此時(shí)混合儀由重液流向輕液的閥門保持關(guān)閉)，同時(shí)打開(kāi)磁力攪拌器，攪拌速度為使指針指向6的位置。然后將恒流泵流速調(diào)至3.0,打開(kāi)恒流泵，使膠液流出3?5滴再將灌膠管接在灌膠槽的閥上，以排除灌膠管內(nèi)的氣體，防止將氣泡引入膠內(nèi)。當(dāng)重液和輕液的高度達(dá)到一致時(shí)，打開(kāi)梯度混合儀中間的閥門，閥門一般控制在60度傾斜，當(dāng)灌膠槽的液體到達(dá)頂部先關(guān)閉恒流泵再關(guān)閉灌膠槽閥門，停止灌膠。灌好膠后要用清水清洗恒流泵和梯度混合儀，避免管道堵塞。
[0034]灌膠完成后聚合2h，聚合時(shí)不能移動(dòng)灌膠槽，以免在膠未聚合前由于移動(dòng)而影響所形成的梯度。聚合結(jié)束后將膠拆下并用清水沖洗干凈。然后對(duì)膠進(jìn)行修整，修整前首先進(jìn)行目測(cè)，檢查膠體是否有明顯缺陷，包括:①、檢查膠內(nèi)是否含有氣泡，若有氣泡要把氣泡趕走、檢查膠體表面是否有條紋現(xiàn)象(有條紋現(xiàn)象則屬于次品)、檢查膠體下邊緣是否完整且平整、檢查膠板卡口是否干凈(若不干凈則用水沖洗干凈)、檢查膠孔是否在一直線上。膠體都符合要求后，才開(kāi)始拔梳齒，且在拔梳齒時(shí)保證均勻用力，不能拔斷，拔出后把氣泡趕干凈，同時(shí)檢查膠柱是否完整豎直，切掉突出的膠柱部分，然后進(jìn)行真空封裝，置于4-8°C保存。在封裝時(shí)加入400 μ L儲(chǔ)存緩沖液，儲(chǔ)存緩沖液由60mL的凝膠緩沖液(3.5X)，1mL的甘油，3mL的100mmol/L的EDTA與去礦物質(zhì)水配成總體積為220mL的溶液。
[0035]實(shí)施例2:
[0036]首先，配制8^-16% SDS-PAGE梯度膠的輕液和重液，其中，梯度膠的輕液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5X):20mL 汸液:15mL，雙蒸水:39mL，AP: 135 μ L7TEMED:13μ L ；重液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5Χ):20mL ；A液:30mL，雙蒸水:7.5mL，甘油:7.5mL，AP: 135 μ L，TEMED:13 μ L。原料中的凝膠緩沖液(3.5X)是通過(guò)將262g Bis-Tris溶于去礦物質(zhì)水配制成IL的標(biāo)準(zhǔn)液，pH為6.4 ;A液為30%的Acr-Bis水溶液，Acr與Bis的質(zhì)量比為19:1。按以上配方配制4% -20% SDS-PAGE梯度膠的輕液和重液，而TEMED和AP在各液體加完后在灌膠前加入，且添加順序依次為TEMED、AP。
[0037]在配制膠液的同時(shí)，進(jìn)行膠夾的拼接，將膠夾表面碎屑清理干凈，扣緊各卡扣，然后將梳子插好，梳子的光滑面朝向板子背面。拼裝好的膠夾以13個(gè)為單位放入灌膠槽，保證有孔道標(biāo)記的一面(背面)靠近灌膠槽的背面，且所有的膠夾保持同一方向，防止取膠時(shí)損壞膠孔。如留有空隙用擋板填充，安裝灌膠閥門，確保連接處不漏液。然后擰緊膠槽各螺絲，以防漏液。最后加水檢測(cè)確保灌膠槽不漏液后，打開(kāi)恒流泵，將流速調(diào)整到最大，用水清洗梯度混合儀，確保儀器暢通后，關(guān)閉恒流泵。
[0038]然后將配制好的膠液按輕液，重液分別置于梯度混合儀相應(yīng)容器內(nèi)(此時(shí)混合儀由重液流向輕液的閥門保持關(guān)閉)，同時(shí)打開(kāi)磁力攪拌器，攪拌速度為使指針指向6的位置。然后將恒流泵流速調(diào)至3.0,打開(kāi)恒流泵，使膠液流出3?5滴再將灌膠管接在灌膠槽的閥上，以排除灌膠管內(nèi)的氣體，防止將氣泡引入膠內(nèi)。當(dāng)重液和輕液的高度達(dá)到一致時(shí)，打開(kāi)梯度混合儀中間的閥門，閥門一般控制在60度傾斜，當(dāng)灌膠槽的液體到達(dá)頂部先關(guān)閉恒流泵再關(guān)閉灌膠槽閥門，停止灌膠。灌好膠后要用清水清洗恒流泵和梯度混合儀，避免管道堵塞。
[0039]灌膠完成后聚合3h，聚合時(shí)不能移動(dòng)灌膠槽，以免在膠未聚合前由于移動(dòng)而影響所形成的梯度。聚合結(jié)束后將膠拆下并用清水沖洗干凈。然后對(duì)膠進(jìn)行修整，修整前首先進(jìn)行目測(cè)，檢查膠體是否有明顯缺陷，包括:①、檢查膠內(nèi)是否含有氣泡，若有氣泡要把氣泡趕走、檢查膠體表面是否有條紋現(xiàn)象(有條紋現(xiàn)象則屬于次品)、檢查膠體下邊緣是否完整且平整、檢查膠板卡口是否干凈(若不干凈則用水沖洗干凈)、檢查膠孔是否在一直線上。膠體都符合要求后，才開(kāi)始拔梳齒，且在拔梳齒時(shí)保證均勻用力，不能拔斷，拔出后把氣泡趕干凈，同時(shí)檢查膠柱是否完整豎直，切掉突出的膠柱部分，然后進(jìn)行真空封裝，置于4-8°C保存。在封裝時(shí)加入400 μ L儲(chǔ)存緩沖液，儲(chǔ)存緩沖液由60mL的凝膠緩沖液(3.5X)，1mL的甘油，3mL的100mmol/L的EDTA與去礦物質(zhì)水配成總體積為220mL的溶液。
[0040]對(duì)比例1:
[0041 ] 市售濃度為8 %的SDS-PAGE凝膠。
[0042]對(duì)比例2:
[0043]市售濃度為10 %的SDS-PAGE凝膠。
[0044]對(duì)比例3:
[0045]市售濃度為12%的SDS-PAGE凝膠。
[0046]先對(duì)本發(fā)明實(shí)施例1和2制得的梯度膠進(jìn)行外觀檢測(cè)，結(jié)果為:梯度膠的表面無(wú)殘膠，膠柱無(wú)傾斜并且所有膠柱的頂端和膠孔的底端都分別在同一水平線上，膠體表面無(wú)條紋，膠體底部無(wú)缺損。
[0047]再將本發(fā)明實(shí)施例1和2制得的梯度膠和對(duì)比例1-3單一濃度的凝膠對(duì)樣品為JWllO空菌裂解液進(jìn)行電泳檢測(cè)，電泳檢測(cè)過(guò)程中所采用的電泳緩沖液(1X)由60.6g的Tris base, 104.6g的MOPS, 1g的SDS和3g的EDTA溶于去礦物質(zhì)水配制成IL的標(biāo)準(zhǔn)液；轉(zhuǎn)印緩沖液(20X)由60g的Tris base和81.6g的Bicine溶于去礦物質(zhì)水配制成IL的標(biāo)準(zhǔn)液；上樣緩沖液(5X)由Ig的SDS, 5mL的甘油，25mg的Bromophenol Blue, 150mg的Tris base和ImL的2-Mercapoethanol溶于去礦物質(zhì)水配制成1mL的標(biāo)準(zhǔn)液，pH為6.8。電泳檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。
[0048]從圖1可知，本發(fā)明實(shí)施例1和2制得的梯度膠電泳檢測(cè)結(jié)果為:條帶SHARP，分辨率明顯高于對(duì)比例單一濃度的凝膠，對(duì)樣品JWllO空菌裂解液組成的分析更為細(xì)致，且相鄰條帶清晰可辨，指定細(xì)胞裂解同一蛋白條帶在同一水平線上。而且，在37°c下放置一個(gè)月，條帶基本沒(méi)有發(fā)生改變，穩(wěn)定性相當(dāng)強(qiáng)。
[0049]實(shí)施例3-4與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于凝膠緩沖液的pH為6.2。
[0050]實(shí)施例5-6與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于凝膠緩沖液的pH為6.6。
[0051]實(shí)施例7-8與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于儲(chǔ)存緩沖液加入量為300 μ L。
[0052]實(shí)施例9-10與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于儲(chǔ)存緩沖液加入量為500 μ L。
[0053]實(shí)施例11-12與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為5% -10% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0054]實(shí)施例13-14與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為3% -12% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0055]實(shí)施例15-16與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為6% -18% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0056]實(shí)施例17-18與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為10% -20% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0057]實(shí)施例19-20與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為10% -30% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0058]實(shí)施例21-22與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為12% -28% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0059]實(shí)施例23-24與實(shí)施例1_2的區(qū)別僅在于梯度膠為I % -100% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0060]實(shí)施例25-26與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為5% -80% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0061]實(shí)施例27-28與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為10% -50% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0062]實(shí)施例29-30與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為20% -30% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0063]實(shí)施例31-32與實(shí)施例1-2的區(qū)別僅在于梯度膠為30% -50% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0064]實(shí)施例33-34與實(shí)施例1_2的區(qū)別僅在于梯度膠為40% -50% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0065]實(shí)施例35-36與實(shí)施例1_2的區(qū)別僅在于梯度膠為50% -60% SDS-PAGE梯度膠，輕液和重液配比在組成成分及其體積百分比內(nèi)即可。
[0066]鑒于本發(fā)明方案實(shí)施例眾多，各實(shí)施例實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)龐大眾多，不適合于此處逐一列舉說(shuō)明，但是各實(shí)施例所需要驗(yàn)證的內(nèi)容和得到的最終結(jié)論均接近，故而此處不對(duì)各個(gè)實(shí)施例的驗(yàn)證內(nèi)容進(jìn)行逐一說(shuō)明，僅以實(shí)施例1-2作為代表說(shuō)明本發(fā)明申請(qǐng)優(yōu)異之處。
[0067]本處實(shí)施例對(duì)本發(fā)明要求保護(hù)的技術(shù)范圍中點(diǎn)值未窮盡之處，同樣都在本發(fā)明要求保護(hù)的范圍內(nèi)。
[0068]本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明精神作舉例說(shuō)明。本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書(shū)所定義的范圍。
[0069]盡管對(duì)本發(fā)明已作出了詳細(xì)的說(shuō)明并引證了一些具體實(shí)施例，但是對(duì)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，只要不離開(kāi)本發(fā)明的精神和范圍可作各種變化或修正是顯然的。
【權(quán)利要求】
1.一種梯度膠，其特征在于，所述梯度膠為梯度膠，所述梯度膠由輕液和重液組成，所述輕液和重液均由以下成分(以體積百分比計(jì))組成:凝膠緩沖液(3.5^):20-35% ；八液:15-70%，雙蒸水:0-60%，甘油:0-15%，八?:0.15-0.4012120:0.015-0.04%，且所述輕液和重液組成成分及含量不同。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種梯度膠，其特征在于，所述凝膠緩沖液是通過(guò)將2628618-11-18溶于去礦物質(zhì)水配制成的標(biāo)準(zhǔn)液，邱為6.2-6.6。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種梯度膠，其特征在于，所述八液為30%的&1-818水溶液，其中與818的質(zhì)量比為19:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種梯度膠，其特征在于，所述梯度膠為4%-20%808~？^62梯度膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種梯度膠，其特征在于，所述4%-20% 808~？^62梯度膠的輕液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5X3:2301減:1?[，雙蒸水:43齓，八?:300^1,丁2腳:30^1 ；重液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5X3:2001纖:46111匕甘油姐，八?:200 卩 1, 丁腿0:20 卩 I。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種梯度膠，其特征在于，所述梯度膠為8%-16%808~？^62梯度膠。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種梯度膠，其特征在于，所述8%-16% 八⑶梯度膠的輕液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5父〉:2001 ；八液:15111匕雙蒸水:39齓，八?:135比12120:13 ；重液由以下成分組成:凝膠緩沖液(3.5 X): 20^1 ；八液:30^1,雙蒸水:7.5111[，甘油:7.51111,:135111, 12120:139 匕
8.一種梯度膠的制備方法，其特征在于，所述制備方法主要包括膠液配制、灌膠、清洗、聚合、拆膠、修整和封裝； 其中，所述膠液配制是按上述配方配制梯度膠的輕液和重液，其中，12120和八？在灌膠前加入，且添加順序依次為12腿0、八？； 所述灌膠的具體過(guò)程為:將配制好的梯度膠的輕液、重液置于梯度混合儀相應(yīng)容器內(nèi)，同時(shí)打開(kāi)磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，然后排除灌膠管內(nèi)氣體后當(dāng)重液和輕液的高度一致時(shí)，打開(kāi)梯度混合儀中間的閥門進(jìn)行灌膠，液體達(dá)到頂部后關(guān)閉。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種梯度膠的制備方法，其特征在于，所述封裝是將修整后的梯度膠進(jìn)行真空封裝后置于4-81進(jìn)行保存，且封裝時(shí)加入300-500 9 I儲(chǔ)存緩沖液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種梯度膠的制備方法，其特征在于，所述儲(chǔ)存緩沖液由以下成分(以體積百分比計(jì))組成:凝膠緩沖液(3.5^):20-35% ；甘油的201八:0.1-5%，余量為去礦物質(zhì)水。
【文檔編號(hào)】G01N27/447GK104359964SQ201410609912
【公開(kāi)日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年11月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月3日
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