毒殺芬單體的分離和測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于農(nóng)副產(chǎn)品或食品檢測(cè)領(lǐng)域，涉及農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，具體地，涉及毒殺芬單體的分離和測(cè)定方法。更具體地，本發(fā)明涉及一種測(cè)定煙草中毒殺芬單體的方法，特別涉及一種能分別或者同時(shí)測(cè)定煙草中毒殺芬單體的方法。所述從樣品中分離毒殺芬單體的方法，包括使用環(huán)己烷-丙酮溶液進(jìn)行分離的步驟。所述測(cè)定毒殺芬單體的方法，包括使用將分離的毒殺芬單體進(jìn)行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定的步驟。本發(fā)明能分別測(cè)定煙草中毒殺芬類農(nóng)殘主要單體，且操作簡單、檢測(cè)快速。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)至少七種毒殺芬單體的同時(shí)有效分離和檢測(cè)。
【專利說明】毒殺芬單體的分離和測(cè)定方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)副產(chǎn)品或食品檢測(cè)領(lǐng)域，涉及農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，具體地，涉及毒殺芬單體的分離和測(cè)定方法。更具體地，本發(fā)明涉及一種測(cè)定煙草中毒殺芬單體的方法，特別涉及一種能分別或者同時(shí)測(cè)定煙草中毒殺芬單體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]毒殺芬(Toxaphene)是一種以松節(jié)油為主要原料合成的有機(jī)氯類農(nóng)藥，自1972年美國環(huán)保署頒布滴滴涕禁令后，毒殺芬使用量迅速增長并成為美國乃至世界范圍內(nèi)使用的主要?dú)⑾x劑，僅1970年到1993年間毒殺芬在全球的使用量就高達(dá)6.7X105噸。
[0003]毒殺芬具有致畸、致癌、致突變等劇毒性，并且穩(wěn)定性高、易于被生物體富集，故20世紀(jì)90年代后相繼被各國禁止生產(chǎn)，并于2002年被列為《斯德哥爾摩公約》中12種首要控制的可持續(xù)有機(jī)污染物之一，許多國家和組織對(duì)其在食品中的最大殘留限量做了嚴(yán)格規(guī)定，如德國規(guī)定毒殺芬在魚中的最大殘留限量為0.lmg / kg (以Parlar26、Parlar50、Parlar62這3種毒殺芬主要單體總殘留量計(jì))。歐盟規(guī)定Parlar26、Parlar50、Parlar62在水果、蔬菜和谷物中的最大殘留限量均為0.lmg / kg。
[0004]雖然毒殺芬在全球已被禁用，但由于它穩(wěn)定性高、半衰期長，目前仍滯留于土壤中。多年生根莖類中藥材極有可能受其污染，而目前我國還沒有毒殺芬在中藥材中的殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。為保證人們用藥安全，迫切需要建立靈敏、準(zhǔn)確的中藥材中毒殺芬殘留量測(cè)定方法。
[0005]但是，毒殺芬成分極其復(fù)雜，僅其主要成分氯代冰片烷類化合物的數(shù)量從理論上推斷就達(dá)32768種，實(shí)際所含化合物也至少有1000多種。
[0006]目前，毒殺芬殘留檢測(cè)多采用氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)，但是該方法但選擇性不高，無法去除色素等樣品基體干擾，而需要復(fù)雜的前處理過程來凈化樣品，例如采用硅藻土柱吸附去雜質(zhì)，正己烷洗過。此外，GC-MS檢測(cè)，無法將毒殺芬單體分離開，并且檢測(cè)的是毒殺芬的總量。
[0007]然而，現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)的樣品基質(zhì)以土壤等環(huán)境樣品和魚等海產(chǎn)品居多，尚未見煙草中毒殺芬殘留主要單體測(cè)定方法的報(bào)道。目前，尚需要一種能分別測(cè)定煙草中毒殺芬農(nóng)殘主要單體的方法，并且為推進(jìn)毒殺芬的安全性評(píng)價(jià)提供技術(shù)支持。
[0008]并且實(shí)際上，不管使用何種方法，對(duì)于毒殺芬各種單體的有效逐一分離和測(cè)定，涉及的因素和條件諸多，故而是本領(lǐng)域始終未能真正解決的技術(shù)難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究和創(chuàng)造性的勞動(dòng)，得到了一種毒殺芬單體的分離(提取)和測(cè)定方法。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，所述方法能夠?qū)⒍練⒎业膯误w逐一分離出來，并且能夠有效地測(cè)定各個(gè)單體的濃度。由此提供了下述發(fā)明:
[0010]本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種從樣品中分離毒殺芬單體的方法，其使用環(huán)己烷-丙酮溶液進(jìn)行萃取，得到提取液。
[0011]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)己烷-丙酮溶液需要完全浸沒樣品。
[0012]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，樣品取1 一 10g,環(huán)己燒-丙酮溶液用量為20 —lOOmLo
[0013]根據(jù)本發(fā)明的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述樣品為農(nóng)副產(chǎn)品或固態(tài)食品；具體地，為煙草原料或者煙草制品；更具體地，為烤煙、香料煙或白肋煙。
[0014]根據(jù)本發(fā)明的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述毒殺芬單體為選自Parlar26、Parlar50、Parlar62、Parlar40、Parlar42、Parlar44 和 Parlar32 中的任意 1、2、3、4、5、6 或7種。
[0015]根據(jù)本發(fā)明的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述環(huán)己烷-丙酮溶液為環(huán)己烷與丙酮體積比9:1至4:1的環(huán)己烷-丙酮溶液。具體地，環(huán)己烷與丙酮體積比為9:1、8:1、7:1、6:
1、5:1或4:1。優(yōu)選地，環(huán)己烷與丙酮體積比為8:1至5:1，更優(yōu)選為7:1至5:1，進(jìn)一步優(yōu)選為6.5:1至5.5:1，特別優(yōu)選為6:1。
[0016]不拘于理論的限制，盡管毒殺芬能夠溶于一些有機(jī)溶劑，但是，由于毒殺芬極性較弱，本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究分析，其中還比較了環(huán)己烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷及其不同配比的混合溶液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，特別是對(duì)于煙草樣品，體積比為6:1環(huán)己烷-丙酮溶液的回收率高，干擾少。
[0017]根據(jù)本發(fā)明的任一項(xiàng)所述的方法，其還包括將提取液進(jìn)行振蕩和除去固體殘?jiān)牟襟E。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述振蕩為渦旋振蕩，所述除去固體殘?jiān)鼮檫^濾(優(yōu)選使用0.45 μ m的濾膜)；優(yōu)選地，所述渦旋振蕩的時(shí)間為至少1分鐘；更優(yōu)選為至少5分鐘；特別優(yōu)選為至少10分鐘；進(jìn)一步優(yōu)選為10 - 40分鐘。
[0019]本發(fā)明的再一方面涉及一種測(cè)定樣品中毒殺芬單體的方法，包括本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的從樣品中分離毒殺芬單體的方法；具體地，包括將本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的從樣品中分離毒殺芬單體的方法得到的產(chǎn)物進(jìn)行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定的步驟。
[0020]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述測(cè)定(或者分離測(cè)定)毒殺芬單體的方法如附圖1所示。
[0021]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，分離檢測(cè)的毒殺芬單體的色譜圖可以與附圖2進(jìn)行比對(duì)。
[0022]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定的條件為:所用色譜柱為HP-5的毛細(xì)管柱，所用載氣為0.8 — 1.2mL/min的氦氣，所用離子源為電子轟擊離子源，所用檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式，所監(jiān)測(cè)離子為毒殺芬單體特征離子對(duì)。
[0023]不拘于理論的限制，不拘于實(shí)際上，并非采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-NC1-MS/MS)就一定能將毒殺芬的單體逐一分離出來。本發(fā)明人通過專業(yè)的摸索優(yōu)化和反復(fù)實(shí)驗(yàn)，創(chuàng)造性地在一整套技術(shù)方案包括色譜柱的選擇、分離程序的優(yōu)化、離子對(duì)的選擇等的基礎(chǔ)上，才將毒殺芬的單體逐一分離出來。從而實(shí)現(xiàn)上述七種毒殺芬單體的同時(shí)有效分離和檢測(cè)。這在實(shí)施例1 一 3中得到了驗(yàn)證。
[0024]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述毒殺芬單體特征離子對(duì)為231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305 和 / 或 377/341。[0025]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的方法，其中，所用載氣為0.8,0.9,1.0、1.1或1.2mL/min
的氦氣。
[0026]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，稱取1 一 10g待測(cè)樣品(煙草，例如烤煙、香料煙、白肋煙)于50 - 100mL的離心管中，加入20 — 50mL體積比9:1至4:1的環(huán)己烷-丙酮溶液，渦旋振蕩10 - 40分鐘，經(jīng)0.45 μ m的濾膜過濾后，濾液用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。其中，所述的氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)條件為:所用色譜柱為HP-5的毛細(xì)管柱，所用載氣為0.8 -
1.2mL/min的氦氣，所用離子源為電子轟擊離子源，所用檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式，所監(jiān)測(cè)離子為毒殺芬主要單體特征離子對(duì)。
[0027]不拘于理論的限制，對(duì)本發(fā)明而言，能檢出的單體種類由實(shí)際樣品含有的毒殺芬單體種類數(shù)決定。
[0028]本發(fā)明中，
[0029]術(shù)語“烤煙”是指煙葉，一年生草本，茄科。植株被腺毛，高1米左右。葉柄不明顯或成翅狀柄。用手摸起來，葉發(fā)黏。圓錐花序頂生?；ㄝ嗤矤睿ü诼┒窢?，形似軍號(hào)，末端粉紅色。蒴果，種子黃褐色。原產(chǎn)于南美洲，世界各地有栽培。主要采用烘烤技術(shù)醇化。
[0030]術(shù)語“香料煙”是指香料煙茄科，煙草屬，為一年生草本植物，其株型緊湊，葉片小，莖桿細(xì)，易燃燒，填充力強(qiáng)，芳香氣味好，香濃味醇，故有“香料煙”之稱。
[0031]術(shù)語“白肋煙”是指白肋煙紅花煙種。它起源于美國俄亥俄州，混合型卷煙的原料，也可用于雪茄煙、斗煙和嚼煙。
[0032]發(fā)明的有益效果
[0033]本發(fā)明能分別測(cè)定煙草中毒殺芬類農(nóng)殘主要單體，且操作簡單、檢測(cè)快速。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)至少七種毒殺芬單體的同時(shí)有效分離和檢測(cè)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1:本發(fā)明的操作流程示意圖。
[0035]圖2:本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖。其中，各個(gè)峰表示的含義為:l.Parlar26 ；
2.Parlar32 ;3.Parlar40 ;4.Parlar42 ;5.Parlar44 ;6.Parlar50 ;7.PCB202 ;8.Parlar62。
【具體實(shí)施方式】
[0036]下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0037]實(shí)施例1:烤煙樣品中的毒殺芬單體的測(cè)定
[0038]稱取lg烤煙樣品于50mL離心管中，加入20mL體積比4:1的環(huán)己烷-丙酮溶液的提取液，渦旋振蕩lOmin，經(jīng)濾膜過濾后，用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。
[0039]氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)條件為:色譜柱為HP-5的毛細(xì)管柱，載氣為0.8mL/min的氦氣，離子源為電子轟擊離子源，檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式，所監(jiān)測(cè)離子對(duì)為231/195、233/197,195/159,305/269,358/323,341/305 和 377/341，有檢測(cè)出的檢測(cè)毒殺芬單體為Parlar26 (231/195)、Parlar40 (195/159)，含量分別為 5.2 μ g/kg、18.6 μ g/kg。[0040]實(shí)施例2:香料煙樣品中的毒殺芬單體的測(cè)定
[0041]稱取5g香料煙樣品于50mL離心管中，加入30mL體積比6:1的環(huán)己烷-丙酮溶液的提取液，渦旋振蕩30min，經(jīng)濾膜過濾后，用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。
[0042]氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)條件為:色譜柱為HP-5的毛細(xì)管柱載氣為lmL/min的氦氣，離子源為電子轟擊離子源，檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式，所監(jiān)測(cè)離子對(duì)為231/195、233/197,195/159,305/269,358/323,341/305 和 377/341，有檢測(cè)出的檢測(cè)毒殺芬單體為Parlar32 (233/197),Parlar40 (195/159),Parlar44 (231/195)，含量分別為 10.6 μ g/kg、203.9 μ g/kg、79.2 μ g/kg。
[0043]實(shí)施例3:白肋煙樣品中的毒殺芬單體的測(cè)定
[0044]稱取10g白肋煙樣品于100mL離心管中，加入50mL體積比9:1的環(huán)己烷-丙酮溶液的提取液，渦旋振蕩40min，經(jīng)濾膜過濾后，用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。
[0045]氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)條件為:色譜柱為HP-5的毛細(xì)管柱，載氣為1.2mL/min的氦氣，離子源為電子轟擊離子源，檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式，所監(jiān)測(cè)離子對(duì)為231/195、233/197,195/159,305/269,358/323,341/305 和 377/341，有檢測(cè)出的檢測(cè)毒殺芬單體為Parlar26 (231/195)、 Parlar40 (195/159)、 Parlar50 (341/305)、 Parlar62 (377/341)，含量分別為 2.1 μ g/kg、115.9 μ g/kg、8.0 μ g/kg、26.7 μ g/kg。
[0046]盡管本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】已經(jīng)得到詳細(xì)的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解。根據(jù)已經(jīng)公開的所有教導(dǎo)，可以對(duì)那些細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改和替換，這些改變均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。
【權(quán)利要求】
1.一種從樣品中分離毒殺芬單體的方法，其使用環(huán)己烷-丙酮溶液進(jìn)行分離，得到提取液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，環(huán)己烷-丙酮溶液需要完全浸沒樣品；具體地，樣品取1 — 10g,環(huán)己燒-丙酮溶液用量為20 — 100mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述樣品為農(nóng)副產(chǎn)品或固態(tài)食品；具體地，為煙草原料或者煙草制品；更具體地，為烤煙、香料煙或白肋煙。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述毒殺芬單體為選自Parlar26、Parlar50、Parlar62> Parlar40、Parlar42、Parlar44 和 Parlar32 中的任意 1、2、3、4、5、6 或 7 種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述環(huán)己烷-丙酮溶液中環(huán)己烷與丙酮的體積比為9:1至4:1 ;優(yōu)選地，環(huán)己烷與丙酮體積比為8:1至5:1 ;更優(yōu)選為7:1至5:1 ;進(jìn)一步優(yōu)選為6.5:1至5.5:1 ;特別優(yōu)選為6:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其還包括將提取液進(jìn)行振蕩和除去固體殘?jiān)牟襟E。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述振蕩為渦旋振蕩，所述除去固體殘?jiān)鼮檫^濾；優(yōu)選地，所述渦旋振蕩的時(shí)間為至少1分鐘；更優(yōu)選為至少5分鐘；特別優(yōu)選為至少10分鐘；進(jìn)一步優(yōu)選為10 - 40分鐘；優(yōu)選地，所述過濾使用0.45 μ m的濾膜。
8.一種測(cè)定樣品中毒殺芬單體的方法，包括權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的從樣品中分離毒殺芬單體的方法；具體地，包括將權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的產(chǎn)物進(jìn)行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定的條件為:所用色譜柱為HP-5的毛細(xì)管柱，所用載氣為0.8 — 1.2mL/min的氦氣,所用尚子源為電子轟擊尚子源，所用檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式，所監(jiān)測(cè)離子為毒殺芬單體特征離子對(duì)；具體地，所用載氣為 0.8,0.9,1.0、1.1 或 1.2mL/min 的氦氣。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述毒殺芬單體特征離子對(duì)為231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305 和 / 或 377/341。
【文檔編號(hào)】G01N30/14GK103698444SQ201310743979
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】黃華發(fā), 張建平, 劉秀彩, 黃朝章, 謝衛(wèi), 許寒春, 劉澤春, 鄧其馨, 蘇明亮, 吳清輝 申請(qǐng)人:福建中煙工業(yè)有限責(zé)任公司