本實用新型涉及體外診斷技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測綜合42項食物過敏原IgG抗體的免疫印跡試劑盒。

背景技術(shù)：

目前，臨床實驗室檢測樣本中的42項常見食物過敏原，一般采用酶聯(lián)免疫法(Elisa)進(jìn)行檢測，該方法是將過敏原包被在96微孔板中，通過臨床樣本的孵育反應(yīng)，最后通過酶標(biāo)儀進(jìn)行結(jié)果判讀。

這種檢測方法由于一次實驗只能檢測單一指標(biāo)，通量低，檢測成本高，對于擴(kuò)大過敏原檢測項目存在著局限性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型的目的在于提供一種檢測綜合42項食物過敏原IgG抗體的免疫印跡試劑盒，從而解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的前述問題。

為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用的技術(shù)方案如下：

一種檢測綜合42項食物過敏原IgG抗體的免疫印跡試劑盒，包括：膜條，平行設(shè)置在所述膜條上的42條檢測線、質(zhì)控線和臨界值線，所述42條檢測線依次由：牛肉、雞肉、鱈魚、玉米、螃蟹、雞蛋、蘑菇、牛奶、豬肉、大米、蝦、大豆、西紅柿、小麥、西瓜、橄欖、藍(lán)莓、菠蘿、橘子、桃、蘋果、榴蓮、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龍蝦、三文魚、沙丁魚、草魚、帶魚、扇貝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火雞、羊肉、腰果、花生共42種常見食物特異性過敏原包被。

優(yōu)選地，還包括透明的PVC膠片，所述膜條固定在所述PVC膠片上。

優(yōu)選地，所述膜條為硝酸纖維素膜。

優(yōu)選地，還包括樣本稀釋液、濃縮洗液、酶結(jié)合物和底物液，所述樣本稀釋液為含有山羊血清的Tris緩沖液，所述濃縮洗液為10×的Tris緩沖液，所述酶結(jié)合物為堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗人IgG，所述底物液為NBT/BCIP。

本實用新型的有益效果是：本實用新型實施例提供的檢測42項常見食物過敏原IgG抗體的免疫印跡試劑盒，采用線性免疫分析法，將牛肉、雞肉、鱈魚、玉米、螃蟹、雞蛋、蘑菇、牛奶、豬肉、大米、蝦、大豆、西紅柿、小麥、西瓜、橄欖、藍(lán)莓、菠蘿、橘子、桃、蘋果、榴蓮、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龍蝦、三文魚、沙丁魚、草魚、帶魚、扇貝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火雞、羊肉、腰果、花生共42種常見食物特異性IgG過敏原和質(zhì)控線及臨界值線平行包被在硝酸纖維素膜上，通過一份臨床樣本和一次檢測反應(yīng)，即可檢測人血清中的42種食物過敏原的IgG抗體，克服了當(dāng)前Elisa方法學(xué)試劑盒相關(guān)抗體逐一單獨檢測在操作上的繁瑣，大大提高檢測效率。

附圖說明

圖1是本實用新型提供的免疫印跡試劑盒的膜條的布線結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本實用新型提供的免疫印跡試劑盒的膜條的布線截面示意圖。

圖中，各符號的含義如下：

1質(zhì)控線，2臨界值線，3-44依次為包被有如下42種常見食物特異性過敏原的檢測線：牛肉、雞肉、鱈魚、玉米、螃蟹、雞蛋、蘑菇、牛奶、豬肉、大米、蝦、大豆、西紅柿、小麥、西瓜、橄欖、藍(lán)莓、菠蘿、橘子、桃、蘋果、榴蓮、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龍蝦、三文魚、沙丁魚、草魚、帶魚、扇貝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火雞、羊肉、腰果、花生，45PVC膠片，46雙面膠，47膜條。

具體實施方式

為了使本實用新型的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖，對本實用新型進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施方式僅僅用以解釋本實用新型，并不用于限定本實用新型。

如圖1-2所示，本實用新型實施例提供了一種檢測綜合42項食物過敏原IgG抗體的免疫印跡試劑盒，包括：膜條47，平行設(shè)置在所述膜條上的42條檢測線3-44、質(zhì)控線1和臨界值線2，42條檢測線3-44依次由：牛肉、雞肉、鱈魚、玉米、螃蟹、雞蛋、蘑菇、牛奶、豬肉、大米、蝦、大豆、西紅柿、小麥、西瓜、橄欖、藍(lán)莓、菠蘿、橘子、桃、蘋果、榴蓮、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龍蝦、三文魚、沙丁魚、草魚、帶魚、扇貝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火雞、羊肉、腰果、花生共42種常見食物特異性過敏原包被。

上述試劑盒中，42種常見食物過敏原的組合符合國人飲食習(xí)慣，進(jìn)行42項綜合檢測更直觀準(zhǔn)確，為過敏疾病的預(yù)防及預(yù)后提供全面指導(dǎo)。

本實施例提供的試劑盒，還包括透明的PVC膠片45，膜條47固定在PVC膠片45上。

實際制作過程中，可以使用雙面膠46將膜條47固定在PVC膠片45上。

本實施例提供的試劑盒，膜條47為硝酸纖維素膜。

過敏原的包被通過自動化點樣儀高精度包被于硝酸纖維素膜，可根據(jù)檢測需求進(jìn)行合理排序和組合。

本實施例提供的試劑盒，還包括樣本稀釋液、濃縮洗液、酶結(jié)合物和底物液，所述樣本稀釋液為含有山羊血清的Tris緩沖液，所述濃縮洗液為10×的Tris緩沖液，所述酶結(jié)合物為堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗人IgG，所述底物液為NBT/BCIP。

上述試劑盒的實驗原理為，將包被有42種常見食物過敏原的膜條用樣本緩沖液進(jìn)行封閉處理，封閉膜上的非特異位點，從而阻止非特異性反應(yīng)的發(fā)生。檢測時，膜條與稀釋的血清樣本共同溫育使血清中的抗體與膜條上的抗原結(jié)合。利用堿性磷酸酶標(biāo)記羊抗人IgG檢測此結(jié)合抗體。加入底物后，結(jié)合抗體上標(biāo)記的酶催化底物反應(yīng)，并在過敏原包被的位置產(chǎn)生可見的條帶。根據(jù)條帶是否顯色，可判斷受試者的抗體特性，如果明顯顯色判定為該抗體陽性，如果不顯色則判定為陰性。通過以硝酸纖維素膜為載體進(jìn)行包被，實現(xiàn)42種常見食物過敏原聯(lián)合檢測，大大提高了檢測效率。

使用上述試劑盒，可以通過一份臨床樣本和一次檢測同時檢測42種常見食物過敏原，克服了多種過敏原逐一檢測在操作上的繁瑣，大大提高操作效率，有益于實現(xiàn)高通量。

上述結(jié)構(gòu)的免疫印跡試劑盒，膜條的制備方法，包含以下步驟：

1)配制過敏原包被液，使用包被緩沖液，將共42種食物特異性過敏原和抗人IgG，人IgG稀釋至相對的包被濃度。

2)使用高精度自動點樣儀將配制好的過敏原包被液點樣包被在硝酸纖維素膜上，形成檢測線、臨界值線和質(zhì)控線。

3)使用惰性蛋白如牛血清白蛋白、酪蛋白或新生牛血清進(jìn)行非特異性封閉。

4)將封閉好的膜條至于濕度低于30％的條件下干燥。

5)通過定制的雙面膠將干燥后的膜條粘貼按相關(guān)序列固定于PVC襯板上。

6)使用斬切機將組裝好的條斬切成單人份。

本試劑盒的其他組分包括：

上述結(jié)構(gòu)的免疫印跡試劑盒，在使用時，首先進(jìn)行以下的預(yù)處理：

濃縮洗液的稀釋：稀釋前應(yīng)使其全部溶解。將濃縮洗液(10×)與蒸餾水或純化水1:9稀釋。例如：1份濃縮洗液(10×)加9份蒸餾水或純化水。

酶結(jié)合物的配制：10倍濃縮。吸取所需酶結(jié)合物，并用樣本緩沖液1:10稀釋。

其使用方法包括以下步驟：

1.將抗原膜條置于孵育槽中，帶有文字標(biāo)記的一面朝上；每槽加入1.5ml樣本緩沖液，將膜條在室溫下?lián)u擺搖床輕微晃動5分鐘，其后棄去孵育槽中液體。

2.每槽加入1.5ml稀釋的血清樣品，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育30分鐘。

3.棄去孵育槽中液體，每槽加入1.5ml清洗緩沖液，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動5分鐘，棄去孵育槽中液體。再重復(fù)洗滌2次。

4.棄去孵育槽中液體，每槽加入1.5ml稀釋后的酶結(jié)合物，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育30分鐘。

5.重復(fù)步驟3。

6.棄去孵育槽中液體，每槽加入1.5ml底物液，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育10分鐘。

7.棄去孵育槽中液體，每槽加入1.5ml蒸餾水或純化水，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動1分鐘，棄去孵育槽中液體。再重復(fù)洗滌2次。.

8.膜條干燥后，可將抗原膜條粘貼于結(jié)果記錄單上，以便保存實驗結(jié)果。

上述結(jié)構(gòu)的免疫印跡試劑盒，其性能鑒定的方法為：

位于檢測膜條標(biāo)志下方反應(yīng)區(qū)域依次有質(zhì)控線、臨界值線。如果質(zhì)控線出現(xiàn)強的顏色反應(yīng)，臨界值線有微弱顯色，并且質(zhì)控線顯色強于臨界值線，則說明實驗結(jié)果有效。如果質(zhì)控線未出現(xiàn)強的顏色反應(yīng)，則說明實驗結(jié)果無效。

可將結(jié)果判讀卡的標(biāo)示條帶與膜條上的相應(yīng)條帶對齊，比對檢測條帶位置。

根據(jù)抗原條帶顯色程度，可將結(jié)果判讀為陰性和陽性。

陽性：抗原條帶顯色較臨界值線一致或更深；

陰性：抗原條帶顯色較臨界值線淺。

通過采用本實用新型公開的上述技術(shù)方案，得到了如下有益的效果：本實用新型實施例提供的檢測42項常見食物過敏原IgG抗體的免疫印跡試劑盒，采用線性免疫分析法，將牛肉、雞肉、鱈魚、玉米、螃蟹、雞蛋、蘑菇、牛奶、豬肉、大米、蝦、大豆、西紅柿、小麥、西瓜、橄欖、藍(lán)莓、菠蘿、橘子、桃、蘋果、榴蓮、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龍蝦、三文魚、沙丁魚、草魚、帶魚、扇貝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火雞、羊肉、腰果、花生共42種常見食物特異性IgG過敏原和質(zhì)控線及臨界值線平行包被在硝酸纖維素膜上，通過一份臨床樣本和一次檢測反應(yīng)，即可檢測人血清中的42種食物過敏原的IgG抗體，克服了當(dāng)前Elisa方法學(xué)試劑盒相關(guān)抗體逐一單獨檢測在操作上的繁瑣，大大提高檢測效率。

本說明書中的各個實施例均采用遞進(jìn)的方式描述，每個實施例重點說明的都是與其他實施例的不同之處，各個實施例之間相同相似的部分互相參見即可。

本領(lǐng)域人員應(yīng)該理解的是，上述實施例提供的方法步驟的時序可根據(jù)實際情況進(jìn)行適應(yīng)性調(diào)整，也可根據(jù)實際情況并發(fā)進(jìn)行。

上述實施例涉及的方法中的全部或部分步驟可以通過程序來指令相關(guān)的硬件來完成，所述的程序可以存儲于計算機設(shè)備可讀取的存儲介質(zhì)中，用于執(zhí)行上述各實施例方法所述的全部或部分步驟。所述計算機設(shè)備，例如：個人計算機、服務(wù)器、網(wǎng)絡(luò)設(shè)備、智能移動終端、智能家居設(shè)備、穿戴式智能設(shè)備、車載智能設(shè)備等；所述的存儲介質(zhì)，例如：RAM、ROM、磁碟、磁帶、光盤、閃存、U盤、移動硬盤、存儲卡、記憶棒、網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器存儲、網(wǎng)絡(luò)云存儲等。

最后，還需要說明的是，在本文中，諸如第一和第二等之類的關(guān)系術(shù)語僅僅用來將一個實體或者操作與另一個實體或操作區(qū)分開來，而不一定要求或者暗示這些實體或操作之間存在任何這種實際的關(guān)系或者順序。而且，術(shù)語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、商品或者設(shè)備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、方法、商品或者設(shè)備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、商品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。

以上所述僅是本實用新型的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本實用新型原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視本實用新型的保護(hù)范圍。