一種普洱生茶的等級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種茶葉的等級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，具體的是采用中藥指紋圖譜分析方 法對普洱生茶的等級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。本發(fā)明的等級(jí)及質(zhì)量分析評(píng)價(jià)方法可以用于普洱茶 生茶及其加工產(chǎn)品的等級(jí)及質(zhì)量分析。
【背景技術(shù)】
[0002] 普洱茶是以云南省一定區(qū)域內(nèi)的云南大葉種曬青毛茶為原料，經(jīng)過后發(fā)酵加工而 成的散茶和緊壓茶，外形色澤褐紅，內(nèi)質(zhì)湯色紅濃明亮，香氣獨(dú)特陳香，滋味醇厚回甘，葉底 褐紅。有生茶和熟茶之分，生茶自然發(fā)酵，熟茶人工催熟。 茶葉在中國有很多年的飲用歷史，隨著人們對食品安全日益重視，各類食品包括茶葉 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也越來越高，目前普海茶所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)是國家地理標(biāo)志產(chǎn)品的國家標(biāo)準(zhǔn)，從產(chǎn) 地、鮮葉、工藝、理化指標(biāo)等多個(gè)項(xiàng)目對普洱茶進(jìn)行了規(guī)定，但其中的分級(jí)指標(biāo)僅通過感官 對比進(jìn)行，缺乏客觀評(píng)價(jià)指標(biāo)，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了茶多酚的檢測，茶葉中其他指標(biāo)性成分如 茶氨酸、咖啡因成分現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法，但目前沒有產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)對其限量等進(jìn)行規(guī)定， 對茶葉等級(jí)和質(zhì)量的評(píng)價(jià)都是建立在比較主觀的滋味、香氣等指標(biāo)上。本發(fā)明中涉及的中 藥指紋圖譜研究是中藥質(zhì)量研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，其主要通過廣泛的樣品收集后制定特征指紋 圖譜，再通過規(guī)定各個(gè)峰的相對保留時(shí)間進(jìn)行中藥質(zhì)量的控制。雖然中藥指紋圖譜的研究 已經(jīng)較為普遍，但將其移植到茶葉的研究和質(zhì)量控制上比較鮮見。現(xiàn)有文獻(xiàn)研究主要針對 綠茶中的咖啡因、茶多酚單個(gè)成分的研究，或者更加確切的說是針對其中的成分研究，比如 成分的含量對比等，尚未見到有關(guān)普洱茶整體成分構(gòu)成情況的等級(jí)及質(zhì)量分析評(píng)價(jià)研究。 普洱茶產(chǎn)品的等級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)定級(jí)等工作主要由有經(jīng)驗(yàn)的審評(píng)員完成，尤其是其中的內(nèi)質(zhì) 感官指標(biāo)項(xiàng)目，完全需要審評(píng)員憑借經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷，這種主觀性很強(qiáng)的評(píng)價(jià)方法很容易受 到審評(píng)人員的飲食、情緒等主觀因素影響。目前其他茶類的等級(jí)評(píng)價(jià)同樣存在這一問題，普 遍以主觀檢驗(yàn)為主，客觀檢驗(yàn)項(xiàng)目的專屬性又不強(qiáng)，所以相對全面的茶類產(chǎn)品客觀評(píng)價(jià)體 系亟待建立。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是針對目前評(píng)價(jià)普洱茶標(biāo)準(zhǔn)主觀性強(qiáng)的技術(shù)缺陷，提供一種以高效 液相色譜法為基礎(chǔ)的一種普洱生茶的等級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法的技術(shù)方案。該方法充分結(jié)合現(xiàn) 有天然產(chǎn)物研究技術(shù)方法，結(jié)合現(xiàn)行普洱茶產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)要求，考慮能夠相對客觀評(píng)價(jià)普洱 茶等級(jí)及質(zhì)量的方法。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案;一種普洱茶的等級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，通過高效液相色譜法獲 得普洱茶樣品的紫外吸收色譜，利用歸一化法計(jì)算色譜中特征峰的百分比例，按照其中一 個(gè)或多個(gè)特征峰的比例進(jìn)行等級(jí)評(píng)價(jià)，其步驟如下： a.樣品的前處理方法:取表沒食子兒茶素沒食子酸酯以甲醇做溶劑，配制成每lml含 0.5mg的溶液，即得參照成分/對照品溶液;取普洱茶生茶供試樣過40目篩的粉末3-5g，加入 12-20倍量的溶劑于70-80°C水浴浸提10-15分鐘，浸提2次，離心，合并上清液于80°C水浴上 蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜羖〇ml即得普洱茶生茶供試品待測液； b. 高效液相的色譜條件：固定相為十八烷基鍵合硅膠，流動(dòng)相由有機(jī)相、水相、調(diào)節(jié)劑 相組成，檢測波長245nm-360nm;流動(dòng)相洗脫條件為水相與有機(jī)相梯度洗脫，水相在0-15min 由體積比85%-90%降至80%-84%、在15-35min由體積比80%-84%降至65%-70%; c. 采用步驟b所述的高效液相的色譜條件，以參照成分/對照品為檢測對象，按照色譜 條件進(jìn)行分析，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯的色譜圖； d. 采用步驟b所述的高效液相的色譜條件，以普洱茶生茶供試品待測液為檢測對象，按 照色譜條件進(jìn)行分析，得到普洱茶生茶樣品的色譜圖，在色譜圖上找到與表沒食子兒茶素 沒食子酸酯保留時(shí)間一致的峰，指認(rèn)出參照成分在普洱茶生茶樣品中的位置； e. 采集5-30分鐘之內(nèi)的色譜峰，以表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為參照成分，分別按 普洱茶生茶特征指紋圖譜中的特征峰標(biāo)記方法標(biāo)記供試樣中的特征峰至少有8個(gè)，計(jì)算其 中各個(gè)特征峰面積在所有峰面積中的百分含量之和應(yīng)大于等于65%。
[0005] 所述步驟b中流動(dòng)相中的有機(jī)相為甲醇、乙腈、丙酮中的至少1種，調(diào)節(jié)劑相為甲 酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的至少1種。
[0006] 所述步驟b中流動(dòng)相的有機(jī)相為甲醇、乙腈的一種或二種、調(diào)節(jié)劑為乙酸、三氟乙 酸中的一種或二種。
[0007] 所述步驟b中流動(dòng)相洗脫條件為水相與有機(jī)相梯度洗脫，水相在0-15min由體積比 89%-90% 降至 81%-82%、在 15-35min 由體積比 81%-82% 降至 66%-68%。
[0008] 所述步驟a中供試品浸提用溶劑為為甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水、磷酸中的至少1 種。
[0009] 所述步驟e中普洱茶特征指紋圖譜中的特征峰標(biāo)記方法為，以表沒食子兒茶素沒 食子酸酯為參照峰，標(biāo)記峰S，規(guī)定其保留時(shí)間為1.000,計(jì)算其他特征峰相對于參照峰的相 對保留時(shí)間，其相對保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%之內(nèi)；各特征峰的相對保留時(shí)間規(guī)定值為 特征峰1(P1)規(guī)定值0.429、特征峰2(P2)規(guī)定值0.556、特征峰3(P3)(咖啡因）規(guī)定值0.576、 特征峰4(P4)規(guī)定值0.642、特征峰5(P5)規(guī)定值0.723、特征峰6(P6)規(guī)定值0.769、特征峰7 (P7 )規(guī)定值0.849、特征峰8 (S )規(guī)定值1.000、特征峰9 (P9 )規(guī)定值1.134、特征峰10 (P10 )規(guī) 定值1.183、特征峰ll(Pll)規(guī)定值1.389。
[0010] 本發(fā)明涉及一種以普洱茶生茶為研究對象，采用高效液相色譜分析結(jié)合中藥指紋 圖譜分析的方法對普洱茶生茶樣品的感官內(nèi)質(zhì)成分進(jìn)行客觀分析，本發(fā)明方法可以用于普 洱茶生茶產(chǎn)品或主要由普洱茶生茶加工制成的產(chǎn)品的等級(jí)及質(zhì)量分析。在本發(fā)明所采用的 HPLC色譜分析條件下，對多批次多個(gè)等級(jí)的普洱茶樣品進(jìn)行檢測分析，獲得相應(yīng)的色譜圖， 利用中藥指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)軟件進(jìn)行色譜圖的比較分析，獲得普洱茶生茶具有共性特征 的色譜圖，即普洱茶生茶的特征指紋圖譜;再利用同樣的HPLC色譜分析條件，對待評(píng)價(jià)的樣 品進(jìn)行檢測分析獲得普洱茶生茶樣品的色譜圖，將樣品的色譜圖與特征指紋圖譜進(jìn)行比 對，即可按照本發(fā)明中規(guī)定的普洱茶生茶分級(jí)及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法進(jìn)行判斷其等級(jí)質(zhì)量情況。
[0011] 本發(fā)明通過對多批、多個(gè)產(chǎn)地的普洱茶生茶樣品進(jìn)行成分分析后，得到一個(gè)普遍 適用的普洱茶生茶成分的高效液相色譜分析方法，再結(jié)合中藥指紋圖譜分析方法對得到的 色譜圖進(jìn)行分析比對，確定了普洱茶生茶的特征指紋圖譜，共呈現(xiàn)11個(gè)特征峰，經(jīng)鑒定其中 第八個(gè)峰為表沒食子兒茶素沒食子酸酯，將該成分作為參照可以規(guī)定出其他10個(gè)特征峰的 相對保留時(shí)間，同時(shí)該成分參照可以用于在供試品成分分析時(shí)標(biāo)記各個(gè)特征峰。
[0012] 本發(fā)明首先通過高效液相色譜分析方法的研究，確定了色譜分析條件的參數(shù)。采 用該高效液相的色譜條件，以參照成分/對照品為檢測對象，按照色譜條件進(jìn)行分析，得到 表沒食子兒茶素沒食子酸酯的色譜圖；再用該高效液相的色譜條件，以普洱茶生產(chǎn)供試品 待測液為檢測對象，按照色譜條件進(jìn)行分析，得到待測樣品的色譜圖，在色譜圖上找到與表 沒食子兒茶素沒食子酸酯保留時(shí)間一致的峰，指認(rèn)出參照成分在普洱茶生茶樣品中的位 置。再以特征性樣品的檢測研究為基礎(chǔ)建立普洱茶生茶特征指紋圖譜。分析樣品分別為， S1、臨滄云縣;S2、大理下關(guān);S3、版納普文;S4、臨滄鳳慶;S5、普洱漫灣;S6、大理云龍;S7、保 山昌寧;S8、普洱瀾滄;S9、版納易武。各個(gè)樣品經(jīng)過高效液相色譜法分析后得到對應(yīng)的色譜 圖，使用中藥色譜指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行分析，相似度0.9以上，通過樣品生成對照 圖譜，提取對照圖譜數(shù)據(jù)后獲得各個(gè)成分峰的保留時(shí)間、峰面積等數(shù)據(jù)。色譜圖比較分析見 圖1。以表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為參照峰，根據(jù)特征指紋圖譜的信息計(jì)算各特征峰相 對于參照峰的相對保留時(shí)間。規(guī)定了各特征峰的相對保留時(shí)間規(guī)定值。然后，取所要檢測的 供試品配制供試品待測液，按照上述高效液相色譜法進(jìn)行分析，得到供試品的色譜圖，用表 沒食子兒茶素沒食子酸酯標(biāo)記參照峰，根據(jù)普洱茶對照特征圖譜中其他特征峰的規(guī)定，找 到其他特征峰，采集5-30分鐘的色譜數(shù)據(jù)，計(jì)算8個(gè)特征峰的峰面積在所有峰面積中的比 例，該數(shù)值應(yīng)大于等于65%，否則不屬于合格的普洱茶生茶。
[0013] 建立普洱茶生茶特征指紋圖譜時(shí)對不同樣品分