一種氟唑菌苯胺殘留量的gc-ms/ms測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，更具體地說是采用氣相 色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動物肌肉及制品等 復(fù)雜基質(zhì)的動植物源性食品中殘留的氣挫菌苯胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測定技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣挫菌苯胺是由己斯夫公司開發(fā)的班巧酸脫氨酶抑制劑類殺菌劑，通用名： penflufen;試驗代號:BYF14182;化學(xué)名稱:N-[2-(l，3-二甲基下基)苯基]-5-氣-1,3-二甲 基-IH-化挫-4-甲酯胺；外觀:灰白色粉末狀固體;烙點(diǎn)：11 TC ;沸點(diǎn)：沸點(diǎn)前分解;分解溫 度:320°C ;蒸氣壓：1.2 X l〇-6pa(25°C);分配系數(shù):Kow Io評=3.3(20°C，PH=7);亨利常數(shù)： 1.05 X 1 〇-中曰? m3 ? mo 1 -1 (25°C)。溶解度:在水中的溶解度為10.9mg/L(20°C);在正己燒中 的溶解度為1.6g/L，甲苯中為62g/L，丙酬中為139g/L，甲醇中為126g/L，乙酸乙醋中為96g/ 1，二甲亞諷中為162邑/1(^上均為20°(：);〔45登錄號：494793-67-8。相對分子質(zhì)量317.41; 分子式C18H24FN3O,化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 氣挫菌苯胺是拜耳公司開發(fā)的又一個化挫酷胺類殺菌劑，于2006年申請專利，主 要用于種子處理，對多種植物病原真菌具有良好活性。該殺菌劑為班巧酸脫氨酶(SDH)抑制 劑，主要作用于呼吸鏈電子傳遞復(fù)合體n，阻斷能量代謝。經(jīng)過處理后的種子在萌發(fā)過程中 可W吸收氣挫菌苯胺，并通過木質(zhì)部傳導(dǎo)到植物體的其他部位，從而起到保護(hù)作物的作用。 氣挫菌苯胺是一個種子處理殺菌劑，用于馬鈴馨、玉米、水稻、棉花、小麥、大麥、首猜、蔬菜、 豆類W及油菜等種子，可W防治種傳、±傳的擔(dān)子菌和子囊菌病害，主要有絲核菌 (化izoctonia spp.)和黑粉菌素化Stilago spp.)等引起的馬鈴馨黑捷病、小麥紋枯病、水 稻紋枯病、油菜菌核病、小麥散黑穗病、小麥腥黑穗病、玉米小斑病等病害?？膳c丙硫菌挫、 甲霜靈、嚷蟲胺、朽菌醋等復(fù)配，不僅可W防治病蟲害，還可W延緩抗性產(chǎn)生與發(fā)展。氣挫菌 苯胺于2011年在英國獲得首個全球登記，2012年又在美國和加拿大取得其登記批準(zhǔn)，在澳 大利亞及很多國家獲得登記，具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著氣挫菌苯胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的美國等國家制定 了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），2012年5月14 日，美國新增對農(nóng)藥戊苯化菌胺(Penflufen)的殘留限量要求，殘留限量要求規(guī)定如下：
歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記，沒有制定相應(yīng)的殘留限量 標(biāo)準(zhǔn)時，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動物源性食品中殘留限量均實行 O. Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對氣挫菌苯胺殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中氣挫菌苯胺殘留檢測方法，運(yùn)些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中氣挫菌苯胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價格較昂貴，很多檢測機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動 相或色譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費(fèi)比較長的時間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng) 藥殘留具有快速、簡便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可實現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS檢測方法的報道，由于糧谷、動物 源性食品等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，須建立凈化效果良好的樣品前處理方法和儀器分析 條件才能滿足檢測要求，因此，建立氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性和定量分析糧谷和 動物源性食品中氣挫菌苯胺殘留量的檢測方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，主要用于測定 糧谷、動物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量。
[0007] 為實現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/ MS測定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘或含1%乙酸的乙臘 溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鋼或乙酸鋼中的一種和無水硫酸儀，劇烈滿旋 Imin后離屯、。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至ImL左右，經(jīng)Cis/PSA固相萃取柱凈化，乙臘洗脫，收 集洗脫液，取部分洗脫液濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過 膜后，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氣挫菌苯胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（I)、（2)處理時，得樣品提取凈 化殘渣，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的氣挫菌苯胺系列標(biāo)準(zhǔn) 工作液。
[0011] (4)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-MS/MS進(jìn)行測定，測得樣品液中氣挫菌苯胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，得到樣品液中氣挫菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到樣品中氣 挫菌苯胺殘留量。若上機(jī)溶液中氣挫菌苯胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時加 入乙酸鋼鹽析。
[0014] 步驟(2)中進(jìn)行Cis/PSA固相萃取凈化，乙臘洗脫時，洗脫體積為6~8血。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:290°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氣氣;多反應(yīng)監(jiān)測掃描方式MRM，監(jiān)測參數(shù)為：
[0017] 步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應(yīng)用于糧谷、動物源性食品中氣挫菌苯 胺定性確證和定量檢測，平均回收率為81.0%~89.7%，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.8% ~8.8%，檢出限低于0.65yg/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全 及對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的氣挫菌苯胺標(biāo)液的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的氣挫菌苯胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線。
【具體實施方式】
[0023] 現(xiàn)W W下實施實例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21G虹離屯、機(jī)（日立Japan) ;MS3基本型旋滿混 合器（IKA，Germany);TurboVapLV型樣品自動濃縮儀（Caliper，USA);7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent,USA) ;Cis/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027]乙臘、丙酬、正己燒（HPLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany);無水 硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[00巧]標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購自德國化.E虹enstorfer公司。
[0029] 實施例1:小麥中氣挫菌苯胺殘留量的檢測
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱取經(jīng)充分混勻的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離屯、管中，加入20mL水復(fù)蘇30min 后，準(zhǔn)確加入20mL含1 %乙酸的乙臘溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無水硫酸 儀和2g乙酸鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、5min。離屯、后，取SmL乙臘提取液于40°C旋蒸或 氮?dú)獯抵两?，加入ImL乙臘滿旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙臘預(yù)洗Cis/PSA固相萃取柱，當(dāng)液面到達(dá)吸附劑的頂部時，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙臘洗涂試管，并將洗涂液移入SPE柱中，待溶液達(dá)到吸附劑頂部時，加入4mL 乙臘至柱子上進(jìn)行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，用乙臘定容至lOmL，取ImL凈化液 用氮?dú)獯蹈珊?，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑定容至ImL,過0.22皿濾膜后，待GC-MS/MS測定。
[0033] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制