一種檢測(cè)多巴胺的電化學(xué)發(fā)光傳感器及其制備與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供一種檢測(cè)多巴胺的電化學(xué)發(fā)光傳感器，所述電化學(xué)發(fā)光傳感器包括電極，所述電極包括基底、復(fù)合物層和修飾層，所述基底為導(dǎo)電材料，所述復(fù)合物層生長(zhǎng)于所述導(dǎo)電基底表面上，由魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺聚合而成，所述修飾層由修飾于復(fù)合物層表面的酪胺氧化酶構(gòu)成。本發(fā)明還提出所述電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備和應(yīng)用。本發(fā)明將具有生物活性的酶用于電化學(xué)發(fā)光分析，可以有效解決電化學(xué)發(fā)光方法選擇性差的問(wèn)題。本發(fā)明電化學(xué)傳感器的制備和檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，多巴胺檢測(cè)過(guò)程中不受尿酸和抗壞血酸等的影響，抗干擾性好。
【專利說(shuō)明】
一種檢測(cè)多巴胺的電化學(xué)發(fā)光傳感器及其制備與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種電化學(xué)發(fā)光傳感器及其制備和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]多巴胺是一種天然存在的兒茶酚胺，是哺乳動(dòng)物體內(nèi)一種重要的神經(jīng)傳導(dǎo)遞質(zhì)，對(duì)許多基本生理功能和腦高級(jí)功能至關(guān)重要。多巴胺對(duì)軀體具有非常重要的調(diào)節(jié)作用，它在體內(nèi)的濃度水平與帕金森氏綜合癥等神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)。鑒于多巴胺重要的生理功能，準(zhǔn)確測(cè)定其在體內(nèi)的含量對(duì)于疾病的預(yù)防治療變得尤為重要。
[0003]在線測(cè)定多巴胺濃度的方法有很多，包括化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)法、液相色譜結(jié)合質(zhì)譜、表面等離子體共振和表面增強(qiáng)拉曼等方法，例如專利CN201310479300.84用氧化鋅納米片球/泡沫石墨烯復(fù)合材料作為電極材料用于多巴胺檢測(cè)。這些手段在測(cè)試中存在的一個(gè)問(wèn)題是它們?cè)靸r(jià)較高，測(cè)量過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng)，并且有些測(cè)試需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理以及需要特殊的測(cè)試環(huán)境。
[0004]電化學(xué)發(fā)光分析方法作為化學(xué)發(fā)光與電化學(xué)相結(jié)合的分析方法，由于其發(fā)光反應(yīng)的空間區(qū)域集中在電極表面的附近區(qū)域，具有發(fā)光反應(yīng)的控制性強(qiáng)和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，因此受到分析工作者的廣泛關(guān)注。電化學(xué)發(fā)光分析具有設(shè)備搭建簡(jiǎn)單，檢測(cè)信號(hào)背景噪音低，高靈敏度以及較寬的檢測(cè)范圍等優(yōu)勢(shì)，可用來(lái)檢測(cè)葡萄糖，內(nèi)酰胺酶和DNA等高分子有機(jī)物，如專利CN201510482877.3—種納米復(fù)合材料的電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法，介紹了一種納米復(fù)合材料的電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法，將復(fù)合材料luminol-AuBSA-ant1-CEA沉積于金的電極表面，得到對(duì)抗原CEA具有靶向作用的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。專利CN201010271247.9—種電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器檢測(cè)赭曲霉毒素A的方法，將納米金粒子修飾到裸金電極表面，再在工作電極表面修飾上單鏈DNA，然后將標(biāo)記有異魯米諾(ABEI)的適配體修飾到電極表面，加入過(guò)氧化氫，檢測(cè)電發(fā)光信號(hào)，以檢測(cè)赭曲霉毒素A。專利CN201510594214.03提供了基于甲硫氨酸金納米團(tuán)簇的電致化學(xué)發(fā)光傳感器，以甲硫氨酸保護(hù)的金納米團(tuán)簇材料為發(fā)光體，過(guò)硫酸根離子為共反應(yīng)劑，將甲硫氨酸保護(hù)的金納米團(tuán)簇修飾在玻碳電極上，進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測(cè)試，并實(shí)現(xiàn)對(duì)多巴胺的檢測(cè)。該傳感器對(duì)對(duì)多巴胺檢測(cè)的線性范圍為0.1?4ymol/L和4?25ymol/L，檢測(cè)限為0.032ymol/L。
[0005]在電化學(xué)發(fā)光法探測(cè)多巴胺濃度的研究中，檢測(cè)傳感器的制備尤為重要。由于魯米諾和聚魯米諾具有電化學(xué)活性與高效的發(fā)光性能，其在電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)多巴胺濃度的應(yīng)用尤為廣泛。但是魯米諾和聚魯米諾的量子產(chǎn)率不高，檢測(cè)靈敏度較低。同時(shí)在活體環(huán)境中高濃度的抗壞血酸和尿酸與多巴胺共存，由于三者的氧化電位很相似，容易對(duì)多巴胺的檢測(cè)造成干擾。因此研究高靈敏度與高選擇性的電化學(xué)發(fā)光傳感器將大大推進(jìn)多巴胺檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明創(chuàng)新性地提出了一種用于多巴胺檢測(cè)的電化學(xué)發(fā)光傳感器，其目的在于克服現(xiàn)有多巴胺檢測(cè)方法造價(jià)昂貴、耗時(shí)長(zhǎng)、靈敏度低，選擇性差等缺點(diǎn)。針對(duì)以上問(wèn)題，本發(fā)明將魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺聚合，用硫酸聯(lián)苯胺調(diào)制魯米諾的光物理性能，以提高其在多巴胺檢測(cè)中的量子產(chǎn)率，增強(qiáng)發(fā)光強(qiáng)度，從而提高其檢測(cè)靈敏度。
[0007]本發(fā)明的另一目的是提出所述檢測(cè)多巴胺的電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法。
[0008]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提出所述電化學(xué)發(fā)光傳感器的應(yīng)用。
[0009]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的的技術(shù)方案為:
[00?0] —種檢測(cè)多巴胺的電化學(xué)發(fā)光傳感器，所述電化學(xué)發(fā)光傳感器包括電極，所述電極包括基底、復(fù)合物層和修飾層，所述基底為導(dǎo)電材料，所述復(fù)合物層生長(zhǎng)于所述導(dǎo)電基底表面上，由魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺聚合而成，所述修飾層由修飾于復(fù)合物層表面的酪胺氧化酶構(gòu)成。
[0011]由于酪胺氧化酶可以選擇性催化氧化多巴胺，原位生成的H2O2可以顯著增敏魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺的電化學(xué)發(fā)光，本發(fā)明將酪胺氧化酶固定于復(fù)合膜電極表面作為多巴胺的識(shí)別元素，將酶催化反應(yīng)的選擇性和聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)電化學(xué)發(fā)光方法的靈敏性結(jié)合在一起，構(gòu)成快速、靈敏、選擇性高的多巴胺濃度測(cè)定的傳感器。
[0012]本發(fā)明所述的電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法，包括步驟:
[0013]I)在磷酸緩沖鹽溶液中，配置魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺溶液，采用循環(huán)伏安法，在導(dǎo)電基底上制備聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合物層，
[0014]2)將上述電極取出，干燥，以緩沖溶液配置酪胺氧化酶溶液，用循環(huán)伏安法在所述步驟I)得到的聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合物層表面固定酪胺氧化酶修飾層。
[0015]優(yōu)選地，所述步驟I)中，磷酸緩沖鹽溶液的pH值為5.5?8.5，循環(huán)伏安法制備中，以導(dǎo)電基底為工作電極，鉑片為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，所述導(dǎo)電基底為FTO(摻雜氟的SnO2透明導(dǎo)電玻璃)或ITO(氧化銦錫)導(dǎo)電玻璃。
[0016]磷酸緩沖鹽溶液的pH值對(duì)聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜性能影響較小，在本發(fā)明所闡述的pH=5.5?8.5范圍內(nèi)制備均可得到聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜。
[0017]所述步驟I)中，緩沖鹽溶液中魯米諾的摩爾濃度為I?lOmmol/L，硫酸聯(lián)苯胺的摩爾濃度為1.5?15mmol/L。
[0018]更優(yōu)選地，魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺的摩爾比例為3:2?2:3。
[0019]其中，所述步驟I)中，在導(dǎo)電基底上制備聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合物層時(shí)，循環(huán)伏安掃描的電位范圍為-0.2V?1.0V，掃描圈數(shù)30?100圈，掃描速率80?200mV/s。
[0020]其中，所述步驟2)中，所述緩沖溶液為pH為6.5?7.5的磷酸鹽緩沖溶液，在所述緩沖溶液中含有濃度為0.05?2mg/mL的酪胺氧化酶。
[0021]進(jìn)一步地，所述步驟2)中，循環(huán)伏安掃描的電位范圍為-0.2V?0.6V，掃描圈數(shù)10?30圈，掃描速率80?150mV/s。
[0022]本發(fā)明還提出所述電化學(xué)發(fā)光傳感器的應(yīng)用。
[0023]應(yīng)用本發(fā)明提出的電化學(xué)發(fā)光傳感器檢測(cè)多巴胺的方法，將待測(cè)溶液的pH值調(diào)節(jié)為6.8?7.2，在避光條件下，將所述電化學(xué)發(fā)光傳感器的電極置于待測(cè)溶液中，施加方波電位，電位范圍為-0.5?-0.9V(vs.Ag/AgCl)，測(cè)量電極的響應(yīng)信號(hào)。
[0024]優(yōu)選地，方波電位可以選用以0V，-0.5?-0.9V(vs.Ag/AgCl)兩個(gè)階梯的電壓為一個(gè)循環(huán)，循環(huán)2?5次。
[0025]其中，用磷酸緩沖鹽或硼砂緩沖溶液調(diào)節(jié)待測(cè)溶液的pH值。
[0026]其中，待測(cè)溶液中多巴胺的含量在0.5nmo I /L以上。
[0027]本發(fā)明的有益效果在于:
[0028]基于電化學(xué)發(fā)光測(cè)試多巴胺濃度的方法，不同于傳統(tǒng)的使用魯米諾或聚魯米諾作為電化學(xué)發(fā)光傳感器，本發(fā)明選擇將魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺進(jìn)行電化學(xué)聚合，利用硫酸聯(lián)苯胺調(diào)制增強(qiáng)魯米諾的光物理性能，并用酪胺氧化酶作為多巴胺的識(shí)別物質(zhì)修飾于上述制備的聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合膜上，制成用于檢測(cè)多巴胺濃度的電化學(xué)發(fā)光傳感器。
[0029]本發(fā)明將具有生物活性的酶用于電化學(xué)發(fā)光分析，可以有效解決電化學(xué)發(fā)光方法選擇性差的問(wèn)題。本發(fā)明電化學(xué)傳感器的制備和檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，多巴胺檢測(cè)過(guò)程中不受尿酸和抗壞血酸等的影響，抗干擾性好。
【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1a為本發(fā)明實(shí)施例1A)中制備的聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜的AFM圖片；圖1b為本發(fā)明實(shí)施例1B)中制備的酪胺氧化酶-聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)，即本發(fā)明中的電化學(xué)發(fā)光傳感器的AFM圖片；
[0031]圖2a為本發(fā)明實(shí)施例1A)中采用循環(huán)伏安法制備的聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜的反應(yīng)過(guò)程曲線；圖2b為本發(fā)明實(shí)施例1B)中采用循環(huán)伏安法在發(fā)明實(shí)施例1A)中聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜表面固定酪胺氧化酶的反應(yīng)過(guò)程曲線；
[0032]圖3a為本發(fā)明實(shí)施例2中電化學(xué)發(fā)光傳感器檢測(cè)不同多巴胺濃度時(shí)的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)；圖3b為本發(fā)明實(shí)施例2中傳感器的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度隨多巴胺濃度的變化及線性擬合情況；
[0033]圖4為本發(fā)明實(shí)施例3中的抗干擾測(cè)試結(jié)果，具體為傳感器在不同溶液中的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度，其中DA為多巴胺，AA為抗壞血酸，UA為尿酸。
[0034]圖5為本發(fā)明提出電化學(xué)傳感器結(jié)構(gòu)示意圖。圖中，I為導(dǎo)電基底，2為復(fù)合物層，3為修飾層。
【具體實(shí)施方式】
[0035]現(xiàn)以以下最佳實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0036]如無(wú)特殊說(shuō)明，實(shí)施例中采用的手段均為本領(lǐng)域常用的技術(shù)手段。
[0037]實(shí)施例1:
[0038]本實(shí)施例中，電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法包括如下步驟[0039 ] A)聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜的制備
[0040]配置磷酸緩沖鹽溶液，通過(guò)改變0.1mol/L NaH2PO4和0.lmol/L Na2HPO4水溶液的比例調(diào)節(jié)磷酸緩沖鹽溶液的pH值為5.7。試驗(yàn)結(jié)果表明，溶液pH值對(duì)聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜性能影響較小，在pH = 5.5?8.5范圍內(nèi)制備均可得到聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜;將魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺加入上述磷酸鹽緩沖溶液中配置成反應(yīng)溶液，具體濃度為8mmol/L魯米諾和12mmol/L硫酸聯(lián)苯胺，選擇FTO導(dǎo)電玻璃作基底，以FTO為工作電極，鈾片為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，采用循環(huán)伏安電化學(xué)聚合法將上述魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺聚合到FTO基底上，循環(huán)伏安參數(shù)設(shè)置為掃描步長(zhǎng)100mV/S，掃描范圍-0.2V?1.0V，循環(huán)次數(shù)40，聚合過(guò)程的曲線如圖2a所示。將上述復(fù)合膜清洗，干燥，得到聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜，其AFM圖像如圖1 a所示(圖1的坐標(biāo)單位為μπι)。
[0041]B)酪胺氧化酶的固定
[0042]配置磷酸緩沖鹽溶液，通過(guò)改變0.1mol/L NaH2PO4和0.lmol/L Na2HPO4水溶液的比例調(diào)節(jié)磷酸緩沖鹽溶液的PH值為7，用所述磷酸緩沖鹽溶液將酪胺氧化酶以0.lmg/mL的比例配成反應(yīng)液。以步驟A)中制得的生長(zhǎng)在FTO表面的聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)膜為基底即工作電極，鉑片為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，采用循環(huán)伏安法將上述酪胺氧化酶固定在基底上，具體循環(huán)伏安參數(shù)設(shè)置為掃描步長(zhǎng)100mV/S，掃描范圍-0.2V?0.6V，循環(huán)次數(shù)20，反應(yīng)曲線如圖2b所示。將樣品清洗，干燥，得到復(fù)合物膜，即電化學(xué)發(fā)光傳感器，其AFM圖像如圖1b所示。
[0043]制得的電極結(jié)構(gòu)如圖5，導(dǎo)電基底I為FTO導(dǎo)電玻璃，復(fù)合物層2是由魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺聚合而成，修飾層3由修飾于復(fù)合物層表面的酪胺氧化酶構(gòu)成。
[0044]實(shí)施例2
[0045]實(shí)施例1制得的電化學(xué)發(fā)光傳感器用于檢測(cè)多巴胺濃度的方法包括如下步驟:
[0046]測(cè)試在室溫條件下進(jìn)行，測(cè)試前，配置磷酸緩沖鹽溶液，通過(guò)改變0.lmol/LNaH2PO4和0.lmol/L Na2HPO4水溶液的比例調(diào)節(jié)磷酸緩沖鹽溶液的pH值為7，在所述磷酸緩沖鹽溶液中加入多巴胺使其分別濃度為0.51111101/1，11111101/1，101111101/1和201111101/1，以實(shí)施例I中制備的電化學(xué)發(fā)光傳感器為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，Ag/AgCl (飽和KCl)為參比電極，將上述體系置于微弱發(fā)光儀的暗箱中，對(duì)以上體系施加如下方波電位:(13s，0V)和(4s，-0.85V)(Vs.Ag/AgCl)，兩個(gè)方波為一個(gè)循環(huán)，工作四個(gè)循環(huán)。測(cè)試過(guò)程中首先對(duì)
0.1mol/L，pH = 7的磷酸緩沖鹽溶液進(jìn)行測(cè)試，以得到空白信號(hào)，然后將上述磷酸緩沖鹽溶液換成上述四種濃度的多巴胺溶液，對(duì)以上體系進(jìn)行光電化學(xué)發(fā)光測(cè)試，得到樣品信號(hào)，最終得到傳感器的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度為樣品信號(hào)減去空白信號(hào)。圖3a所示為所述電化學(xué)發(fā)光傳感器對(duì)不同濃度的多巴胺響應(yīng)信號(hào)，隨著多巴胺濃度的增加，發(fā)光信號(hào)也隨之增強(qiáng)，該傳感器對(duì)多巴胺的檢測(cè)限達(dá)到了0.5nmol/L。將多巴胺濃度與電化學(xué)發(fā)光信號(hào)作圖，并進(jìn)行線性擬合(圖3b，相關(guān)系數(shù)R = 0.9991)，圖3的縱坐標(biāo)為測(cè)試過(guò)程中電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，在lnmol/L?20nmol/L范圍內(nèi)傳感器的發(fā)光強(qiáng)度與多巴胺濃度呈現(xiàn)很好的線性關(guān)系。
[0047]實(shí)施例3
[0048]本發(fā)明提出的電化學(xué)發(fā)光傳感器用于檢測(cè)多巴胺在高濃度尿酸和抗壞血酸存在條件下的選擇性測(cè)試如下:
[0049]測(cè)試在室溫條件下進(jìn)行，測(cè)試前，配置磷酸緩沖鹽溶液，通過(guò)改變0.lmol/LNaH2PO4和0.lmol/L Na2HPO4水溶液的比例調(diào)節(jié)磷酸緩沖鹽溶液的pH值為7，在溶液中加入lnmol/L多巴胺，100nmol/L尿酸和100nmol/L抗壞血酸配成干擾性測(cè)試溶液，以實(shí)施例1中制備的電化學(xué)發(fā)光傳感器為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，Ag/AgCl (飽和KCl)為參比電極，將上述體系置于微弱發(fā)光儀的暗箱中，對(duì)其施加如下方波電位:(13s，0V)和(4s，-0.85V)(vs.Ag/AgCl)，測(cè)試四個(gè)循環(huán)。首先我們對(duì)0.1mol/L，pH=7的磷酸緩沖鹽溶液進(jìn)行測(cè)試，以得到空白信號(hào)，然后將上述磷酸緩沖鹽溶液換成之前配置的干擾性測(cè)試溶液，對(duì)上述體系進(jìn)行測(cè)試，得到樣品信號(hào)，最終得到的傳感器的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度為樣品信號(hào)減去空白信號(hào)。
[0050]圖4反映了干擾性測(cè)試結(jié)果，發(fā)現(xiàn)，在100倍于多巴胺濃度的條件下，尿酸和抗壞血酸的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于多巴胺，兩種干擾性物質(zhì)可以忽略，由此得出所制備的電化學(xué)發(fā)光傳感器對(duì)多巴胺檢測(cè)具有很好的選擇性。
[0051]以上的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種檢測(cè)多巴胺的電化學(xué)發(fā)光傳感器，所述電化學(xué)發(fā)光傳感器包括電極，所述電極包括基底、復(fù)合物層和修飾層，其特征在于，所述基底為導(dǎo)電材料，所述復(fù)合物層生長(zhǎng)于所述導(dǎo)電基底表面上，由魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺聚合而成，所述修飾層由修飾于復(fù)合物層表面的酪胺氧化酶構(gòu)成。2.權(quán)利要求1所述的電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法，其特征在于，包括步驟: 1)在磷酸緩沖鹽溶液中，配置魯米諾和硫酸聯(lián)苯胺溶液，采用循環(huán)伏安法，在導(dǎo)電基底上制備聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合物層， 2)將上述電極取出，干燥，以緩沖溶液配置酪胺氧化酶溶液，用循環(huán)伏安法在所述步驟I)得到的聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合物層表面固定酪胺氧化酶修飾層。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟I)中，磷酸緩沖鹽溶液的pH值為5.5?8.5，循環(huán)伏安法制備中，以導(dǎo)電基底為工作電極，鉑片為對(duì)電極，飽和甘汞電極為參比電極，所述導(dǎo)電基底為FTO或ITO導(dǎo)電玻璃。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟I)中，緩沖鹽溶液中魯米諾的摩爾濃度為I?10mmol/L，硫酸聯(lián)苯胺的摩爾濃度為1.5?15mmol/L。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟I)中，在導(dǎo)電基底上制備聚(魯米諾-硫酸聯(lián)苯胺)復(fù)合物層時(shí)，循環(huán)伏安掃描的電位范圍為-0.2V?1.0V，掃描圈數(shù)30?100圈，掃描速率80?200mV/s。6.根據(jù)權(quán)利要求2?5任一所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中，所述緩沖溶液為pH為6.5?7.5的磷酸鹽緩沖溶液，在所述緩沖溶液中含有濃度為0.05?2mg/mL的酪胺氧化酶。7.根據(jù)權(quán)利要求2?5任一所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中，循環(huán)伏安掃描的電位范圍為-0.2V?0.6V，掃描圈數(shù)10?30圈，掃描速率80?150mV/s。8.應(yīng)用權(quán)利要求1所述電化學(xué)發(fā)光傳感器檢測(cè)多巴胺的方法，其特征在于，將待測(cè)溶液的PH值調(diào)節(jié)為6.8?7.2，在避光條件下，將所述電化學(xué)發(fā)光傳感器的電極置于待測(cè)溶液中，施加方波電位，電位范圍為-0.5?-0.9V(vs.Ag/AgCl)，測(cè)量電極的響應(yīng)信號(hào)。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述電化學(xué)發(fā)光傳感器檢測(cè)多巴胺的方法，其特征在于，用磷酸緩沖鹽或硼砂緩沖溶液調(diào)節(jié)待測(cè)溶液的PH值。10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述電化學(xué)發(fā)光傳感器檢測(cè)多巴胺的方法，其特征在于，待測(cè)溶液中多巴胺的含量在0.5nmol/L以上。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK105973876SQ201610286963
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月3日
【發(fā)明人】賀濤, 王艷杰, 張雪華, 張?chǎng)?
【申請(qǐng)人】國(guó)家納米科學(xué)中心