一種三疣梭子蟹家系高效選育方法
【專利摘要】一種三疣梭子蟹家系高效選育方法，屬于水產(chǎn)育種領(lǐng)域，所述方法為收集三疣梭子蟹不同野生地理群體，通過人工控制定向交尾技術(shù)完成親蟹交配，交尾后取雄蟹大螯肌肉?80℃超低溫保存，交尾雌蟹經(jīng)過越冬、排幼，構(gòu)建家系，排幼后取雌蟹大螯肌肉?80℃超低溫保存；家系幼體發(fā)育至II期幼蟹時，轉(zhuǎn)移至室外養(yǎng)殖，每個家系等比例混合放苗建立測試群體，同時每個家系分別建立保種群體；120日齡時，測量測試群每個個體生長性狀，然后利用篩選的微衛(wèi)星引物，對個體進行家系鑒定，統(tǒng)計家系成活率、生長性狀；根據(jù)家系成活率、生長性狀，計算綜合指數(shù)，進行家系選育，需要留種家系，從保種群內(nèi)，進行家系內(nèi)個體選擇，通過室內(nèi)人工定向交尾技術(shù)完成親蟹交配，實現(xiàn)家系精準選育。
【專利說明】
-種Ξ巧梭子蟹家系高效選育方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于水產(chǎn)育種領(lǐng)域，具體地設(shè)及一種Ξ痛梭子蟹家系高效選育方法。
【背景技術(shù)】
[0002] Ξ痛梭子蟹（Portunustri化berculatus)是一種重要的海洋經(jīng)濟動物，目前養(yǎng)殖 面積40余萬畝，產(chǎn)量達11萬噸，已成為我國海水養(yǎng)殖主導種類之一。目前，Ξ痛梭子蟹養(yǎng)殖 業(yè)主要還是依靠捕拱野生蟹來滿足生產(chǎn)育苗的需要，運種狀態(tài)限制了其發(fā)展。一方面，運些 捕拱的野生Ξ痛梭子蟹可能攜帶感染性病毒，導致養(yǎng)殖成活率極低(5-10%)，給產(chǎn)業(yè)和區(qū) 域經(jīng)濟的發(fā)展造成重大損失;另一方面，生長速度是重要的經(jīng)濟性狀，大規(guī)格Ξ痛梭子蟹的 經(jīng)濟價值明顯要高。因此培育生長速度快、成活率高的優(yōu)良品種是實現(xiàn)Ξ痛梭子蟹產(chǎn)業(yè)的 可持續(xù)性發(fā)展的重要保障。傳統(tǒng)群體選育無法兼顧生長速度和成活率兩個性狀，由于梭子 蟹沒有合適的個體標記，也無法通過評估個體育種值進行選育。根據(jù)物種特性及目前研究 進展，采用家系的選育方式效果更佳，但由于個體標記沒有解決，家系不能混養(yǎng)，必須在不 同的網(wǎng)格或池塘中單獨養(yǎng)殖，在養(yǎng)殖過程中，密度是一個動態(tài)變化值，水質(zhì)因子也不盡相 同，因此不能進行生長性狀精確評估;而如果采用傳統(tǒng)的分子標記輔助育種方式，首先進行 家系混養(yǎng)，然后再用分子標記進行個體甄別，運樣可W精確評估家系生長、存活性狀，但存 在如下弊端:a、個體較多，工作量巨大;b、分子標記個體甄別實驗需要提取個體肌肉或其他 組織，而蟹類機體損傷后，很容易感染死亡，導致傳代困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種Ξ痛梭子蟹家系高效選育方法，本選育方 法，收集Ξ痛梭子蟹不同野生地理群體，通過人工控制定向交尾技術(shù)完成親蟹交配，交尾后 取雄蟹大馨肌肉-80°C超低溫保存，交尾雌蟹經(jīng)過越冬、排幼，構(gòu)建家系，排幼后取雌蟹大馨 肌肉-80°C超低溫保存;家系幼體發(fā)育至II期幼蟹時，轉(zhuǎn)移至室外養(yǎng)殖，每個家系等比例混 合放苗建立測試群體，同時每個家系分別建立保種群體；120日齡時（臨近交尾），測量測試 群每個個體生長性狀，并分別編號、提取DNA，然后利用篩選的微衛(wèi)星引物，對個體進行家系 鑒定，統(tǒng)計家系成活率、生長性狀;根據(jù)家系成活率、生長性狀進行家系選育，需要留種家 系，從保種群內(nèi)，進行家系內(nèi)個體選擇，通過室內(nèi)人工定向交尾技術(shù)完成親蟹交配，實現(xiàn)家 系精準選育。
[0004] 本發(fā)明是按照W下操作技術(shù)方案完成的：
[0005] -種Ξ痛梭子蟹家系高效選育方法，包括W下步驟：
[0006] (1)收集我國不同地理群體的Ξ痛梭子蟹，進行遺傳結(jié)構(gòu)評估，構(gòu)建基礎(chǔ)群體；
[0007] (2)不同群體中分別挑選親蟹，通過配合力測試，制定交配方案；
[000引（3)采用室內(nèi)人工定向交尾技術(shù)，完成親蟹交配，交配結(jié)束后，取雄蟹大馨肌肉，- 80°C超低溫冰箱保存;經(jīng)過越冬、排幼，取雌蟹大馨肌肉，-80°C超低溫冰箱保存;標準化苗 種培育，構(gòu)建家系，幼體發(fā)育至II期幼蟹時，轉(zhuǎn)移室外建立家系測試群體和保種群體，所述 的測試群體:每個家系取300只II期幼蟹室外混合養(yǎng)殖，所述的保種群體:每個家系取2000 只II期幼蟹，分別放在獨立的圍格中養(yǎng)殖，每個圍格的環(huán)境盡量一致；120日齡時，收集測試 群體存活個體，進行個體編號、測量生長性狀，然后取每個個體大馨肌肉；提取親本、子代 DNA，利用微衛(wèi)星技術(shù)，進行家系鑒定，統(tǒng)計家系成活率及生長性狀;根據(jù)家系生長、成活率 指標，計算綜合指數(shù)，進行家系選留；選留家系，利用保種群體，進行家系內(nèi)個體選擇，通過 室內(nèi)人工定向交尾技術(shù)完成親蟹交配、留種；
[0009] (4)次年春天每個家系選擇抱卵良好的親蟹，進行標準化育苗與養(yǎng)殖，采用（3)的 選育方法繼續(xù)家系選育；
[0010] (5)對篩選出的家系進行小規(guī)模示范養(yǎng)殖，確定和評價選育家系的養(yǎng)殖效益。
[0011] 進一步，所述的步驟(2)具體為從備選親蟹中挑選親蟹，采用人工定向交尾技術(shù)建 立家系交配組合，每種交配組合3組，雌雄比例為3:1，對建立的家系進行標準化育苗與養(yǎng) 殖，各家系苗種培育密度、養(yǎng)殖密度相同。
[0012] 進一步，所述的步驟(3)收獲時測量測試群體每個個體的生長指標;采用微衛(wèi)星技 術(shù)，進行親子鑒定，統(tǒng)計家系成活率；W全部家系平均值作對照，計算每個家系生長、成活率 提高值，然后生長、成活率提高值分別加權(quán)70%、30%，計算綜合指數(shù)，綜合指數(shù)>0的家系 為選留家系；自每個選留家系保種群體中，選取健康交尾雌蟹:個體大、肥滿度高、無機械損 傷；
[0013] 進一步，所述的步驟(4)中每個篩選家系的越冬親蟹為雌蟹20只。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果：
[0015] 1、本發(fā)明W生長速度、成活率2個指標，進行Ξ痛梭子蟹家系選育，綜合評價家系 經(jīng)濟性狀，選育結(jié)果既提高收獲時梭子蟹規(guī)格，又提高養(yǎng)殖成活率，從而大幅度提高養(yǎng)殖效 益，同時避免單一性狀選育造成的偏差。
[0016] 2、目前Ξ痛梭子蟹個體標記尚未解決，不能依靠物理標記混養(yǎng)，而通過分子標記 進行混養(yǎng)個體家系鑒別，則導致工作量大、個體損傷;本發(fā)明在Ξ痛梭子蟹選育過程中，每 個家系設(shè)置測試群體和保種群體，既能通過家系混養(yǎng)獲得精確數(shù)據(jù)，又能得到無損傷留種 個體，實現(xiàn)了家系高效選育。另外可W為擬穴青蟹、中華絨馨蟹等個體標記未解決的甲殼類 新品種培育提供一種新思路。
[0017] 3、通過小規(guī)模示范養(yǎng)殖結(jié)果表明，篩選出的Ξ痛梭子蟹家系具明顯的高產(chǎn)出效 果，具有良好的推廣和應用價值，經(jīng)小規(guī)模的示范測試和比較試驗，選育1代后成活率、生長 速度均有顯著提高，平均畝產(chǎn)量在65kgW上，上市時梭子蟹養(yǎng)殖產(chǎn)量提高10% W上。
【具體實施方式】
[0018] 下面通過實施例詳細敘述本發(fā)明的技術(shù)方法：
[0019] -種Ξ痛梭子蟹家系高效選育方法，具體包括W下步驟：
[0020] (1)收集了萊州灣、鴨綠江口、海州灣、舟山4個Ξ痛梭子蟹野生群體組建基礎(chǔ)群， 每個群體的雌、雄蟹數(shù)量均在80只W上。對4個群體的14項形態(tài)學指標進行測量，綜合運用 生物學性狀、免疫酶學指標、同工酶電泳、A化P分析等手段對4個不同地理群體進行群體間 遺傳結(jié)構(gòu)研究，發(fā)現(xiàn)Ξ痛梭子蟹遺傳多樣性較高，種質(zhì)資源處于較好狀態(tài);選擇體重> 250g 的個體構(gòu)建基礎(chǔ)群體，備選親蟹符合W下特征:健康、活力強、體表光潔、附肢齊全、無機械 損傷的個體。
[0021] (2)從備選親蟹中挑選優(yōu)良個體，根據(jù)配合力測試結(jié)果，采用人工定向交尾技術(shù)建 立家系交配組合，每種交配組合3組，雌雄比例為3:1，交尾結(jié)束后，取雄蟹大馨肌肉保存于 超低溫冰箱中備用，經(jīng)過越冬，次年春天，每個雌蟹在1獨立水泥池中排幼，建立家系，對建 立的家系進行標準化育苗，排幼結(jié)束后，取雌蟹大馨肌肉存于超低溫冰箱中備用。
[0022] (3)親蟹同一天排幼8只，建立8個家系，發(fā)育至II期幼蟹時，每個家系取300只混合 放入1個600m2室外養(yǎng)殖池中養(yǎng)殖，構(gòu)建測試群體，同步建立備份；另外每個家系取2400只， 分別放入1個600m2室外養(yǎng)殖池中養(yǎng)殖，構(gòu)建保種群體；120日齡（臨近交尾），測量測試群體 每個個體體重，并進行編號取肌肉樣品，利用10對多態(tài)性較好的微衛(wèi)星引物進行家系鑒定， 根據(jù)鑒定結(jié)果進行每個家系生長、成活率指標統(tǒng)計，W8個家系平均值作為對照，計算每個 家系生長、成活率提高值，分別加權(quán)70%、30%計算綜合指標，綜合指標>0的3個家系為選 留家系，每個留種家系自保種群體中選擇40只親蟹(雌雄3:1)進行室內(nèi)交尾。
[0023]
[0024] (4)交配結(jié)束后，取雌蟹大馨肌肉超低溫冰箱保存;每個家系選取20只交尾雌蟹進 行越冬;次年春天，每個家系挑選抱卵良好的親蟹10只，單獨進行標準化育苗，共建立25個 全同胞家系，同步建立野生對照，養(yǎng)殖及選育同步驟(3);留種家系按照步驟(3)中的方式進 行親蟹交尾、越冬。
[0025] 對越冬成功的親蟹單獨進行苗種培育，分別在中國水產(chǎn)科學研究院下營增殖實驗 站、日照開航水產(chǎn)有限公司2個地區(qū)進行小規(guī)模養(yǎng)殖示范，采用普通商品苗種作為對照組。 其中中國水產(chǎn)科學研究院下營增殖實驗站示范面積100畝，平均畝產(chǎn)65kg，實現(xiàn)產(chǎn)值50余萬 元，與對照組相比養(yǎng)殖產(chǎn)量提高10% W上；日照開航水產(chǎn)有限公司示范養(yǎng)殖面積120畝，收 獲時平均畝產(chǎn)68kg，實現(xiàn)產(chǎn)值65萬元，與對照組相比養(yǎng)殖產(chǎn)量提高10% W上。
【主權(quán)項】
1. 一種三疣梭子蟹家系高效選育方法，其特征在于它包括以下步驟： (1) 收集我國不同地理群體的三疣梭子蟹，進行遺傳結(jié)構(gòu)評估，構(gòu)建基礎(chǔ)群體； (2) 不同群體中分別挑選親蟹，通過配合力測試，制定交配方案； (3) 采用室內(nèi)人工定向交尾技術(shù)，完成親蟹交配，交配結(jié)束后，取雄蟹大螯肌肉，-80°C 超低溫冰箱保存;經(jīng)過越冬、排幼，取雌蟹大螯肌肉，-80°C超低溫冰箱保存;標準化苗種培 育，構(gòu)建家系，幼體發(fā)育至II期幼蟹時，轉(zhuǎn)移室外建立家系測試群體和保種群體，所述的測 試群體:每個家系取300只II期幼蟹室外混合養(yǎng)殖，所述的保種群體:每個家系取2000只II 期幼蟹，分別放在獨立的圍格中養(yǎng)殖，每個圍格的環(huán)境盡量一致;120日齡時，收集測試群體 存活個體，進行個體編號、測量生長性狀，然后取每個個體大螯肌肉；提取親本、子代DNA，利 用微衛(wèi)星技術(shù)，進行家系鑒定，統(tǒng)計家系成活率及生長性狀;根據(jù)家系生長、成活率指標，計 算綜合指數(shù)，進行家系選留；選留家系，利用保種群體，進行家系內(nèi)個體選擇，通過室內(nèi)人工 定向交尾技術(shù)完成親蟹交配、留種； (4) 次年春天每個家系選擇抱卵良好的親蟹，進行標準化育苗與養(yǎng)殖，采用（3)的選育 方法繼續(xù)家系選育； (5) 對篩選出的家系進行小規(guī)模示范養(yǎng)殖，確定和評價選育家系的養(yǎng)殖效益。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三疣梭子蟹家系高效選育方法，其特征在于所述的步驟 (2) 具體為從備選親蟹中挑選親蟹，采用人工定向交尾技術(shù)建立家系交配組合，每種交配組 合3組，雌雄比例為3:1，對建立的家系進行標準化育苗與養(yǎng)殖，各家系苗種培育密度、養(yǎng)殖 密度相同。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三疣梭子蟹家系高效選育方法，其特征在于所述的步驟 (3) 收獲時測量測試群體每個個體的生長指標;采用微衛(wèi)星技術(shù)，進行親子鑒定，統(tǒng)計家系 成活率；以全部家系平均值作對照，計算每個家系生長、成活率提高值，然后生長、成活率提 尚值分別加權(quán)70%、30%，計算綜合指數(shù)，綜合指數(shù)>0的家系為選留家系；自每個選留家系 保種群體中，選取健康交尾雌蟹:個體大、肥滿度高、無機械損傷。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三疣梭子蟹家系高效選育方法，其特征在于所述的步驟 (4) 中每個篩選家系的越冬親蟹為雌蟹20只。
【文檔編號】A01K61/00GK105918173SQ201610286759
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年5月3日
【發(fā)明人】高保全, 劉萍, 李健, 任憲云, 呂建建, 孟憲亮
【申請人】中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所