本發(fā)明屬于食用菌菌種的制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種雙孢菇液體菌種的制備方法。
背景技術(shù)：
雙孢菇又稱白蘑菇或蘑菇，是世界上栽培面積最大、產(chǎn)量最多，消費(fèi)最普遍的一種食用菌。雙孢菇色澤潔白、質(zhì)地柔嫩、營養(yǎng)豐富、味道鮮美，含有豐富的蛋白質(zhì)、多種氨基酸和維生素及礦物質(zhì)，不僅是一檔高檔的菌類蔬菜，而且具有清熱解毒、消炎潤肺、健腦、降低膽固醇等多種保健功能，是理想的保健食品。
隨著木屑等價(jià)格的上漲，培養(yǎng)固體菌種的價(jià)格也隨之上漲，且固體菌種培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，發(fā)菌速度慢。由于菌絲生長(zhǎng)旺盛、菌齡短、出菇氣，轉(zhuǎn)潮快，質(zhì)量與產(chǎn)量明顯高于傳統(tǒng)的生產(chǎn)方式的液體菌種慢慢贏得了市場(chǎng)和效益。目前，雙孢菇液體菌種培養(yǎng)過程中存在培養(yǎng)基各成分比例不合理、容易滋生雜菌等問題，因此，研發(fā)一種能夠高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的生產(chǎn)雙孢菇的液體菌種具有大的市場(chǎng)價(jià)值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種雙孢菇液體菌種的制備方法。
本發(fā)明為了實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案為：
本發(fā)明提供了一種雙孢菇液體菌種的制備方法，包括以下步驟：
（1）將雙孢菇母種接種到一級(jí)斜面培養(yǎng)基上，24-26℃下培養(yǎng)5-6d，得雙孢菇斜面菌種，劃分成斜面菌種塊；
（2）將5-6塊一級(jí)杏鮑菇斜面菌種塊接種到一級(jí)培養(yǎng)基中，在溫度20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)1-2d，然后在20-22℃下靜置培養(yǎng)1-2d，得一級(jí)培養(yǎng)液；
（3）將一級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量10%的接種量接種到二級(jí)培養(yǎng)基中，在20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)2-3d，得二級(jí)培養(yǎng)液；
（4）將二級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量15%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25℃下培養(yǎng)4-5d，通氣量2.5m3/h，發(fā)酵結(jié)束后即得雙孢菇液體菌種；
進(jìn)一步的，所述斜面培養(yǎng)基為每1000mL純凈水中加入8-10mL綠茶提取液，20-28g玉米淀粉，1-2g瓊脂，0.2-0.5g酪蛋白水解肽，0.8-1.2g蛋白胨，0.2-0.5g磷酸二氫鉀，攪拌均勻，殺菌處理后冷卻即得。
進(jìn)一步的，所述一級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入15-20mL綠茶提取液，蛋白胨7-10g，可溶性淀粉50-55g，甘油5-8g，硫酸鎂0.2-0.8g，普魯蘭多糖0.2-0.3g，蔗糖8-12g，鹽酸硫胺素0.06-0.08g。
進(jìn)一步的，所述二級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入20-25mL綠茶提取液，蛋白胨30-40g，麩皮45-60g，蔗糖18-20g，磷酸二氫鉀1.5-2.0g，卡波姆0.06-0.08g。
進(jìn)一步的，所述發(fā)酵培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入酵母膏12-15g，15-20g蔗糖，8-10g葡萄渣，10-15mL綠茶提取液，40-50g蛋白胨，檸檬酸鋅0.02-0.05g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.8-1.2g。
本發(fā)明所使用的綠茶提取液采用以下方法制備而成：將新鮮采摘的綠茶葉加入食鹽后研磨，然后用紗布包住研磨后的綠茶，然后加入占綠茶葉重量8倍的水，加入麥飯石粉，聚乙二醇，加熱至90-100℃，保溫?cái)嚢?h，過濾得濾液，將濾液濃縮至原體積的一半即可。
進(jìn)一步的，所述食鹽的加入量占綠茶葉重量的1%；所述麥飯石粉的加入量占加入水的重量的5%。
進(jìn)一步的，聚乙二醇的加入量占綠茶葉重量的1.5%。
本發(fā)明所述的斜面菌種塊的長(zhǎng)寬均為2cm。
本發(fā)明所使用的葡萄渣為葡萄果汁等加工后的皮渣廢棄物，主要是葡萄皮、種子組成。
本發(fā)明培養(yǎng)基中含有的綠茶提取液，在制備過程中，首先加入食鹽進(jìn)行研磨，然后進(jìn)行提取，能夠加快綠茶中有效物質(zhì)的溶出，麥飯石粉中含有大量的微量元素，且對(duì)細(xì)菌具有強(qiáng)的吸附作用，通過在培養(yǎng)基中加入綠茶提取液，能夠防止雜菌的產(chǎn)生，未經(jīng)發(fā)酵的綠茶含有茶多酚，兒茶素、咖啡堿、氨基酸等營養(yǎng)成分，加快雙孢菇的出菇速度。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為：
（1）本發(fā)明提供的各種培養(yǎng)基的配方能夠提供雙孢菇菌種生長(zhǎng)過程中所需的營養(yǎng)成分，縮短雙孢菇液體菌種的生長(zhǎng)周期，增強(qiáng)菌種活力；
（2）本發(fā)明通過加入少量的綠茶提取液，能夠有效的防治雙孢菇生長(zhǎng)過程中的霉菌、雜菌等的產(chǎn)生，且促進(jìn)雙孢菇菌種的生長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)速度快，品質(zhì)好，純度高；
（3）本發(fā)明提供的方法低碳、綠色環(huán)保，產(chǎn)量高。
具體實(shí)施方式
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。
本發(fā)明所使用綠茶提取液采用以下方法制備而成：將新鮮采摘的綠茶葉加入占綠茶葉重量1%的食鹽后研磨（研磨至無明顯片狀即可），然后用紗布包住研磨后的綠茶，然后加入占綠茶葉重量8倍的水，加入占水的重量5%的麥飯石粉，占綠茶葉重量1.5%的聚乙二醇，加熱至90-100℃，保溫?cái)嚢?h，過濾得濾液，將濾液濃縮至原體積的一半即可。
實(shí)施例1
一種雙孢菇液體菌種的制備方法，包括以下步驟：
（1）將雙孢菇母種接種到一級(jí)斜面培養(yǎng)基上，24-26℃下培養(yǎng)5d，得雙孢菇斜面菌種，劃分成長(zhǎng)寬均為2cm的斜面菌種塊；
所述斜面培養(yǎng)基為每1000mL純凈水中加入8mL綠茶提取液，25g玉米淀粉， 2g瓊脂，0.5g酪蛋白水解肽，0.8g蛋白胨，0.35g磷酸二氫鉀，攪拌均勻，殺菌處理后冷卻即得；
（2）將5-6塊一級(jí)杏鮑菇斜面菌種塊接種到一級(jí)培養(yǎng)基中，在溫度20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)2d，然后在20-22℃下靜置培養(yǎng)1d，得一級(jí)培養(yǎng)液；
所述一級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入20mL綠茶提取液，蛋白胨10g，可溶性淀粉50g，甘油7g，硫酸鎂0.6g，普魯蘭多糖0.2g，蔗糖12g，鹽酸硫胺素0.06g；
（3）將一級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量10%的接種量接種到二級(jí)培養(yǎng)基中，在20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)2d，得二級(jí)培養(yǎng)液；
所述二級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入23mL綠茶提取液，蛋白胨30g，麩皮56g，蔗糖18g，磷酸二氫鉀1.5g，卡波姆0.08g；
（4）將二級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量15%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25℃下培養(yǎng)5d，通氣量2.5m3/h，發(fā)酵結(jié)束后即得雙孢菇液體菌種；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入酵母膏12g，15g蔗糖，10g葡萄渣，12mL綠茶提取液，50g蛋白胨，檸檬酸鋅0.03g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1.2g。
實(shí)施例2
一種雙孢菇液體菌種的制備方法，包括以下步驟：
（1）將雙孢菇母種接種到一級(jí)斜面培養(yǎng)基上，24-26℃下培養(yǎng)6d，得雙孢菇斜面菌種，劃分成長(zhǎng)寬均為2cm的斜面菌種塊；
所述斜面培養(yǎng)基為每1000mL純凈水中加入9mL綠茶提取液，20g玉米淀粉，1g瓊脂，0.3g酪蛋白水解肽，1.0g蛋白胨，0.5g磷酸二氫鉀，攪拌均勻，殺菌處理后冷卻即得；
（2）將5-6塊一級(jí)杏鮑菇斜面菌種塊接種到一級(jí)培養(yǎng)基中，在溫度20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)1d，然后在20-22℃下靜置培養(yǎng)2d，得一級(jí)培養(yǎng)液；
所述一級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入15mL綠茶提取液，蛋白胨9g，可溶性淀粉53g，甘油5g，硫酸鎂0.7g，普魯蘭多糖0.3g，蔗糖8g，鹽酸硫胺素0.07g；
（3）將一級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量10%的接種量接種到二級(jí)培養(yǎng)基中，在20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)2d，得二級(jí)培養(yǎng)液；
所述二級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入20mL綠茶提取液，蛋白胨35g，麩皮60g，蔗糖19g，磷酸二氫鉀1.8g，卡波姆0.07g；
（4）將二級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量15%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25℃下培養(yǎng)5d，通氣量2.5m3/h，發(fā)酵結(jié)束后即得雙孢菇液體菌種；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入酵母膏13g，18g蔗糖，9g葡萄渣，15mL綠茶提取液，46g蛋白胨，檸檬酸鋅0.05g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.8g。
實(shí)施例3
一種雙孢菇液體菌種的制備方法，包括以下步驟：
（1）將雙孢菇母種接種到一級(jí)斜面培養(yǎng)基上，24-26℃下培養(yǎng)5d，得雙孢菇斜面菌種，劃分成長(zhǎng)寬均為2cm的斜面菌種塊；
所述斜面培養(yǎng)基為每1000mL純凈水中加入10mL綠茶提取液， 28g玉米淀粉，2g瓊脂，0.2g酪蛋白水解肽， 1.2g蛋白胨，0.2g磷酸二氫鉀，攪拌均勻，殺菌處理后冷卻即得；
（2）將5-6塊一級(jí)杏鮑菇斜面菌種塊接種到一級(jí)培養(yǎng)基中，在溫度20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)2d，然后在20-22℃下靜置培養(yǎng)1d，得一級(jí)培養(yǎng)液；
所述一級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入18mL綠茶提取液，蛋白胨7g，可溶性淀粉55g，甘油8g，硫酸鎂0.8g，普魯蘭多糖0.3g，蔗糖10g，鹽酸硫胺素0.08g；
（3）將一級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量10%的接種量接種到二級(jí)培養(yǎng)基中，在20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)3d，得二級(jí)培養(yǎng)液；
所述二級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入25mL綠茶提取液，蛋白胨40g，麩皮45g，蔗糖20g，磷酸二氫鉀2.0g，卡波姆0.06g；
（4）將二級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量15%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25℃下培養(yǎng)4d，通氣量2.5m3/h，發(fā)酵結(jié)束后即得雙孢菇液體菌種；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入酵母膏15g，20g蔗糖，8g葡萄渣，10mL綠茶提取液，40g蛋白胨，檸檬酸鋅0.02g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1.0g。
對(duì)比例1
一種雙孢菇液體菌種的制備方法，包括以下步驟：
（1）將雙孢菇母種接種到一級(jí)斜面培養(yǎng)基上，24-26℃下培養(yǎng)4-5d，得雙孢菇斜面菌種，劃分成長(zhǎng)寬均為2cm的斜面菌種塊；
所述斜面培養(yǎng)基為每1000mL純凈水中加入20g玉米淀粉，1g瓊脂，0.3g酪蛋白水解肽，1.0g蛋白胨，0.5g磷酸二氫鉀，攪拌均勻，殺菌處理后冷卻即得；
（2）將5-6塊一級(jí)杏鮑菇斜面菌種塊接種到一級(jí)培養(yǎng)基中，在溫度20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)3d，得一級(jí)培養(yǎng)液；
所述一級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入蛋白胨9g，可溶性淀粉53g，甘油5g，硫酸鎂0.7g，普魯蘭多糖0.3g，蔗糖8g，鹽酸硫胺素0.07g；
（3）將一級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量10%的接種量接種到二級(jí)培養(yǎng)基中，在20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)3d，得二級(jí)培養(yǎng)液；
所述二級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入蛋白胨35g，麩皮60g，蔗糖19g，磷酸二氫鉀1.8g，卡波姆0.07g；
（4）將二級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量15%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25℃下培養(yǎng)7d，通氣量2.5m3/h，發(fā)酵結(jié)束后即得雙孢菇液體菌種；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入酵母膏13g，18g蔗糖，9g葡萄渣， 46g蛋白胨，檸檬酸鋅0.05g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.8g。
對(duì)比例2
一種雙孢菇液體菌種的制備方法，包括以下步驟：
（1）將雙孢菇母種接種到一級(jí)斜面培養(yǎng)基上，24-26℃下培養(yǎng)6d，得雙孢菇斜面菌種，劃分成長(zhǎng)寬均為2cm的斜面菌種塊；
所述斜面培養(yǎng)基為每1000mL純凈水中加入20g玉米淀粉，1g瓊脂，1.0g蛋白胨，0.5g磷酸二氫鉀，攪拌均勻，殺菌處理后冷卻即得；
（2）將5-6塊一級(jí)杏鮑菇斜面菌種塊接種到一級(jí)培養(yǎng)基中，在溫度20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)4d，得一級(jí)培養(yǎng)液；
所述一級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入蛋白胨9g，可溶性淀粉53g，甘油5g，硫酸鎂0.7g，蔗糖8g，鹽酸硫胺素0.07g；
（3）將一級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量10%的接種量接種到二級(jí)培養(yǎng)基中，在20-22℃下?lián)u床培養(yǎng)3d，得二級(jí)培養(yǎng)液；
所述二級(jí)培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入蛋白胨35g，麩皮60g，蔗糖19g，磷酸二氫鉀1.8g；
（4）將二級(jí)培養(yǎng)液按照體積百分含量15%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25℃下培養(yǎng)6d，通氣量2.5m3/h，發(fā)酵結(jié)束后即得雙孢菇液體菌種；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基每1000mL純凈水中加入酵母膏13g，18g蔗糖，46g蛋白胨，檸檬酸鋅0.05g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.8g。
效果實(shí)施例：
1、將實(shí)施例1-3及對(duì)比例1-2的母種在不同的斜面培養(yǎng)基上菌絲的生長(zhǎng)情況，具體結(jié)果見表1。
表1
上表中，++++表示菌絲濃白、粗壯；+++表示菌絲濃白，細(xì)密；++表示菌絲濃白帶淡黃，細(xì)密有菌索；+表示菌絲灰白，菌索多，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)入弱。
2、將實(shí)施例1-3及對(duì)比例1制備的雙孢菇液體菌種接種于菌袋上，設(shè)置對(duì)照組，對(duì)照組接種的雙孢菇液體菌種為市售，菌袋的規(guī)格均相同，接種量相同，將雙孢菇總產(chǎn)量及殘菇率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，具體結(jié)果見表2。
表2
另外，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)培養(yǎng)基各組分的含量超出本發(fā)明所提供的范圍時(shí)，效果相差不大，過多則造成資源的浪費(fèi)，低于本發(fā)明所提供的范圍時(shí)，可能營養(yǎng)不充分，效果較差，產(chǎn)量降低。
本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明精神做舉例說明。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：上述具體實(shí)施例并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何等同替換，改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。