一種用甲基茉莉酸提高三角褐指藻巖藻黃素含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種用甲基茉莉酸提高三角褐指藻巖 藻黃素含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 巖藻黃素（Fucoxanthin)是一類呈橘黃色的類胡蘿卜素，其廣泛存在于褐藻和硅 藻中。它的結(jié)構(gòu)比較特殊，有一個(gè)共軛雙鍵，環(huán)氧基團(tuán)，還有羰基，共同組成的多烯鏈化合 物。由于它的結(jié)構(gòu)中包含氧原子，因此，它也屬于葉黃素并具有抗氧化的作用?，F(xiàn)在，心血管 疾病，癌癥以及慢性疾病已經(jīng)成為了死亡率最高的疾病。發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家肥胖的概 率逐年快速增長(zhǎng)。然而引起這些疾病和這種現(xiàn)象的原因是多方面的，而藥物的治療并不總 是有效的，研宄者正在對(duì)食物中對(duì)這些疾病有治療和保護(hù)作用的功能性成分進(jìn)行研宄。這 其中就包含了巖藻黃素。在褐藻中包括很多種生物活性的化合物，如《_3不飽和脂肪酸， 多酚，多糖和巖藻黃素。這些都與藻類中類胡蘿卜素的抗氧化作用有關(guān)。但是，到目前為止， 僅僅通過(guò)類胡蘿卜素的抗氧化作用還不能解釋所有的生理作用。在過(guò)去的幾年中，通過(guò)對(duì) 巖藻黃素的研宄，發(fā)現(xiàn)巖藻黃素在細(xì)胞代謝過(guò)程中對(duì)某些特殊基因的表達(dá)具有異常的調(diào)節(jié) 作用。巖藻黃素具有很多的作用，如抗氧化，抗癌癥，抗肥胖，抗糖尿病，抗心血管疾病以及 抗老化的作用?？梢哉f(shuō)，巖藻黃素是一類功能強(qiáng)大的類胡蘿卜素。它不僅能減少體內(nèi)脂肪 的積累，還能調(diào)節(jié)血糖的含量。經(jīng)研宄表明，巖藻黃素是安全的并且沒(méi)有副作用。它還是重 金屬和毒素的有效螯合劑。因此提高巖藻黃素的含量是一種迫切的需要。
[0003] 甲基茉莉酸（methyljasmonate，MeJA)是一類含有環(huán)戊酮基團(tuán)的化合物。通過(guò)對(duì) 其進(jìn)行分子生物學(xué)的研宄，發(fā)現(xiàn)甲基茉莉酸能夠調(diào)控基因的表達(dá)。這些基因主要與植物發(fā) 育和自生的防御系統(tǒng)有著密切的關(guān)系。在高等植物體內(nèi)，甲基茉莉酸也是一種內(nèi)源生長(zhǎng)調(diào) 節(jié)物質(zhì)。在誘導(dǎo)植物防衛(wèi)基因表達(dá)中具有信號(hào)分子的作用。當(dāng)然，甲基茉莉酸本身也能夠 作為激發(fā)子。王艷東等發(fā)現(xiàn)甲基茉莉酸除了能夠促進(jìn)細(xì)胞由初生代謝提前轉(zhuǎn)化成次生代謝 夕卜，還可以促進(jìn)細(xì)胞中某些次生代謝產(chǎn)物的合成。Muelleretal.和Tamogamietal等人 還發(fā)現(xiàn)，甲基茉莉酸不僅能夠刺激植物中次生代謝產(chǎn)物的合成，還可以將次生代謝產(chǎn)物進(jìn) 行迅速的積累，它的作用具有廣泛性。目前，利用各種誘導(dǎo)子來(lái)提高巖藻黃素含量的相關(guān)文 獻(xiàn)還未報(bào)道。本申請(qǐng)通過(guò)利用不同濃度的甲基茉莉酸處理三角褐指藻，來(lái)研宄三角褐指藻 的生長(zhǎng)狀況，分離和提取三角褐指藻中的巖藻黃素并且利用HPLC對(duì)不同濃度的甲基茉莉 酸處理下的三角褐指藻中巖藻黃素含量的測(cè)定。進(jìn)而得出最適甲基茉莉酸的濃度，提高巖 藻黃素的含量。為提高巖藻黃素含量提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種用甲基茉莉酸提高三角褐指藻巖藻黃素含量的方法， 該方法對(duì)提高三角褐指藻中的巖藻黃素含量效果顯著，操作簡(jiǎn)單方便，費(fèi)用低，生產(chǎn)周期 短，適于批量處理和工廠化生產(chǎn)。
[0005] 本發(fā)明具體通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0006] -種用甲基茉莉酸提高三角褐指藻巖藻黃素含量的方法，包括以下步驟：
[0007] 1)將滅菌海水與MAD母液混合得營(yíng)養(yǎng)液；
[0008] 2)在營(yíng)養(yǎng)液中加入三角褐指藻母液培養(yǎng)；
[0009] 3)培養(yǎng)2天后，加入甲基茉莉酸；
[0010] 4)繼續(xù)培養(yǎng)6天后手機(jī)藻液，離心分離，棄上清，收集藻體；
[0011] 5)將藻體冷凍干燥處理2天，研磨備用。
[0012] 本發(fā)明所述的MAD母液的配方為：KN03:10g，KH2P04:lg，F(xiàn)eS04.7H20 :0? 25g，MnS04: 0. 025g，EDTANa2:lg，VB1:0. 0006g，dH20 :100ml。
[0013] 本發(fā)明所述的培養(yǎng)條件為：5000千勒克斯，25 °C。
[0014] 所述的滅菌海水與MAD母液的體積比為1 : 1000。
[0015] 所述的營(yíng)養(yǎng)液與三角褐指藻母液的體積比為1 : 10。
[0016] 步驟（3)中培養(yǎng)液加入甲基茉莉酸后甲基茉莉酸的濃度為0ymol/L-200ymol/ L，優(yōu)選的甲基茉莉酸的濃度為200ymol/L。
[0017] 步驟（5)所述的冷凍干燥處理?xiàng)l件為：溫度_70°C，壓強(qiáng)999Pa。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：發(fā)明首次公開(kāi)了從三角褐指藻中提取巖藻黃素，為提高巖藻 黃素含量還利用不同濃度的甲基茉莉酸處理三角褐指藻，尋找最適合的甲基茉莉酸處理濃 度，通過(guò)該濃度對(duì)三角褐指藻的誘導(dǎo)處理，其巖藻黃素的含量增加顯著。該發(fā)明操作簡(jiǎn)單方 便，費(fèi)用低，生產(chǎn)周期短，適于批量處理和工廠化生產(chǎn)。由于巖藻黃素對(duì)抗癌，高血糖，心血 管疾病，糖尿病都有顯著地功效，提高巖藻黃素的含量將滿足人們治病的需要，并且能夠提 高經(jīng)濟(jì)效益。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例不同濃度甲基茉莉酸處理三角褐指藻后生長(zhǎng)曲線；
[0020] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例三角褐指藻生長(zhǎng)曲線；
[0021] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例不同濃度甲基茉莉酸處理三角褐指藻后巖藻黃素含量變化。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，以下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施 例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明 的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以下實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0023] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0024] 1、三角褐指藻的培養(yǎng)
[0025] 取過(guò)濾且高溫滅菌的海水，加入1 : 1000的滅菌MAD母液。MAD母液的配方為： KN03：10g,KH2P04：lg,FeS04 ? 7H20 ：0. 25g,MnS04：0. 025g,EDTANa2：lg,VB1 ：0. 0006,dH20 ： 100ml。以1 : 10的比例接入藻液，放置于5000Klx，溫度為25°C，12h/12h黑暗/光照的培 養(yǎng)箱中。每天分三個(gè)時(shí)間段（8:00,12:00, 20:00)均勻搖藻體。
[0026] 2、三角褐指藻生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
[0027] 分別取300ml的滅菌MAD培養(yǎng)液3組。向每組平行中倒入30ml的藻液，放入光照 培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。每天搖藻三次進(jìn)行培養(yǎng)，并且利用分光光度機(jī)測(cè)定藻體的OD值（每次 測(cè)藻體OD值前應(yīng)該將藻液搖勻）。
[0028] 3、利用甲基茉莉酸處理三角褐指藻
[0029] 向滅菌海水中加入MAD營(yíng)養(yǎng)液，以1 : 10的比例加入三角褐指藻原液，將三角藻 放于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)條件與上文相同）2天，讓三角褐指藻適應(yīng)新的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，加 入不同濃度的甲基茉莉酸。從三角褐指藻接入培養(yǎng)基的那天開(kāi)始，每天需要利用分光光度 機(jī)來(lái)測(cè)定每組的藻液的濃度，再測(cè)定6天。
[0030] 本實(shí)驗(yàn)所用的巖藻黃素標(biāo)準(zhǔn)品取自寧波大學(xué)海