一種含玉米秸稈的培養(yǎng)基及其制備方法和培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(或植物乳桿菌)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于枯草芽孢桿菌(或植物乳桿菌)培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基及其制備方法和培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(或植物乳桿菌)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]由于我國(guó)農(nóng)業(yè)機(jī)械化程度不高，玉米聯(lián)合收割機(jī)械化作業(yè)尚未得到大面積推廣應(yīng)用，大部分地區(qū)仍依靠農(nóng)民手工收獲玉米。農(nóng)民割倒玉米秸桿再經(jīng)過(guò)一段時(shí)間晾曬后，將玉米穗收走；玉米秸桿留在田間繼續(xù)晾曬，晾曬后的玉米秸桿可以手工捆扎運(yùn)到田邊村頭堆放或由打捆機(jī)撿拾打捆后運(yùn)至秸桿存儲(chǔ)點(diǎn)或利用點(diǎn)。東北地區(qū)玉米秸桿的規(guī)模化工業(yè)利用方式多為直燃發(fā)電。
[0003]現(xiàn)有枯草芽孢桿菌(或植物乳桿菌)培養(yǎng)基中使用大量化學(xué)試劑，存在培養(yǎng)成本高，來(lái)源不廣泛，技術(shù)含量大，不易于非專(zhuān)業(yè)人士掌握，不利于利用在實(shí)際生產(chǎn)中的技術(shù)問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決現(xiàn)有玉米秸桿利用率低，現(xiàn)有培養(yǎng)基中使用大量化學(xué)試劑，存在培養(yǎng)成本高，來(lái)源不廣泛，技術(shù)含量大，不易于非專(zhuān)業(yè)人士掌握，不利于利用在實(shí)際生產(chǎn)中的技術(shù)問(wèn)題；而提供了一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基及其制備方法和培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(或植物乳桿菌)的方法。
[0005]本發(fā)明中一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基的配方為:10?43g/L玉米芯、10?45g/L玉米秸桿、I?8g/L豆柏、I?7g/L大豆糖蜜，余量為水，自然pH值；其制備方法如下:將玉米秸桿、玉米芯和豆柏分別依次進(jìn)行粉碎、過(guò)30目篩處理，混合；然后加入大豆糖蜜和水，攪拌均勻，然后在121°C條件下滅菌25分鐘，冷卻至室溫，得到含玉米秸桿的培養(yǎng)基。
[0006]本發(fā)明中一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法是按下述步驟完成的:
[0007]步驟一、將菌種活化三代以上，保存于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基斜面上；
[0008]步驟二、取牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基100ml，在121°C條件下滅菌25分鐘，冷卻至室溫，接種經(jīng)步驟一處理的菌種，在37°C恒溫震蕩箱中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，得到種子液；
[0009]步驟三、將步驟二獲得的種子液按2v/v%的接種量接種于權(quán)利要求1所述的含玉米秸桿的培養(yǎng)基中，在37°C恒溫震蕩箱中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，取出；即完成了枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)。
[0010]本發(fā)明中一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基培養(yǎng)植物乳桿菌的方法是按下述步驟進(jìn)行的:
[0011]步驟一、將菌種活化三代以上，保存于MRs固體培養(yǎng)基斜面上；
[0012]步驟二、取MRs液體培養(yǎng)基100ml，在121°C條件下滅菌25分鐘，冷卻至室溫，接種經(jīng)步驟一處理的菌種，在37°C恒溫震蕩箱中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，得到種子液；
[0013]步驟三、將步驟二獲得的種子液按2v/v%的接種量接種于權(quán)利要求1所述的含玉米秸桿的培養(yǎng)基中，在37°C恒溫震蕩箱中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，取出；即完成了植物乳桿菌的培養(yǎng)。
[0014]玉米芯中含糖54.5%、粗蛋白質(zhì)2.2%、粗纖維29.7%、礦物質(zhì)1.2%，為微生物生產(chǎn)提供碳源和礦物質(zhì)。
[0015]玉米秸桿中碳水化合物含量31 %?45 %，蛋白質(zhì)含量3?6 %，為微生物生產(chǎn)提供碳源。
[0016]?柏是大?提取?油后得到的一種副廣品。?柏中粗蛋白質(zhì)含量尚達(dá)30?50%，為微生物生產(chǎn)提供氮源。
[0017]大豆糖蜜是生產(chǎn)大豆?jié)饪s蛋白過(guò)程中，醇溶部分物質(zhì)，經(jīng)過(guò)濃縮處理后的產(chǎn)品，因富含糖類(lèi)物質(zhì)，顏色和流動(dòng)性類(lèi)似蜂蜜。粗蛋白質(zhì)(大豆乳清蛋白)5%-8%、碳水化合物50% -55%、蔗糖 15% -20%、單糖 5% -10%、灰份(主要是 P3+、Ca2+、Mg2+、K+、Fe2+) 4%，為微生物生長(zhǎng)提供碳源和礦物質(zhì)。
[0018]過(guò)30目篩，可使玉米秸桿、玉米芯和豆柏均勻分散在水中，菌種可以充分利用培養(yǎng)基原料，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，活菌數(shù)高。不足30目菌活數(shù)達(dá)不到1.0X108cFu/ml。
[0019]玉米秸桿多為農(nóng)業(yè)廢棄物，在廣大農(nóng)村方便易得。本發(fā)明為秸桿綜合利用提供一個(gè)新的途徑，變廢為寶，提高經(jīng)濟(jì)效益，使得玉米秸桿到了有效的利用。同時(shí)玉米秸桿，玉米芯，豆柏，大豆糖蜜等廉價(jià)的原料，替代微生物培養(yǎng)基中化學(xué)試劑，不僅大幅度降低了培養(yǎng)基成本，同時(shí)也為后續(xù)制備微生物飼料生產(chǎn)提供了基礎(chǔ)，使得生產(chǎn)過(guò)程中技術(shù)難度降低，生產(chǎn)成本降低，方便易行，產(chǎn)品價(jià)格降低，農(nóng)民可以廣泛的使用微生物飼料，使農(nóng)村廢棄資源循環(huán)利用，可持續(xù)發(fā)展。
[0020]本發(fā)明原料來(lái)源不廣泛，方法容易操作和掌握，有利于在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用。
[0021]在實(shí)驗(yàn)室中用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備IL菌液需要培養(yǎng)基成本需要10元。
[0022]在實(shí)驗(yàn)室中用MRs培養(yǎng)基制備IL菌液需要培養(yǎng)基成本40_70元。
[0023]本發(fā)明配方中玉米秸桿，玉米芯為農(nóng)業(yè)廢棄物，豆柏市售在2-3元/500克，大豆糖蜜0.25元/500克，制備IL菌液培養(yǎng)基成本僅需不足0.1元。
【具體實(shí)施方式】
[0024]【具體實(shí)施方式】一:本實(shí)施方式中一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基的配方為:10g/L玉米芯、30g/L玉米秸桿、5g/L豆柏、7g/L大豆糖蜜，余量為水，自然pH值；其制備方法如下:將玉米秸桿、玉米芯和豆柏分別依次進(jìn)行粉碎、過(guò)30目篩處理，混合；然后加入大豆糖蜜和水，攪拌均勻，然后滅菌，冷卻至室溫，得到含玉米秸桿的培養(yǎng)基。
[0025]—種含玉米秸桿的培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法是按下述步驟進(jìn)行的:
[0026]步驟一、將枯草芽孢桿菌菌種活化三代以上，保存于牛肉膏固體蛋白胨培養(yǎng)基斜面上；
[0027]所述的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方如下:3.0g/L牛肉膏:10.0g/L蛋白胨、5.0g/LNaCl、25g/L 瓊脂和 100ml 水，pH 值為 7.4-7.6。
[0028]步驟二、去牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基100ml，在121°C條件下滅菌25分鐘，冷卻至室溫，接種步驟一的菌種，在37°C恒溫震蕩箱中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，得到種子液；
[0029]所述牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的配方如下:3.0g/L牛肉膏、10.0g/L蛋白胨、5.0g/LNaCl 和 100ml 水，pH 值為 7.4-7.6。
[0030]步驟三、將種子液按2v/v%的接種量接種于權(quán)利要求1所述的一種含玉米秸桿的培養(yǎng)基中，在37°C恒溫震蕩箱中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，取出；即完成了枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)。[0031 ] 將步驟三恒溫震蕩箱取出的菌液按1、10' 10' 10' 10' 10' 10' 10' 1-8取9個(gè)梯度稀釋?zhuān)瑑A倒法倒入牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中，在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。然后計(jì)算菌活數(shù)，本實(shí)施方式培養(yǎng)的菌活數(shù)達(dá)到1.0X108cFu/ml以上。
[0032]【具體實(shí)施方式】二:本實(shí)施方式中含玉米秸桿的培養(yǎng)基的配方為:30g/L玉米芯、3