皂角刺中黃烷酮骨架類(lèi)化合物的提取方法及化合物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種皂角刺中黃烷酮骨架類(lèi)化合物 的提取方法及化合物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 皂角刺是豆科植物皂莢的干燥棘刺。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為皂角刺性溫，味辛，歸肝、胃經(jīng)， 有消腫托毒、排膿、殺蟲(chóng)之功效，常用于癰疽瘡毒初起或膿成不潰之癥以及皮癬、麻風(fēng)等。不 僅如此，臨床數(shù)據(jù)已證明皂角刺具有抗癌功效，是我國(guó)中醫(yī)治療肺癌、食管癌、肝癌、胃癌和 宮頸癌等多種癌癥的常用藥之一。作用機(jī)理研宄，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，皂角刺的乙醇提取物可以通 過(guò)抑制C0X-2表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白及其激酶，p27,p53,ERK，p38MAP激酶和JNK信號(hào)靶 點(diǎn)等途徑，有效抑制胃癌、食管癌和肺癌等多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡，且對(duì)正常細(xì)胞 的毒性較小。植物化學(xué)研宄發(fā)現(xiàn)，皂角刺的化學(xué)成分主要有皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)、氨基酸 等成分。其中，部分皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)成分已被報(bào)道具有不同程度的體內(nèi)外抗癌活性。盡管 如此，尚未有皂角刺中黃烷酮類(lèi)成分抗腫瘤化合物的詳細(xì)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供皂角刺中黃烷酮骨架類(lèi)化合物的提取方法以及化合物的應(yīng) 用，該方法提取分離的黃烷酮骨架類(lèi)化合物具有良好的抗肝癌細(xì)胞活性，為進(jìn)一步提升皂 角刺的藥用價(jià)值提供了新的科學(xué)依據(jù)，且該方法能夠使黃烷酮類(lèi)化合物因得到較高的富集 盡可能多的被提取出來(lái)。
[0004] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：皂角刺中黃烷酮骨架類(lèi)化合物的提取方法，包括以下 步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺 粉末用85-95%乙醇進(jìn)行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀 40-48h，過(guò)濾，減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積10-12倍的水，攪拌至浸膏溶解完全， 得到水溶液，備用；然后將水溶液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯 浸膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，通過(guò)TLC點(diǎn)板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環(huán)己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過(guò)濾，將得到的固體重結(jié)晶得到化合物1 ; 將餾分704運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，得到化合物2 和化合物3 ; 將餾分705運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，得到化合物 4 ； 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置后有黃色固體析出，然后過(guò)濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置 后有深黃色固體析出，然后過(guò)濾純化后得到化合物6 ; 這六個(gè)黃烷酮骨架的化合物分別被鑒定和命名為： 化合物1為5, 7, 3' -三羥基-4' -甲氧基-3a-羥-二氫黃烷酮醇； 化合物2為5, 7, 3'，4' -四羥基二氫黃烷酮醇； 化合物3為7, 5'，3' -三羥基-3〇t-二氫黃烷酮醇； 化合物4為5, 7，2'，4'-四羥基-3a_羥-二氫黃烷酮醇； 化合物5為5-甲氧基-3'，4'，7' -三羥基-二氫黃烷酮醇； 化合物6為5, 3'，4' -三甲氧基-7-羥基-二氫黃酮醇。
[0005] 以上得到的六種化合物的結(jié)構(gòu)式分別為：
[0006] 進(jìn)一步優(yōu)化，步驟四所述餾分704等度洗脫的洗脫劑為體積比為40:60的水-甲 醇溶液。
[0007] 進(jìn)一步優(yōu)化，步驟四所述餾分705等度洗脫的洗脫劑為體積比為20:80的水-甲 醇溶液。
[0008] 本發(fā)明的有益效果 本發(fā)明提供的方法從皂角刺中提取分離的黃烷酮骨架類(lèi)化合物，經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明， 具有良好的抗肝癌細(xì)胞（HepG2)活性，為進(jìn)一步提升皂角刺的藥用價(jià)值提供了新的科學(xué)依 據(jù)，并且具有重要的科學(xué)理論價(jià)值和開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。本發(fā)明的提取分離方法是在活性指導(dǎo) 下的有效分離，尤其適合天然微量化合物的追蹤獲取。另外本發(fā)明采用90%的乙醇溶液熱 回流提取，能夠使黃烷酮類(lèi)骨架化合物高度富集后盡可能多的被提取出來(lái)，并使單體化合 物充分富集后微量的黃烷酮類(lèi)單體化合物很容易獲得。本發(fā)明已經(jīng)分離的黃烷酮類(lèi)化合物 多具有特異性的抗肝癌細(xì)胞（HepG2)腫瘤殺傷活力，可能對(duì)皂角刺的選擇性抗癌效果起到 至關(guān)重要的物質(zhì)基礎(chǔ)作用。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 皂角刺中黃烷酮骨架類(lèi)化合物的提取方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺 粉末用85-95%乙醇進(jìn)行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀 40_48h，過(guò)濾，減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積10-12倍的水，攪拌至浸膏溶解完全， 得到水溶液，備用；然后將水溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯 浸膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，通過(guò)TLC點(diǎn)板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環(huán)己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過(guò)濾，將得到的固體重結(jié)晶得到化合物1; 將餾分704運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為40:60的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物2和化合物3 ; 將餾分705運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為20:80的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物4; 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置后有黃色固體析出，然后過(guò)濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置 后有深黃色固體析出，然后過(guò)濾純化后得到化合物6; 這六個(gè)黃烷酮骨架類(lèi)化合物分別被鑒定和命名為： 化合物1為5, 7, 3' -三羥基-4' -甲氧基-3〇t-二氫黃烷酮醇； 化合物2為5, 7, 3'，4' -四羥基二氫黃烷酮醇； 化合物3為7, 5'，3' -三羥基-3〇t_二氫黃烷酮醇； 化合物4為5, 7，2'，4' -四羥基-3〇t_二氫黃烷酮醇； 化合物5為5-甲氧基-3'，4'，7' -三羥基-二氫黃烷酮醇； 化合物6為5, 3'，4' -三甲氧基-7-羥基-二氫黃酮醇。
[0010] 以上得到的六個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)式分別為：
[0011] 以上得到的六個(gè)化合物的波普分析數(shù)據(jù)分別為：


實(shí)施例I: 皂角刺中黃烷酮骨架類(lèi)化合物的提取方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺粉 末用85%乙醇進(jìn)行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀40h，過(guò)濾， 減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積10倍的水，攪拌至浸膏溶解完全，得 到水溶液，備用；然后將水溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸 膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，通過(guò)TLC點(diǎn)板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環(huán)己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過(guò)濾，將得到的固體重結(jié)晶得到化合物1 ; 將餾分704運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為40:60的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物2和化合物3 ; 將餾分705運(yùn)用Waters高效液