一種新的二萜類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從尾葉香茶菜的干燥全草中分離得到的一種 具有治療慢性粒細(xì)胞白血病作用的二祗類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 尾葉香茶菜Isodon excisa(maxim.化ara屬香茶菜屬植物，在亞洲東部和非洲西 部廣為分布，全世界約有150種，中國約有90種25個變種，廣泛分布于全國各地。其中約有30 種在民間可供藥用，主要作為清熱解毒、抗癌、消炎、健脾、活血、抗菌藥來使用。
[0003] 尾葉香茶菜含有二祗、=祗、醬醇、脂肪酸W及少量的黃酬、倍半祗、連控武等多種 活性成分，其中W二祗類成分為主，已知有100余種。近年來，人們從運(yùn)些種植物中提取分離 到多種二祗類化合物，并通過藥理實驗證明部分二祗化合物具有良好的抗菌、消炎、抗氧 化、調(diào)節(jié)免疫力和抗腫瘤活性。
[0004] 現(xiàn)在研究表明尾葉香茶菜具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗炎等藥理作用。 尾葉香茶菜提取的二祗類化合物可W顯著的抑制人體鼻咽癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞等的生長。 尾葉香茶菜提取物對小鼠離體臟器組織中的過氧化物生成有非常顯著的抑制作用，表明其 中含有的化合物能抑制組織液和細(xì)胞中氧化性物質(zhì)對不飽和脂肪酸的氧化破壞，達(dá)到保護(hù) 細(xì)胞作用。機(jī)體的免疫能力低下容易收到病毒和細(xì)菌的入侵，或者是受損的細(xì)胞、壞死的細(xì) 胞、變形的細(xì)胞得不到快速的清除，就容易受到攻擊，抗病毒能力弱，比較正常人容易患疾 病，在相同條件下或者疾病加重。通過實驗研究，發(fā)現(xiàn)該植物能加強(qiáng)小鼠的特異性免疫和非 特異性免疫。尾葉香茶菜抗菌活性成分的研究始于1954年，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)該植物的乙醇 提取物可W抑制抑制革蘭氏陽性細(xì)菌(Gram-positivebacteria)的生長。此外，在臨床上對 于蟲蛇咬傷、跌打損傷、消炎退熱有治療的功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從尾葉香茶菜的干燥全草中分離得到的一種具有治療 慢性粒細(xì)胞白血病作用的二祗類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[000引
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)將尾葉香茶菜的干燥全草 粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和 水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用75%乙醇洗脫 10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟(b)中75%乙 醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲燒-甲 醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20: 1、15:1和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019 ]圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0021] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023] 制備方法：（a)將尾葉香茶菜的干燥全草(8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取(2化 X3次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和 水飽和的正下醇(化X3次)萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物(355g)和正下醇 萃取物；（b)步驟(a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體 積，再用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (136g); (C)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個柱體 積）、55:1(8個柱體積）、30:1(6個柱體積）、15:1(8個柱體積)和1:1(5個柱體積）的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(C)中組分4(31g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用 體積比為20:1(8個柱體積）、15:1(10個柱體積)和10:1(6個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(llg)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 純的化合物（I)(228mg)。
[0024] 結(jié)構(gòu)確證：白色粉末;皿-ESIMS顯示[M+化r為m/z 355.1904，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C2地2804，不飽和度為7。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)SH(ppm，DMSO-ds，600MHz): H-3(5.38， s)，H-4(5.95，dd J=15.3,2.7)，H-5(6.17，dd，J=15.3，1.7)，H-7(1.74，m)，H-7(1.05，m)， H-8(1.61，m)，H-8(0.82，m)，H-9(0.51，m)，H-ll(0.36，m)，H-12(1.18，m)，H-12(1.14，m)，H-13(3.14，m)，H-15(3.89，s)，H-16(5.57，s)，H-16(5.34，s)，H-17(1.24，s)，H-18(0.98，s)， H-19(0.97，s)，H-20(1.08，d，J = 5.9);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) Sc (ppm，DMSO-ds，150MHz): 170.7 (C，1-C)，147.1(C，2-C)，81.7(CH，3-C)，120.8(CH，4-C)，137.2(CH，5-C)，73.3(C，6-C)， 45.2(Ol2,7-C)，19.9(CH2,8-C)，26.3(CH，9-C)，18.7(C，10-C)，21.4(CH，ll-C)，29.6(CH2， 12-C)，44.4(CH，13-C)，211.1(C，14-C)，63.9(CH，15-C)，m.7(Ol2，16-C)，26.4(ai3，17-0,28.8(邸3，18-0，15.6(邸3，19-0，11.7((：曲，20-0;碳原子標(biāo)記參見圖1。1歴]\?譜顯示 一個雙峰甲基化1.08(d，J = 5.9化），S個單峰甲基信號（化1.24,0.98和0.97)和反式-雙鍵 質(zhì)子信號 5 冊.95((1(1，1 = 15.3,2.7化）和6.17((1(1，1=15.3，1.7化）。13(：-醒時普顯示了20個碳 信號，包括四個甲基，四個亞甲基(一個締屬亞甲基），屯個次甲基(一個含氧次甲基，兩個締 屬次甲基），W及五個季碳(兩個幾基，一個締控季碳，一個含氧季碳KHMB村普中，締屬亞甲 基（化5.57和5.34，此-16)與碳信號（6(：147.1，(：-2;63.9，(：-15;81.7，(：-3);低場質(zhì)子信號5 冊.38(s，H-3)與內(nèi)醋幾基 SC170.7(C-1)，雙鍵碳信號此120.8((：-4)，137.2((：-5)^及(：-2和 C-15的相關(guān)性表明該化合物含有一個五元內(nèi)醋環(huán)。兩個高場次甲基質(zhì)子信號姐0.51(m，H- 9)和0.36(m，H-ll)表明該化合物含有一個環(huán)丙烷基。HMBC譜中，甲基質(zhì)子信號Me-18和Me-19(姐0.98,S和0.97，s)與環(huán)丙烷次甲基C-9和C-Il(SC26.3和21.4)的相關(guān)性，W及C-IO位 的高場核磁信號（SC18.7)表明C-IO位連有兩個甲基。ROESY譜中H-Il與H-9，H-8a和H-7a的 交叉峰表明運(yùn)些質(zhì)子為a構(gòu)型。此外，H-地與Me-17的相關(guān)性表明Me-17為0構(gòu)型。綜合氨譜、 碳譜、麗BC譜和ROESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所 示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過EC的式驗確定，理論值與實驗值基本一致(圖2)。
[0025] 實施例2:化合物（I)藥理作用試驗 [002引一、材料和儀器
[0027] K562細(xì)胞由中科院上海生物細(xì)胞所提供?；衔铮↖)為自制，HPLC歸一化純度大于