一種云實(shí)三環(huán)二萜及其制法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從云實(shí)種子中分離純化得到的三環(huán)類二萜及其制法和用途，并利用現(xiàn)代分析手段確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，根據(jù)有關(guān)化合物的命名規(guī)則命名為3β,7β?二羥基?4α?羥甲基?12(13),15(16)?雙鍵?卡山烷二萜，為無(wú)色粉末，易溶于氯仿、甲醇。經(jīng)功能性試驗(yàn)證明：3β,7β?二羥基?4α?羥甲基?12(13),15(16)?雙鍵?卡山烷二萜對(duì)HeLa細(xì)胞、HT?29細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞均具有較好的抑制作用，能夠作為制備防治腫瘤藥物的原料，具有較強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)前景。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種云實(shí)三環(huán)二萜及其制法和用途，具體指3β，7β-二羥基-4α-羥甲 基-12( 13) ,15(16)-雙鍵-卡山烷二萜及其制法和用途。 一種云實(shí)三環(huán)二萜及其制法和用途
【背景技術(shù)】
[0002] 云實(shí)（Caesalpinia decapetala (Roth) Alston)又名"藥王子"，"牛王刺"，"朝天 子"，"倒掛刺"等，為豆科(Fabaceae)云實(shí)屬植物，生于我國(guó)南部地區(qū)，平原地帶長(zhǎng)載培，常 野生于山坡、巖旁、林邊、河邊或灌木叢中。云實(shí)的果、莖皮含單寧，種子可榨油，根莖及果實(shí) 供藥用，具有清熱除濕殺蟲之功效，治療痢疾、瘧疾、消渴、小兒疳積等疾病。
[0003] 因此，開發(fā)和利用云實(shí)中具有生物活性的單體化合物，進(jìn)一步挖掘其潛在的藥用 價(jià)值，并對(duì)其單體化合物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行確定和表征，對(duì)于開發(fā)利用云實(shí)資源具有 重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明就是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種從云實(shí)種子中分離得到的具有重要生 物活性和產(chǎn)業(yè)化利用價(jià)值的云實(shí)三環(huán)二萜單體化合物。該單體化合物為云實(shí)種子中首次分 離得到，利用現(xiàn)代分析手段表征其結(jié)構(gòu)并確認(rèn)其生物活性后，根據(jù)有關(guān)化合物的命名規(guī)則 命名為3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12(13) ,15(16)-雙鍵-卡山烷二萜。
[0005] -種從云實(shí)種子中分離得到的3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12 (13 ),15(16 )_雙鍵_ 卡山燒二砲，具有如下式所示結(jié)構(gòu)：
上述從云實(shí)種子中分離得到的3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12(13)，15(16)_雙鍵-卡山 燒二砲按下述方法得到： 云實(shí)種子干燥后粉碎過(guò)篩，加乙醇加熱回流提取3次，每次1-3小時(shí)，合并提取液，減壓 回收溶劑，濃縮后得總浸膏，總浸膏經(jīng)100~200目硅膠拌樣，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙 酯、丙酮和甲醇洗脫，洗脫液減壓濃縮至干;取氯仿層浸膏用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇 (1:0-0:1)9梯度洗脫，得到9個(gè)餾分Fr A-I，F(xiàn)rH部分經(jīng)凝膠色譜洗脫后再用氯仿-甲醇作 為洗脫液洗脫除去色素，然后樣品經(jīng)反相中壓色譜柱經(jīng)甲醇-水（30:70; 50:50; 60:40; 70: 30 ; 80: 20 ; 90:10)梯度洗脫，得到六個(gè)部份FrHl-6，其中FrH3經(jīng)高效液相色譜純化分 離，采用甲醇-水洗脫，收集28.5分鐘的洗脫液結(jié)晶即得。
[0006]所述加熱回流提取中云實(shí)種子與乙醇的質(zhì)量體積比為1:8-1:12。
[0007] 所述氯仿-甲醇洗脫液中氯仿與甲醇的體積比為40:60-55:45。
[0008] 所述甲醇-水洗脫液中甲醇與水的體積比為68:32。
[0009] 3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12(13) ,15(16)-雙鍵-卡山烷二萜為無(wú)色粉末，易溶于 氯仿，甲醇，將3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12 (13 )，15 (16)_雙鍵-卡山烷二萜進(jìn)行體外抗腫 瘤藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，體外抗腫瘤藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)利用ΜΤΤ比色法。
[0010] 以3β，7β-二羥基-4α-羥甲基-12(13) ,15(16)-雙鍵-卡山烷二萜為實(shí)驗(yàn)組，以 Doxorubicin(多柔比星，抗腫瘤藥物)為對(duì)照組，同時(shí)設(shè)立空白組，實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和空白組 選取HeLa(人宮頸癌）細(xì)胞和HT-29(人結(jié)腸癌）細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，培養(yǎng)基稀釋后，以6X104/ ml的密度接種于96孔板，每孔100μΙ，培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)24小時(shí)后，各組加入相對(duì)應(yīng)的藥物， 使各組藥物的最終濃度分別為2.5 μg/ml (1組），5 μg/ml (2組），10 μg/ml (3組），20 yg/ ml (四組），40 μg/ml (5組），共設(shè)5個(gè)濃度，每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔;培養(yǎng)48小時(shí)后，于每孔加 ΜΤΤ 10 μL染色;繼續(xù)培養(yǎng)四小時(shí)后，吸棄原培養(yǎng)液，每孔加入DMS0 100μΙ，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解，并于酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)光密度值，根據(jù)光密度 值計(jì)算50%抑制濃度(IC5Q，yg/mL)，光密度值計(jì)算IC 5Q的計(jì)算方法為現(xiàn)有公知技術(shù)。實(shí)驗(yàn)組、 對(duì)照組對(duì)HeLa細(xì)胞和HT-29細(xì)胞的IC5Q如表1所示。 通過(guò)上表的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明所述的
3β，7β-二羥基-4α-羥甲基-12(13)，15(16)-雙鍵-卡山烷二萜對(duì)HeLa細(xì)胞、ΗΤ-29細(xì)胞均具有較好的抑制作用，能夠作為制備防治腫瘤 藥物的原料，具備較強(qiáng)的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用價(jià)值。
[0012] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于： 首次從云實(shí)種子中分離得到了具有重要抗腫瘤活性的3β，7β_二羥基-4α_羥甲基-12 (13) ，15(16)-雙鍵-卡山烷二萜，并利用現(xiàn)代分析手段確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)。經(jīng)功 能性試驗(yàn)證明：3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12(13)，15(16)_雙鍵-卡山烷二萜對(duì)腫瘤細(xì)胞具 有較好的抑制作用，能夠作為制備防治腫瘤藥物的原料，具有較強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)前景。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1是3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12(13)，15(16)_雙鍵-卡山烷二萜的分子結(jié)構(gòu)示 意圖。
[0014] 圖2是3β，7β-二羥基-4α-羥甲基-12(13) ,15(16)-雙鍵-卡山烷二萜的核磁共振氫 譜 Gh-nmr)。
[0015] 圖3是3β，7β-二羥基-4α-羥甲基-12(13) ,15(16)-雙鍵-卡山烷二萜的核磁共振碳 譜(13c-apt)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明 第一步:云實(shí)種子(1.0 kg)干燥后粉碎過(guò)80目篩。第二步:藥材粉末加10倍量乙醇加熱 回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得總浸膏62.0 g。第三步：云 實(shí)種子總浸膏經(jīng)100~200目硅膠拌樣，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脫，洗 脫液減壓濃縮至干。最終得到石油醚部位浸膏12.6 g，氯仿部位浸膏8.7 g，乙酸乙酯部位 浸膏6.3 g，丙酮部位浸膏5.9 g，甲醇部位浸膏17.4 g。第四步:取氯仿層浸膏8.7 g經(jīng)硅膠 柱色譜（100~200目）分離，氯仿-甲醇（1:0-0:1 )9梯度洗脫，得到9個(gè)餾分Fr A-Ι。第五步： Fr.Η部分經(jīng)凝膠色譜洗脫，氯仿-甲醇(45-55)作為洗脫液洗脫除去色素，然后樣品經(jīng)反相 中壓色譜柱經(jīng)甲醇-水（30:70; 50:50; 60:40; 70:30; 80:20; 90:10)梯度洗脫，得到六 個(gè)部份FrHl-6。第六步:FrH3經(jīng)高效液相色譜分離純化，采用甲醇-水(68: 32)等度洗脫，收 集28.5分鐘的洗脫液結(jié)晶得到無(wú)色粉末，易溶于氯仿、甲醇。
[0017] 上述無(wú)色粉末的結(jié)構(gòu)表征和確認(rèn)如下： 將上述所得無(wú)色粉末進(jìn)行核磁共振氫譜Gh-nmr)和核磁共振碳譜(13C-APT)分析，4-NMR譜圖如圖2所示， 13C-APT譜圖如圖3所示。
[0018] 對(duì)圖2和圖3進(jìn)行圖譜解析，將圖2和圖3各峰進(jìn)行歸屬，圖2和圖3的峰歸屬如表2所 示，通過(guò)圖2、圖3以及表1的數(shù)據(jù)可知，無(wú)色粉末的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示，根據(jù)有關(guān)化合物 的命名規(guī)則命名為3β，7β_二羥基-4α-羥甲基-12(13)，15(16)-雙鍵-卡山烷二萜。
[0019] 英文名為3β, 70-dihydroxyl-4a-hydroxymethyl-12(13)，15(16)-diene_cass。
[0020] 表 2
上述只是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制。任何熟悉本領(lǐng)域 的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍的情況下，都可利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容對(duì)本 發(fā)明技術(shù)方案做出許多可能的變動(dòng)和修飾，或修改為等同變化的等效實(shí)施例。因此，凡是未 脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改、等 同變化及修飾，均應(yīng)落在本發(fā)明技術(shù)方案保護(hù)的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種化合物，其特征在于:具有如下式所示結(jié)構(gòu)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于：該化合物為無(wú)色粉末，易溶于氯仿、甲 醇。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于：該化合物對(duì)HeLa細(xì)胞和HT-29細(xì)胞均具 有抑制作用。4. 權(quán)利要求1或2或3所述化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。5. 權(quán)利要求1-3所述化合物的制備方法，其特征在于：云實(shí)種子干燥后粉碎過(guò)篩，加乙 醇加熱回流提取3次，每次1-3小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得總浸膏，總浸膏經(jīng) 100~200目硅膠拌樣，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脫，洗脫液減壓濃縮至 干;取氯仿層浸膏用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇（1:0-0:1)9梯度洗脫，得到9個(gè)餾分Fr A-I，F(xiàn)rH部分經(jīng)凝膠色譜洗脫后再用氯仿-甲醇作為洗脫液洗脫除去色素，然后樣品經(jīng)反相中 壓色譜柱經(jīng)甲醇-水（30:70; 50:50; 60:40; 70:30; 80:20; 90:10)梯度洗脫，得到六個(gè) 部份FrHl-6，其中FrH3經(jīng)高效液相色譜純化分離，采用甲醇-水洗脫，收集28.5分鐘的洗脫 液結(jié)晶即得。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述化合物的制備方法:其特征在于:所述加熱回流提取中云實(shí)種子 與乙醇的質(zhì)量體積比為1:8-1:12。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述化合物的制備方法:其特征在于:所述氯仿-甲醇洗脫液中氯仿 與甲醇的體積比為40:60-55:45。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述化合物的制備方法:其特征在于:所述甲醇-水洗脫液中甲醇與 水的體積比為68:32。
【文檔編號(hào)】C07C35/42GK106045819SQ201610490893
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】魏華, 田云剛, 鄭杰, 王建霞, 劉涵, 劉一涵, 向芳芳, 劉玲玲
【申請(qǐng)人】吉首大學(xué)