一種低鹽酪蛋白磷酸肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種低鹽酪蛋白磷酸肽的制備方法。本發(fā)明采用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)酶解前料液的pH，達(dá)到堿性酶最初需要的酶解條件，酶解反應(yīng)開(kāi)始后，隨著肽鍵的打開(kāi)會(huì)導(dǎo)致水解液pH值下降，恰好有利于中性蛋白酶反應(yīng)，加入中性蛋白酶進(jìn)行二次酶解，隨著pH進(jìn)一步降低，加入酸性蛋白酶，酶解適當(dāng)時(shí)間后，升溫滅酶，通過(guò)超濾、濃縮、噴霧干燥得到粉狀的酪蛋白磷酸肽。本發(fā)明制備的酪蛋白磷酸肽工藝，在傳統(tǒng)的制備工藝的基礎(chǔ)上，免除了脫鹽工序，簡(jiǎn)單可行，成本較低，所得成品為純白色粉末，無(wú)苦味，符合GB 31617?2014食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑酪蛋白磷酸肽對(duì)灰分的要求。
【專利說(shuō)明】
-種低鹽酪蛋白磯酸化的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種低鹽酪蛋白憐酸膚的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 酪蛋白憐酸膚(化Sein化OS地opeptides,CPP)是W牛乳酪蛋白為原料，通過(guò)生物 酶解制備得到的含有憐酸絲氨酸簇的天然活性膚。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，酪蛋白憐酸膚能夠促 進(jìn)人體對(duì)巧、鐵、鋒等二價(jià)礦物營(yíng)養(yǎng)素的吸收和利用，被譽(yù)為"礦物質(zhì)載體"，是目前唯一促 進(jìn)巧吸收的活性膚，同時(shí)具有增強(qiáng)免疫力、增強(qiáng)繁殖能力和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡的作用。
[0003] 酪蛋白憐酸膚因其具有良好的生物活性，可促進(jìn)人體對(duì)巧的吸收，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用 于食品行業(yè)中，尤其是嬰幼兒配方乳粉行業(yè)。美國(guó)、德國(guó)、日本等國(guó)家已經(jīng)把酪蛋白憐酸膚 大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。目前我國(guó)將酪蛋白憐酸膚作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑管理使用，陸續(xù)廣泛添加到 液態(tài)奶、乳制品、嬰幼兒奶粉等其他食品中，其應(yīng)用和發(fā)展呈現(xiàn)出強(qiáng)勁的上升的趨勢(shì)。
[0004] 酪蛋白憐酸膚(化Sein化OS地opeptides,CPP)生產(chǎn)多數(shù)采用酶法生產(chǎn)，為了達(dá)到 酶解合適的酸堿條件，一般都要加入鹽酸或者氨氧化鋼調(diào)節(jié)抑，最終在產(chǎn)品中都會(huì)產(chǎn)生氯 化鋼鹽，增加了水解物下游處理過(guò)程中脫鹽和除雜難度。再者，由于鋼鹽來(lái)源廣，累計(jì)在一 起很容易造成鋼超標(biāo)。所W，目前食品都對(duì)鋼有嚴(yán)格的限制，尤其是嬰幼兒食品，運(yùn)就限制 低鋼鹽酪蛋白憐酸膚的應(yīng)用，不利于降低產(chǎn)品成本和提高產(chǎn)品純度。
[0005] 本發(fā)明立足于酪蛋白憐酸膚良好的市場(chǎng)前景W及在嬰幼兒配方奶粉與其他乳制 品中廣泛使用的現(xiàn)狀，結(jié)合公司在乳制品加工方面多年積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，對(duì)嬰幼兒乳粉生 產(chǎn)過(guò)程中剩余的酪蛋白進(jìn)行可控酶解，避免產(chǎn)生氯化鋼鹽，避免增加水解物下游處理過(guò)程 中脫鹽和除雜難度。
[0006] 本發(fā)明生產(chǎn)出具有良好口感的低鹽酪蛋白憐酸膚，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)牛乳的深加工并延 長(zhǎng)乳制品加工產(chǎn)業(yè)鏈，可有力地推動(dòng)我國(guó)酪蛋白憐酸膚的供應(yīng)能力，推進(jìn)水解酪蛋白行業(yè) 進(jìn)一步發(fā)展，提升行業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種低鹽酪蛋白憐酸 膚的制備方法。
[000引本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的采用的技術(shù)方案是:本發(fā)明克服現(xiàn)有酪蛋白憐酸膚因脫鹽 造成工藝耗長(zhǎng)、成本高、營(yíng)養(yǎng)成分損失大等不足，提供一種用多種蛋白酶聯(lián)合水解的方式制 備酪蛋白憐酸膚，采用氨氧化鐘溶液調(diào)節(jié)酶解前料液的抑，達(dá)到堿性酶最初需要的酶解條 件，酶解反應(yīng)開(kāi)始后，隨著膚鍵的打開(kāi)會(huì)導(dǎo)致水解液pH值下降，恰好有利于中性蛋白酶反 應(yīng)，加入中性蛋白酶進(jìn)行二次酶解，隨著抑進(jìn)一步降低，加入酸性蛋白酶，酶解適當(dāng)時(shí)間后， 升溫滅酶，通過(guò)超濾、濃縮、噴霧干燥得到粉狀的酪蛋白憐酸膚。本發(fā)明自酶解開(kāi)始后，酶解 過(guò)全程不再加入酸堿調(diào)節(jié)，從而不需脫鹽就得到低鹽的酪蛋白憐酸膚。
[0009] -種低鹽酪蛋白憐酸膚的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：（1)取一定量的酪蛋白， 向酪蛋白中加入5-10倍量的無(wú)菌水，于80-90°C攬拌溶解，保溫15-30min，使酪蛋白變性； (2)變性后的酪蛋白溶液溫度降至50-60°C，保溫狀態(tài)，添加 l-2mol/L的氨氧化鐘溶液將酪 蛋白溶液pH值調(diào)至8-10，加入堿性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05-0.2 %，酶解 15-60min ; (3)繼續(xù)加入中性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05-0.2 %，酶解10-60min; (4)繼續(xù)加入酸性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05-0.2%，酶解lO-eOmin后 迅速升溫至80-95°(：滅酶，并保溫15-30111111，9巧直達(dá)到6-7;(5)將步驟(4)迅速降溫至15-30 °C，濃縮至料液濃度為15-40%，經(jīng)過(guò)冷凍干燥、噴霧干燥、真空干燥的任意一種干燥成粉。
[0010] 進(jìn)一步，本發(fā)明在所述步驟(4)與步驟(5)之間添加一步純化過(guò)程，采用平均截留 分子量5KD的超濾膜進(jìn)行純化，得到平均分子量小于5KD的酪蛋白憐酸膚。
[0011] 進(jìn)一步，本發(fā)明所述步驟(4)中噴霧干燥的出風(fēng)溫度為60-100°C，進(jìn)風(fēng)溫度為140-200 °C。
[001 ^ 進(jìn)一步，本發(fā)明所述氨氧化鐘溶液濃度為0.0 l-0.2mol/L。
[0013] 本發(fā)明制備的酪蛋白憐酸膚的工藝，在傳統(tǒng)的制備工藝的基礎(chǔ)上，免除了脫鹽工 序，簡(jiǎn)單可行，成本較低，所得成品為純白色粉末，無(wú)苦味，得率大于等于25%，N/P摩爾比4 ~5:1，鹽分含量小于等于10%，符合GB31617-2014食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑酪蛋白憐酸膚對(duì)灰分的 要求。本發(fā)明得到低鹽酪蛋白憐酸膚，不僅保證了酪蛋白憐酸膚產(chǎn)品的質(zhì)量，還降低了生產(chǎn) 成本，提高了產(chǎn)品的生產(chǎn)效率。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
[001引實(shí)施例1
[0016] -種低鹽酪蛋白憐酸膚的制備方法。
[0017] 按照下述步驟進(jìn)行：（1)取一定量的酪蛋白，向酪蛋白中加入5倍量的無(wú)菌水，于90 °(：攬拌溶解，保溫15min，使酪蛋白變性；（2)變性后的酪蛋白溶液溫度降至50°C，保溫狀態(tài)， 添加 Imol/L的氨氧化鐘將酪蛋白溶液抑值調(diào)至9，加入堿性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì) 量的0.05%，酶解30min; (3)繼續(xù)加入中性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05 %，酶 解25min; (4)繼續(xù)加入酸性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05 %，酶解15min后迅速 升溫至95°C滅酶，并保溫30min，測(cè)試抑值達(dá)到7;(5)將步驟(4)迅速降溫至15°(：，濃縮至料 液濃度為15%，經(jīng)過(guò)噴霧干燥，噴霧干燥的出風(fēng)溫度為80°C，進(jìn)風(fēng)溫度為130°C，得到干燥粉 末，裝入成品袋。
[001引實(shí)施例2
[0019] -種低鹽酪蛋白憐酸膚的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：（1)取一定量的酪蛋白， 向酪蛋白中加入6倍量的無(wú)菌水，于80°C攬拌溶解，保溫15min，使酪蛋白變性；（2)變性后的 酪蛋白溶液溫度降至50°C，保溫狀態(tài)，添加氨氧化鐘(O.Olmol/L)，將酪蛋白溶液抑值調(diào)至 10，加入堿性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05 %，酶解15min; (3)繼續(xù)加入中性蛋 白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05%，酶解15min; (4)繼續(xù)加入酸性蛋白酶，加入量是 酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05%，酶解15min后迅速升溫至80°C滅酶，并保溫30min，測(cè)試pH值達(dá)到 7; (5)將步驟(5)純化液迅速降溫至15°C，濃縮至料液濃度為15%，經(jīng)過(guò)冷凍干燥得到干燥 成粉。
[0020] 實(shí)施例3
[0021] -種低鹽酪蛋白憐酸膚的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：（1)取一定量的酪蛋白， 向酪蛋白中加入10倍量的無(wú)菌水，于90°C攬拌溶解，保溫30min，使酪蛋白變性；（2)變性后 的酪蛋白溶液溫度降至60°C，保溫狀態(tài)，添加氨氧化鐘(O.Olmol/L)將酪蛋白溶液抑值調(diào)至 10，加入堿性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05 %，酶解60min; (3)繼續(xù)加入中性蛋 白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.2%，酶解60min; (4)繼續(xù)加入酸性蛋白酶，加入量是酪 蛋白溶液質(zhì)量的0.2%，酶解20min后迅速升溫至85°C滅酶，并保溫15min;(5)采用平均截留 分子量5KD的超濾膜進(jìn)行步驟(4)純化，得到平均分子量小于5KD的酪蛋白憐酸膚；（6)迅速 將步驟(5)降溫至15°C，濃縮至料液濃度為20%，經(jīng)過(guò)冷凍干燥的到干燥成粉。
[0022] 對(duì)比實(shí)施例4
[0023] 根據(jù)專利文件CN201310523826.1制備高濃度蛋白憐酸膚，酶解之后選用超濾+納 濾得到高純度的蛋白憐酸膚。
[0024] 目前一般采用超濾加納濾的方式對(duì)酪蛋白憐酸膚處理提高其純度，本發(fā)明僅用超 濾，省去了納濾，不僅節(jié)約了成本，同時(shí)減少了酪蛋白憐酸膚的損失。
[0025] W下將對(duì)比實(shí)施例與實(shí)施例3進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比，
[00%] 表1.不同制備工藝對(duì)比分析
[0027]
[002引備注:均采用6忍190 nf過(guò)濾面積的UF和NF，進(jìn)料濃度W10-12 %計(jì)算。
[0029] 由表1得出，校對(duì)對(duì)比實(shí)施例，本申請(qǐng)超濾過(guò)程成本減少了2倍多，工時(shí)縮短了 1.5 倍，蛋白質(zhì)的損失率僅為0.5%，較對(duì)比實(shí)施例大大降低，實(shí)現(xiàn)了較好的生產(chǎn)效率和產(chǎn)品轉(zhuǎn) 化率。
[0030] 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在 不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠W其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論 從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán) 利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有 變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
[0031] 此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書按照實(shí)施方式加 W描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包 含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書的運(yùn)種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng) 將說(shuō)明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可W經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員 可W理解的其他實(shí)施方式。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種低鹽酪蛋白磷酸肽的制備方法，其特征在于：按照下述步驟進(jìn)行：（1)取一定量 的酪蛋白，向酪蛋白中加入5-10倍量的無(wú)菌水，于80-90°C攪拌溶解，保溫15-30min，使酪蛋 白變性；（2)變性后的酪蛋白溶液溫度降至50-60°C，保溫狀態(tài)，添加 l-2mol/L的氫氧化鉀溶 液將酪蛋白溶液pH值調(diào)至8-10，加入堿性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05-0.2 %， 酶解15-60min; (3)繼續(xù)加入中性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05-0.2%，酶解10-60min; (4)繼續(xù)加入酸性蛋白酶，加入量是酪蛋白溶液質(zhì)量的0.05-0.2%，酶解10-60min后 迅速升溫至80-95°(：滅酶，并保溫15-301^11，？!1值達(dá)到6-7 ;(5)將步驟(4)迅速降溫至15-30 °C，濃縮至料液濃度為15-40%，經(jīng)過(guò)冷凍干燥、噴霧干燥、真空干燥的任意一種干燥成粉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低鹽酪蛋白磷酸肽的制備方法，其特征在于：所述步驟 (4)與步驟(5)之間添加一步純化過(guò)程，采用平均截留分子量5KD的超濾膜進(jìn)行純化，得到平 均分子量小于5KD的酪蛋白磷酸肽。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低鹽酪蛋白磷酸肽的制備方法，其特征在于：所述步驟 (4)中噴霧干燥的出風(fēng)溫度為60-100 °C，進(jìn)風(fēng)溫度為140-200 °C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低鹽酪蛋白磷酸肽的制備方法，其特征在于:氫氧化鉀溶 液濃度為〇. 01Umol/L。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK105838768SQ201610312495
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】張亮
【申請(qǐng)人】美泰科技（青島）股份有限公司