抗cxcl16抗體和抗cxcr6抗體在治療或檢測癌癥中的用途
【專利摘要】本申請公開了使用CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者在受試者中預(yù)防或抑制癌細(xì)胞的生長或轉(zhuǎn)移的方法。本申請還公開了在受試者中檢測癌癥或監(jiān)測癌癥進(jìn)展的方法。
【專利說明】抗CXCL16抗體和抗CXCR6抗體在治療或檢測癌癥中的用途
[0001]本發(fā)明要求享有于2011年9月15日提交的第13/233，769號美國專利申請(其為2010年12月14日提交的第12/967，273號美國專利申請的部分繼續(xù)申請)的優(yōu)先權(quán)。并在此將上述申請公開的全部內(nèi)容通過引用方式并入本申請。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本申請主要涉及抗趨化因子抗體和/或抗趨化因子受體抗體在治療或檢測和/或監(jiān)測癌癥(cancer)的進(jìn)展上的用途。
【背景技術(shù)】
[0003]在美國，癌癥是死亡的主要原因之一。大多數(shù)癌癥僅源于單一的贅生性細(xì)胞。贅生性細(xì)胞增殖以形成局部的“腫瘤”。腫瘤僅僅是指腫脹；它不一定癌性的。僅在其位置或者開始處生長而不會向遠(yuǎn)處擴(kuò)散的腫瘤是良性腫瘤，而不是癌癥。然而，具有擴(kuò)散能力的腫瘤(無論實(shí)際上是或否)被稱為惡性腫瘤或癌癥。癌癥可通過血液或淋巴系統(tǒng)擴(kuò)撒到區(qū)域淋巴結(jié)，并通過被稱為轉(zhuǎn)移的過程擴(kuò)撒到較遠(yuǎn)的位置。轉(zhuǎn)移的癌癥比較難以治療，由于其此刻擴(kuò)撒到許多不同的組織和器官。現(xiàn)已證實(shí)，在許多類型的癌癥(如乳腺癌，結(jié)腸癌，卵巢癌和前列腺癌)中，早期治療能夠提高生存率。
[0004]趨化因子是小的細(xì)胞因子樣蛋白質(zhì)的超家族，其抗水解，促進(jìn)新生血管形成或者內(nèi)皮細(xì)胞生長抑制，誘導(dǎo)細(xì)胞支架重排，激活或鈍化淋巴細(xì)胞，并通過與G蛋白偶聯(lián)受體的相互作用介導(dǎo)趨化作用。趨化因子可以介導(dǎo)表達(dá)其受體的宿主細(xì)胞的生長和遷移。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本申請的一個方面涉及一種治療受試者的黑素瘤、淋巴瘤、白血病、肉瘤、胚細(xì)胞瘤或癌(carcinoma)的方法。在一個實(shí)施方式中，該方法包括向所述受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或其組合的步驟。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括給所述受試者施用在所述受試者中表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或其組合的表達(dá)載體的步驟。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括用有效量的作為蛋白質(zhì)、肽或編碼基因的CXCL16和/或CXCR6免疫原來誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體以使受試者免疫的步驟。在另一個實(shí)施例中，所述方法包括以下步驟:給受試者施用有效量的表達(dá)載體，該表達(dá)載體表達(dá)下列試劑:能夠(I)抑制CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑，能夠(2)抑制CXCL16和CXCR6之間的相互作用的試劑，或能夠(3)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的試劑。
[0006]本申請的另一個方面涉及一種在受試者中預(yù)防或抑制具有CXCL16和/或CXCR6的升高的表達(dá)的癌細(xì)胞的遷移或轉(zhuǎn)移的方法。在一個實(shí)施方式中，該方法包括給受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或其組合的步驟。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括給所述受試者施用表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或其組合的表達(dá)載體的步驟。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括用有效量的作為蛋白質(zhì)、肽或編碼基因的CXCL16和/或CXCR6免疫原來誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體以使受試者免疫的步驟。在另一個實(shí)施例中，所述方法包括以下步驟:給受試者施用有效量的表達(dá)載體，該表達(dá)載體表達(dá)下列試劑:能夠(I)抑制CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑，能夠(2)抑制CXCL16和CXCR6之間的相互作用的試劑，或能夠(3)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的試劑。
[0007]本申請的另一個方面涉及一種治療受試者癌癥的方法。該方法包括以下步驟:檢測來自所述受試者的生物樣本中的CXCL16的表達(dá)水平和/或CXCR6的表達(dá)水平，如果所述生物樣本中檢測出CXCL16的表達(dá)水平和/或CXCR6的表達(dá)水平升高，則向受試者施用(I)治療有效量的CXCL16的抗體和/或CXCR6的抗體或者(2)在所述受試者中表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或其組合的表達(dá)載體。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括以下步驟:檢測來自所述受試者的生物樣本中CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)水平，如果所述生物樣本中檢測出CXCL16的表達(dá)水平和/或CXCR6的表達(dá)水平升高，則向受試者施用有效量的表達(dá)載體，該表達(dá)載體表達(dá)下列試劑:能夠(I)抑制CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑，能夠(2)抑制CXCL16和CXCR6之間的相互作用的試劑，或能夠(3)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的試劑?；蛘撸绻錾飿颖局袡z測出CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)水平升高，則向受試者施用有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、其組合，或者用有效量的CXCL16和/或CXCR6誘發(fā)抗體反應(yīng)來抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性以使受試者免疫。
[0008]本申請的另一個方面涉及一種增強(qiáng)化療效果的方法。該方法包括向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用有效量的抗CXCL16抗體，抗CXCR6抗體，或其組合。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體，或其組合的表達(dá)載體的步驟。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括用有效量的作為蛋白質(zhì)、肽或編碼基因的CXCL16和/或CXCR6免疫原來誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體以使受試者免疫的步驟。在另一個實(shí)施例中，所述方法包括以下步驟:給受試者施用有效量的表達(dá)載體，該表達(dá)載體表達(dá)下列試劑:能夠(I)抑制CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑，或能夠(2)抑制CXCL16和CXCR6之間的相互作用的試劑，或能夠(3)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的試劑。
[0009]本申請的一個方面涉及對受試者檢測癌癥。該方法包括:檢測在從所述受試者得到的生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平；并比較該生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平和所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的正常表達(dá)水平，其中，所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的高于正常的表達(dá)水平意味著所述受試者存在癌癥，其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的正常表達(dá)水平是預(yù)定值或者從與所述生物樣本相同的來源或者類型的已知的正常非癌細(xì)胞的對照樣本中得到的，其中，所述癌癥為黑素瘤或者癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16、或CXCR6、或者CXCL16和CXCR6兩者。
[0010]本申請的另一個方面涉及一種評估患有癌癥的受試者的預(yù)后的方法。該方法包括:確定來自所述受試者的生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平；并比較該生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平和所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的對照表達(dá)水平，其中，相對于對照水平，在該生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的較高的表達(dá)水平意味著受試者的預(yù)后差，且其中，相對于對照水平，在該生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的較低的或相似的表達(dá)水平意味著受試者的預(yù)后好，其中，差的預(yù)后表示該癌癥是攻擊型的或者侵略型的，其中，所述癌癥為黑素瘤或者癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16、或CXCR6、或者CXCL16和CXCR6兩者。
[0011]本申請的另一個方面涉及監(jiān)測受試者癌癥治療過程的方法。該方法包括:在治療過程中或在治療之后，檢測從受試者得到的一個或多個生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平，并比較所述一個或多個生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平和所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的對照表達(dá)水平，其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的對照水平是在所述受試者中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的治療前水平，或者是預(yù)定的參照水平，其中，如果所述一個或多個生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物相似于或者低于所述對照水平，則該治療被視為有效的，其中，所述癌癥為黑素瘤或者癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16、或CXCR6、或CXCL16和CXCR6兩者。
[0012]本申請的另一個方面涉及用于檢測癌癥或監(jiān)測癌癥進(jìn)展的試劑盒。該試劑盒包括:用于測定在生物樣本中的CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑；以及如何使用所述試劑的指示，其中，所述試劑包括抗CXCL16抗體，抗CXCR6抗體，或上述兩者。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1顯示出相對于非腫瘤對照，前列腺癌組織的CXCR6和CXCL16的表達(dá)。
[0014]圖2顯示出CXCR6在前列腺細(xì)胞系中的表達(dá)。
[0015]圖3顯示出CXCR6介導(dǎo)的前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。
[0016]圖4顯示出與前列腺癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移相關(guān)的CXCL16依賴的信號級聯(lián)放大。
[0017]圖5顯示出在前列腺癌細(xì)胞系中CXCL16依賴的p_埃茲蛋白(p_Ezrin)磷酸化。
[0018]圖6顯示出前列腺癌細(xì)胞系的CXCL16誘導(dǎo)的⑶51/⑶61 ( α ν β 3)表達(dá)。
[0019]圖7顯示出ERK1/2和NF- κ B的CXCL16介導(dǎo)的磷酸化。
[0020]圖8顯示出乳腺癌組織的CXCR6、CXCL16和ADAMlO的表達(dá)。
[0021]圖9顯示出乳腺細(xì)胞系的CXCR6的表達(dá)。
[0022]圖10顯示出乳腺癌細(xì)胞系的CXCL16介導(dǎo)的F-肌動蛋白聚合。
[0023]圖11顯示出肺癌患者血清中的CXCL16的水平。
[0024]圖12顯示出非腫瘤性肺和肺癌組織的CXCR6的表達(dá)。
[0025]圖13顯示出肺癌組織的CXCL16的表達(dá)。
[0026]圖14顯示出相對于非腫瘤對照，卵巢癌組織的CXCR6和CXCL16的表達(dá)。
[0027]圖15顯示出相對于非腫瘤對照，結(jié)腸癌組織的CXCR6和CXCL16的表達(dá)。
[0028]圖16顯示出ABC藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的CXCR6依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
【具體實(shí)施方式】
[0029]提供以下的詳細(xì)說明以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠?qū)嵤┖褪褂帽景l(fā)明。為了解釋的目的，所提及的特定命名提供了對于本發(fā)明的徹底理解。然而，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，顯然這些具體的細(xì)節(jié)并不需要在本發(fā)明中實(shí)施。具體應(yīng)用的表述僅用作典型的實(shí)施例。本發(fā)明并不限于所示的實(shí)施方式，而是希望包括與在此公開的原理和特征相一致的可能的最寬范圍。
[0030]除非另有定義，本發(fā)明中使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的含義。此外，除非上下文另有規(guī)定，單數(shù)術(shù)語應(yīng)包括復(fù)數(shù)情形，且復(fù)數(shù)術(shù)語應(yīng)包括單數(shù)情形。
[0031]定義
[0032]本文所用的以下術(shù)語應(yīng)該具有以下涵義:
[0033]本文所用的術(shù)語“治療”(treat、treating或treatment)是指減輕或消除疾病和/或其伴隨的癥狀的方法。本文所用的術(shù)語“預(yù)防”(prevent、preventing或prevention)是指防止受試者獲得疾病和/或其伴隨的癥狀的方法。在一些實(shí)施方式中，術(shù)語“預(yù)防”(prevent ^preventing或prevention)是指減少獲得疾病和/或其伴隨的癥狀的風(fēng)險的方法。
[0034]如在此所使用的，術(shù)語“抗體”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即，包含特異性結(jié)合抗原(與抗原發(fā)生免疫反應(yīng))的抗原結(jié)合部位的分子。術(shù)語“抗體”使用了廣義含義，并且具體地包括單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們顯示所需的生物活性。“特異性結(jié)合”或者“與…發(fā)生免疫反應(yīng)”是指，抗體與所需的抗原的一個或者多個抗原決定族反應(yīng)，并且不會與其它多肽反應(yīng)(即，結(jié)合)或者與其它多肽以非常低的親和力結(jié)合。術(shù)語“抗體”也包括抗體片段，所述抗體片段包含全長抗體的一部分，通常是其抗原結(jié)合或可變區(qū)。抗體片段的實(shí)例包括Fab，F(xiàn)ab'、F(ab' )2和Fv片段；雙體；線性抗體；單鏈抗體(scFv)分子；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，合意的是，例如，使用抗體片段，而不是完整抗體，以提高腫瘤穿透性。在這種情況下，合意的是，使用通過本領(lǐng)域任何已知方式修飾以提高其血清半衰期的抗體片段。
[0035]在此所使用的術(shù)語“單克隆抗體”是指從基本上同系的抗體的群體獲得的抗體，也就是說，除了可以以較小量存在的可能自然發(fā)生的突變，包含群體的單個抗體是相同的。在此所述單克隆抗體特別包括“嵌合”抗體以及這些抗體的片段，在所述“嵌合”抗體中，重鏈和/或輕鏈的一部分與源自特定種或者屬于特定抗體類別或亞類的抗體中的相應(yīng)的序列相同或者同系，而鏈的其余部分與源自其它種或者屬于其它抗體類別或亞類的抗體中相應(yīng)的序列相同或者同系，只要它們顯示所需的生物活性(U.S.Pat.N0.4，816，567;以及Morrison 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA 81:6851-6855 (1984))。
[0036]非人抗體的“人化”形式是包含源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合體抗體。對于絕大部分，人化抗體是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中，將來自受體高變區(qū)的殘基由來自具有所需特異性、親和性和/或容量的非人種(供體抗體)(例如，小鼠、大鼠、兔子或者非人靈長動物)的高變區(qū)的殘基所替代。制備人化抗體和其它嵌合體抗體的方法為本領(lǐng)域已知的方法。
[0037]“雙特異性抗體”是對于至少兩個不同抗原具有結(jié)合特異性的抗體。在當(dāng)前情況下，所述結(jié)合特異性中的一種是對于CXCL16或CXCR6的。第二結(jié)合靶為任何其它抗原，并且有利地為細(xì)胞表面蛋白或者受體或受體亞單元。制備雙特異性抗體的方法為本領(lǐng)域已知的方法。
[0038]“非同性結(jié)合抗體(heteroconjugate antibody) ”的使用也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。非同性結(jié)合抗體由兩種共價結(jié)合的抗體組成。這種抗體已經(jīng)，例如，被提出靶向免疫系統(tǒng)細(xì)胞至不該有的細(xì)胞(美國專利第4，676，980號)。應(yīng)該注意到，可以利用已知的合成蛋白質(zhì)化學(xué)的方法(包括涉及到交聯(lián)劑的那些方法)在體外制備抗體。
[0039]本申請還考慮使用“免疫結(jié)合物”，包括與細(xì)胞毒性劑(如毒素(例如，細(xì)菌、真菌、植物或動物來源的酶促活性毒素或其片段))或放射性同位素(即放射性結(jié)合物(radioconjugate))結(jié)合的抗體。可以使用的酶促活性毒素及其片段包括白喉A鏈，白喉毒素的非結(jié)合活性片段，外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌)，蓖麻毒素A鏈，相思子毒素A鏈，蒴蓮根毒素A鏈，巨曲霉蛋白毒素(a -sarcin),油桐蛋白，石竹素蛋白，垂序商陸(Phytolacaamericana)蛋白(PAP1、PAPII 和 PAP-S),苦瓜(momordica charantia)抑制劑，麻瘋樹毒蛋白，巴豆毒蛋白，白樹毒素，米托潔林(mitogellin)，局限曲菌素，酚霉素，依諾霉素和新月毒素(tricothecene)。各種放射性核素可用于制備放射性結(jié)合的抗體。實(shí)例包括212Bi，1311，131In，90Y 和 186Re。
[0040]在藥理學(xué)意義上說，在本申請的上下文中，抗體的“治療有效量”指的是就抗體對治療是有效的而言在疾病的預(yù)防或治療中有效的量。“疾病”是將從用抗體治療中獲益的任何狀態(tài)，包括癌和化學(xué)抗性。這包括慢性和急性疾病或病癥，包括正在討論的那些使哺乳動物易患病的病理狀態(tài)。
[0041]本文所用的術(shù)語“腫瘤”是指通過細(xì)胞異常生長形成的贅生物或?qū)嶓w性病變。腫瘤可以是良性的、惡變前的或惡變的。
[0042]“原發(fā)腫瘤”是指出現(xiàn)在受試者體內(nèi)的第一個位置的腫瘤，其可區(qū)別于出現(xiàn)在受試者體內(nèi)遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤的位置上的“轉(zhuǎn)移性腫瘤”。
[0043]本文所用的術(shù)語“癌”是指或解釋為典以未調(diào)節(jié)細(xì)胞生長為典型特征的哺乳動物的生理病癥。示例性的癌癥包括:癌，黑素瘤，肉瘤，淋巴瘤，白血病，生殖細(xì)胞瘤，和胚細(xì)胞瘤。所述癌癥的更具體的例子包括鱗狀細(xì)胞癌(例如，鱗狀上皮細(xì)胞癌)，肺癌，包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌和肺鱗狀細(xì)胞癌，腹膜癌，肝細(xì)胞癌，胃(gastric)癌或胃(stomach)癌(包括胃腸癌)，胰腺癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，子宮頸癌，卵巢癌，肝癌(livercancer ),膀胱癌,尿路癌，肝細(xì)胞瘤(hepatoma),乳腺癌,結(jié)腸癌,直腸癌,結(jié)腸直腸癌，子宮內(nèi)膜或子宮癌，唾液腺癌，腎癌或腎臟癌(kidney or renal cancer)，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝癌(kpatic carcinoma),肛門癌，陰莖癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤和B細(xì)胞淋巴瘤，腦和頭及頸部癌，以及相關(guān)的轉(zhuǎn)移灶。
[0044]在此所用的術(shù)語“癌”是指侵襲惡性腫瘤，其由變異的上皮細(xì)胞或者未知的組織發(fā)生變異的細(xì)胞組成，但是其具有與上皮細(xì)胞相關(guān)的特定分子或者組織特性，例如細(xì)胞角蛋白或者細(xì)胞間橋的生成。本申請的示例性的癌包括卵巢癌、陰道癌、子宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、肛門癌、直腸癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、胰島素瘤、腺癌、腺鱗癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、乳腺癌、肺癌、食管癌、口腔癌、腦癌、髓母細(xì)胞瘤、神經(jīng)外胚層瘤、膠質(zhì)瘤、腦垂體瘤和骨癌。
[0045]在此所用的術(shù)語“淋巴瘤”是指免疫系統(tǒng)的淋巴細(xì)胞的癌癥。淋巴瘤通常表現(xiàn)為實(shí)體瘤。示例性淋巴瘤包括:小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、淋巴衆(zhòng)細(xì)胞淋巴瘤、Waldenstrdm巨球蛋白血癥、脾邊緣區(qū)淋巴瘤、漿細(xì)胞瘤、結(jié)外邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、結(jié)節(jié)邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(NMZL)、濾泡性淋巴瘤、外套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大B細(xì)胞淋巴瘤、原發(fā)性滲出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、典型性霍杰金淋巴瘤、結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型的霍杰金淋巴瘤、成人T細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤(鼻型)、腸病型T細(xì)胞淋巴瘤、肝脾T細(xì)胞淋巴瘤、亞頂極NK細(xì)胞淋巴瘤、真菌病真菌瘤、塞扎里綜合征、原發(fā)性侵犯皮膚CD30陽性T細(xì)胞淋巴增生性障礙、原發(fā)性侵犯皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細(xì)胞性T細(xì)胞淋巴瘤、非特異性外周T細(xì)胞淋巴瘤和間變性大細(xì)胞淋巴瘤。典型性霍杰金淋巴瘤的示例形式包括:結(jié)節(jié)性硬化型、混合細(xì)胞型、富淋巴細(xì)胞型和淋巴細(xì)胞耗盡型或者淋巴細(xì)胞不耗盡型。
[0046]在此所使用的術(shù)語“肉瘤”為由胚胎中胚層生發(fā)展成的許多組織之中的一種組織中的變異細(xì)胞引起的癌癥。因此，肉瘤包括骨、軟骨、脂肪、肌肉、血管和造血組織的腫瘤。例如，骨肉瘤來源于骨，軟骨肉瘤來源于軟骨，脂肪肉瘤來源于脂肪，以及平滑肌肉瘤來源于平滑肌。示例性肉瘤包括:Askin瘤、葡萄狀肉瘤(botryodies)、軟骨肉瘤、尤因原始神經(jīng)外胚葉瘤(Ewing' s-PNET)、惡性血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤、惡性神經(jīng)鞘瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤。軟組織肉瘤的亞類包括:軟組織腺泡狀肉瘤、血管肉瘤、葉狀囊肉瘤、皮膚纖維肉瘤韌帶樣纖維瘤、結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞腫瘤、上皮樣肉瘤、骨外軟骨肉瘤、纖維肉瘤、血管外皮細(xì)胞瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤和滑膜肉瘤。
[0047]在此所使用的術(shù)語“白血病”是指以白細(xì)胞異常增加為特征的血液或骨髓癌。白血病是覆蓋疾病譜的廣義術(shù)語。反過來，其是稱為血液腫瘤的更寬泛疾病組的一部分。白血病細(xì)分為許多大組；第一分組在白血病的急性和慢性形式之間。急性白血病的特征在于，不成熟血細(xì)胞的數(shù)量迅速增加。由這些細(xì)胞導(dǎo)致的擁擠現(xiàn)象使骨髓不能產(chǎn)生健康血細(xì)胞。慢性白血病的特征在于，相對成熟但仍不正常的白細(xì)胞過度增長。通常在數(shù)月或數(shù)年間發(fā)展，所述細(xì)胞較比正常細(xì)胞以快得多的速率產(chǎn)生，從而導(dǎo)致血液中存在許多不正常的白細(xì)胞。白血病還通過受感染的細(xì)胞來細(xì)分。這一分級將白血病分為成淋細(xì)胞性白血病或者淋巴細(xì)胞性白血病，以及髓細(xì)胞性白血病或者骨髓性粒細(xì)胞性白血病。在成淋細(xì)胞性白血病或者淋巴細(xì)胞性白血病中，癌性變化發(fā)生在通常持續(xù)形成淋巴細(xì)胞的髓細(xì)胞類型中。在髓細(xì)胞性白血病或者骨髓性粒細(xì)胞性白血病中，癌性變化發(fā)生在通常持續(xù)形成紅細(xì)胞、一些其它類型白細(xì)胞和血小板的髓細(xì)胞類型中。結(jié)合這兩種分類方法提供了全部四種主要的分類。在這四種分類中的每一類中，存在幾種典型的亞類。也有罕見類型為落入這種分類法中。示例性白血病包括:急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、毛細(xì)胞性白血病(HCL)、T細(xì)胞前淋巴細(xì)胞性白血病、大顆粒淋巴細(xì)胞性白血病、少年型粒-單核細(xì)胞型白血病、B細(xì)胞前淋巴細(xì)胞性白血病、Burkitt白血病和成人T細(xì)胞性白血病。
[0048]在此所使用的術(shù)語“黑素瘤”為黑素細(xì)胞的癌癥或惡性瘤。黑素細(xì)胞是產(chǎn)生深色色素、黑色素的細(xì)胞，其對皮膚的顏色起作用。它們主要出現(xiàn)在皮膚中，但是也發(fā)現(xiàn)在身體的其它部位，包括腸和眼睛。黑素瘤分為以下實(shí)體類型和亞型:惡性雀斑樣痣、惡性雀斑樣痣黑素瘤、淺表擴(kuò)散性黑素瘤、肢端黑素瘤、黏膜黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、息肉狀黑素瘤、結(jié)締組織增生性黑素瘤、無黑素性黑素瘤、軟組織黑素瘤、具有小痣狀細(xì)胞的黑素瘤、具有Spitz痣特征的黑素瘤和色素層黑素瘤。
[0049]在此所使用的術(shù)語“生殖細(xì)胞瘤(GCT) ”為由生殖細(xì)胞獲得的贅生物。生殖細(xì)胞瘤可以是癌性的或非癌性的腫瘤。生殖細(xì)胞通常存在在生殖腺(卵巢和睪丸)的內(nèi)部。起源于生殖腺外部的生殖細(xì)胞瘤可以產(chǎn)生由胚胎發(fā)育過程中的錯誤導(dǎo)致的缺陷。生殖細(xì)胞瘤大概分為兩類:生殖細(xì)胞瘤的或精原細(xì)胞瘤的以及非生殖細(xì)胞瘤的或非精原細(xì)胞瘤的生殖細(xì)胞瘤。示例性生殖細(xì)胞瘤的或精原細(xì)胞瘤的生殖細(xì)胞瘤包括:生殖細(xì)胞瘤、無性細(xì)胞瘤和精原細(xì)胞瘤。示例性非生殖細(xì)胞瘤的或非精原細(xì)胞瘤的生殖細(xì)胞瘤包括:胚胎癌性細(xì)胞、內(nèi)胚層竇瘤或卵黃囊瘤(EST，YST)、絨毛膜癌、成熟型畸胎瘤、皮樣囊腫、末成熟畸胎瘤、畸胎瘤伴惡變、多胚瘤、性腺胚細(xì)胞瘤和混合GCT。
[0050]在此所用術(shù)語“轉(zhuǎn)移”是指腫瘤或癌從一個器官或部位擴(kuò)散到其它不鄰近的器官或部位。
[0051]術(shù)語“生物樣本”是指從哺乳動物受試對象(優(yōu)選是，人類受試者)獲得的生物材料的樣本，其包括組織、組織樣本、細(xì)胞樣本、腫瘤樣本、糞便樣本和生物液體，例如，血液、血漿、血清、唾液、尿液、腦液或脊髓液、淋巴液和乳頭抽吸物。生物樣本可以以如下形式獲得，例如，組織活檢檢查，如，吸出活組織檢查、刷拭活組織檢查、表面活組織檢查、針吸活組織檢查、鉆取活組織檢查、切除物活組織檢查、切開活組織檢查、切取活組織檢查和內(nèi)窺鏡活組織檢查。在一個實(shí)施方式中，所述生物樣本為血液、血清或血漿樣本。在另一個實(shí)施方式中，所述生物樣本為唾液樣本。在又一個實(shí)施方式中,所述生物樣本為尿液樣本。
[0052]生物樣本的“分離物”(例如，組織或者腫瘤樣本的分離物)是指已經(jīng)從樣本中分開、得到、抽取、純化或分離的材料或成分(例如，生物材料或成分)，并且優(yōu)選是基本上沒有無需要的成分和/或與生物樣本相關(guān)的雜質(zhì)或者污染物。
[0053]“組織樣本”包括從受試者(優(yōu)選人類受試者)獲得或者移除的組織的部件、切片、部份、塊或者碎片。
[0054]“腫瘤樣本”包括腫瘤的部件、切片、部份、塊或者碎片，例如，從受試者(優(yōu)選人類受試者)獲得或者移除的腫瘤，例如，從受試者的組織移除或抽取的腫瘤。腫瘤樣本可以從原發(fā)性腫瘤或者轉(zhuǎn)移性腫瘤中獲得。
[0055]用于治療目的的“哺乳動物”是指任何被分類為哺乳動物的動物，包括人類，非人類靈長類動物，家畜和農(nóng)場動物，動物園動物，競技動物，或?qū)櫸飫游铮?，狗，馬，貓，牛等優(yōu)選地，所述哺乳動物是人。
[0056]術(shù)語“抑制”是相對術(shù)語，與參考試劑相比，如果在施用一種試劑之后一種反應(yīng)或狀態(tài)在數(shù)量上減少，或者如果在施用試劑之后其減少，則該試劑抑制了該反應(yīng)或狀態(tài)。同樣地，術(shù)語“防止”并不一定意味著試劑完全消除了該反應(yīng)或狀態(tài)，只要反應(yīng)或狀態(tài)的至少一種特性被消除即可。因此，減少或防止感染或反應(yīng)(如病理反應(yīng))的組合物能夠，但不一定，完全消除這種感染或反應(yīng)，只要感染或反被應(yīng)被適度地減少即可，例如，減少了在沒有試劑的情況下或者在與參考試劑相比的情況下的至少約50%，如至少約70%，或約80%，或甚至約90% (即10%以下)的感染或反應(yīng)。
[0057]術(shù)語“增加水平”是指高于相關(guān)領(lǐng)域中通常定義或使用的正?；?qū)φ账降乃?。例如，在組織中免疫染色的增加水平為被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員認(rèn)為高于在對照組織中的免疫染色水平的免疫染色水平。
[0058]術(shù)語“CXCL16免疫原”和“CXCR6免疫原”指的是一種免疫原組合物，其包含(I)得自CXCL16或CXCR6的免疫原肽和/或(2)編碼并且能夠表達(dá)得自CXCL16或CXCR6的免疫原肽的表達(dá)載體。得自CXCL16或CXCR6的免疫原肽可以以融合蛋白的形式以增強(qiáng)其免疫原性。[0059]本文所用術(shù)語“生物樣本”，是指生物來源的材料，其可以是體液或身體產(chǎn)物，例如，血液、血漿、尿液、唾液、脊髓液、糞便、汗液或呼吸物。生物樣本還包括組織樣本和細(xì)胞樣本。
[0060]本文中，范圍可被表示為從“大約”一個特定的值和/或到“大約”另一個特定的值。當(dāng)表示這樣的范圍時，另一個實(shí)施方式包括從一個特定的值和/或到另一個特定的值。同樣地，當(dāng)值通過使用先行詞“大約”表示為近似值時，將被理解的是，該特定的值形成另一個實(shí)施方式。其將進(jìn)一步理解的是，范圍的各端點(diǎn)，無論是與另一端點(diǎn)有關(guān)，還是獨(dú)立于另一端點(diǎn)，都是顯著的。還應(yīng)該理解，在本文中公開了一些值，而每個值在此又被公開為除該值自身之外的“大約”該特定值。例如，如果公開了“10”這個值，那么“大約10”也被公開了。還應(yīng)該理解，當(dāng)公開一個值“小于或等于”某值時，如本領(lǐng)域技術(shù)人員適當(dāng)?shù)乩斫獾?，“大于或等于某值”以及在某些值之間的可能的范圍也被公開。例如，如果公開了“10”這個值，貝IJ “小于或等于10”，以及“大于或等于10”也被披露。
[0061]通過調(diào)節(jié)CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)或活性治療或預(yù)防癌癥
[0062]CXCL16是CXCR6趨化因子受體的配體。趨化因子和受體出現(xiàn)在癌癥的轉(zhuǎn)移和侵襲的調(diào)控中發(fā)揮作用。與正常組織相比，CXCL16和CXCR6在多種癌組織類型中都局部上調(diào)，包括卵巢癌，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，骨癌和胰腺癌。
[0063]在患有這些癌癥的患者的血清中，CXCL16的水平也被增加。此外，可溶性CXCL16趨化因子在體內(nèi)和體外都增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖和遷移。
[0064]CXCR6是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)的趨化因子受體家族的成員，其會在癌細(xì)胞生存中具有不同的作用，假定使其免受化療藥物的作用。CXCR6和CXCL16的相互作用激活A(yù)kt，真核起始因子4E結(jié)合蛋白1，并為雷帕霉素(mTOR)途徑的目標(biāo)。雷帕霉素抑制CXCL16誘導(dǎo)的癌細(xì)胞的侵襲、生長以及降低IL-8或VEGF的分泌，表明mTOR信號途徑可能參與CXCR6依賴的癌進(jìn)展。
[0065]CXCR6-CXCL16相互作用也參與整聯(lián)蛋白聚集和肝中浸潤T細(xì)胞的激活。整聯(lián)蛋白聚集可導(dǎo)致形成粘著斑激酶(FAK)復(fù)合物\和Ras、MAPK/ERK1/2和PI3K的激活。GSK3 β的Akt依賴的Ser9的磷酸化和凋亡因子的鈍化還通過穩(wěn)定β -連環(huán)蛋白和fct途徑(其負(fù)責(zé)對Twist-1和Snail-1的表達(dá)的調(diào)節(jié))支持了 PCa細(xì)胞的生存。連同癌細(xì)胞中的CXCR6-CXCL16相互作用，會通過增加細(xì)胞存活分子的表達(dá)、抑制促凋亡信號的激活、和/或調(diào)節(jié)ABC藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體和耐藥基因(例如，Twist-1和Snail-Ι)的轉(zhuǎn)錄而導(dǎo)致對化療藥物的保護(hù)。這對于CXCR6在癌細(xì)胞存活和減少化療的療效中的作用提供了一個強(qiáng)有力的理論。
[0066]使用抗CXCL16抗體和抗CXCR6抗體治療或預(yù)防癌癥的方法
[0067]本申請的一個方面涉及使用抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體治療或預(yù)防癌癥的方法。該方法包括向需要該治療的受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合。在一個實(shí)施方式中，所述癌癥為黑素瘤或癌。癌的例子包括但不限于，腺泡細(xì)胞癌、腺樣囊性癌、腺癌、腺鱗癌、腎上腺皮質(zhì)腺瘤、腎上腺皮質(zhì)癌、未分化癌、胺前體攝取脫羧細(xì)胞瘤(apudoma)、基底細(xì)胞癌、類癌、癌肉瘤、透明細(xì)胞癌、圓柱瘤(cylindroma)、囊腺癌、導(dǎo)管癌、胃泌素瘤、巨大細(xì)胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、高血糖素瘤、大嗜酸性細(xì)胞癌(Hurthle cell carcinoma)、胰島素瘤、大細(xì)胞癌、小葉癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、髓樣癌、粘液性囊腺瘤、粘液表皮樣癌、神經(jīng)外胚層瘤、嗜酸細(xì)胞瘤、乳頭狀汗腺腺瘤(papillaryhidradenoma)、乳頭狀瘤、多形性癌、肺母細(xì)胞瘤、肉瘤樣癌、漿液性囊腺瘤、印戒細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌、生長抑制素瘤(somatostatinoma)、梭細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、胸腺瘤、疣狀癌、以及劃線于源于內(nèi)胚層、外胚層(extodermal)、或上皮細(xì)胞的機(jī)體的內(nèi)或外表面的器官或組織。這些器官和組織包括，但不限于:骨、乳房、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、子宮頸、結(jié)腸、子宮內(nèi)膜、食道、輸卵管、胃腸道、腎、肺、淋巴、乳腺、口腔、卵巢、胰、腦垂體、前列腺、直腸、生殖道、呼吸道、胃、汗腺、胸腺、甲狀腺、子宮、陰道。
[0068]在另一個實(shí)施方式中，所述受試者被診斷患有導(dǎo)致癌細(xì)胞中的CXCL16和/或CXCR6表達(dá)升高的癌癥。這種癌癥的實(shí)例包括，但不限于，淋巴瘤、白血病、肉瘤、生殖細(xì)胞腫瘤、黑素瘤和癌。在一個實(shí)施方式中，所述受試者被診斷患有腦癌。在另一個實(shí)施方式中，所述受試者被診斷患有骨癌。在另一個實(shí)施方式中，所述受試者被診斷患有腦垂體腫瘤。在又一個實(shí)施方式中，所述受試者被診斷患有卵巢癌。
[0069]在另一個實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包括:確定來自受試者的組織中的CXCL16和/或CXCR6表達(dá)水平，以及如果檢測到CXCL16和/或CXCR6的水平提高，則向受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合。在另一個實(shí)施方式中，所述方法包括用有效量的作為蛋白質(zhì)、肽或編碼基因的CXCL16和/或CXCR6免疫原來誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體以使受試者免疫的步驟。
[0070]本申請的一種優(yōu)選的抗體是與人CXCL16結(jié)合并且優(yōu)選(部分或完全)阻斷CXCL16與受體(包括，但并不限于，CXCR6)結(jié)合的能力的抗體。本申請的另一種優(yōu)選的抗體是與人CXCR6結(jié)合并且優(yōu)選(部分或完全)阻斷細(xì)胞(如在其細(xì)胞表面表達(dá)CXCR6的趨化因子受體的腫瘤或癌細(xì)胞)與配體(包括，但不限于，CXCL16)結(jié)合的能力。本申請的又一種優(yōu)選的抗體是與人CXCR6結(jié)合并且優(yōu)選(部分或完全)阻斷可溶的CXCR6趨化因子受體與配體(包括，但并不限于，CXCL16)結(jié)合的能力的抗體。
[0071]在一個實(shí)施方式中，抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體是單克隆抗體。在另一個實(shí)施方式中，抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體是人化抗體。在另一個實(shí)施方式中，抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體是人化抗體片段。
[0072]本申請的另一個實(shí)施方式是在使用治療有效量的至少一種特異性針對另一種抗原的其他抗體對受試者進(jìn)行治療之前、同時或者之后，聯(lián)合使用抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體對受試者進(jìn)行治療。在一個實(shí)施方式中，所述另一種抗原是另一種趨化因子或趨化因子受體，如 CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCLIO、CXCL11、CXCLl2, CXCLl3, CXCL14, CXCLl5, CXCL16、CXCRl、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR5a、CXCR5b、CXCR6、CXCR7、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCLIO、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CCL27、CCL28、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCRlO、CCR11、XCL1、XCL2、XCR1、CX3CR1 或 CX3CL1。
[0073]在另一個實(shí)施方式中，所述另一種抗原是與癌相關(guān)的趨化因子或趨化因子受體，并且選自 CCLl、CCL2、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CXCLl3, CXCL16、CCR2、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CXCR7 和 CX3CR1。
[0074]在另一個實(shí)施方式中，所述另一種抗原是與黑素瘤相關(guān)的趨化因子或趨化因子受體，并且選自 CCL25、CCL27、CXCLU CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCLl2,CXCL13、CXCL16、CX3CL1、CCR9、CCRIO、CXCR1、CXCR2、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CXCR7 和 CX3CRI。
[0075]在另一個實(shí)施方式中，所述另一種抗原是與白血病相關(guān)的趨化因子或趨化因子受體，并且選自 CCLl、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CXCR5、CXCR7 和 CX3CR1。
[0076]在另一個實(shí)施方式中，所述另一種抗原是與淋巴瘤相關(guān)的趨化因子或趨化因子受體，并且選自 CXCL12、CXCLl3, CXCR4、CXCR5 和 CXCR7。
[0077]在另一個實(shí)施方式中，所述另一種抗原是與肉瘤相關(guān)的趨化因子或趨化因子受體，并且選自 CCLl、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCLl1、CCL13、CCL17、CCL22、CCL24、CXCLl2, CX3CL1、CCR3、CCR5、CCR8、CXCR4 和 CX3CR1。
[0078]其他的示例性抗原包括:分子，如腎素；生長激素，包括人生長激素和牛生長激素；生長激素釋放因子；甲狀旁腺激素；促甲狀腺激素；脂蛋白；α -1-抗胰蛋白酶；胰島素A鏈；胰島素B鏈；胰島素原；促卵泡激素；降鈣素；促黃體生成激素；胰高血糖素；凝血因子，如VIII因子，IX因子，組織因子和血管假性血友病因子；抗凝血因子，如蛋白C ;心房鈉尿因子；肺表面活性劑；纖溶酶原激活劑，如尿激酶或人體尿液或組織型纖溶酶原激活劑(t-PA);鈴蟾肽；凝血酶；造血生長因子；腫瘤壞死因子-α和腫瘤壞死因子；腦啡肽酶；血清白蛋白，如人血清白蛋白；抑制繆勒管物質(zhì)(Muellerian-1nhibitingsubstance);松弛素A鏈；松弛素B鏈；松弛素原(prorelaxin);小鼠促性腺素相關(guān)肽；微生物蛋白，如β -內(nèi)酰胺酶；DNA酶；IgE ;細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(CTLA)，如CTLA-4 ；抑制素；活化素；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF);激素或生長因子的受體；蛋白質(zhì)A或D ;類風(fēng)濕因子；神經(jīng)營養(yǎng)因子，如骨源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)營養(yǎng)因子-3，神經(jīng)營養(yǎng)因子-4，神經(jīng)營養(yǎng)因子-5或神經(jīng)營養(yǎng)因子-6 (NT-3，NT4，NT-5，或NT-6)，或神經(jīng)生長因子，如神經(jīng)生長因子-β ;血小板衍生生長因子(I3DGF);成纖維細(xì)胞生長因子，如FGF和bFGF ;表皮生長因子(EGF) ；ErbB受體家族的成員，如EGF受體；轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)，如TGF- α和TGF- β，包括TGF-β 1、TGF-β 2、TGF-β 3、TGF-β 4或TGF-β 5 ;胰島素樣生長因子-1和胰島素樣生長因子-1I (IGF-1和IGF-1I) ；des (1-3)-1GF-1 (腦IGF-1)，胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白；CD蛋白，如CD3, CD4, CD8,⑶19，CD20和CD34 ;促紅細(xì)胞生成素；骨誘導(dǎo)因子；免疫毒素；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP);干擾素，如干擾素-α，干擾素和干擾素-Y ;集落刺激因子(CSFs)，例如，M-CSF, GM-CSF 和 G-CSF ;白介素(ILs)，例如，IL-U IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9和/或IL-10 ;超氧化物歧化酶；Τ細(xì)胞受體；表面膜蛋白；衰變加速因子；病毒抗原，如，例如，AIDS包封的部分；運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)；歸巢受體；地址素；調(diào)節(jié)蛋白；α V/β 3整聯(lián)蛋白，包括其α或β亞單位，如0)11&、0)1113、0)11(3、0)18、1〇八皿、￥1^-4和VCAM ;前列腺特異性抗原(PSA);腫瘤相關(guān)抗原，如癌胚抗原(CEA)、CK2、CA125、TA90、HER2、HER3或HER4受體；血型抗原；flk2/flt3受體；肥胖(OB)受體；mpl受體;CTLA_4 ;蛋白C ;從典型凝集素或替代補(bǔ)體途徑中的任一種蛋白質(zhì)；和以上列出的任何多肽的片段。
[0079]可以使用公知的方法，例如，以推注或通過在一段時間內(nèi)連續(xù)輸注的靜脈內(nèi)施用，通過肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、外用或吸入途徑，將抗體施用到受試者。在某些實(shí)施例中，所述抗體被直接施用到腫瘤或癌癥組織，包括在侵入操作過程中直接施用到瘤床。還可以將所述抗體放在針對受影響的組織的目標(biāo)趨化因子施用的固體載體(如海綿或紗布)上。[0080]本發(fā)明的抗體可以在通常接受的藥學(xué)上可接受的載體中被施用。可接受的載體包括，但不限于，鹽水，緩沖鹽水，在鹽水中的葡萄糖。固相載體、脂質(zhì)體、納米粒子、微粒、納米微球或微球體，也可被用作用于施用抗體的載體。
[0081]抗體的適當(dāng)劑量(“治療有效量”)將取決于，例如，將要治療的病，病的嚴(yán)重程度和病程，是否出于預(yù)防或治療的目的施用抗體，以前的治療，患者的臨床病史及對抗體的反應(yīng)，所用抗體的類型，以及主治醫(yī)師的決定。所述抗體適于向患者一次或在一系列治療下使用，并且可以在從診斷開始的任何時間向患者施用。所述抗體可以以單獨(dú)治療或者聯(lián)合在治療正被討論的病中有用的其他藥物或療法進(jìn)行施用。
[0082]作為一般的建議，無論通過一次或多次施用，所施用的抗體的治療有效量將在約lng/kg體重/天至約100mg/kg體重/天的范圍內(nèi)。在一個特定的實(shí)施方式中，所施用的抗體的范圍是從約lng/kg體重/天至約I μ g/kg體重/天，lng/kg體重/天至約IOOng/kg體重/天，lng/kg體重/天至約10ng/kg體重/天，10ng/kg體重/天至約I μ g/kg體重/天，10ng/kg體重/天至約100ng/kg體重/天，100ng/kg體重/天至約I μ g/kg體重/天，100ng/kg體重/天至約10 μ g/kg體重/天，I μ g/kg體重/天至約10 μ g/kg體重/天，I μ g/kg體重/天至約100 μ g/kg體重/天，10 μ g/kg體重/天至約100 μ g/kg體重/天，10 μ g/kg體重/天至約lmg/kg體重/天，100 μ g/kg體重/天至約10mg/kg體重/天，lmg/kg體重/天至約100mg/kg體重/天，以及10mg/kg體重/天至約100mg/kg體重/天。
[0083]在另一個實(shí)施方式中，所述抗體是以每次注射Ing至10ng、每次注射IOng至100ng、每次注射IOOng至I μ g、每次注射I μ g至10 μ g、每次注射10 μ g至100 μ g、每次注射100 μ g至lmg、每次注射Img至IOmg和每次注射IOmg至IOOmg的劑量范圍施用的?？梢悦刻?，每2天，每3天，每4天，每5天，每6天和每7天，或者每I周，每2周，每3周或每4周，注射抗體。
[0084]在另一個【具體實(shí)施方式】中，抗體的給藥劑量范圍是從約lng/kg至約100mg/kg。在又一個實(shí)施方式中，所施用的抗體的范圍為從約lng/kg至約10ng/kg,約10ng/kg至約100ng/kg,約 100ng/kg 至約 I μ g/kg,約 I μ g/kg 至約 10 μ g/kg,約 10 μ g/kg 至約 100 μ g/kg,約 100 μ g/kg 至約 lmg/kg,約 lmg/kg 至約 10mg/kg,約 10mg/kg 至約 100mg/kg,約0.5mg/kg 至約 30mg/kg,以及約 lmg/kg 至約 15mg/kg。
[0085]在其他的特定的實(shí)施方式中，所施用的抗體的量為或者約為0.0006、0.001、0.003,0.006,0.01,0.03,0.06,0.1,0.3,0.6、1、3、6、10、30、60、100、300、600 和 IOOOmg/天。如預(yù)期的，所述劑量將取決于病、患者的大小、患者的年齡和狀態(tài)癥狀。
[0086]可以按照適當(dāng)?shù)幕蛑甘镜耐谱⒒蛲ㄟ^連續(xù)輸注的單次劑量或者通過推注或通過連續(xù)輸注的多倍劑量施用抗體。多倍劑量可被施用，例如，每天多次，每天一次，每2、3、4、5、6或7天，每周，每2，3，4，5或6周或每月。然而，其他的劑量方案可以是有用的。此療法的進(jìn)展是很容易用常規(guī)技術(shù)監(jiān)測的。
[0087]在本申請的特定的實(shí)施方式中，可以向需要其作為唯一的治療劑的受試者施用治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體。在特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體殺死腫瘤或癌細(xì)胞或者促進(jìn)腫瘤或癌細(xì)胞的凋亡。在另一特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體抑制或防止腫瘤或癌的建立。在又一特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體抑制或防止來自現(xiàn)存的腫瘤或癌的腫瘤或癌細(xì)胞的遷移或轉(zhuǎn)移。在再一特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體抑制或防止腫瘤或癌細(xì)胞侵入到非癌組織中。
[0088]在本申請的特定的實(shí)施方式中，可以向需要其的患者施用治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體，聯(lián)合一種或多種另外的治療有效抗體。所述一種或多種另外的治療有效抗體可以針對CXCL16和/或CXCR6上的另外的決定子、其他趨化因子、其他趨化因子受體、其他可溶性或細(xì)胞表面配體或受體，包括，但不限于，腫瘤或癌特異性抗原，病毒，細(xì)菌或寄生蟲抗原，癌細(xì)胞的產(chǎn)物或凋亡殘余?？梢栽谑褂靡环N或多種另外的治療有效抗體之前、同時和/或之后，施用抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體。
[0089]在一個特定的實(shí)施方式中，就殺死腫瘤或癌而言，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體增強(qiáng)了所述一種或多種另外的治療有效抗體的有效性。在又一個特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體減少了用于殺死腫瘤或癌所需的所述一種或多種另外的治療有效抗體的量。在再一個特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗-CXCL16和/或抗CXCR6抗體抑制或防止來自建立的腫瘤或癌的腫瘤或癌細(xì)胞的遷移或轉(zhuǎn)移，提聞所述一種或多種另外的治療有效抗體在殺死腫瘤或癌細(xì)胞方面的局部有效性。在又一個特定的實(shí)施方式中，治療有效量的抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體抑制或防止腫瘤或癌細(xì)胞侵入到非癌組織中，提高所述一種或多種另外的治療有效抗體在殺死腫瘤或癌細(xì)胞方面的局部有效性。
[0090]在另一個實(shí)施方式中，抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體是與細(xì)胞毒性劑結(jié)合的抗體。在另一個實(shí)施方式中，抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體與另一種抗腫瘤劑(如化療藥物)施用。
[0091]本申請的另一個方面涉及一種抑制趨化因子CXCL16與具有其受體的細(xì)胞相互作用的方法，其包括使細(xì)胞接觸有效量的抗體或其功能片段，該抗體或其功能片段與哺乳動物CXCL16或CXCL16的一部分結(jié)合。
[0092]本申請的另一個方面涉及一種抑制含有CXCR6的細(xì)胞與其配體相互作用的方法，其包括使細(xì)胞接觸有效量的抗體或其功能片段，該抗體或其功能片段與哺乳動物CXCR6或CXCR6的一部分結(jié)合。
[0093]在另一個實(shí)施方式中，所述方法包括向需要這種治療的患者施用有效量的在癌細(xì)胞或惡性細(xì)胞中表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合的表達(dá)載體。在另一個實(shí)施方式中，該方法包括以下步驟:用有效量的CXCL16和/或CXCR6編碼基因來誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗CXCL16和/或CXCR6抗體以使受試者免疫。
[0094]所述表達(dá)載體可以是能夠?qū)⒕幋a抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體的核苷酸遞送到靶細(xì)胞中并且在靶細(xì)胞中表達(dá)抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體的任何載體。在另一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體是能夠?qū)⒕幋a抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體的核苷酸遞送到靶細(xì)胞中以誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗CXCL16和/或CXCR6抗體的任意載體。表達(dá)載體的實(shí)例包括病毒載體和非病毒載體。
[0095]病毒載體包括，但不限于，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，腺病毒載體，腺伴隨病毒載體，以及其他大容量的病毒載體，如皰疫病毒和牛痘病毒。還包括具有這些病毒的使其適合于用作表達(dá)載體的性質(zhì)的任何病毒家族。
[0096]逆轉(zhuǎn)錄病毒載體[0097]逆轉(zhuǎn)錄病毒是一種動物病毒，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科的病毒家族，包括任何類型、亞科、屬或嗜親性。在美國專利第4，868，116號和第4，980，286號；PCT申請WO 90/02806和WO 89/07136 ;以及 Mulligan (Science 260:926-932(1993))中描述了使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體用于基因治療的方法的實(shí)例，在此將上述文獻(xiàn)教導(dǎo)的內(nèi)容通過引用的方式并入本文。
[0098]腺病毒載體
[0099]重組腺病毒已被證明在直接在體內(nèi)遞送到氣道上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮、CNS薄壁組織和許多其他組織部位之后實(shí)現(xiàn)高效率的基因轉(zhuǎn)移。重組腺病毒通過結(jié)合到特異細(xì)胞表面受體而實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，在此之后，病毒通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用以與野生型或復(fù)制缺陷型腺病毒相同的方式被納入。
[0100]病毒載體可為基于其中一種或多種病毒基因已被移除了的腺病毒的病毒載體，并且這些病毒體在補(bǔ)體細(xì)胞系(如人293細(xì)胞系)中被產(chǎn)生。在一個實(shí)施方式中，從腺病毒載體中移除El基因。在另一個實(shí)施方式中，從腺病毒載體中移除El和E3基因。在另一個實(shí)施方式中，從腺病毒載體中移除El和E4基因。在另一個實(shí)施方式中,所述腺病毒載體是無腸腺病毒載體。
[0101]腺相關(guān)病毒載體
[0102]另一種類型的病毒載體基于腺相關(guān)病毒(AAV)。這種缺陷型細(xì)小病毒是一種優(yōu)選的載體，這是因?yàn)樗梢愿腥驹S多細(xì)胞類型并且對人類是不致病的。AAV類型載體能夠運(yùn)送約4-5kb，并且已知野生型AAV穩(wěn)定地插入到第19號染色體。包含這種位點(diǎn)特異性整合性質(zhì)的載體是優(yōu)選的。這種類型的載體的特別優(yōu)選的實(shí)施方式是由Avigen, San Francisco, CA制造的P4.1C載體，其可包含單純皰疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)和/或標(biāo)記基因(如編碼綠色熒光蛋白(GFP)的基因)。
[0103]在另一種類型的AAV病毒中,AAV包含一對反向末端重復(fù)(ITRs),其攻擊含有與異源基因可操作地連接的指導(dǎo)細(xì)胞特異性表達(dá)的啟動子的至少一個盒的側(cè)翼。上下文中的異源是指不是AAV或B19細(xì)小病毒與生俱來的任何核苷酸序列或基因。
[0104]典型的AAV和B19編碼區(qū)已被刪除了，從而得到安全、無細(xì)胞毒性的載體。AAVITRs或其修飾物賦予感染性和位點(diǎn)特異性整合，但沒有細(xì)胞毒性，而啟動子指導(dǎo)細(xì)胞特異性表達(dá)。在此將美國專利第6，261，834號作為關(guān)于AAV載體材料的參考文獻(xiàn)并入本申請。
[0105]大型有效負(fù)載病毒載體
[0106]大型人類皰疹病毒的分子遺傳實(shí)驗(yàn)提供了一種方法，由此大型的異源DNA片段可以在允許使用皰疫病毒感染的細(xì)胞中被克隆、傳播和建立(Sun et al.，Nature genetics8:33-41, 1994; Cotter and Robertson, Curr Opin Mol Ther 5:633-644，1999)。這些大型DNA病毒(單純皰疹病毒(HSV)和EB病毒(EBV)，具有將>150kb的人類異源DNA片段遞送到特定細(xì)胞的潛力。EBV重組體能夠在受感染的B細(xì)胞中保持大量的DNA片段作為游離基因DNA。單個克隆攜帶的高達(dá)330kb的人基因組插入物表現(xiàn)出遺傳穩(wěn)定。這些游離基因的維持需要特定的EBV核內(nèi)蛋白、EBNA1、其在使用EBV感染過程中以組成型表達(dá)。此外，這些載體可用于轉(zhuǎn)染，其中，在體外可以瞬時產(chǎn)生大量的蛋白質(zhì)。還可以使用皰疹病毒擴(kuò)增子系統(tǒng)包裝>220kb的DNA片段以及感染能夠穩(wěn)定地保持DNA作為游離基因的細(xì)胞。其它有用的系統(tǒng)包括，例如，復(fù)制和宿主限制的非復(fù)制痘苗病毒載體。
[0107]非病毒載體包括質(zhì)粒表達(dá)載體。質(zhì)粒載體通常包括可以向其中插入另外的DNA片段的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。
[0108]在病毒和非病毒表達(dá)載體中，編碼一個抗體或多個抗體的多核苷酸通常被設(shè)置在接近并朝向適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄控制序列(啟動子，以及任選地，一種或多種增強(qiáng)子)以指導(dǎo)mRNA合成。也就是說，目的多核苷酸序列可操作地連接到適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄控制序列。這種啟動子的實(shí)例包括:病毒啟動子，如CMV、LTR或SV40啟動子的立即早期啟動子，桿狀病毒的多角體啟動子(polyhedron promoter),大腸桿菌Iac或trp啟動子,T7卩遼菌體和λ PL啟動子，以及已知在真核細(xì)胞或它們的病毒中控制基因的表達(dá)的其他啟動子。啟動子可以是組織特異性啟動子。
[0109]表達(dá)載體通常也包含用于翻譯起始的核糖體結(jié)合位點(diǎn)，和轉(zhuǎn)錄終止子。載體任選包括用于擴(kuò)大表達(dá)的適當(dāng)序列。此外，表達(dá)載體任選地包含一種或多種可選擇標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如用于真核細(xì)胞培養(yǎng)的二氫葉酸還原酶或新霉素抗性，或如在大腸桿菌中的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。
[0110]表達(dá)載體還可包括另外的表達(dá)元件，例如，用于提高翻譯效率。這些信號可以包括，例如，ATG起始密碼子和相鄰的序列。在某些情況下，例如，將翻譯起始密碼子和相關(guān)的序列元件與目的多核苷酸序列(例如，天然的起始密碼子)一同插入到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中。在這種情況下，另外的翻譯控制信號是不需要的。然而，在只插入多肽編碼序列或其部分的情況下，外源翻譯控制信號，包括ATG起始密碼子，要被提供。將起始密碼子放在正確的讀框中以確保目的多核苷酸序列的翻譯。外源轉(zhuǎn)錄元件和起始密碼子可以是不同來源的，包括天然和合成的。如需要，可以通過包含適于所用的細(xì)胞系統(tǒng)的增強(qiáng)子來進(jìn)一步提高表達(dá)效率(Scharf 等,(1994)Results Probl Cell Differ 20:125-62;Bitter 等，(1987)Methods in Enzymol 153:516-544)。
[0111]在一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體包含誘導(dǎo)型或可調(diào)節(jié)的表達(dá)系統(tǒng)。可調(diào)節(jié)的表達(dá)系統(tǒng)的實(shí)例的簡要說明如下:
[0112]蛻皮激素系統(tǒng)。蛻皮激素系統(tǒng)是基于在果蠅(Drosophila)中發(fā)現(xiàn)的蛻皮誘導(dǎo)系統(tǒng)，但是為了在哺乳動物細(xì)胞中可誘導(dǎo)地表達(dá)而進(jìn)行了改造。該系統(tǒng)使用果蠅留類激素蛻皮激素的類似物(muristerone A)通過異二聚核受體激活目的基因的表達(dá)。已報道表達(dá)水平超過對哺乳動物細(xì)胞生理機(jī)能沒有影響的基礎(chǔ)水平200倍，同時對哺乳動物細(xì)胞生理機(jī)能沒有影響。
[0113]孕酮系統(tǒng)。通常孕酮受體被刺激與特異性DNA序列結(jié)合并且通過與其激素配體相互作用而激活轉(zhuǎn)錄。相反，孕酮拮抗劑米非司酮(RU486)能夠阻斷激素誘導(dǎo)的核轉(zhuǎn)運(yùn)和隨后的DNA結(jié)合。已經(jīng)產(chǎn)生了能夠被刺激經(jīng)由與RU486的相互作用而結(jié)合的孕酮受體的突變體形式。為了產(chǎn)生特定的、可調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子，已將孕酮受體的RU486結(jié)合域融合到酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合域和HSV蛋白VP16的激活域。在沒有RU486的情況下，嵌合因子無活性。然而，加入激素，誘導(dǎo)嵌合蛋白的構(gòu)象變化，而這種變化允許結(jié)合到GAL4結(jié)合位點(diǎn)以及由含有GAL4結(jié)合位點(diǎn)的啟動子的轉(zhuǎn)錄激活。
[0114]雷帕霉素系統(tǒng)。免疫抑制劑(如FK506和雷帕霉素)通過與特異的細(xì)胞蛋白質(zhì)結(jié)合并促進(jìn)它們的二聚而起作用。例如，雷帕霉素與FK506結(jié)合蛋白(FKBP)的結(jié)合導(dǎo)致其與另一種雷帕霉素結(jié)合蛋白FRAP的異二聚化，其可通過藥物的移除而逆轉(zhuǎn)。通過加入藥物使兩種蛋白質(zhì)集合在一起的能力使許多生物過程(包括轉(zhuǎn)錄)的調(diào)節(jié)成為可能。嵌合的DNA結(jié)合域已被融合到FKBP，F(xiàn)KBP能夠使融合蛋白結(jié)合到特異性DNA結(jié)合序列。轉(zhuǎn)錄激活域也已被融合到FRAP。當(dāng)這兩種融合蛋白在相同細(xì)胞中共表達(dá)時，可以通過由加入雷帕霉素介導(dǎo)的異二聚化來形成全功能的轉(zhuǎn)錄因子。然后二聚嵌合轉(zhuǎn)錄因子可以結(jié)合至合成的包含合成的DNA結(jié)合序列的拷貝的合成啟動子序列。該系統(tǒng)已被成功地整合到腺病毒和AAV載體中。
[0115]使用抑制CXCL16或CXCR6的表達(dá)或活性的試劑治療或預(yù)防癌癥的方法
[0116]本申請的一個方面涉及通過使用抑制CXCL16或CXCR6的表達(dá)或活性的試劑用于治療或預(yù)防癌癥的方法。在另一個實(shí)施方式中，所述方法包括向需要這種治療的受試者施用有效量的表達(dá)(I)抑制CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)、或(2)抑制CXCL16和CXCR6間的相互作用、或⑶抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的試劑的表達(dá)載體。在一個實(shí)施方式中，CXCL16和CXCR6的生物活性包括CXCL16和CXCR6間的相互作用。
[0117]在另一個實(shí)施方式中，所述受試者被診斷患有導(dǎo)致癌細(xì)胞中的CXCL16和/或CXCR6表達(dá)升高的癌癥。這種癌癥的實(shí)例包括，但不限于，黑素瘤，以及癌，例如，卵巢癌，陰道癌，子宮頸癌，子宮癌，前列腺癌，肛門癌，直腸癌，結(jié)腸癌，胃癌，胰腺癌，胰島細(xì)胞瘤，腺癌，腺鱗癌，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，乳腺癌，肺癌，食道癌，□腔癌，腦癌，髓母細(xì)胞瘤，神經(jīng)外胚層瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腦垂體癌和骨癌。
[0118]在另一個實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包括確定來自受試者的組織中的CXCL16和/或CXCR6表達(dá)水平，以及只要檢測到組織中CXCL16和/或CXCR6的水平提高，則向受試者施用所述試劑。
[0119]在一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體是病毒載體。在另一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體是非病毒載體。在另一個實(shí)施方式中，所述試劑是抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合。在另一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體是能夠?qū)⒕幋a抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體的核苷酸遞送到靶細(xì)胞中以誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗CXCL16和/或CXCR6抗體的任意載體。
[0120]在又一個實(shí)施方式中，所述試劑是功能性核酸。功能性核酸是具有特定功能(如結(jié)合靶分子或催化特定反應(yīng))的核酸分子。該功能性核酸分子可以擔(dān)當(dāng)靶分子具有的特定活性的抑制劑。功能性核酸分子可以與任何大分子(如DNA、RNA和多肽)發(fā)生相互作用。因此，功能性核酸能夠與CXCL16或CXCR6的mRNA或基因組DNA發(fā)生相互作用以抑制CXCL16或CXCR6蛋白的表達(dá)或相互作用從而抑制活性。通常，基于靶分子與功能性核酸分子之間的序列同源性，將功能性核酸設(shè)計成與其他核酸發(fā)生相互作用。在其他情況下，功能性核酸分子與靶分子之間的特異性識別不是基于功能性核酸分子與靶分子之間的序列同源性，而是基于允許發(fā)生特異性識別的三級結(jié)構(gòu)的形成。功能性核酸分子的實(shí)例包括siRNA，反義分子，適體，核酶，形成三聯(lián)體的分子，和外在引導(dǎo)序列。
[0121]siRNA涉及RNA干擾(RNAi)，其包括兩步機(jī)制:起始步驟和效應(yīng)物步驟。在第一步驟中，所加入的雙鏈(ds)RNA(siRNA)被加工成小片段，如21-23-核苷酸的‘指導(dǎo)序列’。RNA擴(kuò)增發(fā)生在整個動物中。然后通常情況下，指導(dǎo)RNA可被納入形成蛋白質(zhì)RNA復(fù)合物，其能夠降解RNA、核酸酶復(fù)合物，其已被稱為RNA誘導(dǎo)的敲減復(fù)合物(RISC)。該RISC復(fù)合物在第二效應(yīng)物步驟中起作用以破壞經(jīng)由堿基配對相互作用由指導(dǎo)RNA識別的mRNA。RNAi涉及通過將雙鏈RNA引入到細(xì)胞中，其觸發(fā)引起靶RNA降解的事件。RNAi是轉(zhuǎn)錄后基因敲減的一種形式。除本文所披露的siRNA之外，還披露了能夠在RNAi中起作用的RNA發(fā)夾。對于制造和使用RNAi分子的說明，參見,例如，Hammond et al., Nature Rev Gen2:110-119(2001);Sharp, Genes Dev 15:485-490(2001), Waterhouse et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.USA 95 (23): 13959-13964 (1998)，其公開的全部內(nèi)容在此通過引用的方式并入本文并且至少構(gòu)成與遞送和制造RNAi分子相關(guān)的的材料。
[0122]RNAi已被證明在許多類型的細(xì)胞(包括哺乳動物細(xì)胞)中發(fā)揮作用。對于在哺乳動物細(xì)胞中的工作，優(yōu)選的是，將在RISC復(fù)合物中被用作靶向序列的RNA分子較短。例如，長度小于或等于 50 或 40 或 30 或 29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、
13、12、11或10個核苷酸。相對于將要被裂解的靶RNA，這些RNA分子也可以在Y或Y端上具有懸突。這些懸突的長度可為至少或小于或等于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20個核苷酸。
[0123]反義分子被設(shè)計成通過規(guī)范或非規(guī)范的堿基配對而與靶核酸分子發(fā)生相互作用。反義分子與靶分子之間的相互作用被設(shè)計成通過例如RNA酶H介導(dǎo)的RNA-DNA雜合體降解來促進(jìn)靶分子的破壞?；蛘?，反義分子被設(shè)計成中斷正常情況下會在靶分子上發(fā)生的加工功能，如轉(zhuǎn)錄或復(fù)制。反義分子可以基于靶分子的序列來設(shè)計。存在許多通過發(fā)現(xiàn)靶分子的最易接近區(qū)來優(yōu)化反義效率的方法。示例性的方法是使用DMS和DEPC的體外篩選實(shí)驗(yàn)和DNA修飾研究。優(yōu)選的是，反義分子結(jié)合靶分子的解離常數(shù)(kd)小于或等于ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ,或10_12。可以在下面的美國專利的非限定性列表中找到有助于反義分子的設(shè)計和使用的方法和技術(shù)的具有代表性的樣本:5, 135，917，5，994，320，6，046，319，和6，057，437。
[0124]適體是(優(yōu)選以特定的方式)與靶分子相互作用的分子。通常情況下典型地，適體是長度范圍在15-50個堿基的小核酸，其折疊成定義的二級和三級結(jié)構(gòu)，如莖環(huán)或G-四聯(lián)體。適體能夠結(jié)合趨化因子并阻斷它的功能(參見，例如，Marro et al., Biochem BiophysRes Commun.20060ctl3; 349:270-6)。在與靶分子的kd小于KT12M的情況下，適體可以非常緊密地結(jié)合。優(yōu)選的是，適體結(jié)合靶分子的kd小于10_6、10_8、10_1(1或10_12。適體可以以非常高度的特異性結(jié)合靶分子。例如，適體已被分離，在靶分子與在分子上只有單一位置處不同的另一分子之間的親合力具有大于10000倍的差異(美國專利5，543，293)。優(yōu)選的是，適體與靶分子的kd比與背景結(jié)合分子的kd低至少10、100、1000、10，000或100，000倍?？梢栽谙旅娴拿绹鴮＠姆窍薅ㄐ粤斜碇姓业饺绾沃圃旌褪褂眠m體結(jié)合多種不同的靶分子的代表性實(shí)例:5, 476，766,5, 861，254,6, 030，776 和 6，051，698。
[0125]核酶是能夠催化(分子內(nèi)或分子間)化學(xué)反應(yīng)的核酸分子。因此核酶是催化的核酸。優(yōu)選的是，核酶催化分子間反應(yīng)。有很多不同類型的核酶，其基于在自然系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的核酶，例如，如錘頭核酶(參見，例如，美國專利:5, 334，711和5，861，288，WO 9858058和WO9718312)、發(fā)夾結(jié)構(gòu)核酶(參見，例如，美國專利:5，631，115和6，022，962)以及四膜蟲屬核酶(參見，例如，美國專利:5，595，873和5，652，107)，催化核酸酶或核酸聚合酶型反應(yīng)。也有一些在自然系統(tǒng)中沒有被發(fā)現(xiàn)的核酶，但是其已被重新設(shè)計成催化特定反應(yīng)的(參見，例如，美國專利:5，580，967和5，910，408)。優(yōu)選的核酶切割RNA或DNA底物，且更優(yōu)選地切割RNA底物。核酶通常通過對靶底物的識別和結(jié)合及隨后切割而切割核酸底物。該識別往往是主要基于規(guī)范或不規(guī)范的堿基對相互作用。這種性質(zhì)是核酶成為靶向特異性切割核酸的極好的候選者，因?yàn)榘械孜锏淖R別是基于靶底物序列?？梢栽诿绹鴮＠?5，646，042、5，869，253,5, 989，906和6，017, 756中找到如何制造和使用核酶催化各種不同的反應(yīng)的代表性實(shí)例。[0126]形成三聯(lián)體的功能性核酸分子是能夠與雙鏈或單鏈核酸相互作用的分子。當(dāng)三聯(lián)體分子與靶區(qū)域發(fā)生相互作用時，形成稱為三聯(lián)體的結(jié)構(gòu)，其中，根據(jù)Watson-Crick和Hoogsteen堿基配對，有三鏈DNA形成復(fù)合物。三聯(lián)體分子是優(yōu)選的，這是因?yàn)樗鼈兡軌蛞愿哂H和性和特異性結(jié)合靶區(qū)域。優(yōu)選的是，形成三聯(lián)體的分子結(jié)合靶分子的kd小于10_6、10-8、10-10 或 10-12?？梢栽诿绹鴮＠?5，176，996,5, 683，874,5, 874，566 和 5，962，426 中找到如何制造和使用形成三聯(lián)體的分子以結(jié)合各種不同的靶分子。
[0127]外在引導(dǎo)序列(EGS)是結(jié)合形成復(fù)合物的靶核酸分子的分子，并且該復(fù)合物被RNA酶P識別，RNA酶P切割靶分子。EGS可被設(shè)計成特異性靶向所選的RNA分子。RNA酶P有助于在細(xì)胞內(nèi)加工轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)。通過使用引起靶RNA = EGS復(fù)合物模擬天然tRNA底物的EGS，細(xì)菌RNA酶P可被募集來切割實(shí)際上任何RNA序列(參見，例如，耶魯大學(xué)的WO92/03566,和 Forster and Altman, Science 238:407-409 (1990))?
[0128]同樣地，可以利用真核EGS/RNA酶P定向切割RNA來在真核細(xì)胞中切割所需的目標(biāo)(Yuan 等，Proc.Nat 1.Acad.Sc1.USA 89:8006-8010(1992);耶魯大學(xué)的 WO 93/22434 ；耶魯大學(xué)的 WO 95/24489 ；Yuan 和 Altman, EMBO J 14:159-168 (1995)，以及 Carrara 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA 92:2627-2631 (1995))?？梢栽谝韵碌姆窍拗菩粤谐龅拿绹鴮＠?5，168，053,5, 624，824,5, 683，873,5, 728，521,5, 869，248 和 5，877，162 中找到如何制備和使用EGS分子以幫助裂解各種不同的靶分子的典型例子。
[0129]預(yù)防或抑制具有CXCL16和/或CXCR6的升高的表達(dá)的癌細(xì)胞遷移或轉(zhuǎn)移的方法
[0130]本申請的另一個方面涉及一種在受試者中預(yù)防或抑制具有CXCL16和/或CXCR6的升高的表達(dá)的癌細(xì)胞的遷移或轉(zhuǎn)移的方法。
[0131]在一個實(shí)施方式中，該方法包括向受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合的步驟。
[0132]在另一個實(shí)施方式中，該方法包括向受試者施用在所述受試者中表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合的表達(dá)載體的步驟。
[0133]在另一個實(shí)施方式中，所述方法包括向受試者施用表達(dá)能夠抑制CXCL16或CXCR6的表達(dá)、或CXCL16或CXCR6的生物活性、或CXCL16和CXCR6間的相互作用的試劑的表達(dá)載體。在另一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體可以是能夠?qū)⒕幋aCXCL16和/或CXCR6的核苷酸遞送到靶細(xì)胞中以誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體的任意載體。
[0134]CXCL16和/或CXCR6在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)可以使用在本領(lǐng)域公知的方法(如免疫染色或定量PCR)來確定。已知過表達(dá)CXCL16和/或CXCR6的癌細(xì)胞包括，但不限于，黑素瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞。癌的例子包括，但不限于，卵巢癌、陰道癌、子宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、肛門癌、直腸癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、胰島素瘤、腺癌、腺鱗癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、乳腺癌、肺癌、食管癌、口腔癌、腦癌、髓母細(xì)胞瘤、神經(jīng)外胚層瘤、膠質(zhì)瘤、腦垂體瘤和骨癌。
[0135]在一個實(shí)施方式中，所述癌細(xì)胞為腦癌細(xì)胞。在另一個實(shí)施方式中，所述癌細(xì)胞為骨癌細(xì)胞。在另一個實(shí)施方式中，所述癌細(xì)胞為腦垂體癌細(xì)胞。在又一個實(shí)施方式中，所述癌細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞。
[0136]增強(qiáng)化療效果的方法
[0137]本申請的另一個方面涉及一種用于增強(qiáng)化療效果的方法。在一個實(shí)施方式中，該方法包括向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合。
[0138]在另一個實(shí)施方式中，該方法包括向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用治療有效量的表達(dá)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合的表達(dá)載體。
[0139]在另一個實(shí)施方式中，所述方法包括向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用表達(dá)能夠抑制CXCL16或CXCR6的表達(dá)、或CXCL16或CXCR6的生物活性、或CXCL16和CXCR6間的相互作用的試劑的表達(dá)載體。在另一個實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體可以是能夠?qū)⒕幋aCXCL16和/或抗CXCR6的核苷酸遞送到靶細(xì)胞中以誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗CXCL16抗體和/或抗CXCR6抗體的任意載體。
[0140]在一個實(shí)施方式中，所述患者正在進(jìn)行化療以治療黑素瘤或癌。在另一個實(shí)施方式中，所述患者正在進(jìn)行化療以治療腦癌。在另一個實(shí)施方式中，所述患者正在進(jìn)行化療以治療骨癌。在另一個實(shí)施方式中，所述患者正在進(jìn)行化療以治療腦垂體癌。在又一個實(shí)施方式中，所述患者正在進(jìn)行化療以治療卵巢癌。
[0141]治療或預(yù)防癌癥的組合物和試劑盒
[0142]本申請的另一個方面涉及用于治療或預(yù)防癌癥的組合物和試劑盒。在一個實(shí)施方式中，所述組合物包括(I)抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合，以及(2)藥學(xué)上可接受的載體。在另一個實(shí)施方式中，所述組合物包括(I)表達(dá)載體，其攜帶抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或它們的組合的編碼序列，以及(2)藥學(xué)上可接受的載體。在另一個實(shí)施方式中，所述組合物包括(I)表達(dá)載體，其攜帶抑制CXCL16或CXCR6的表達(dá)、或CXCL16或CXCR6的生物活性、或CXCL16和CXCR6間的相互作用的試劑的編碼序列，以及(2)藥學(xué)上可接受的載體。
[0143]本申請的組合物可包含單一類型的抗體，如單獨(dú)的抗CXCL16或抗CXCR6抗體，或同時包含這兩種類型的抗體。所述組合物還可包含治療有效量的特異性針對如正在被治療的特定適應(yīng)癥(優(yōu)選那些不會彼此產(chǎn)生不利影響的互補(bǔ)活動的適應(yīng)癥)所需的如上所述的一種或多種另外的抗原的抗體。例如，在被治療的癌是卵巢癌時，可取的是，制備在單制劑中包括抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體與一種或多種進(jìn)一步的抗癌的決定子抗體(如抗CEA，抗CA125和/或抗TA90)的治療制劑。在本申請的一些實(shí)施方式中，治療抗體可與化療試劑或細(xì)胞毒性劑組合使用。在本申請的其他實(shí)施方式中，治療抗體可與抗炎劑或血栓溶解劑組合使用。在組合中，這些試劑以其對于所需的目的有效的含量適當(dāng)存在。
[0144]本文所用文字“藥學(xué)上可接受的載體”意欲包括與藥物施用可配合的任何及全部溶劑、增溶劑、填料、穩(wěn)定劑、粘合劑、吸收劑、堿、緩沖劑、潤滑劑、控制釋放賦形物、稀釋劑、乳化劑、濕潤劑、潤滑劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌或抗真菌劑、等滲吸收延遲劑等。這些用于藥學(xué)活性物質(zhì)的介質(zhì)和試劑的使用是本領(lǐng)域眾所周知的。參見，例如，A.H.Kibbe藥用輔料手冊，第三版，醫(yī)藥出版社，倫敦，英國(2000)。會考慮任何常規(guī)介質(zhì)或試劑在組合物中的使用，除非其與活性化合物不相容。還可以向組合物中加入補(bǔ)充的試劑。在某些實(shí)施方式中，藥學(xué)上可接受的載體包括血清白蛋白。
[0145]將本申請的藥物組合物配制成與其預(yù)定的施用途徑具有生物相容性。施用途徑的實(shí)例包括腸胃外，例如，鞘內(nèi)，動脈內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮內(nèi)，皮下，經(jīng)口，經(jīng)皮(局部)以及經(jīng)粘膜施用。在某些實(shí)施方式中，將所述藥物組合物直接施用到腫瘤組織中。[0146]用于腸胃外、真皮內(nèi)或皮下施用的溶液或混懸液可包括下列成分:無菌稀釋劑，例如，注射用水、鹽溶液、不揮發(fā)油、聚乙二醇、甘油；丙二醇或其他的合成溶劑；抗菌劑，例如，苯甲醇或尼泊金甲酯；抗氧化劑，例如，抗壞血酸或硫酸氫鈉；螯合劑，例如，乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如，醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及用于調(diào)節(jié)張力的試劑，例如，氯化鈉或葡萄糖?？梢允褂盟峄驂A(例如，鹽酸或氫氧化鈉)調(diào)節(jié)pH。腸胃外制劑可以封裝在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。
[0147]適合可注射使用的藥物組合物包括無菌水溶液(在水溶性的情況下)或分散劑以及用于臨時制備無菌可注射溶液或分散劑的無菌粉末。就靜脈內(nèi)施用而言，適合的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL?(BASF, Parsippany, NJ)或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。在所有情況下，可注射的組合物應(yīng)當(dāng)是無菌的并且應(yīng)當(dāng)為能達(dá)到易于溶液注射程度的流體。其在制造和貯藏條件下必須是穩(wěn)定的并且必須針對如細(xì)菌和真菌的微生物污染行為進(jìn)行防腐。載體可為溶劑或分散介質(zhì)，例如，包括水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)以及它們的合適的混合物。例如，通過使用如卵磷脂的包衣、通過在分散的情況下保持所需的粒度以及通過使用表面活性劑，可以保持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。通過多種抗細(xì)菌和抗真菌劑(例如，對羥苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等)可以實(shí)現(xiàn)微生物行為的防止。在許多情況下，將優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如，糖、多元醇(如甘露醇、山梨糖醇)和氯化鈉。通過使組合物中包含延遲吸收的試劑(例如，單硬脂酸鋁或凝膠)可以使可注射的組合物延長吸收。
[0148]在具有上述列舉的成分的一種或組合的適當(dāng)?shù)娜軇┲屑尤胨枇康幕钚曰衔?例如，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白)來制備無菌的可注射溶液，根據(jù)需要，之后再過濾滅菌。通常，可以通過將活性化合物加入到包含基礎(chǔ)分散介質(zhì)和所需的其他來自上述列舉的那些成分中的成分的無菌載體中來制備分散劑。在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況中，優(yōu)選的制備方法為真空干燥和冷凍干燥，這樣可以得到活性成分加任何附加的來自其預(yù)先過濾滅菌溶液中的所需成分的粉末。
[0149]經(jīng)口的組合物通常包含惰性稀釋劑或可食用的載體?？梢詫⑺鼈兎庋b在凝膠膠囊中或者壓制成片劑。為了經(jīng)口治療施用，可以將活性化合物與賦形劑結(jié)合并以片劑、錠劑或膠囊的形式使用。也可以使用用作嗽口水的流體載體來制備經(jīng)口的組合物，其中，流體載體中化合物經(jīng)口施用、發(fā)出嗖嗖聲、咳出或吞咽?？梢园帉W(xué)可配合的結(jié)合劑和/或輔劑材料作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可以包含任何下列成分或相似性質(zhì)的化合物:粘合劑，例如，微晶纖維素、黃蓍樹膠或凝膠；賦形劑，例如，淀粉或乳糖；崩解劑，例如，藻酸、淀粉輕乙酸鈉(Primogel)或玉米淀粉；潤滑劑，例如，硬脂酸鎂或Stertes ;助流劑，例如，膠體二氧化硅；甜味劑，例如，蔗糖或糖精；或者調(diào)味劑，例如，薄荷、水楊酸甲酯或橙味劑。
[0150]為了通過吸入施用，將化合物以來自加壓容器或者包含適合的推進(jìn)劑(例如，如二氧化碳的氣體)的分配器或噴霧器中的噴霧劑的形式遞送。
[0151]也可以通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮方式進(jìn)行全身施用。就經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用而言，在制劑中使用適合透入將要穿過的屏障的滲透劑。這種滲透劑是本領(lǐng)域中通常已知的，并且包括，例如，就經(jīng)粘膜施用而言，清潔劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。通過使用鼻腔噴霧或栓劑可以實(shí)現(xiàn)經(jīng)粘膜施用。就經(jīng)皮施用而言，將藥物組合物配制成本領(lǐng)域中所熟知的軟膏劑、油膏齊U、凝膠或乳膏劑。
[0152]在某些實(shí)施方式中，藥物組合物被配制成緩釋或控釋活性成分的。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如，乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，這些制劑的制備方法將是明顯的。還可以商購材料，例如，從Alza公司和Nova Pharmaceuticals, Inc0脂質(zhì)體混懸液(包括祀向受感染細(xì)胞的脂質(zhì)體，其攜帶有針對病毒抗原的單克隆抗體)也可用作藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法可以制備這些，例如，按照美國專利第4，522，811中所述。
[0153]為了易于施用和劑量統(tǒng)一，制成以劑量單位形式的經(jīng)口或腸胃外的組合物是特別有利的。本文中所用的劑量單位形式包括適合作為要被治療的受試者的單位劑量的物理上的離散單位；每個單位包含預(yù)定量的計算與所需藥物載體結(jié)合產(chǎn)生所需治療效果的活性化合物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格由活性化合物的獨(dú)特特性和所要實(shí)現(xiàn)的特定治療效果以及在合成這種用于個體治療的活性化合物的領(lǐng)域中的固有限制因素規(guī)定，或者直接取決于活性化合物的獨(dú)特特性和所要實(shí)現(xiàn)的特定治療效果以及在合成這種用于個體治療的活性化合物的領(lǐng)域中的固有限制因素。
[0154]在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動物中通過標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法可以確定這種化合物的毒性和治療效能，例如，確定LD50 (50%群體致死的劑量)和ED50 (50%群體治療有效的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比為治療指數(shù)并且它可以表示為LD50/ED50比。優(yōu)選具有大的治療指數(shù)的化合物。盡管可以使用具有毒副作用的化合物，但是為了使對未受感染細(xì)胞的潛在損害減至最小并由此減少副作用，應(yīng)當(dāng)注意設(shè)計使這種化合物靶向受侵襲組織的部位的遞送系統(tǒng)。
[0155]從細(xì)胞培養(yǎng)測定和動物研究中得到的數(shù)據(jù)可以用于配制在人體中使用的劑量的范圍。這種化合物的劑量優(yōu)選處于包括具有很少毒性或無毒性的ED50的循環(huán)濃度的范圍內(nèi)。依據(jù)所利用的劑量形式和所采用的施用途徑，所述劑量在該范圍內(nèi)可以變化。對于本發(fā)明方法中使用的任何化合物，可以從細(xì)胞培養(yǎng)測定中最初估計治療的有效劑量。在動物模型中配制劑量以得到包括在細(xì)胞培養(yǎng)中測定的IC50(即達(dá)到癥狀的半最大抑制的試驗(yàn)化合物的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。該信息可用于更加精確地確定人體內(nèi)的有用劑量。在某些實(shí)施方式中，單一劑量包含0.01 μ g至50mg的抗CCL25或抗CCR9抗體。所述藥物組合物可以與用于施用的說明書一起被包含在容器、包裝或分配器中。
[0156]通過測量CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)或活性檢測癌癥的方法
[0157]CXCL16是CXCR6趨化因子受體的配體。趨化因子和受體出現(xiàn)在癌癥的轉(zhuǎn)移和侵襲的調(diào)控中發(fā)揮作用。與正常組織相比，CXCL16和CXCR6在多種癌組織類型中都局部上調(diào)，包括卵巢癌，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，骨癌和胰腺癌。在患有這些癌癥的患者的血清中，CXCL16的水平也被增加。此外，可溶性CXCL16趨化因子在體內(nèi)和體外均增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖和遷移。
[0158]CXCR6是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)的趨化因子受體家族的成員，其會在癌細(xì)胞生存中具有不同的作用，假定使其免受化療藥物的作用。CXCR6和CXCL16的相互作用激活A(yù)kt，真核起始因子4E結(jié)合蛋白1，并為雷帕霉素(mTOR)途徑的目標(biāo)。雷帕霉素抑制CXCL16誘導(dǎo)的癌細(xì)胞的侵襲、生長以及降低IL-8或VEGF的分泌，表明mTOR信號途徑可能參與CXCR6依賴的癌進(jìn)展。[0159]本申請的一個個方面涉及一種在受試者中檢測癌癥存在的方法。在一個實(shí)施方式中，該方法包括:檢測從受試者得到的生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平；并比較所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平和所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的的正常表達(dá)水平，其中，所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的高于正常的表達(dá)水平意味著受試者中存在癌癥，其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的正常表達(dá)水平是預(yù)定值或者是從與所述生物樣本相同的起源或類型的已知正常非癌細(xì)胞的對照樣本中獲得的，其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者。在另一個實(shí)施方式中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括(I )CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者，以及(2) —種或多種其他癌癥標(biāo)記物。
[0160]在本申請的上下文中，術(shù)語“檢測”意欲包括預(yù)測和可能性分析。本方法意欲用于臨床以做出關(guān)于癌癥治療方案的決定，包括治療介入、例如疾病階段的診斷標(biāo)準(zhǔn)(、以及疾病檢測和監(jiān)護(hù)。根據(jù)本申請，可以提供檢查受試者狀況的中間結(jié)果。這種中間結(jié)果可以與附加信息結(jié)合以幫助醫(yī)生、護(hù)士或其他從業(yè)者以診斷受試者患有所述疾病。或者，本發(fā)明可以用于檢測從受試者獲得的組織內(nèi)的癌細(xì)胞，并且提供給醫(yī)生有用的信息以診斷受試者患有所述疾病。所述受試者優(yōu)選為人，但是也可以包括其他哺乳動物，例如，非人靈長類動物、小鼠、大鼠、狗、貓、馬和牛。
[0161]在一些實(shí)施方式中，所述癌癥是黑素瘤或癌。在其它實(shí)施方式中，所述癌癥是淋巴瘤，白血病，肉瘤或生殖細(xì)胞瘤。在一些其它實(shí)施方式中,所述生物樣本是血漿樣本,唾液樣本或尿液樣本。
[0162]預(yù)測患有癌癥的受試者的預(yù)后的方法
[0163]通過比較得自患者的生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平與參考樣本的表達(dá)水平，本發(fā)明的檢測癌癥的方法也可以應(yīng)用于評價患有癌癥的患者的預(yù)后。在一個實(shí)施方式中，所述方法包括:確定來自患者的生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平，其中，相對于對照值(例如，對照組的水平)，在所述生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的較高的表達(dá)水平表明受試者的預(yù)后差，而相對于對照值，在所述生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的較低的或相似的表達(dá)水平表明受試者的預(yù)后好。預(yù)后差表明，癌癥是攻擊類型或侵入類型，可能快速發(fā)展和/或可能轉(zhuǎn)移，其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者。在另一個實(shí)施方式中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括(1)CXCL16或CXCR6或CXCL16和CXCR6兩者，以及(2)—種或多種其他癌癥標(biāo)記物。
[0164]或者，在生物樣本中的一個或多個癌癥標(biāo)記物的水平可以在疾病階段譜范圍內(nèi)進(jìn)行測定以評價患者的預(yù)后。相比于正常對照水平，一個或多個癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平的增加意味著不太合意的預(yù)后。相比于正常對照水平，一個或多個癌癥標(biāo)記物的相似表達(dá)水平意味著患者的較為合意的預(yù)后。
[0165]在一些實(shí)施方式中，所述癌癥是黑素瘤或癌。在其它實(shí)施方式中，所述癌癥是淋巴瘤，白血病，肉瘤或生殖細(xì)胞瘤。在一些其它實(shí)施方式中,所述生物樣本是血漿樣本,唾液樣本或尿液樣本。
[0166]監(jiān)測癌癥治療過程的方法
[0167]在某些實(shí)施方式中，一個或多個癌癥標(biāo)記物的水平用于監(jiān)測癌癥治療的過程。在這一方法中，測試生物樣本由進(jìn)行癌癥治療的受試者處提供。優(yōu)選地，多個測試生物樣本是從處于治療前、治療中或治療后的不同時間點(diǎn)的受試者處獲得。而后，在治療后的樣本中的癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平可以與治療前的樣本中的癌癥標(biāo)記物水平或者與參考樣本(例如，正常對照水平)相比較。例如，如果治療后標(biāo)記物水平低于治療前標(biāo)記物水平，人們可以得出治療有效的結(jié)論。同樣地，如果治療后標(biāo)記物水平與正常對照標(biāo)記物水平相似或相同，人們也可以得出治療有效的結(jié)論。
[0168]治療“有效”是指治療導(dǎo)致癌癥標(biāo)記物水平降低或者受試者的癌癥的尺寸、患病率或者轉(zhuǎn)移能力降低。當(dāng)治療應(yīng)用于預(yù)防時，“有效”意味著治療延緩或者阻止了癌癥的發(fā)生或者減緩了癌癥的臨床癥狀?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)臨床方案做出癌癥評價。此外，治療的有效性可以與任何用于檢測、診斷或治療癌癥的已知方法相結(jié)合進(jìn)行測定。例如，對癌癥進(jìn)行組織病理學(xué)常規(guī)診斷或者通過鑒定癥狀異常(例如，體重減輕和厭食)進(jìn)行常規(guī)診斷。
[0169]在一個實(shí)施方式中，將在生物樣本中的癌癥標(biāo)記物的水平與參考樣本(如正常對照樣本)的癌癥標(biāo)記物的水平作比較。術(shù)語“正常對照水平”是指通常在未患癌癥的群體的生物樣本中發(fā)現(xiàn)的癌癥標(biāo)記物的水平。參考樣本優(yōu)選是與測試樣本有類似性質(zhì)的。例如，如果測試樣本包括患者血清，則參考樣本也應(yīng)是血清。來自對照和試驗(yàn)受試者的生物樣本中的癌癥標(biāo)記物水平可以同時確定，或者，正常對照水平可以基于由分析在先前從對照組收集的樣本中的癌癥標(biāo)記物的水平而得到的結(jié)果通過統(tǒng)計方法確定。
[0170]在一些實(shí)施方式中，所述癌癥是黑素瘤或癌。在其它實(shí)施方式中，所述癌癥是淋巴瘤，白血病，肉瘤或生殖細(xì)胞瘤。在一些其它實(shí)施方式中,所述生物樣本是血漿樣本,唾液樣本或尿液樣本。
[0171]癌癥標(biāo)記物
[0172]在此所使用的術(shù)語“癌癥標(biāo)記物”是指或者描述的是一種多肽或多核苷酸，其單獨(dú)的表達(dá)水平或者與其它多肽或多核苷酸聯(lián)合的表達(dá)水平與癌癥或者癌癥的預(yù)后相關(guān)。這種相關(guān)性可能涉及多肽或多核苷酸的增加或減小的表達(dá)。例如，多肽或者多核苷酸的表達(dá)指示癌癥，或者多肽或者多核苷酸的表達(dá)的缺乏可以與癌癥患者差的預(yù)后有關(guān)。
[0173]術(shù)語“癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平”可以以轉(zhuǎn)錄水平測量(在該情況下測定多核苷酸的存在和/或數(shù)量)，或者以翻譯水平測量(在該情況下測定多肽的存在和/或數(shù)量)。癌癥標(biāo)記物表達(dá)可以通過使用任何適合的方法表征。
[0174]所述癌癥標(biāo)記物的實(shí)例包括CXCL16、CXCR6，以及其它趨化因子和趨化因子受體，例如，CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCLlO、CXCLl1、CXCLl2, CXCLl3, CXCL14, CXCLl5, CXCRU CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR5a、CXCR5b、CXCR7、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCLIO、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL25—1、CCL25-2、CCL27、CCL28、CCRl、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCRlO、CCRl1、XCLl、XCL2、XCRl、CX3CR1、CX3CL1、RNA 結(jié)合基序 3 (〃RBM3〃)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、嗜鉻粒素A(chromgranin A, CGA)、脫氫表雄酮(DHEA)、神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、催乳激素、B7-H3、成纖維細(xì)胞激活蛋白a (seprase)多肽、抗P53、骨橋蛋白、鐵蛋白、溶血磷脂酰膽堿、驅(qū)動蛋白家族成員4A(KIF4A)、神經(jīng)正五聚蛋白I(NPTXl)和成纖維細(xì)胞生長因子受體I致癌基因配偶體(FGFR10P)蛋白。[0175]在一個實(shí)施方式中，上述的癌癥標(biāo)記物選自黑素瘤標(biāo)記物組，所述黑素瘤標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CCL25、CCL27、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL12、CXCL13、CX3CL1、CCR9、CCR10、CXCRl、CXCR2、CXCR4、CXCR5 和 CX3CR1。在黑素瘤組中的標(biāo)記物可以用于檢測黑素瘤或者預(yù)測患有黑素瘤受試者的預(yù)后。
[0176]在一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自癌標(biāo)記物組，所述癌標(biāo)記物組包括CXCL16、CXCR6、CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL2 2、CCL2 5、CXCL12、CXCL13、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CXCR5和CX3CR1。在癌標(biāo)記物組中的標(biāo)記物可以用于檢測癌或者預(yù)測患有癌的受試者的預(yù)后。
[0177]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自乳腺癌標(biāo)記物組，所述乳腺癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCLl3, CXCR5、CCLU CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、RNA 結(jié)合基序 3 (〃RBM3〃)和 CEA。在乳腺癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測乳腺癌或者預(yù)測患有乳腺癌的受試者的預(yù)后。
[0178]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自前列腺癌標(biāo)記物組，所述前列腺癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCL13、CXCR5、CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL2 2、CCL2 5、CXCL12、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、PSA、CEA、CGA、DHEA、NSE、PAP、催乳激素和 B7-H3。在前列腺癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測前列腺癌或者預(yù)測患有前列腺癌的受試者的預(yù)后。
[0179]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自結(jié)腸直腸癌標(biāo)記物組，所述結(jié)腸直腸癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCLl3, CXCR5、CCLl、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、成纖維細(xì)胞激活蛋白 α 多肽、抗 ρ53、骨橋蛋白和鐵蛋白。在所述結(jié)腸直腸癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測結(jié)腸直腸癌或者預(yù)測患有結(jié)腸直腸癌的受試者的預(yù)后。
[0180]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自卵巢癌標(biāo)記物組，所述卵巢癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCLl3, CXCR5、CCLU CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、癌癥抗原 125 (CA-125)、ΗΕ-4、0VX-1 巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)和溶血磷脂酰膽堿。在卵巢癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測卵巢癌或者預(yù)測患有卵巢癌的受試者的預(yù)后。
[0181]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自肺癌標(biāo)記物組，所述肺癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCL13、CXCR5、CXCL16、CXCR6、CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL2 2、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、驅(qū)動蛋白家族成員 4A(KIF4A)、神經(jīng)正五聚蛋白I (NPTXl)、成纖維細(xì)胞生長因子受體I致癌基因配偶體(FGFR10P)蛋白和CEA。在肺癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測肺癌或者預(yù)測患有肺癌的受試者的預(yù)后。
[0182]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自胰腺癌標(biāo)記物組，所述胰腺癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCLl3, CXCR5、CCLU CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1和CEA。在胰腺癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測胰腺癌，或者預(yù)測患有胰腺癌受試者的預(yù)后。
[0183]在另一個實(shí)施方式中，上述癌癥標(biāo)記物選自胃癌標(biāo)記物組，所述胃癌標(biāo)記物組包括 CXCL16、CXCR6、CXCL13、CXCR5、CCL1、CCL4、CCLl7、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCL12、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1和CEA。在胃癌組中的標(biāo)記物可以用于檢測胃癌或者預(yù)測患有胃癌的受試者的預(yù)后。[0184]檢測方法
[0185]所述癌癥標(biāo)記物的表達(dá)可以以轉(zhuǎn)錄水平(即，mRNA的量)或者翻譯水平(即，蛋白的量)來測定。在某些實(shí)施方式中，通過定量RT_PCR、RNA印跡法或者本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他方法，以mRNA水平測定癌癥標(biāo)記物的表達(dá)。在其它實(shí)施方式中，通過使用抗癌標(biāo)記物抗體，例如抗CXCL16和抗CXCR6抗體，用ELISA、蛋白質(zhì)印跡或者其他類型的免疫檢測方法，在蛋白水平上測定癌癥標(biāo)記物的表達(dá)。
[0186]在一些實(shí)施方式中，抗CXCL16和/或抗CXCR6抗體包括與CXCL16肽或者CXCR6肽特異性結(jié)合的抗體。所述CXCL16肽的實(shí)例包括，但不限于，由選自 AAGPEAGENQKQPEKN(SEQ ID NO:1)、 SQASEGASSDIHTPAQ(SEQ ID NO:2)、STLQSTQRPTLPVGSL (SEQ ID N0:3), SffSVCGGNKDPffVQEL (SEQ ID NO:4),GPTARTSATVPVLCLL(SEQ ID NO:5)、SGIVAHQKHLLPTSPP(SEQ ID NO:6)、RLRKHL(SEQ IDNO: 7)、LQSTQRP(SEQ ID NO:8)、SSDKELTRPNETT(SEQ ID NO: 9)、AGENQKQPEKNA(SEQID NO: 10)、NEGSVT (SEQ ID NO: 11)、ISSDSPPSV (SEQ ID NO: 12) , CGGNKDPff (SEQ IDNO: 13)、LLPTSPPISQASEGASSDIHT(SEQ ID NO:14)、STQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHT (SEQ ID NO: 15), SLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSA(SEQ ID NO: 16), TGSCYCGKR(SEQ IDNO: 17)、DSPPSVQ(SEQ ID NO: 18), RKHLRAYHRCLYYTRFQLLSffSVCGG(SEQ ID NO: 19)、WVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQ(SEQ ID NO:20)、 SDIHTPAQMLLSTLQ(SEQ IDNO: 21), RPTLPVGSL (SEQ ID NO: 22)、TAGHSLAAG (SEQ ID NO: 23)、GKRISSDSPPSVQ (SEQID NO:24)、KDPWVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKH(SEQ ID NO:25)中的一個或多個序列組成的肽，或者包含選自 AAGPEAGENQKQPEKN (SEQ ID NO:1), SQASEGASSDIHTPAQ (SEQID NO:2)、STLQSTQRPTLPVGSL(SEQ ID NO:3), SffSVCGGNKDPffVQEL (SEQ ID NO:4)、GPTARTSATVPVLCLL (SEQ ID NO: 5)、SGIVAHQKHLLPTSPP (SEQ ID NO: 6)、RLRKHL (SEQ IDNO: 7)、LQSTQRP (SEQ ID NO: 8)、SSDKELTRPNETT (SEQ ID NO: 9)、AGENQKQPEKNA (SEQ IDNO: 10)、NEGSVT (SEQ ID NO: 11)、ISSDSPPSV (SEQ ID NO: 12), CGGNKDPff (SEQ ID NO: 13)、LLPTSPPISQASEGASSDIHT(SEQ ID NO:14)、 STQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHT(SEQ IDNO: 15)、SLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSA (SEQ ID NO: 16)、TGSCYCGKR (SEQ ID NO: 17)、DSPPSVQ (SEQ ID NO: 18), RKHLRAYHRCLYYTRFQLLSffSVCGG (SEQ ID NO: 19)、WVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQ(SEQ ID NO: 20)、SDIHTPAQMLLSTLQ(SEQ ID N0:21)、RPTLPVGSL (SEQ ID NO: 22)、TAGHSLAAG (SEQ ID NO: 23)、GKRISSDSPPSVQ (SEQ ID NO:24),KDPWVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKH (SEQ ID NO:25)中的一個或多個序列的肽。所述CXCR6 肽的實(shí)例包括，但不限于，由選自 HQDFLQFSKV(SEQ ID NO:26)、AGIHEffVFGQVMCK(SEQID NO:25), PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI (SEQ ID NO:26)和 YYAMTSFHYTMVTEA(SEQ IDNO: 27)中的一個或多個序列組成的肽，或者包含，所述選自HQDFLQFSKV (SEQ ID NO: 26),AGIHEffVFGQVMCK (SEQ ID NO: 25)、PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI(SEQ ID NO:26)和YYAMTSFHYTIMVTEA(SEQ ID NO:27)中的一個或多個序列的肽。
[0187]在一個實(shí)施方式中，所述抗體與固體載體結(jié)合。所述“固體載體”的意思是本申請的抗體能夠附著或連接的非水性基質(zhì)。在此包括的固體相的實(shí)例包括部分或完全由玻璃(例如，可控多孔玻璃)、多糖(例如，瓊脂糖)、聚丙烯酰胺、硅酮、和塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯和聚乙烯醇)形成的那些固體相。[0188]酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)
[0189]在某些實(shí)施方式中，通過使用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測癌癥標(biāo)記物，所述酶聯(lián)免疫吸附測定法通常通過使用涂覆抗體的測試板或測試孔進(jìn)行。常規(guī)使用的ELISA測定使用夾層免疫測定(sandwich immunoassay)或者競爭結(jié)合免疫測定(competitivebinding immunoassay)。
[0190]簡要地說，夾層免疫測定是使用結(jié)合在抗原或配體上不同位點(diǎn)的兩種抗體的方法。將對抗原具有高度特異性的第一抗體附著在固體表面。然后加入抗原，接著加入稱為檢測抗體的第二抗體。所述檢測抗體將抗原結(jié)合至與第一抗體相比不同的表位。結(jié)果，抗原“夾在”兩種抗體之間?？贵w對于抗原的親合力通常是免疫測定靈敏性的主要決定因素。隨著抗原濃度的增大，檢測抗體的量也增大，導(dǎo)致更高的測量響應(yīng)。夾層-結(jié)合測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有正相性斜率。為了定量化結(jié)合的程度，可以使用不同的報告因子。典型地，酶附著在第二抗體，所述第二抗體必須是在與第一抗體相比不同的種類中產(chǎn)生的(即，如果第一抗體是兔子抗體，那么第二抗體將是來自羊、雞等的抗兔子的抗體，而不是兔子抗體)。將酶的底物加入到形成色度法讀數(shù)(readout)作為檢測信號的反應(yīng)中。生成信號與樣本中存在的目標(biāo)抗原的量成比例。
[0191]用于測定結(jié)合事件的抗體連接的報告因子決定了檢測方式。對于ELISA，在檢測為色度法時，使用分光光度板讀數(shù)器。最近已經(jīng)開發(fā)出許多種類的報告因子用以增大免疫測定法的靈敏性。例如，已經(jīng)開發(fā)的化學(xué)發(fā)光底物，其進(jìn)一步放大了信號，并且可以在發(fā)光板讀數(shù)器上讀出。此外，其中用熒光體標(biāo)記抗體替代測定法的酶步驟的熒光讀數(shù)正變得十分受歡迎。這種讀數(shù)隨后通過使用熒光板讀數(shù)器測定。
[0192]競爭性結(jié)合測定是基于標(biāo)記或未標(biāo)記配體對于有限數(shù)量的抗體結(jié)合位點(diǎn)的競爭。競爭性抑制測定常常用于測定較小的分析物。這些測定也在抗體與分析物的配對不存在時使用。在競爭結(jié)合ELISA中使用唯一抗體。這是由于如果兩種抗體試圖結(jié)合到非常小的分子上會產(chǎn)生空間位阻。將固定量的標(biāo)記配體(示蹤物)和可變量的未標(biāo)記配體用抗體孵育。根據(jù)質(zhì)量作用定律，標(biāo)記配體的量是標(biāo)記配體和未標(biāo)記配體的總濃度的函數(shù)。隨著未標(biāo)記配體濃度的增大，越少的標(biāo)記配體結(jié)合到抗體上，并且測定到的響應(yīng)減少。這樣，信號越低，在樣本中存在越多的未標(biāo)記分析物。競爭結(jié)合測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有負(fù)向性斜率。
[0193]微珠
[0194]在某些其它的實(shí)施方式中，癌癥標(biāo)記物通過使用涂覆抗體的微珠檢測。在一些實(shí)施方式中，所述微珠為磁珠。在其它實(shí)施方式中，所述珠用熒光染料進(jìn)行內(nèi)部顏色編碼，并且所述珠的表面用抗癌標(biāo)記物抗體(例如，抗CXCL16抗體或者抗CXCR6抗體)加以標(biāo)記，所述抗癌標(biāo)記物抗體可以結(jié)合測試樣本中的癌癥標(biāo)記物。依次地，所述癌癥標(biāo)記物以熒光標(biāo)記直接標(biāo)記或者以結(jié)合到突光標(biāo)記上的抗標(biāo)記物抗體間接標(biāo)記。因此，存在兩種顏色來源，一種源自珠，另一種來自熒光標(biāo)記?；蛘?，珠可以以不同尺寸內(nèi)部編碼。
[0195]通過使用來自兩種染料的不同熒光強(qiáng)度的混合物以及不同尺寸的珠，測定可以測量高達(dá)數(shù)百種不同的癌癥標(biāo)記物。在測定過程中，包含顏色/尺寸編碼珠的混合物、熒光標(biāo)記抗標(biāo)記物抗體和樣本被組合并且注入到使用精密流控技術(shù)以調(diào)節(jié)珠的儀器中。所述珠隨后經(jīng)過激光，并且基于其顏色或者尺寸，進(jìn)行分選或者測定顏色強(qiáng)度，其經(jīng)處理獲得對于各反應(yīng)的定量數(shù)據(jù)。[0196]當(dāng)用熒光團(tuán)直接標(biāo)記樣本時，系統(tǒng)可以讀出或定量珠上唯一的熒光而不會除去溶液中非結(jié)合的熒光團(tuán)。測定可以通過區(qū)別不同顏色或尺寸的珠來多元化。當(dāng)樣本直接需要未標(biāo)記樣本時，實(shí)時測試是可實(shí)現(xiàn)的。標(biāo)準(zhǔn)測定步驟包括用抗標(biāo)記物抗體涂覆的珠孵育樣本，用生物素或熒光團(tuán)標(biāo)記的第二抗體孵育，以及檢查熒光信號?？梢栽谥樯?通過加入對于生物素化的第二抗體的抗生物素蛋白鏈菌素-熒光團(tuán)軛合物)顯影熒光信號，并且通過珠分析儀讀出。依靠珠表面上固定的抗標(biāo)記物，基于珠的免疫測定法可以是夾層型或者競爭型免疫測定法。
[0197]測試條
[0198]在一些其它的實(shí)施方式中，液體生物樣本中的癌癥標(biāo)記物通過使用測試條來檢測。所述測試條典型地包括流體不可滲透外殼和具有一個或多個檢測區(qū)域的流體可滲透“條”。在一個實(shí)施方式中，各檢測區(qū)域包括與生物樣本中癌癥標(biāo)記物結(jié)合的干燥的結(jié)合試齊U。在其它實(shí)施方式中，干燥的結(jié)合試劑為標(biāo)記結(jié)合試劑。在另一實(shí)施方式中，測試條可以進(jìn)一步包括控制區(qū)域以指示測定樣本已經(jīng)令人滿意地進(jìn)行，也就是說，試劑存在于測試條中，以及指示它們在實(shí)驗(yàn)操作過程中變得可移動且已經(jīng)沿著流體路徑輸送。所述控制區(qū)域也指示了設(shè)備中試劑能夠進(jìn)行免疫化學(xué)相互作用，證實(shí)了設(shè)備的化學(xué)完整性。當(dāng)考慮在某一溫度范圍內(nèi)的烘干條件下設(shè)備的存放和運(yùn)輸時，這是重要的?？刂茀^(qū)域典型地放置在檢測區(qū)域的下游，并且可以例如，包括用于標(biāo)記結(jié)合試劑的固定結(jié)合試劑。標(biāo)記結(jié)合試劑可以存在于控制區(qū)域和檢測區(qū)域的可移動形式上游區(qū)。所述標(biāo)記結(jié)合試劑可以與對于癌癥標(biāo)記物的標(biāo)記結(jié)合試劑相同或不同。
[0199]在一個實(shí)施方式中，所述測試條包括與一個或多個流動路徑連接且在一個或多個流動路徑上游的流體多孔樣本接收器。所述多孔樣本接收器可以是與所有測定方法通用的。這樣，用于設(shè)備的常規(guī)樣本應(yīng)用區(qū)域的流體樣本能沿著一個或多個流動路徑流動到各檢測區(qū)域。所述多孔樣本接收器可以在外殼中提供，或者可以至少部分地延伸到所述外殼的外部，并且可以用于例如收集體液。所述多孔樣本接收器也可以充當(dāng)流體貯存器。多孔樣本接收部件由任何吸水材料、多孔材料或者能夠迅速吸收液體纖維材料制成。材料的孔隙率可以單向的(B卩，整體或者主要平行于部件的軸運(yùn)行的孔或者纖維)或者是多向的(全向的，以致部件具有非晶海綿狀結(jié)構(gòu))?？梢允褂枚嗫姿芰喜牧希?，聚丙烯、聚乙烯(優(yōu)選非常高分子量)、聚偏二氟乙烯、乙烯乙酸乙烯酯、丙烯腈和聚四氟乙烯。其它合適的材料包括玻璃纖維。
[0200]如果需要，吸收劑“儲槽”可以提供在載體材料的遠(yuǎn)端。吸收劑儲槽可以包括，例如，華特門(Whatman) 3MM色層分析紙，并且應(yīng)該提供足夠的吸收能力以使任何非結(jié)合標(biāo)記結(jié)合試劑從測試區(qū)域洗出。作為與這一儲槽的可選方案，具有延伸超過所述檢測區(qū)域的多孔固材料長度是足夠的。
[0201]在將結(jié)合試劑用于檢測區(qū)域之后，可以處理多孔固相材料的殘留物以封閉任何殘留結(jié)合部位。封閉可以通過例如用蛋白質(zhì)(例如，牛血清白蛋白或乳蛋白質(zhì))或者用聚乙烯醇或乙醇胺或其結(jié)合的處理方式來實(shí)現(xiàn)。為了幫助標(biāo)記結(jié)合試劑的自由移動，當(dāng)多孔載體用樣本潤濕時，多孔載體可以進(jìn)一步包括如蔗糖或乳糖的糖和/或其它物質(zhì)(例如，聚乙烯醇(PVA)或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。這種材料可以例如作為水溶液儲存在將要使用標(biāo)記結(jié)合試劑的區(qū)域。這些材料可以作為第一用途用于多孔載體，隨后用于標(biāo)記物，或者這些材料可以與標(biāo)記物混合并用于多孔載體或兩者的組合。這種材料可以存放在標(biāo)記結(jié)合試劑的上游或者存放在標(biāo)記結(jié)合試劑處。
[0202]或者，多孔載體在制造時可以不被封閉；作為替代的是，用于封閉多孔載體的組件被包括在多孔載體的材料上游中。當(dāng)潤濕所述測試條時，用于封閉多孔載體的組件被移動，并且封閉組件流進(jìn)且通過多孔載體，隨著流動的進(jìn)行實(shí)施封閉。封閉組件包括蛋白質(zhì)，例如BSA和酪蛋白；以及聚合物，例如PVP、PVA ;以及糖和去污劑，例如Triton-XlOO。封閉部件可以存在于大孔載體材料中。
[0203]所述干燥結(jié)合試劑可以提供在設(shè)置在包含檢測區(qū)域的多孔載體材料上游的多孔載體材料上。上游多孔載體材料可以是大孔的。大孔載體材料應(yīng)該是低蛋白結(jié)合的或者非蛋白結(jié)合的，或者應(yīng)該是通過例如BSA或PVA的試劑可以容易封閉的，以在大孔體已經(jīng)用液體樣本潤濕后最小化非特異性結(jié)合且有助于標(biāo)記試劑的自由移動。如果需要，大孔載體材料可以用表面活性劑或溶劑預(yù)處理，以使其更為親水且促進(jìn)液體樣本的迅速吸收。用于大孔載體的合適材料包括塑料材料，例如聚乙烯和聚丙烯；或者其它材料，例如紙或玻璃纖維。在標(biāo)記結(jié)合試劑用可檢測顆粒標(biāo)記的情況下，大孔體可以具有大于顆粒標(biāo)記物的最大粒度至少10倍的孔徑。越大的孔徑給予越好的標(biāo)記試劑釋放。作為對于大孔載體的替代物，標(biāo)記結(jié)合試劑可以設(shè)置在檢測區(qū)域上游設(shè)置的非多孔物質(zhì)上，所述非多孔物質(zhì)形成部分流動路徑。
[0204]在另一實(shí)施方式中，測試條可以進(jìn)一步包括用于接收流體樣本的樣本接收部件。所述樣本接收部件可以從外套延伸。
[0205]所述外殼可以由流體不可滲透材料構(gòu)成。所述外殼也合意地將環(huán)境光排除在外。當(dāng)從設(shè)備的外部透入設(shè)備內(nèi)部時，如果少于10%，優(yōu)選少于5%，且更優(yōu)選少于1%的可見光入射，則認(rèn)為所述外殼基本上排除環(huán)境光。光不可透過合成塑料材料，例如包含適當(dāng)阻光顏料的聚碳酸酯、ABS、聚苯乙烯(polystyrene)、聚苯乙烯(polystyrol)、高密度聚乙烯或者聚丙烯，為用于構(gòu)成外殼的合適選擇。開孔可以設(shè)置在外殼的外部，其與在外殼內(nèi)部的設(shè)置于內(nèi)部空間內(nèi)的測定相聯(lián)通?；蛘撸_孔可以用于使多孔樣本接收器從外殼向外殼外的位置延伸。
[0206]微點(diǎn)陣
[0207]在其它實(shí)施方式中，所述癌癥標(biāo)記物通過在其表面上包含固定的癌癥標(biāo)記物特異性抗體的蛋白質(zhì)微點(diǎn)陣檢測。所述微點(diǎn)陣可以用于“夾層”測定，其中在微點(diǎn)陣上的抗體捕捉測試樣本中的癌癥標(biāo)記物并且捕捉的標(biāo)記物用與捕捉的標(biāo)記物特異性結(jié)合的標(biāo)記第二抗體檢測。在優(yōu)選實(shí)施方式中，第二抗體為生物素化的或者酶標(biāo)記的。所述檢測通過隨后用抗生蛋白鏈菌素-熒光團(tuán)軛合物(用于熒光檢測)或者酶底物(用于色度法檢測)孵育來實(shí)現(xiàn)。
[0208]典型地，微點(diǎn)陣測定包括多個孵育步驟，包括用樣本孵育和用多種試劑(例如，第一抗體、第二抗體、報告試劑等)孵育。在孵育步驟之間，也需要重復(fù)清洗。在一個實(shí)施方式中，微點(diǎn)陣測定在需要唯一一個或兩個孵育的快速測定方式中進(jìn)行。也可以想象到，可檢測免疫復(fù)合物(例如，捕捉的癌癥標(biāo)記物/抗標(biāo)記物抗體/指示物復(fù)合物)的形成可以通過使蛋白質(zhì)微點(diǎn)陣暴露于樣本和所有所需試劑的混合物而在單一的孵育步驟中實(shí)現(xiàn)。在一個實(shí)施方式中，所述第一抗體和第二抗體為相同的抗體。[0209]在另一實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)點(diǎn)陣提供了競爭免疫測定。簡要的說，在標(biāo)記癌癥標(biāo)記物標(biāo)準(zhǔn)物的存在下，包含固定的抗標(biāo)記物抗體的微點(diǎn)陣用測試樣本孵育。，標(biāo)記癌癥標(biāo)記物在測試樣本中與未標(biāo)記癌癥標(biāo)記物競爭以結(jié)合至固定的抗原特異性抗體。在這一競爭機(jī)構(gòu)中，測試樣本中特異性癌癥標(biāo)記物濃度的增大將導(dǎo)致標(biāo)記癌癥標(biāo)記物標(biāo)準(zhǔn)物與固定的抗體結(jié)合的降低，并且因此減少源自標(biāo)記物的信號強(qiáng)度。
[0210]所述微點(diǎn)陣可以以手工、半自動或者自動模式進(jìn)行。手工模式是指手工操作所述測定步驟，包括將試劑和樣本遞送至微點(diǎn)陣上，樣本孵育和微點(diǎn)陣清洗。半自動模式是指手工操作將樣本和試劑遞送至微點(diǎn)陣上，同時自動運(yùn)行孵育和清洗步驟。在自動模式中，三個步驟(樣本/試劑遞送、孵育和清洗)可以通過具有小鍵盤的計算機(jī)或者集成實(shí)驗(yàn)電路板單?？刂?。例如，所述微點(diǎn)陣可以通過ProteinArray Workstation (PerkinElmer LifeSciences, Boston, Mass.)或者 Assay 1200?.Workstation(Zyomyx, Hayward, Calif.)進(jìn)行。利用熒光、色度法和化學(xué)發(fā)光法的掃描器可以用于檢測微點(diǎn)陣信號并且捕捉微點(diǎn)陣圖像。基于微點(diǎn)陣的定量法也可以通過其它方式，如質(zhì)譜法和表面等離子體共振(surfaceplasma resonance)實(shí)現(xiàn)。捕捉的微點(diǎn)陣圖像可以通過獨(dú)立的圖像分析軟件來進(jìn)行分析或者利用圖像采集和分析軟件包來進(jìn)行分析。例如，抗原微點(diǎn)陣的定量化可以利用基于熒光PMT 的掃描器一ScanArray 3000 (General Scanning, Watertown, Mass.)或者基于色度法的 CCD 掃描器 VisionSpot (Allied Biotech, Ijamsville, Md.)來實(shí)現(xiàn)。典型地，圖像分析將包括數(shù)據(jù)采集和用單獨(dú)的軟件包制備分析報告。為了加速從捕捉圖像到生成分析報告的整個分析過程，包括圖像捕捉、圖像分析和報告生成的所有分析步驟可以被限制在一個軟件包和/或由一個軟件包控制。這一統(tǒng)一的控制系統(tǒng)將提供圖像分析和以使用者友好的方式生成分析報告。
[0211]植入性生物傳感器
[0212]在其它實(shí)施方式中，癌癥標(biāo)記物通過使用植入性生物傳感器檢測。生物傳感器為產(chǎn)生作為生物學(xué)相互作用結(jié)果的電子信號的電子設(shè)備。在一個實(shí)施方式中，生物傳感器使用抗體、受體、核酸或者與癌癥標(biāo)記物結(jié)合的結(jié)合對的其它部件，其通常是結(jié)合對的其它部件。生物傳感器可以與血液樣本一起使用以確定癌癥標(biāo)記物的存在而不需要對于自動化免疫測定系統(tǒng)通常需要的樣本制備和/或分離步驟。
[0213]在一個實(shí)施方式中，傳感器為納米尺度的設(shè)備。所述傳感系統(tǒng)包括聯(lián)接至納米線的生物識別元件和能夠確定與納米線有關(guān)的性質(zhì)的檢測器。所述生物識別元件為結(jié)合對的一個部件(例如，癌癥標(biāo)記物的受體或者抗癌癥標(biāo)記物抗體)，其中被測定的所述癌癥標(biāo)記物為結(jié)合對的另一部件。優(yōu)選地，納米線傳感器包括半導(dǎo)體納米線，其具有在其上形成的外部表面以形成柵極；和第一端，其與導(dǎo)體電接觸以形成源極；以及第二端，其與導(dǎo)體電接觸以形成漏極。在一個實(shí)施方式中，傳感器為場效應(yīng)晶體管，其包括由絕緣材料形成的基板、源極、漏極和設(shè)置在其間的具有連接至納米線表面上的生物識別元件的半導(dǎo)體納米線。當(dāng)結(jié)合事件發(fā)生在生物識別元件和其特異性結(jié)合配偶體之間時，可檢測的變化以場效應(yīng)晶體管的電流電壓特性發(fā)生。
[0214]在另一實(shí)施方式中，傳感系統(tǒng)包括傳感器陣列。在陣列中的一個或多個傳感器與防止相關(guān)傳感器和周圍環(huán)境相互作用的防護(hù)部件聯(lián)接。在選定的時間，所述防護(hù)部件可以是不起作用的，因此允許傳感器開始運(yùn)行以與周圍流體或組織相互作用，以便所述生物識別元件可以與其結(jié)合對的其它部件相互作用(如果存在那個配對部件)。
[0215]在另一實(shí)施方式中，所述防護(hù)部件由導(dǎo)電材料形成，所述導(dǎo)電材料能夠氧化，是生物相容、生物可吸收的，并且可以在施加電勢時在例如血液的溶液中溶解。例如，傳感器可以形成在覆蓋了例如生物相容金屬或電侵蝕聚合物的導(dǎo)電材料的基板的孔中。在另一個實(shí)施方式中，所述防護(hù)部件通過使用在預(yù)定時間段內(nèi)溶解的材料來形成。
[0216]質(zhì)譜法
[0217]在其它實(shí)施方式中，所述癌癥標(biāo)記物通過使用質(zhì)譜(MS)，例如，MALDI/T0F(飛行時間)、SELDI/T0F、液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)、高性能液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)、毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜、核磁共振波譜法或者串聯(lián)質(zhì)譜法(如，MS/MS、MS/MS/MS、ES 1-MS/MS等)來檢測。
[0218]質(zhì)譜法是本領(lǐng)域所已知的，并且已經(jīng)被用于定量和/或鑒定生物分子，例如蛋白質(zhì)。而且，質(zhì)譜技術(shù)已經(jīng)發(fā)展為允許分離的蛋白質(zhì)至少部分重新測序。在某些實(shí)施方式中，使用氣相離子分光光度計。在其它實(shí)施方式中，使用激光脫附/離子化質(zhì)譜以分析樣本。調(diào)制解調(diào)器激光解析’離子化質(zhì)譜(“LD1-MS”)可以在兩個主要變化中實(shí)施:基質(zhì)輔助激光解析’離子化(“MALDI”)質(zhì)譜和界面增大激光解析’離子化(“SELDI”)。在MALDI中，分析物與包含基質(zhì)的溶液混合，并且將一滴液體置于基板的表面上。然后，基質(zhì)溶液與生物分子共結(jié)晶。將基板插入進(jìn)質(zhì)譜中。激光能量指向基板表面，其中，其使生物分子解吸附且離子化而沒有顯著破壞它們。在SELDI中，基板表面可以被修飾以便其成為解析過程的積極參與者。在一個實(shí)施方式中，基板用選擇性結(jié)合目的蛋白質(zhì)的吸附劑和’或捕捉試劑衍化。在另一實(shí)施方式中，表面用在利用激光撞擊時不會解吸附的能量吸收分子衍化。在另一實(shí)施方式中，表面用結(jié)合目的蛋白質(zhì)且包括在施加激光時斷裂的光解鍵的分子衍化。在這些方法中的每種中，衍化試劑通常被局限于施加樣本的基板表面上的特定位置。參見，例如，美國專利第 5，719，060 號(Hutchens 和 Yip)以及 WO 98/59361 (Hutchens 和 Yip)。兩種方法可以通過以下方法組合使用:例如，使用SELDI親合表面以捕捉分析物并且將包含基質(zhì)的液體加入到捕捉到的分析物中以提供能量吸收材料。
[0219]檢測癌癥標(biāo)記物的存在將典型地包括檢測信號強(qiáng)度。這又能夠反映結(jié)合到基板的多肽的數(shù)量和特性。例如，在某些實(shí)施方式中，來自第一樣本和第二樣本的光譜的峰值的信號強(qiáng)度可以被比較(例如，視覺上、通過計算機(jī)分析等)以確定特定生物分子的相對量。例如Biomarker Wizard 程序(Ciphergen Biosystems, Inc., Fremont, Calif.)的軟件程序可以用于幫助分析質(zhì)譜。所述質(zhì)譜和其技術(shù)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的。
[0220]本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的是，質(zhì)譜儀的任何部件(例如，解析源、質(zhì)量分析儀、檢測等)和各種樣本制品可以與在此所述的或本領(lǐng)域已知的其它適合的部件或制品結(jié)合。例如，在一些實(shí)施方式中，對照樣本可以包括重原子(例如，13C)從而允許測試樣本與在相同的質(zhì)譜運(yùn)行中已知的對照樣本相混合。
[0221]在一個優(yōu)選實(shí)施方式中，使用激光解吸飛行時間(TOF)質(zhì)譜儀。在激光解吸質(zhì)譜中，具有結(jié)合標(biāo)記物的基板引入到進(jìn)口系統(tǒng)。通過來自電離源的激光解吸附所述標(biāo)記物并將其離子化成氣相。生成的離子通過離子光學(xué)裝置收集，然后在飛行時間質(zhì)量分析儀中，離子通過短高壓場加速并且漂移進(jìn)高真空室。在高真空室的遠(yuǎn)端，加速離子在不同時間撞擊靈敏檢測器表面。由于飛行時間是離子質(zhì)量的函數(shù)，所以在離子形成和離子檢測器沖擊之間逝去的時間可以用于鑒定特定質(zhì)量分子的存在或缺乏以獲得配料比。
[0222]在一些實(shí)施方式中，部分地，通過用計算機(jī)執(zhí)行算法，確定存在于第一或第二樣本中的一個或多個癌癥標(biāo)記物的相對量。所述算法鑒定在第一質(zhì)譜和第二質(zhì)譜中的至少一個峰值。隨后，所述算法將質(zhì)譜的第一質(zhì)譜的峰值信號強(qiáng)度與第二質(zhì)譜的峰值信號強(qiáng)度相比較。相對信號強(qiáng)度為存在于第一樣本和第二樣本中的癌癥標(biāo)記物的量的指不?？梢苑治霭阎康陌┌Y標(biāo)記物的標(biāo)準(zhǔn)物作為第二樣本以較好地定量化第一樣本中存在的生物分子的量。在某些實(shí)施方式中，也可以確定在第一樣本和第二樣本中的癌癥標(biāo)記物的身份。
[0223]標(biāo)準(zhǔn)值、特異性和靈敏性的測定
[0224]在本申請中，可以對癌癥標(biāo)記物，例如CXCL16的血液濃度，的標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)測定。例如，可以測定在健康個體中的CXCL16的血液濃度以在統(tǒng)計學(xué)上確定CXCL16的標(biāo)準(zhǔn)血液濃度。當(dāng)可以采集統(tǒng)計學(xué)上充足的群體時，在自平均值的兩倍或三倍標(biāo)準(zhǔn)差(S.D.)的范圍內(nèi)的值通常用作標(biāo)準(zhǔn)值。因此，相當(dāng)于平均值±2XS.D.或者平均值±3XS.D.的值可以用作標(biāo)準(zhǔn)值。如理論上所述設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)值分別包括90%和99.7%健康個體。
[0225]或者，標(biāo)準(zhǔn)值也可以基于癌癥患者體內(nèi)的實(shí)際表達(dá)水平(例如，CXCL16血液濃度)設(shè)定。通常，設(shè)定這種方法的標(biāo)準(zhǔn)值使假陽性的百分比最小化，并且從符合能夠使檢測靈敏性最大化的條件的值的范圍內(nèi)選擇。在此，假陽性的百分比是指在健康個體中CXCL16的血液濃度被判定為高于標(biāo)準(zhǔn)值的患者的百分比。相反，在健康個體中，CXCL16的血液濃度被判定為低于標(biāo)準(zhǔn)值的患者的百分比指示特異性。也就是說，假陽性和特異性的總和總是I。檢測靈敏性是指:在已經(jīng)確定存在癌癥的個體群體內(nèi)所有患者中，CXCL16的血液濃度被判定為高于標(biāo)準(zhǔn)值的患者的百分比。
[0226]如在此所使用的，術(shù)語“測試靈敏性”是篩選實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蜩b定真實(shí)疾病的能力，并且特征也在于是具有較少假陰性的高靈敏性的測試，另外還是不依賴于疾病患病率的測試。所述測試靈敏性計算為真陽性’所測試的受襲患者總和，表達(dá)為百分比。
[0227]術(shù)語“測試特異性”為在疾病不存在時確切陰性，具有高特異性和較少假陽性、不依賴于疾病患病率的篩選實(shí)驗(yàn)。測試特異性計算為真陰性’所測試的未受襲個體，表達(dá)為百分比。
[0228]術(shù)語“PPV”(陽性預(yù)測值)為患有疾病的測試陽性的患者的百分比，并且因此評價陽性測試的可靠性。計算:
[0229]PPV=(真陽性)/ (真陽性+假陽性)。
[0230]術(shù)語“NPV” (陰性預(yù)測值)是指未患有疾病的測試陰性的患者的百分比，并且由此評價陰性測試的可靠性。計算:
[0231 ] NPV=(真陰性)/ (真陰性+假陰性)。
[0232]正如上面顯示的關(guān)系所示，作為用于評價檢測準(zhǔn)確性的指數(shù)的靈敏性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值的各值依據(jù)用于判定CXCL16的血液濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)值而變化。
[0233]通常設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)值以便假陽性比較低，并且靈敏性較高。但是，如從上述所示的關(guān)系中顯示的，在假陽性比值與靈敏性之間存在權(quán)衡。也就是說，如果標(biāo)準(zhǔn)值減小，檢測靈敏性增大。但是，由于假陽性比值也增大，則很難符合具有“低假陽性比值”的條件。考慮到這些情況，例如，給予如下預(yù)測結(jié)果的值可以被選擇作為本發(fā)明中的優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)值:(I)假陽性比值為50%或更小的標(biāo)準(zhǔn)值(也就是說，特異性不小于50%的標(biāo)準(zhǔn)值);以及(2)靈敏性不小于20%的標(biāo)準(zhǔn)值。
[0234]通過使用接收器工作特性(ROC)曲線設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)值。ROC曲線為顯示在縱軸上的檢測靈敏性和在橫軸上的假陽性比值(也就是“1-特異性”)的曲線圖。通過繪制靈敏性和假陽性比值的變化來獲得ROC曲線，其是在使測定癌癥標(biāo)記物(例如，CXCL16)的血液濃度的高/低程度的標(biāo)準(zhǔn)值連續(xù)變化之后獲得的。
[0235]用于獲得ROC曲線的“標(biāo)準(zhǔn)值”為臨時用于統(tǒng)計分析的值。用于獲得ROC曲線的“標(biāo)準(zhǔn)值”通?？梢栽谠试S覆蓋所有可選標(biāo)準(zhǔn)值的范圍內(nèi)連續(xù)變化。例如，所述標(biāo)準(zhǔn)值可以在分析群體中最小和最大測量的血液CXCL16值之間變化。
[0236]基于獲得的ROC曲線，將用于本發(fā)明的優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)值可以從符合上述條件的范圍內(nèi)選擇。或者，標(biāo)準(zhǔn)值可以基于ROC曲線來選擇，所述ROC曲線通過從包括絕大多數(shù)測量的血液CXCL16的范圍中改變標(biāo)準(zhǔn)值而制作。
[0237]用于檢測癌癥或監(jiān)測癌癥進(jìn)展的試劑盒
[0238]本申請的另一個方面涉及一種用于檢測癌癥或監(jiān)測癌癥進(jìn)展的試劑盒。在一個實(shí)施方式中，所述試劑盒包括用于確定生物樣品中CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑；以及如何使用所述試劑的說明書，其中，所述試劑包括抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體或者其兩者。
[0239]本申請通過如下實(shí)施例進(jìn)一步進(jìn)行解釋，其不應(yīng)解釋為對本申請的限制。所有通過本申請引用的參考文獻(xiàn)、專利和公開專利申請以及圖和表的內(nèi)容在此以引用方式并入本文。
[0240]實(shí)施例1:在各種癌中的CXCL16和CXCR6表汰和活件的體外分析
[0241]圖1A-D顯示出在前列腺組織中CXCR6和CXCL16的表達(dá)的典型情形。用(A)同種型對照、(B)抗CXCR6或(C)抗CXCL16抗體對非腫瘤組(n=8)以及腺癌組(n=16)的前列腺組織進(jìn)行染色。褐色(DAB)和洋紅染色分別表明CXCR6和CXCL16陽性。圖1D描繪了使用Aperio ImageScope V.6.25軟件量化的CXCR6和CXCL16的相關(guān)的前列腺癌與非腫瘤對照組織的免疫強(qiáng)度的比。星號(*)顯示出非腫瘤和癌組織之間的顯著性差異(P〈0.01)。
[0242]在圖2A中，從前列腺癌細(xì)胞系、PC3 (如陰影框所示)和LNCaP (如實(shí)心框所示)中以及從正常前列腺細(xì)胞系(RWPE-1 (如空心框所示))中分離總RNA。CXCR6mRNA的表達(dá)的定量RT-PCR分析進(jìn)行三份，且轉(zhuǎn)錄物拷貝被表示為相對于18S rRNA±SE的實(shí)際拷貝。星號(*)表示正常細(xì)胞和癌細(xì)胞之間的統(tǒng)計顯著性(p〈0.05)。在圖2B中，從PC3 (如陰影框所示)和LNCaP (如實(shí)心框所示)中以及從正常前列腺細(xì)胞系(RWPE-1 (如空心框所示))中分離總細(xì)胞蛋白質(zhì)。蛋白印跡分析(Western blot analysis)進(jìn)行三次。用CXCR6譜帶的集成密度除以各個細(xì)胞類型的肌動蛋白譜帶的集成密度。所述值土SE被表示為CXCR6的標(biāo)準(zhǔn)化值。星號(*)表示正常細(xì)胞和癌細(xì)胞之間的統(tǒng)計顯著性(Ρ〈0.05)。在圖2C中，用FITC結(jié)合的抗人CXCL16抗體和PE結(jié)合的抗人CXCR6抗體和7AAD對LNCaP和PC3細(xì)胞進(jìn)行染色。細(xì)胞由Amnis Imagestream成像。
[0243]圖3Α-Β顯示出PC3、LNCaP和RWPE-1細(xì)胞系的CXCR6介導(dǎo)的前列腺癌細(xì)胞向CXCL16的遷移(A)和侵襲(B) (土SEM)。測試PC3，LNCaP和RWPE-1細(xì)胞的侵入或轉(zhuǎn)移穿過響應(yīng)無添加(如空心框所示)、100ng/mL的CXCL16(如實(shí)心框所示)、或者100ng/mL的CXCL16加I μ g/mL的抗CXCR6抗體(如條框所示)的基質(zhì)膠(Matrigel)基質(zhì)的能力。星號(*)顯示出在無添加之間的顯著性差異(P〈0.01)。
[0244]圖4顯示出與前列腺癌細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移相關(guān)的CXCL16依賴的信號級聯(lián)放大。通過使趨化因子處理的溶胞產(chǎn)物雜交到磷酸特異性抗體微陣列上來分析PC3(轉(zhuǎn)移的)和RWPE-1(正常前列腺上皮細(xì)胞)細(xì)胞系對CXCL16的反應(yīng)。使用Ingenuity Pathway分析軟件分析雜交印跡。紅色對象表示選擇的蛋白質(zhì)的磷酸化的增加，而綠色對象表示選擇的蛋白質(zhì)磷酸化的減少。白色對象表示磷酸化狀態(tài)沒有發(fā)生變化的蛋白質(zhì)。表中重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)了通過這個途徑測定的選擇的激酶的關(guān)鍵變化，以及在CXCL16處理后其磷酸化倍數(shù)的變化。
[0245]圖5顯示出在前列腺癌細(xì)胞系中的CXCL16依賴的p_埃茲蛋白的磷酸化。在聚L-賴氨酸包被的蓋玻片上培養(yǎng)PC3和LNCaP細(xì)胞系，并用100ng/ml的CXCL16單獨(dú)處理5分鐘，或者在以Calphostin C( IOOnM)或Wartmannin( 10 μ Μ)培養(yǎng)預(yù)處理(2小時)后用IOOng/ml的CXCL16處理5分鐘。細(xì)胞以IOOnM的羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(Rhodamine Phallodin)和20μ1的Alexa Fluor ? 488結(jié)合的小鼠抗埃茲蛋白(pY353) (BD Biosciences公司)孵育40分鐘。使用奧林巴斯FluoVieWTMFV1000共聚焦顯微鏡以60倍油浸物鏡獲取圖像。
[0246]圖6A-C顯示出前列腺癌細(xì)胞系的CXCL16誘導(dǎo)的⑶51/⑶61(ανβ3)表達(dá)。收集未經(jīng)處理的LNCaP和PC3細(xì)胞(A)、CXCL16處理的LNCaP細(xì)胞(B)和CXCL16處理的PC3細(xì)胞(C)，并用抗人α V β 3抗體標(biāo)記，然后用DRAQ5染料進(jìn)行核染色，并從20，000個細(xì)胞獲取陽性事件的頻率。直方圖表明在CXCL16處理后整聯(lián)蛋白的增加。使用基于AmnisImageStream 100圖像的流式細(xì)胞器獲取圖像。顯示了典型的PC3和LNCaP細(xì)胞的明視場、α V β 3 (綠色)和核(nucleur)(紅色)以及復(fù)合圖像。
[0247]圖7A-B顯示出ERK1/2和NF- κ B的CXCL16介導(dǎo)的磷酸化。圖7Α顯示出用PE結(jié)合的抗磷酸ERK1/2染色的未處理的和CXCL16 (100ng/ml)處理的PC3細(xì)胞。圖7B顯示出用FITC結(jié)合的抗磷酸p65NFk B染色的未處理的和CXCL16 (100ng/ml)處理的PC3細(xì)胞。(A)和(B)都還顯示出以DRAQ5核染色。由Amnis ImageStream系統(tǒng)獲取圖像并使用圖像數(shù)據(jù)探索和分析軟件(Image Data Exploration and Analysis Software) (IDEAS)分析圖像。
[0248]圖8顯示出通過乳腺癌組織的CXCR6，CXCL16和ADAM10的表達(dá)。用同種型對照或抗CXCR6抗體、抗CXCL16抗體或抗ADAM10抗體對乳腺組織進(jìn)行染色。洋紅色顯示出CXCR6，CXCL16和ADAM-10染色。使用Aperio ScanScope CS系統(tǒng)以40倍物鏡獲取數(shù)字圖像以表明并獲得典型情形。
[0249]圖9A-C顯示出乳腺細(xì)胞系的CXCR6的表達(dá)。用PE結(jié)合的抗人CXCR6抗體和DRAQ5核染劑來染色 MCF-10A (A)、MCF-7 (B)和 MDA-MB-231 (C)細(xì)胞。細(xì)胞由 ImageStream 成像，其顯示了攻擊型癌細(xì)胞系MDA-MB-231的升高的CXCR6表達(dá)。
[0250]圖10A-B顯示出乳腺癌細(xì)胞系MCF-7 (A)和MDA-MB-231 (B)的CXCL16介導(dǎo)的F-肌動蛋白聚合。在聚L-賴氨酸包被的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，并用100ng/ml的CXCL16處理5分鐘，或者在用抗CXCR6抗體、SU6656 (Src抑制劑)、PF-573228 (FAK抑制劑)和U0126 (ERK抑制劑)預(yù)處理(2小時)后用100ng/ml的CXCL16處理5分鐘。細(xì)胞用羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽孵育40分鐘。使用奧林巴斯FluoVieWTMFV1000共聚焦顯微鏡以60倍油浸物鏡獲取圖像。
[0251]圖11顯示出在診斷患有腺癌(AdenoCa，n=14)或鱗狀細(xì)胞癌(SSC，n=17)的肺癌患者以及正常健康供體(對照，n=9)的血清中的CXCL16水平。通過能夠檢測>5pg/ml的此趨化因子的ELISA檢測CXCL16水平。實(shí)心圓表示個體的血清CXCL16水平且線顯示出各組的中值濃度。星號(*)顯示出肺癌組和對照組之間的顯著性差異(P〈0.01)。
[0252]圖12A-D顯示出在非腫瘤肺組織(NN，n=8 ;圖12A)、有鱗狀細(xì)胞癌(SCC，n=24 ;圖12B)和腺癌(AdenoCa，n=54 ;圖12C)的肺組織樣本中的CXCR6的表達(dá)。用同種型對照或抗CXCR6抗體對組織樣本染色。褐色(DAB)顯示CXCR6染色。使用Aperio ScanScope CS系統(tǒng)以40倍物鏡獲取每張玻片的數(shù)字圖像。使用圖像分析軟件Aperio ImageScope V.6.25量化CXCR6的免疫強(qiáng)度(圖12D)。星號(*)顯示出非腫瘤和肺癌組織之間的顯著性差異(Ρ〈0.01)。
[0253]圖13Α-Β顯示出在肺組織樣本中的CXCL16的表達(dá)。用同種型對照或抗CXCL16抗體對腺癌肺癌組織(AdenoCa ；n=18 ;圖13A)或非腫瘤肺組織(NN ;n=8,無圖)染色。洋紅色顯示出CXCL16染色。使用Aperio ScanScope CS系統(tǒng)以40倍物鏡獲取每張玻片的數(shù)字圖像。使用圖像分析軟件Aperio ImageScope ν.6.25量化CXCL16的免疫強(qiáng)度(圖13B)。星號(*)顯示出非腫瘤和肺癌組織之間的顯著性差異(P〈0.01)。
[0254]圖14A-D顯示出在卵巢癌組織中的CXCR6和CXCL16的表達(dá)。用(A)同種型對照、(B)抗-CXCR6或(C)抗CXCL16抗體對來自非腫瘤(n=8)的卵巢組織和來自腺癌(n=16)的卵巢組織染色。褐色(DAB)和洋紅染色分別表明CXCR6和CXCL16陽性。圖14D描繪了使用Aperio ImageScope V.6.25軟件量化的CXCR6和CXCL16的相關(guān)的前列腺癌與非腫瘤對照組織的免疫強(qiáng)度的比。星號(*)顯示出非腫瘤和癌組織之間的顯著性差異(P〈0.01)。
[0255]圖15A-D顯示出在結(jié)腸癌組織中的CXCR6和CXCL16的表達(dá)。用(A)同種型對照、(B)抗-CXCR6或(C)抗CXCL16抗體對來自非腫瘤組(n=8)的結(jié)腸組織和來自腺癌(n=16)的結(jié)腸組織染色。褐色(DAB)和洋紅染色分別表明CXCR6和CXCL16陽性。圖1?描繪了使用Aperio ImageScope V.6.25軟件量化的CXCR6和CXCL16的相關(guān)的前列腺癌與非腫瘤對照組織的免疫強(qiáng)度的比。星號(*)顯示出非腫瘤和癌組織之間的顯著性差異(P〈0.01)。
[0256]圖16A-B顯示出使用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)的ABC藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的CXCR6依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分析結(jié)果。從未處理的(□)和CXCL16 (B)處理(100ng/ml)的PC3細(xì)胞(A)(人前列腺癌細(xì)胞系)和LNCaP細(xì)胞(B)(雄性激素敏感的人前列腺腺癌細(xì)胞系)中分離總RNA。使用目標(biāo)引物通過RT-qPCR量化mRNA的表達(dá)三次。使用ΛΛ Ct方法計算結(jié)果。當(dāng)與其各自的未處理的細(xì)胞相比時，CXCL16處理以CXCR6依賴的方式增加了 PC3細(xì)胞的 ABC-A2、-A3、-B2、-B3、-B8、B9、-C3 和-ClOmRNA 的表達(dá)以及 LNCaP 細(xì)胞的 ABC-A2、-A7、-B2、-B8、-B9、-C3、-ClOmRNA的表達(dá)。此外，在CXCL16處理后在PC3細(xì)胞中的Twist-1和Snail-1的表達(dá)也增加了。這些結(jié)果顯示出癌細(xì)胞和腫瘤的CXCL16表達(dá)的臨床和診斷相關(guān)性，如在此所顯示的，與CXCR6結(jié)合的CXCL16涉及細(xì)胞存活信號，以及基因的增強(qiáng)表達(dá)涉及耐藥性。
[0257]實(shí)施例2:用實(shí)時PCR分析檢測趨化因子表達(dá)水平
[0258]引物設(shè)計
[0259]從NIH-NCBI 基因庫數(shù)據(jù)庫得到對于 CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCLlO, CXCLlU CXCLl2, CXCLl3, CXCLl4, CXCLl5, CXCL16、CXCRUCXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR5a、CXCR5b、CXCR6、CXCR7、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL25—1、CCL25—2、CCL27、CCL28、CCRl、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCRIO、CCRlU XCLU XCL2、XCRU CX3CR1 或CX3CL1的信使RNA序列。使用BeaconJ 2.0計算機(jī)程序設(shè)計引物。使用計算機(jī)程序:PrimerPremierJ和MIT Primer 3進(jìn)行引物的熱力學(xué)分析。將所得引物組與整個人類基因組比較以確認(rèn)特異性。
[0260]實(shí)時PCR分析
[0261]在補(bǔ)充有非必需氨基酸、L-谷氨酸鹽和丙酮酸鈉的含有10%胎牛血清的RMP1-1640 (完全培養(yǎng)基)中培養(yǎng)癌細(xì)胞系(ATCC公司，Rockville，MD)。從臨床分離物(Clinomics Biosciences 公司，弗雷德里克,MD 和 UAB Tissue Procurement 公司，伯明翰，AL)獲得原發(fā)性腫瘤和正常配對匹配的組織。使用TriReagent (分子研究中心，辛辛那提，OH)根據(jù)制造商手冊從106個細(xì)胞分離信使RNA (mRNA)。通過用10U/F1的無RNA酶的DNA酶(Invitrogen公司，圣地亞哥，CA)在37°C處理15分鐘而從這些樣本中去除潛在的基因組DNA污染。然后，使RNA沉淀并重懸在RNA Secure (Ambion公司，奧斯汀，TX)中。根據(jù)制造商手冊，通過使用Taqman7反轉(zhuǎn)錄試劑(Applied Biosystems公司，福斯特市,CA)反轉(zhuǎn)錄約2 μ g的總RNA產(chǎn)生cDNA。隨后，根據(jù)制造商手冊，使用SYBR7綠色PCR標(biāo)準(zhǔn)混合試劑(Applied Biosystems 公司)以特定的人 cDNA 引物針對 CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCLlO、CXCLl1、CXCLl2、CXCLl3、CXCL14、CXCLl5、CXCL16、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR5a、CXCR5b、CXCR6、CXCR7、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCLl1、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL25—1、CCL25—2、CCL27、CCL28、CCRl、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCRlO、CCRl 1、XCLl、XCL2、XCRl、CX3CR1 或CX3CL1擴(kuò)增cDNA。使用BioRad Icycler和軟件(Hercules, CA)通過實(shí)時PCR分析評價這些目標(biāo)的mRNA的拷貝水平。
[0262]由于排除了與宿主序列(NIH-NCBI基因庫)退火的引物，使用CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCLIO、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCLl5, CXCL16、CXCRl、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR5a、CXCR5b、CXCR6、CXCR7、CCLl、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCLIO、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CCL27、CCL28、CCRl、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCRIO、CCRl1、XCLl、XCL2、XCRUCX3CR1或CX3CL1特異性引物組得到的RT-PCR產(chǎn)物不會與其他基因目標(biāo)發(fā)生交叉反應(yīng)。相對于導(dǎo)致CXCR5a對CXCR5b以及CCL25、CCL25-1對CCL25-2的多態(tài)性，引物產(chǎn)生不同尺寸的擴(kuò)增子產(chǎn)物。為此，腺瘤、癌、白血病，淋巴瘤，黑素瘤和/或骨髓瘤細(xì)胞系和腫瘤組織的RT-PCR分析顯示，癌細(xì)胞區(qū)別地表達(dá)趨化因子和趨化因子受體。
[0263]實(shí)施例3:抗趨化因子和抗趨化因子受體抗體在體外和體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長
[0264]抗血清的制備
[0265]合成來自CXCRl、CXCR2、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCLl2, CXCR5a、CXCR5b、CXCLl3, CXCR6、CXCL16、CCL16、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CX3CR1和CX3CL1的15氨基酸肽(Sigma Genosys公司，The Woodlands, TX)并將其結(jié)合到雞蛋溶菌酶(Pierce公司，洛克福，IL)以產(chǎn)生用于產(chǎn)生抗血清制品或單克隆抗體的后續(xù)免疫的抗 原。趨化因子肽結(jié)合物的內(nèi)毒素水平通過鱟阿米巴樣細(xì)胞溶解物顯色分析(Cape Cod公 司，法茅斯，MS)量化，并顯示為<5EU/mg。使用IOOii g的抗原作為免疫原與完全弗氏佐劑 Ribi佐劑系統(tǒng)(RAS)—起用于在1.0ml終體積中的第一次免疫。在兔子背部的兩個位點(diǎn)上 以IOOml等分皮下施用此混合物并在每個后腿肌肉中以400ml肌內(nèi)施用此混合物。三至四 周后，對于3次后續(xù)免疫，除了不完全弗氏佐劑外，兔子還接受IOOyg抗原。當(dāng)抗CXCR1、抗 CXCR2、抗 CXCL1、抗 CXCL2、抗 CXCL3、抗 CXCL5、抗 CXCL6 抗抗 CXCL7、抗 CXCL8、抗 CXCL12、 抗 CXCR5a、抗 CXCR5b、抗 CXCLl3,抗 CXCR6、抗 CXCL16、抗 CCL16、抗 CCL25、抗 CCL251、抗 CCL252、抗CX3CR1和抗CX3CL1抗體的滴度達(dá)到1:1000000時，收集抗血清。隨后，熱滅活 正常或抗血清，并在PBS中1:50稀釋。
[0266]單克隆抗體的制備
[0267]合成來自CXCRl、CXCR2、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL12、 CXCR5a、CXCR5b、CXCL13、CXCR6、CXCL16、CCL16、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CX3CR1 和 CX3CLI 的15氨基酸肽(Sigma Genosys公司)并將其結(jié)合到雞蛋溶菌酶(Pierce公司)以產(chǎn)生用于 產(chǎn)生抗血清制品或單克隆抗體的后續(xù)免疫的“抗原”。趨化因子肽結(jié)合物的內(nèi)毒素水平通過 鱟阿米巴樣細(xì)胞溶解物顯色分析(Cape Cod公司，法茅斯，MS)量化，并顯示為<5EU/mg。使 用IOOii g的抗原作為免疫原與完全弗氏佐劑Ribi佐劑系統(tǒng)(RAS) —起用于在200 ill終 體積中的第一次免疫。在大鼠、小鼠、或免疫球蛋白人化的小鼠背部的兩個位點(diǎn)以100 ill 等分皮下施用此混合物。兩周后，對于3次后續(xù)免疫，除了不完全弗氏佐劑外，動物還接受 100 ii g抗原。收集血清，且當(dāng)抗CXCRl、抗CXCR2、抗CXCL1、抗抗CXCL2、抗CXCL3、抗CXCL5、 抗 CXCL6 抗 CXCL7、抗 CXCL8、抗 CXCLl2、抗 CXCR5a、抗 CXCR5b、抗 CXCLl3、抗 CXCR6、抗 CXCL16、抗 CCL16、抗 CCL25、抗 CCL251、抗 CCL252、抗 CX3CR1 或抗 CX3CL1 抗體的滴度達(dá)到 1: 2，000，000時，處死宿主，并分離脾細(xì)胞以用于產(chǎn)生雜交瘤。簡單地說,將來自免疫宿主的 脾臟或淋巴結(jié)的B細(xì)胞與不死的骨髓瘤細(xì)胞系(例如，YB2/0)融合。接下來，在選擇性的培 養(yǎng)條件(即，HAT培養(yǎng)基)和雜交瘤克隆的限制性稀釋方法以后，分離雜交瘤。使用ELISA選 擇產(chǎn)生具有所需特異性的抗體的細(xì)胞。使用通常使用的分子生物學(xué)技術(shù)使來自正常大鼠或 小鼠的雜交瘤人化。在克隆高親和力和多產(chǎn)的雜交瘤之后，從腹水或培養(yǎng)上清液分離抗體， 并將其調(diào)整到1:2，000，000的滴度并以1:50稀釋在PBS中。
[0268]抗血清或單克隆抗體治療
[0269]缺乏T、B和NK細(xì)胞的免疫缺陷裸NIH-1II小鼠(8至12周齡，查爾斯河實(shí)驗(yàn)室，維 明頓，MA)皮下接受I X IO6癌細(xì)胞以建立腫瘤。相應(yīng)地，將新鮮分離的或液氮冷凍的Ig腫 瘤組織手術(shù)植入到腸內(nèi)脂肪組織中以產(chǎn)生腫瘤。一旦異種移植的腫瘤生長達(dá)到5mm大小， 則使NIH-1II小鼠每三天接受抗血清或單克隆抗體的200 u I腹腔注射，并監(jiān)測腫瘤生長的 進(jìn)展或退化。
[0270]數(shù)據(jù)分析
[0271]使用SigmaStat 2000 (芝加哥，IL)軟件分析和確認(rèn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計顯著性。隨后，使 用雙因子不成對檢驗(yàn)，通過史蒂頓特氏t檢驗(yàn)(Student' s t_test)分析數(shù)據(jù)。在該分析 中，比較處理的樣本和未處理的對照。顯著性水平設(shè)定為p〈0.05。
[0272]體外生長的研究[0273]在具有或沒有特異性針對CXCRl、CXCR2、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6CXCL7、 CXCL8、CXCR4、CXCLl2, CXCR5a、CXCR5b、CXCLl3, CXCR6、CXCL16、CCL16、CCR9、CCL25、 CCL25-1、CCL25-2、CX3CR1或CX3CL1的抗體的存在下，在完全培養(yǎng)基中使腺瘤、癌、白血病、 淋巴瘤、黑素瘤和/或骨髓瘤細(xì)胞系生長。通過CXCRl、CXCR2、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、 CXCL6、CXCL7或CXCL8的抗體抑制表達(dá)CXCRl和/或CXCR2的癌細(xì)胞系的生長。相似地， 通過CXCR4或CXCL12的抗體抑制表達(dá)CXCR4的癌細(xì)胞系的生長。通過CXCR5a、CXCR5b或 CXCL13的抗體抑制表達(dá)CXCR5a或CXCR5a的癌細(xì)胞系的生長。通過CXCR6或CXCL16的抗體 抑制表達(dá)CXCR6的癌細(xì)胞系的增殖。通過CCR9、CCL25、CCL25-1或CCL25-2的抗體抑制表 達(dá)CCR9的癌細(xì)胞系的生長。通過CX3CR1或CXC3L1的抗體抑制表達(dá)CX3CR1的癌細(xì)胞系的 增殖。有趣的是，抗可溶性配體(CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL12、 CXCLl3, CXCL16、CCL16、CCL25、CCL25-1、CCL25-2 或 CX3CL1)的抗體，直接對抗膜受體，在 生長抑制方面更加有效。
[0274]體外血管生成的研究
[0275]在血管發(fā)生的體外測定法中(BD-Biocoat公司，Hercules, CA)，在具有或沒有特 異性針對 CXCRl、CXCR2、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCR4、CXCLl2, CXCR5a、CXCR5b、CXCLl3, CXCR6、CXCL16、CCL16、CCR9、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CX3CR1 或CX3CL1的抗體的存在下，根據(jù)供應(yīng)商的說明使微血管內(nèi)皮細(xì)胞(細(xì)胞系統(tǒng)，柯克蘭，WA) 生長，并使其形成微血管靜脈。通過抗CXCRl、CXCR2、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、 CXCL7、CXCL8、CXCR4、CXCLl2, CXCR6 或 CXCL16 的抗體抑制血管生成。
[0276]體內(nèi)生長的研究
[0277]將癌細(xì)胞系或原發(fā)性腫瘤組織繼承性(adoptively)轉(zhuǎn)移到NIH-1II小鼠中并 使其形成目的異種移植腫瘤。針對CXCR1、CXCR2、CXCLU CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、 CXCL7、CXCL8、CXCR4、CXCL12、CXCR5a、CXCR5b、CXCL13、CXCR6、CXCL16、CCL16、CCR9、CCL2 5、 CCL25-1、CCL25-2、CX3CR1或CX3CL1的抗體有區(qū)別地影響腫瘤大小的進(jìn)展和退化。在某 些情況下，針對 CXCR1、CXCR2、CXCLU CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCR4、 CXCLl2, CXCR6或CXCL16的抗體有效地導(dǎo)致腫瘤生長退化并阻止腫瘤生長的進(jìn)展。針對 CXCR4、CXCLl2, CXCR5a、CXCR5b、CXCLl3, CCL16、CCR9、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CX3CR1 或 CX3CL1的抗體有效地抑制腫瘤尺寸的增加。
[0278]本文所使用的趨化因子的蛋白序列記錄在NIH-NCBI基因庫中，如: CXCRl(ACCESSION# NP 000625)、(2)CXCR2(ACCESSION# NP 001548)、(3)CXCLl(ACCESSION# NP 001502)、(4)CXCL2(ACCESSION# NP 002080)、(5) CXCL3(ACCESSION# NP 002081)、(6) CXCL5(ACCESSION# NP 002985)、(7)CXCL6(ACCESSION# NP 002984)、(8)CXCL7(ACCESSION# NP 002695)、(9) CXCL8(IL-8、ACCESSION# NP 000575)、(10) CXCR4 (ACCESSION# NP 003458)、(I I)CXCL12 (ACCESSION# NP 000600)、(12)CXCR5A(ACCESSION# NP 116743)、 (13)CXCR5B(ACCESSION# NP 001707)、(14)CXCL13(ACCESSION# NP 006410)、 (15)CXCR6(ACCESSION# NP 006555)、 (16)CXCL16(ACCESSION# NP 071342)、 (17) CCL16 (ACCESSION# NP 004581)、(18)CCL25 (ACCESSION# NP_005616.2)、( 19) CCL25-1(ACCESSION# NP 005615)、 (20)CCL25-2(ACCESSION# NP 683686)、 (21) CX3CR1(ACCESSION# NP 001328)和(22)CX3CL1(ACCESSION# NP 002987)。[0279]cDNA序列是已知的并且可以在NIH-NCBI基因庫中的下列登錄號得 到:(23)CXCRl (ACCESSION# NM 000634)、(24)CXCR2(ACCESSION# NM 001557)、 (25)CXCLl(ACCESSION# NM 001511)、 (26)CXCL2(ACCESSION# NM 002089)、 (27) CXCL3(ACCESSION# NM 002090)、 (28)CXCL5(ACCESSION# NM 002994)、 (29) CXCL6(ACCESSION# NM 002993)、(30)CXCL7(ACCESSION# NM 002704)、(31)CXCL8 (IL-8、 ACCESSION# NM 000584)、 (32)CXCR4(ACCESSION# NM 003467)、 (33)CXCL12(ACCESSION# NM 000609)、(34)CXCR5A(ACCESSION# NM 032966)、-(35)CXCR5B(ACCESSION# 匪 001716) (36)CXCL13 (ACCESSION# 匪 006419)、(37)CXCR6(ACCESSION# 匪 006564)、 (38)CXCL16(ACCESSION# NM 022059)、 (39)CCL16(ACCESSION# NM 004590)、 (40) CCL25 (ACCESSION# 匪_005624.3)、(41) CCL25-1 (ACCESSION# NM 005624)、(42) CCL25-2 (ACCESSION# 匪 148888)、(43)CX3CR1(ACCESSION# NM 001337)和(44) CX3CL1 (ACCESSION# NM 002996)。
[0280]如下表所示，大多數(shù)的所有腫瘤表達(dá)的特定趨化因子可以變化。本發(fā)明的方法可 專門用于特定患者，這取決于患者自身腫瘤過表達(dá)的趨化因子?？梢允褂帽景l(fā)明的方法識 別腫瘤中過表達(dá)的特定趨化因子并且施用對抗過表達(dá)的趨化因子的抗體。為癌癥患者量身 定制的治療是新穎的，并且應(yīng)用特別有價值。
[0281]下面的表格顯示在所研究的特定腫瘤中過表達(dá)的特定趨化因子的不同數(shù)量。
[0282]表1.趨化因子、趨化因子受體和癌的相關(guān)性(取決于病期)。
[0283]
【權(quán)利要求】
1.一種在受試者中檢測癌癥的存在的方法，其包括: 檢測從所述受試者獲得的生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平；以及 比較所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平與所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的正常表達(dá)水平， 其中，所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的高于正常的表達(dá)水平意味著在所述受試者中存在癌癥， 其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的所述正常表達(dá)水平是預(yù)定值或者是從與所述生物樣本相同來源或類型的已知的正常非癌細(xì)胞的對照樣本中得到的，以及 其中，所述癌癥是黑素瘤、癌、淋巴瘤、白血病、肉瘤或生殖細(xì)胞瘤，以及 其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述一種或多種其他癌癥標(biāo)記物選自CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4 、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCLIO、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCLl5, CXCRl、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR5a、CXCR5b、CXCR7、CCLl、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCLIO、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL24、CCL25、CCL25-1、CCL25-2、CCL27、CCL28、CCRl、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CCRl1、XCLl、XCL2、XCRl、CX3CR1、CX3CL1、RNA結(jié)合基序3(" RBM3")、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、嗜鉻粒素A(CGA)、脫氫表雄酮(DHEA)、神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、催乳激素、B7-H3、成纖維細(xì)胞激活蛋白α多肽、抗ρ53、骨橋蛋白、鐵蛋白、溶血磷脂酰膽堿、驅(qū)動蛋白家族成員4A(KIF4A)、神經(jīng)正五聚蛋白I (NPTXl)和成纖維細(xì)胞生長因子受體I致癌基因配偶體(FGFR10P)蛋白中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述癌癥為黑素瘤，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括選自 CCL25、CCL27、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL12、CXCL13、CX3CL1、CCR9、CCR10、CXCRl、CXCR2、CXCR4、CXCR5 和 CX3CR1 中的一種或多種癌癥標(biāo)記物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述癌癥為癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括選自 CCL1、CCL2、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCL12、CXCL13、CCR2、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CXCR5 和 CX3CR1 中的一種或多種癌癥標(biāo)記物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述癌為乳腺癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括 CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CXCLl3, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CXCR5、CX3CR1、RNA 結(jié)合基序 3 (" RBM3 ")、癌胚抗原(CEA)、RNA 結(jié)合基序 3(" RBM3")和 / 或 CEA。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述癌為前列腺癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括前列腺特異性抗原(PSA)、CEA、嗜鉻粒素A(CGA)、脫氫表雄酮(DHEA)、神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、催乳激素和/或B7-H3。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述癌為結(jié)腸直腸癌，且其中，所述癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括 CXCL13、CXCR5、CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、成纖維細(xì)胞激活蛋白α多肽、抗ρ53、骨橋蛋白和鐵蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述癌為卵巢癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括 CXCL13、CXCR5、CXCL16、CXCR6、CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCL12、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、癌癥抗原 125 (CA-125)、HE-4、OVX-1 巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)和/或溶血磷脂酰膽堿。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述癌為肺癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括 CXCLl3, CXCR5、CCLU CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1、驅(qū)動蛋白家族成員4A(KIF4A)、神經(jīng)正五聚蛋白I (NPTXl)、成纖維細(xì)胞生長因子受體I致癌基因(FGFR10P)蛋白和CEA。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述癌為胰腺癌或胃癌，且其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物進(jìn)一步包括 CXCL13、CXCR5、CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CX3CR1 和 CEA。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述癌癥為淋巴瘤、白血病、肉瘤或生殖細(xì)胞瘤。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述生物樣本為血漿、唾液或尿液樣本。
13.一種評價患有癌癥的受試者的預(yù)后的方法，其包括: 確定來自所述受試者的生 物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平；以及比較所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平與所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的對照表達(dá)水平， 其中，相對于所述對照水平，所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的更高的表達(dá)水平意味著所述受試者的預(yù)后差， 其中，相對于所述對照水平，所述生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的更低或者相似的表達(dá)水平意味著所述受試者的預(yù)后好， 其中，差的預(yù)后表示該癌癥是攻擊型的或者侵略型的，其中，所述癌癥是黑素瘤、癌、淋巴瘤、白血病、肉瘤或生殖細(xì)胞瘤，以及 其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者。
14.一種在受試者中監(jiān)測癌癥治療的過程的方法，其包括: 在所述治療期間或在所述治療后確定從所述受試者獲得的一種或多種生物樣本中的一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平；以及 比較所述一種或多種生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的表達(dá)水平與所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的對照表達(dá)水平， 其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的對照水平是在所述受試者中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物的治療前的水平，或者是預(yù)定的參考水平， 其中，如果所述一種或多種生物樣本中的所述一種或多種癌癥標(biāo)記物與所述對照水平相似或比其更低，則所述治療被視為是有效的， 其中，所述癌癥是黑素瘤、癌、淋巴瘤、白血病、肉瘤或生殖細(xì)胞瘤，以及 其中，所述一種或多種癌癥標(biāo)記物包括CXCL16或CXCR6或者CXCL16和CXCR6兩者。
15.一種用于檢測癌癥或監(jiān)測癌癥進(jìn)展的試劑盒，其包括: 用于確定生物樣本中的CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)的試劑；以及如何使用所述試劑的說明， 其中，所述試劑包括抗CXCL16抗體、抗CXCR6抗體、或者抗CXCL16抗體和抗CXCR6抗體兩者，且其中，所述癌癥是癌、黑素瘤、淋巴瘤、白血病、肉瘤或生殖細(xì)胞瘤。
16.—種在受試者中治療癌癥的方法，其包括: 向所述受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、或抗CXCR6抗體、或它們的組合， 其中，所述癌癥是黑素瘤、淋巴瘤、白血病、肉瘤、胚細(xì)胞瘤或癌，且其中，所述抗CXCL16抗體、或所述抗CXCR6抗體、或所述抗CXCL16抗體和所述CXCR6抗體的組合是以lng/kg體重/天至約100mg/kg體重/天的劑量范圍給藥的。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述癌癥為黑素瘤，或選自卵巢癌、陰道癌、子宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、肛門癌、直腸癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、胰島細(xì)胞瘤、腺癌、腺鱗癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、乳腺癌、肺癌、食道癌、口腔癌、腦癌、髓母細(xì)胞瘤、神經(jīng)外胚層瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦垂體癌和骨癌中的癌。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，將所述抗CXCL16抗體、或抗CXCR6抗體、或它們的組合直接施用到癌組織，或與化學(xué)治療試劑一起施用到癌組織。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述癌癥是癌，并且其中，將所述抗CXCL16抗體、或所述抗CXCR6抗體、或它們的組合與選自CCL1、CCL4、CCL17、CCL19、CCL21、CCL22、CCL25、CXCLl2, CXCLl3, CCR7、CCR8、CCR9、CXCR4、CXCR5 和 CX3CR1 中的另外的抗趨化因子抗體或抗趨化因子受體抗體一起施用。
20.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述癌癥是黑素瘤，并且其中，將所述抗CXCL16抗體、或所述抗CXCR6抗體、或它們的組合與選自CCL25、CCL27、CXCLU CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCLl2, CXCLl3, CX3CL1、CCR9、CCR10、CXCRl、CXCR2、CXCR4、CXCR5和CX3CR1中的另外的抗趨化因子抗體或抗趨化因子受體抗體一起施用。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其進(jìn)一步包括: 確定來自所述受試者的組織中的CXCL16和/或CXCR6的表達(dá)水平，以及，如果檢測到CXCL16和/或CXCR6的水平增加，則向所述受試者施用治療有效量的所述抗CXCL16抗體、所述抗CXCR6抗體、或它們的組合。
22.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述受試者被診斷患有導(dǎo)致癌細(xì)胞中的CXCL16和/或CXCR6表達(dá)升高的癌癥。
23.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述抗CXCL16抗體、或所述抗CXCR6抗體、或所述抗CXCL16抗體和所述CXCR6抗體的組合是以lng/kg體重/天至約100ng/kg體重/天、10ng/kg體重/天至約I μ g/kg體重/天、100ng/kg體重/天至約10 μ g/kg體重/天、I U g/kg體重/天至約100 μ g/kg體重/天、10 μ g/kg體重/天至約lmg/kg體重/天、或100 μ g/kg體重/天至約10mg/kg體重/天的劑量范圍給藥的。
24.一種在受試者中預(yù)防或抑制具有CXCL16和/或CXCR6的升高的表達(dá)的癌細(xì)胞的遷移或轉(zhuǎn)移的方法，其包括: 向所述受試者施用治療有效量的抗CXCL16抗體、或抗CXCR6抗體、或它們的組合， 其中，所述抗CXCL16抗體、或所述抗CXCR6抗體、或所述抗CXCL16抗體和所述CXCR6抗體的組合是以lng/kg體重/天至約100mg/kg體重/天的劑量范圍給藥的。
25.一種提高化學(xué)療法的效果的方法，其包括: 向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用有效量的抗CXCL16抗體、或抗CXCR6抗體、或它們的組合。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述受試者正在進(jìn)行化療以治療黑素瘤或癌。
27.一種藥物組合物，其包含: 能夠表達(dá)下列試劑的表達(dá)載體:(I)抑制CXCL16和/或CXCR6表達(dá)的試劑，或(2)抑制CXCL16和CXCR6間的相互作用的試劑，或(3)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的試劑；以及 藥學(xué)上可接受的載體。
28.根據(jù)權(quán)利要求29所述的藥物組合物，其中，所述試劑是抗CXCL16抗體或抗CXCR6抗體。
29.—種在受試者中治療癌癥的方法，其包括: 用有效量的CXCL16和/或CXCR6免疫原來誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體以使受試者免疫， 其中，所述癌癥是黑素瘤、淋巴瘤、白血病、肉瘤、胚細(xì)胞瘤或癌。
30.一種在受試者中預(yù)防或抑制具有CXCL16和/或CXCR6的升高的表達(dá)的癌細(xì)胞的遷移或轉(zhuǎn)移的方法，其包括: 用有效量的CXCL16和/或CX CR6免疫原來誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體以使受試者免疫， 其中，所述癌癥是黑素瘤、淋巴瘤、白血病、肉瘤、胚細(xì)胞瘤或癌。
31.一種提高化學(xué)療法的效果的方法，其包括: 向正在進(jìn)行化療以治療癌癥的受試者施用有效量的CXCL16和/或CXCR6免疫原以誘導(dǎo)抑制CXCL16和/或CXCR6的生物活性的抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK103534593SQ201180067580
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2010年12月14日
【發(fā)明者】詹姆斯·W·利拉德, 沙伊萊什·辛格, 拉杰什·辛格 申請人:詹姆斯·W·利拉德, 沙伊萊什·辛格, 拉杰什·辛格