專利名稱：一種檢測水溶性維生素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種維生素的檢測方法，尤其是關(guān)于動物飼料中水溶性維生素的檢測方法，屬于化學(xué)成份的檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
水溶性維生素是指能在水中溶解的維生素，主要包括維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺和維生素C等。其中，維生素B1又稱硫胺素，參與動物體內(nèi)糖類代謝，維持神經(jīng)、消化和循環(huán)系統(tǒng)的正常功能。維生素B2又稱核黃素，在生物氧化的呼吸鏈中起遞氫作用，參與動物體內(nèi)多種物質(zhì)代謝和能量代謝。維生素B6參與氨基酸、糖原代謝和激素的合成，能促進消化、吸收，增強免疫力。煙酰胺是輔酶I和輔酶II的組成部分，是動物體內(nèi)合成多種脫氫酶的輔酶的重要原料。上述水溶性維生素對生命活動具有重要作用。維生素通常是從食物中攝取的，人工飼養(yǎng)的動物食物源固定，維生素的攝取途徑單一?？刂坪蔑暳现械木S生素添加量就成了防止家畜缺乏維生素的主要手段?，F(xiàn)有飼料工業(yè)檢測水溶性維生素B:、B2、B6和煙酰胺的方法，是先將樣品分別預(yù)處理后，再分別按照以下標準進行檢測標準GB/T14700-2002《飼料中維生素B1的測定》、GB/T14701-2002《飼料中維生素B2的測定》、GB/T14702-2002《飼料中維生素B6的測定》和NY/T2130-2012《飼料中煙酰胺的測定》。上述水溶性維生素檢測方法存在以下不足(I)檢測分別進行，操作重復(fù)，檢測周期冗長。(2)前處理過程中，所用的提取液、流動相為多種不同試劑，需分別配置，操作重復(fù)，過程繁瑣。(3)為消除檢測結(jié)果中拖尾現(xiàn)象，流動相配制時需用額外添加三乙胺。三乙胺是一種易燃、易爆、有毒、具強刺激性的藥品，增加測試過程危險性。(4)維生素B1和B2結(jié)構(gòu)類似，分離較困難。先分別提取再檢測，維生素B1和B2相互影響，檢測結(jié)果不準確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測過程繁雜，檢測周期冗長、分離效果不佳等不足，提出一種檢測水溶性維生素的方法。本發(fā)明的檢測方法可以在較短的時間內(nèi)實現(xiàn)對維生素BpByB6和煙酰胺的同時分離及精確檢測。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案一種水溶性維生素的檢測方法，包括以下步驟(I)制備維生素B1、B2、B6和煙酰胺的標準溶液，利用高效液相色譜儀對其檢測，得所述維生素的保留時間，并生成維生素濃度與峰面積之間對應(yīng)的標準曲線；(2)取飼料樣品進行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對其進行檢測，得到所述溶液樣品的各組份的保留時間和檢測峰面積；
(3)將步驟(2)中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時間和檢測到的峰面積與步驟(I)中得到的保留時間及所述的標準曲線進行比對，計算確定飼料中的維生素B2,B6和煙酰胺的含量；進一步的，所述步驟(2)中的預(yù)處理包括(201)將詞料樣品用尚子對溶液超聲提取,得提取液；(202)將步驟(201)所得提取液于沸水中煮沸20_30min ；(203)將步驟(202)得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過濾；所述離子對溶液為含有4-8mmol/L己燒磺酸鈉和15_25mmol/L磷酸的水溶液。進一步，上述水溶性維生素的檢測方法中，所述離子對溶液為含有5mmol/L己烷磺酸鈉和20mmol/L磷酸的離子對溶液。進一步，上述水溶性維生素的檢測方法中，所述高效液相色譜的流動相為所述離子對溶液。進一步，上述水溶性維生素的檢測方法中，所述高效液相色譜的流動相分為流動相A和流動相B，其中流動相A為所述離子對溶液，流動相B為乙腈。高效液相色譜檢測過程采用梯度洗脫方式，優(yōu)選梯度洗脫程序如表I。表I用于洗脫水溶性維生素的梯度洗脫程序
權(quán)利要求
1.一種水溶性維生素的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)制備維生素BpByB6和煙酰胺的標準溶液，利用高效液相色譜儀對其檢測，得所述維生素的保留時間，并生成維生素濃度與峰面積之間對應(yīng)的標準曲線； (2)取飼料樣品進行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對其進行檢測，得到所述溶液樣品的各組份的保留時間和檢測峰面積； (3)將步驟(2)中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時間和檢測到的峰面積與步驟(O中得到的保留時間及所述的標準曲線進行比對，計算確定飼料中的維生素V B2, B6和煙酰胺的含量； 所述步驟(2)中的預(yù)處理包括 (201)將飼料樣品用離子對溶液超聲提取，得提取液； (202)將步驟(201)所得提取液于沸水中煮沸20-30min； (203)將步驟(202)得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過濾； 所述離子對溶液為含有4-8mmol/L己烷磺酸鈉和15-25mmol/L磷酸的水溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，所述離子對溶液為含有5mmol/L己燒磺酸鈉和20mmol/L磷酸的離子對溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，步驟(203)中提取液過濾用的是O. 45 μ m水相濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的流動相為權(quán)利要求I中所述離子對溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，高效液相色譜流動相分為A，B兩種，A為權(quán)利要求I中所述的離子對溶液，B為乙腈，高效液相色譜檢測過程采用梯度洗脫方式。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，檢測過程梯度洗脫程序如下流動相A、B初始比例為91:9，待基線平衡后進樣，同時調(diào)整流動相A、B比例在12min內(nèi)線性調(diào)整為80:20。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，步驟(201)預(yù)處理中，飼料樣品與提取液比例是重量體積比g/L，2 Γ5 :1。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測水溶性維生素的方法，其特征在于，高效液相色譜檢測條件色譜柱，資生堂 UG120 (5 μ m, 4. 6mm i. d. X 250mm);溫度，30<€ ;流速，I. OmL/min ;檢測波長210nm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測定水溶性維生素的方法，步驟包括(1)制備維生素標準溶液，利用高效液相色譜儀對其檢測，得保留時間并生成標準曲線；(2)取樣品預(yù)處理得到溶液樣品，利用所述高效液相色譜儀在與步驟(1)相同的條件下對其進行檢測，得到樣品保留時間和峰面積；(3)將步驟(2)中獲得的保留時間和峰面積與步驟(1)中得到的保留時間及所述標準曲線進行比對，通過計算確定維生素含量。步驟(2)中預(yù)處理步驟包括超聲提取，將提取液于沸水中煮沸20-30min，冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過濾。采用本發(fā)明方法避免重復(fù)制樣的繁瑣過程，一次性完成四種維生素的測試，檢測速度提高，且檢測結(jié)果準確。
文檔編號G01N30/88GK102980967SQ20121058454
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者梁玉樹, 王虎, 何蕓蕓 申請人:新希望乳業(yè)控股有限公司