一種檢測抗原或抗體的方法
【專利摘要】本發(fā)明首先提供一種檢測抗原或抗體的方法，包括有如下的步驟：包被并封閉待檢抗原或血清對應(yīng)的特異性抗體或抗原；用待檢抗原或血清特異性結(jié)合的抗體或抗原致敏染色的SPA；取待檢抗原或血清與包被在載體上的抗體或抗原進行結(jié)合反應(yīng)，之后沖洗；再加入上述致敏了SPA的特異性抗體或抗原，再沖洗；最后進行結(jié)果的判定，根據(jù)是否出現(xiàn)顯色條帶表明待檢測樣品中存在待檢測的抗原或抗體。本發(fā)明可以一次檢測一種或多種抗原或抗體，減少了操作次數(shù)，節(jié)約了成本；特異性強，降低了假陽性出現(xiàn)的幾率；成本低廉，操作極為簡便，縮短了工時；易于推廣，適于普查；速度快，靈敏度高。
【專利說明】-種檢測抗原或抗體的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明分子檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種抗原、抗體的快速檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 抗原和相應(yīng)抗體之間可W發(fā)生特異性的結(jié)合反應(yīng)，該種結(jié)合取決于抗原表位與抗 體超變區(qū)的結(jié)構(gòu)具有互補性和親和性?？乖蚩贵w的檢測原理便是基于抗原抗體結(jié)合形成 免疫復(fù)合物的性狀與活性特點，對標(biāo)本中的抗原或抗體進行定性、定位或定量的檢測。其中 對抗原的定性和定位檢測即用已知的抗體和待檢樣品混合，經(jīng)過一段時間，若有免疫復(fù)合 物形成的現(xiàn)象發(fā)生，就說明待檢樣品中有相應(yīng)的抗原存在。若無預(yù)期的現(xiàn)象發(fā)生，則說明樣 品中無相應(yīng)的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應(yīng)抗體。
[0003] 抗體檢測的意義在于協(xié)助臨床診斷，在某些疾病中亦是觀察療效及預(yù)后的一個指 標(biāo)，預(yù)防接種效果的觀察，W及傳染病流行病學(xué)調(diào)查中，特異性抗體的檢測也具有特殊的、 重要的意義?？贵w檢測用于臨床治療或?qū)嶒炑芯繒r也需做純度分析和定量測定。臨床上檢 測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗 體，對有關(guān)疾病的診斷有重要意義。
[0004] 抗原檢測的意義根據(jù)可做為抗原進行檢測的物質(zhì)可分為W下四類：
[0005] 1)各種微生物及其大分子產(chǎn)物：用于傳染病診斷、微生物的分類及鑒定W及對菌 苗、疫苗的研究。
[0006] 2)生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì)；包括各種血清蛋白（如各類免疫球蛋白、
[0007] 補體的各種成分）、可溶性血型物質(zhì)、多膚類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做 為抗原進行檢測。在對該些成分的生物學(xué)作用的研究W及各種疾病的診斷有重要意義。
[0008] 3)人和動物細(xì)胞的表面分子；包括細(xì)胞表面各種分化抗原同種異型抗原、病毒相 關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性抗原等。檢測該些抗原對各種細(xì)胞的分類、分化過程及功能研究、對各 種與免疫有關(guān)的疾病的診斷及發(fā)病機制的研究，均有重要意義。
[0009] 4)各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可W分 別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的完全抗原。用其免疫動物，制備出各種半 抗原的抗體，應(yīng)用于各種半抗原物質(zhì)的檢測，例如對某些病人在服用藥物后進行血中藥物 濃度的監(jiān)測。
[0010] 目前用于抗原抗體檢測的方法主要有：
[0011] (1)沉淀反應(yīng)包括環(huán)狀沉淀試驗、單向免疫擴散試驗、雙向免疫擴散試驗、免疫比 濁法、對流免疫電泳、免疫電泳、免疫印記法。
[0012] (2)凝集反應(yīng)包括直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)（包括應(yīng)用SPA的協(xié)同凝集反 應(yīng)）、抗球蛋白試驗。
[0013] (3)補體參與抗原抗體反應(yīng)包括溶血反應(yīng)、補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗、補體結(jié)合試 驗。
[0014] (4)中和反應(yīng)包括病毒中和試驗和毒素中和試驗。
[0015] (5)標(biāo)記免疫反應(yīng)包括英光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)、酶聯(lián)免疫分析法、發(fā)光免疫 技術(shù)和膠體金免疫技術(shù)
[0016] 綜上該些方法要么要求有復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的操作過程，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和 大量樣本的篩查，要么就是檢測時間較長、對操作人員專業(yè)要求高，或是檢測成本高、假陽 性現(xiàn)象比較多。更重要的是，目前的檢測方法還存在靈敏度不是很高的問題。所W，目前急 需一種操作簡便、經(jīng)濟、準(zhǔn)確、適合臨床推廣的檢測方法來檢測抗原和抗體。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測抗原抗體的方法，從而克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不 足。
[0018] 本發(fā)明首先提供一種檢測抗原的方法，包括如下的步驟：
[0019] 將與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體包埋在檢測用的載體上；
[0020] 將包被在載體上的抗體用BSA封閉；
[0021] 將SPA進行染色，染色結(jié)束后，將染色的SPA與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體進 行結(jié)合，即用與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體致敏SPA ;
[0022] 取待檢測的樣品與包被在載體上的抗體進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用清洗液清 洗；
[0023] 然后再加入上述致敏了 SPA的特異性抗體進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用洗液進行 清洗；
[0024] 最后進行結(jié)果的判定，如出現(xiàn)顯色條帶表明樣品中存在待檢測的抗原。
[00巧]作為優(yōu)選，在檢測用的載體上還包埋有作為陽性對照的陽性血清、作為陰性對照 的陰性血清及空白對照。
[0026] 其中陽性血清是用一種或多種特異性抗原免疫易感動物，免疫后靜脈采血測定抗 體效價，效價達(dá)到1:800或W上時，收集血清，制得抗W上多種抗原的陽性血清。
[0027] 所述陰性血清，是采集健康動物血清測定抗多種抗原的抗體的效價，效價低于1:1 時，收集血清制得陰性血清。
[0028] SPA的染色的方法如下；在金黃色葡萄球菌菌液中滴加染液，混勻后收集菌體，再 用緩沖液清洗直至菌體無顏色脫落為止，再加入緩沖液息浮得到染色的SPA菌液。
[0029] 染色的SPA與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體進行結(jié)合，其具體方法如下；將染 色后SPA菌液內(nèi)加入與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體，混勻，37C溫箱放置30分鐘后，收 集菌體，菌體用緩沖液沖洗，制成息液。
[0030] 所述的檢測載體，優(yōu)選為NC膜或化ISA板；
[0031] 所述的清洗液或緩沖液優(yōu)選為PBS緩沖液。
[0032] 上述的方法，還可W用于檢測抗體，操作步驟如下；
[0033] 將與待檢測的抗體特異性結(jié)合的抗原包埋在檢測用的載體上；
[0034] 將包被在載體上的抗原用BSA封閉，備用；
[00巧]將SPA進行染色，染色結(jié)束后，進行SPA致敏和檢測步驟：
[0036] 采用待檢測的血清進行SPA致敏；
[0037] 取致敏了 SPA的待檢測樣品與包被在載體上的抗原進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用 清洗液清洗；
[0038] 沖洗結(jié)束后，如出現(xiàn)顯色條帶表明待檢測樣品中存在待檢測的抗體。
[0039] 上述的SPA致敏和檢測步驟，還可W采用如下的方法：
[0040] 采用特異性的抗體致敏SPA ;
[0041] 取待檢測的樣品與包被在載體上的特異性抗原進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用清洗 液沖洗；
[0042] 然后再加入上述致敏了 SPA的特異性抗體進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用洗液進行 沖洗；
[0043] 最后進行結(jié)果的判定，如不出現(xiàn)顯色條帶表明待檢測樣品中存在待檢測的抗原。
[0044] 進一步的，上述的SPA致敏和檢測步驟，還可W采用如下的方法：
[0045] 采用抗特異性抗體的二抗致敏SPA ;
[0046] 取待檢測的樣品與包被在載體上的特異性抗原進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用清洗 液沖洗；
[0047] 然后再加入上述致敏了 SPA的二抗進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用洗液進行沖洗；
[0048] 最后進行結(jié)果的判定，如出現(xiàn)顯色條帶表明樣品中存在待檢測的抗原；
[0049] 所述的二抗是用一種或多種抗原免疫易感動物，免疫后靜脈采血測定抗體效價， 效價達(dá)到1:800或W上時，收集血清，制得抗W上多種抗原的陽性血清，再將此抗體免疫易 感動物，免疫后靜脈采血測定抗體效價，效價達(dá)到1:800或W上時，收集血清，即制得抗W 上一種或多種抗原的陽性血清的二抗。
[0050] 作為優(yōu)選，在檢測用的載體上還包埋有作為陽性對照的標(biāo)準(zhǔn)抗原、作為陰性對照 的PBS (抑值7. 4,0. 01M)緩沖液及空白對照。
[0051] 本發(fā)明可W-次檢測多種抗原（或抗體），減少了操作次數(shù)，節(jié)約了成本；特異性 強，降低了假陽性出現(xiàn)的幾率；所應(yīng)用的檢測試劑成本低廉，操作極為簡便，縮短了工時； 易于推廣，適于普查；速度快，靈敏度高，可W檢測到0. Ippb的鹽酸克倫特羅、沙下胺醇和 萊克多己胺；其結(jié)果易于觀察，且可W長期保存，該對于快速判斷被檢樣本中是否含有特異 性抗原或抗體具有重要診斷價值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0052] 圖1 ;本發(fā)明檢測抗原原理圖；
[005引圖2 ;本發(fā)明檢測抗體原理圖a ;
[0054] 圖3 ;本發(fā)明檢測抗體原理圖b ;
[005引圖4 ;本發(fā)明檢測抗體原理圖C ;
[005引圖5 ;本發(fā)明線性包被示意圖，其中T1、T2及"……"表示包被的特異性抗體（或 抗原）PC表示陽性對照，NC表示陰性對照。圖中特異性抗體（或抗原）的包被是線性包被。
[0057] 圖6 ;本發(fā)明點狀包被示意圖，其中T1、T2及"……"表示包被的特異性抗體（或 抗原）PC表示陽性對照，NC表示陰性對照。圖中特異性抗體（或抗原）的包被是點狀包被。

【具體實施方式】
[0058] 金黃色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA)是存在于細(xì)菌細(xì)胞壁的 一種表面蛋白。SPA是一種單鏈多膚，與胞壁膚聚糖呈共價結(jié)合；SPA可與人類IgGU IgG2 和IgG4的化段非特異性結(jié)合，亦能同豚鼠、小鼠等多種哺乳動物的IgG的化段結(jié)合；而 IgG分子的Fab段仍能同相應(yīng)抗原分子發(fā)生特異性結(jié)合。
[0059] 申請人:在長期的研究中發(fā)現(xiàn)，用SPA結(jié)合抗原或抗體，能顯著的提高檢測時的靈 敏性，從而促成了本發(fā)明。
[0060] 本發(fā)明的方法，其步驟總體如下：
[0061] 1)制備特異性的抗體、陽性血清和陰性血清，備用；
[0062] 2)將特異性抗體（或抗原）、陽性血清（或抗原）、陰性血清（檢測抗體時為PBS 緩沖液）包被在NC膜（或化ISA板）上，進行封閉備用，其中陽性血清（或抗原）即為陽 性對照，陰性血清（檢測抗體時為PBS緩沖液）即為陰性對照；
[0063] 3)然后將SPA進行染色，并用特異性的抗體或是待檢血清致敏，備用；
[0064] 4)取待檢樣品（或致敏了染色的SPA的待檢樣品）于包被了特異性抗體（或抗 原）且已封閉好的NC膜（或ELISA板）上，作用一段時間后用PBS緩沖液沖洗3次；
[006引 W再滴加致敏的SPA混合液，作用一段時間后再用PBS緩沖液（0. 01M，抑值7. 4) 沖洗3次。（應(yīng)用直接檢測抗體時該步驟省略）
[0066] 檢測抗原時的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)；陽性對照有顯色反應(yīng)，同時陰性對照無顯色反應(yīng)時， 實驗結(jié)果成立，否則，實驗結(jié)果不成立。在實驗結(jié)果成立的條件下，包被抗體的位置上有顯 色反應(yīng)的判為陽性，即被檢樣品中有針對該特異性抗體的抗原；包被抗體的位置上無顯色 反應(yīng)的判為陰性，即被檢樣品中無針對該特異性抗體的抗原。
[0067] 采用待檢血清或抗特異性抗體的二抗致敏SPA檢測抗體時的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性 對照有顯色反應(yīng)，同時陰性對照無顯色反應(yīng)時，實驗結(jié)果成立，否則，實驗結(jié)果不成立。在實 驗結(jié)果成立的條件下，包被抗原的位置上有顯色反應(yīng)的判為陽性，即被檢樣品中有針對該 特異性抗原的抗體；包被抗體的位置上無顯色反應(yīng)的判為陰性，即被檢樣品中無針對該特 異性抗原的抗體。
[0068] 應(yīng)用特異性抗體致敏SPA檢測抗體時的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)；陽性對照無顯色反應(yīng)，同 時陰性對照有顯色反應(yīng)時，實驗結(jié)果成立，否則，實驗結(jié)果不成立。在實驗結(jié)果成立的條件 下，包被抗原的位置上無顯色反應(yīng)的判為陽性，即被檢樣品中有針對該特異性抗原的抗體； 包被抗體的位置上有顯色反應(yīng)的判為陰性，即被檢樣品中無針對該特異性抗原的抗體。
[0069] 所述特異性抗體的制備步驟如下：
[0070] 將抗原稀釋后（半抗原時需加入佐劑）W皮下注射和靜脈注射的方式免疫易感動 物，共免疫4次，每次間隔7?10天，第4次免疫5天后耳靜脈采血測定抗W上多種抗體效 價，效價達(dá)到1:800 W上時，即可自也臟放血，收集血清，即制得特異性抗體。
[0071] 所述陽性血清的制備步驟如下：
[0072] 將多種抗原稀釋后（半抗原時需加入佐劑）W皮下注射和靜脈注射的方式免疫易 感動物，共免疫4次，每次間隔7?10天，第4次免疫5天后耳靜脈采血測定抗W上多種抗 體效價，效價達(dá)到1:800 W上時，即可自也臟放血，收集血清，即制得抗W上多種抗原的陽 性血清。
[0073] 所述二抗的制備步驟如下：
[0074] 將一種或多種抗原稀釋后W皮下注射和靜脈注射的方式免疫易感動物，共免疫4 次，每次間隔7?10天，第4次免疫5天后耳靜脈采血測定抗W上多種抗體效價，效價達(dá)到 1:800 W上時，即可自也臟放血，收集血清，即制得抗W上一種或多種抗原的陽性血清，再將 此陽性血清稀釋后W皮下注射和靜脈注射的方式免疫易感動物，共免疫4次，每次間隔7? 10天，第4次免疫5天后耳靜脈采血測定抗W上多種抗體效價，效價達(dá)到1:800 W上時，即 可自也臟放血，收集血清，即制得抗W上一種或多種抗原的特異性抗體的二抗。
[00巧]所述陰性血清的制備步驟如下：
[0076] 采集健康動物血清測定抗W上多種抗原的抗體的效價，效價低于1:1時，收集血 清即為抗該多種抗原的陰性血清。
[0077] 所述制備特異性抗體、陽性血清和二抗過程中對免疫動物進行的靜脈注射和皮下 注射，其注射步驟是：第一次靜脈注射0. 1ml，皮下注射0. Iml ; 10天后進行第二次免疫，靜 脈注射0. 2ml，皮下注射0. Iml ; 7天后進行第H次免疫，靜脈注射0. 5ml，皮下注射0. Iml ;7 天后進行第四次免疫，靜脈注射1. Oml,皮下注射0. 3ml ;5天后耳靜脈采血，收集血清，測定 效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 ;800 W上時，即可也臟放血，收集血清，作為特異性抗體（或陽性血 清或二抗）。
[0078] 對于本發(fā)明所使用的陽性對照的陽性血清和作為陰性對照的陰性血清，也可選用 本領(lǐng)域通過的作為陽性對照清和作為陰性對照的血清。
[0079] 所述制備特異性抗體和陽性血清過程中對半抗原進行的預(yù)處理方法是：將半抗原 與佐劑按10:1?15:1的比例進行混合，置37C搖床振搖3天，之后放室溫或4C靜止1天， 即可用于免疫動物。
[0080] 所述致敏SPA混合液的制備步驟如下：
[0081] USPA的染色：于金黃色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加石碳酸復(fù)紅染液，搖晃混 勻，放置15分鐘?20分鐘，20(K)巧m離也10分鐘后加入PBS緩沖液化01M，抑值7. 4)沖 洗（此步驟重復(fù)，直至無顏色脫落為止），加PBS緩沖液恢復(fù)至原體積，即可得到染色的SPA 菌液。
[0082] 2、SPA的致敏：將染色后SPA菌液內(nèi)加入同等體積的特異性抗體，混勻，37C溫箱 放置30分鐘，300化pm離也15分鐘，棄上清，沉淀物再用PBS緩沖液化01M，抑值7. 4)沖 洗兩次，制成5%的息液，即為所需的致敏SPA混合液。
[0083] 所述特異性抗體（或抗原）的包被與封閉步驟如下：
[0084] 將特異性抗體（或抗原）按照Img/L的濃度包被于NC膜或化ISA板上，然后用 3% BSA封閉，4°C過夜，備用。
[0085] 所述0. OlM的PBS緩沖液的制備步驟如下：
[008引稱取化2冊042. 2g，化&?040. 3g，化Cl 8. 5g，調(diào)節(jié)溶液的抑值至7. 4,最后加水定 容IOOOml, 121. 3°C滅菌30分鐘，保存于4°C冰箱中備用。
[0087] 下面結(jié)合附圖并通過具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0088] 實施例1
[0089] 檢測對象為動物尿液中的瘦肉精，屬于抗原檢測，具體操作步驟如下：
[0090] 將鹽酸克倫特羅（一種瘦肉精）標(biāo)準(zhǔn)品（IOOy g/ml)做1:2、1:20、1:200、1:2000、 1:10000、1:20000倍稀釋，分別用膠體金法和本發(fā)明的SPA法同時對稀釋好的鹽酸克倫特 羅標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液進行檢測。
[00川（一）本發(fā)明的SPA法檢測方法如下：
[0092] 制備抗鹽酸克羅抗體；將鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品與弗氏完全佐劑按10:1的比例進 行混合，置37C搖床振搖3天，放室溫靜止1天，之后，W皮下注射和靜脈注射的方式免疫健 康家兔，共免疫4次，第一次靜脈注射0. 1ml，皮下注射0. Iml ;10天后進行第二次免疫，靜 脈注射0. 2ml，皮下注射0. Iml ; 7天后進行第H次免疫，靜脈注射0. 5ml，皮下注射0. Iml ;7 天后進行第四次免疫，靜脈注射1. Oml,皮下注射0. 3ml ;5天后耳靜脈采血，收集血清，測定 效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 ;800 W上時，即可也臟放血，收集血清，作為抗鹽酸克羅抗體（陽性 血清）。
[0093] 制備鹽酸克倫特羅陰性血清；采集健康動物血清測定效價，效價低于1:1時，收集 血清即為抗鹽酸克倫特羅的陰性血清。
[0094] SPA的染色：于金黃色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1%染液，搖晃混勻，室溫放 置20分鐘，200化pm離也15分鐘后加入PBS緩沖液化01M，抑值7. 4)沖洗（此步驟重復(fù)， 直至無顏色脫落為止），加PBS緩沖液恢復(fù)至原體積，即可得到染色的SPA菌液。
[009引 SPA的致敏：將染色后SPA菌液內(nèi)加入同等體積的抗鹽酸克羅抗體，混勻，37°C溫 箱放置30分鐘，300化pm離也15分鐘，棄上清，沉淀物再用PBS緩沖液化01M，抑值7. 4) 沖洗兩次，制成5%的息液，即為所需致敏SPA混合液。
[0096] 應(yīng)用SPA法快速檢測鹽酸克倫特羅抗原的具體步驟如下：
[0097] 1)將抗鹽酸克倫特羅抗體（效價為1:10000)、陰性對照血清分別按照lug/ml的 濃度包被于NC膜上，37 C溫箱放置30min。
[009引。然后加入3% BSA，進行封閉，4°C過夜，備用。
[0099] 3)取 1:2、1:20、1:200、1:2000、1: IOOOOU :20000 稀釋的鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品 5U 1滴在包被了抗鹽酸克倫特羅抗體和陰性對照且已經(jīng)封閉好的NC膜上，37C 30min ;
[0100] 4)用PBS緩沖液0). 01M，抑值7. 4)沖洗3次；
[OW] 5)再于NC膜上滴加5 y 1致敏的SPA混合液，37C SOmin ;
[0102] 6)用PBS緩沖液0). 01M，抑值7. 4)沖洗3次；
[0103] 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：
[0104] a)如果陽性對照有顯色反應(yīng)，同時陰性對照無顯色反應(yīng)時，實驗結(jié)果成立，否則， 實驗結(jié)果不成立。
[0105] b)在實驗結(jié)果成立的條件下，包被的抗鹽酸克倫特羅抗體位置上有顯色反應(yīng)的判 為陽性，即被檢樣品中含有鹽酸克倫特羅；反之，無顯色反應(yīng)的判為陰性，即被檢樣品中不 含有鹽酸克倫特羅。
[0106] 最終本發(fā)明的檢測結(jié)果顯示，應(yīng)用本發(fā)明的SPA法對鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品進行檢 測時能夠檢測到1:2000倍稀釋時的標(biāo)準(zhǔn)品，即能夠檢測到0. Ippb的鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品。
[0107] (二）膠體金法檢測步驟為常規(guī)的方法
[0108] 膠體金法檢測結(jié)果顯示，應(yīng)用膠體金法對鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品進行檢測時能夠檢 測到1:200倍稀釋時的標(biāo)準(zhǔn)品，即能夠檢測到Ippb的鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品。結(jié)果如表1所 /Jn O
[0109] 表1 ;膠體金法和SPA法檢測鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品的對比結(jié)果
[0110]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測抗原的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步驟： 將與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體包埋在檢測用的載體上； 將包被在載體上的抗體用BSA封閉； 將SPA進行染色，染色結(jié)束后，將染色的SPA與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體進行結(jié) 合，即用與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體致敏SPA ; 取待檢測的樣品與包被在載體上的抗體進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用清洗液沖洗； 然后再加入上述致敏了 SPA的特異性抗體進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用洗液進行沖 洗； 最后進行結(jié)果的判定，如出現(xiàn)顯色條帶表明待檢測樣品中存在待檢測的抗原。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的載體上還包埋有作為陽性對照的陽 性血清、作為陰性對照的陰性血清和空白對照。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的陽性血清是用多種抗原免疫易感動 物，免疫后靜脈采血測定抗體效價，效價達(dá)到1:800或以上時，收集血清制得的。
4. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的陰性血清，是采集動物血清測定抗多 種抗原的抗體的效價，效價低于1:1時，收集血清制得的陰性血清。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的將SPA進行染色，是在金黃色葡萄球菌 菌液中滴加染液，混勻后收集菌體，再用緩沖液清洗直至菌體無顏色脫落為止，再加入緩沖 液懸浮得到染色的SPA菌液。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的染色的SPA與待檢測的抗原特異性結(jié) 合的抗體進行結(jié)合，是將染色后SPA菌液內(nèi)加入與待檢測的抗原特異性結(jié)合的抗體，混勻 溫育后，收集菌體，菌體用緩沖液沖洗制成的。
7. 如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于所述檢測載體為NC膜或ELISA板。
8. 如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于所述清洗液或緩沖液為PBS緩沖液。
9. 一種檢測抗體的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步驟： 將與待檢測的抗體特異性結(jié)合的抗原包埋在檢測用的載體上； 將包被在載體上的抗原用BSA封閉，備用； 將SPA進行染色，染色結(jié)束后，進行SPA致敏和檢測步驟： 首先采用待檢測的血清進行SPA致敏； 然后取致敏了 SPA的待檢測樣品與包被在載體上的抗原進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用 清洗液清洗； 沖洗結(jié)束后，如出現(xiàn)顯色條帶表明待檢測樣品中存在待檢測的抗體。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的SPA致敏和檢測步驟如下： 采用特異性的抗體致敏SPA ; 取待檢測的樣品與包被在載體上的特異性抗原進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用清洗液沖 洗； 然后再加入上述致敏了 SPA的特異性抗體進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用洗液進行沖 洗； 最后進行結(jié)果的判定，如不出現(xiàn)顯色條帶表明待檢測樣品中存在待檢測的抗原。
11. 如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的SPA致敏和檢測步驟如下： 采用抗特異性抗體的二抗致敏SPA ; 取待檢測的樣品與包被在載體上的特異性抗原進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用清洗液沖 洗； 然后再加入上述致敏了 SPA的二抗進行結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用洗液進行沖洗； 最后進行結(jié)果的判定，如出現(xiàn)顯色條帶表明樣品中存在待檢測的抗原； 所述的二抗是用一種或多種抗原免疫易感動物，免疫后靜脈采血測定抗體效價，效價 達(dá)到1:800或以上時，收集血清，制得抗以上多種抗原的陽性血清，再將此抗體免疫易感動 物，免疫后靜脈采血測定抗體效價，效價達(dá)到1:800或以上時，收集血清，即制得抗以上一 種或多種抗原的陽性血清的二抗。
【文檔編號】G01N33/68GK104237506SQ201410550447
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月16日
【發(fā)明者】蘇冬梅, 張述智, 朱紹輝, 周洪海, 岳長青 申請人:青島中仁生物科技有限公司