一種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，包括如下步驟：(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；(2)待測(cè)樣處理；(3)在線固相萃??；(4)高效液相色譜?靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定。本發(fā)明采用高效、重復(fù)性好的在線固相萃取方法結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑，可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中新煙堿類殺蟲劑的定性和定量測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果靈敏可靠；采用本方法，樣品的前處理過程快速簡(jiǎn)便，提高工作效率；本方法中，根據(jù)新煙堿類藥物的特性，選擇適當(dāng)?shù)妮腿∪軇?、清洗劑和洗脫劑以及適當(dāng)?shù)馁|(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)，提高檢測(cè)精度和可靠度。
【專利說明】
一種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的檢測(cè)方法，具體涉及一 種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的在線固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè) 定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 新煙堿類殺蟲劑包括:吡蟲啉、噻蟲胺、啶蟲脒、氟啶蟲酰胺、噻蟲嗪、噻蟲啉、呋蟲 胺、稀啶蟲胺等。這類殺蟲劑可廣泛用于各種作物，如水稻、小麥、棉花、豆類、油菜、芝麻、土 豆、番茄等?？蓮V譜殺滅刺吸式口器、鞘翅目、鱗翅目、雙翅目害蟲等。這類殺蟲劑起效快，殘 留期長(zhǎng)，有可能嚴(yán)重影響蜜蜂的授粉和生存，歐盟、美國(guó)、加拿大、巴西和我國(guó)已經(jīng)陸續(xù)啟動(dòng) 對(duì)新煙堿類殺蟲劑的審查和限制使用。目前測(cè)定蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的前處理方法多是 手動(dòng)固相萃取，耗費(fèi)較多的人力，重復(fù)性差，而在線固相萃取，節(jié)省人力，重復(fù)性好;儀器方 法多為高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜法，未見高分辨質(zhì)譜法，特別是靜電場(chǎng)軌道阱高 分辨質(zhì)譜技術(shù)在蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑測(cè)定中的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的:本發(fā)明目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便、精準(zhǔn)度高的 蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的在線固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定 方法，該方法可同時(shí)實(shí)現(xiàn)樣品的定性和定量檢測(cè)且靈敏高、結(jié)果可靠。
[0004] 技術(shù)方案:本發(fā)明所述的一種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，包括如下 步驟：
[0005] (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將新煙堿類藥物標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成濃度為0.8~1.2mg/mL的 標(biāo)準(zhǔn)溶液，2~6 °C保存;再用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度為0.8~1.2iig/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0006] (2)待測(cè)樣處理:將待測(cè)蜂蜜樣品攪勻，并稱取0.5~1.5g置于50mL離心管中，加入 pH為7~8的磷酸鹽緩沖液12~18mL，渦旋，充分溶解均勻;置于超聲儀中超聲15~30min;過 濾，取濾液至進(jìn)樣小瓶；
[0007] (3)在線固相萃取：采用HLB萃取柱，用甲醇和水分別進(jìn)行活化，流速為4~6mL/ min;然后進(jìn)樣，上樣量為0.3~0.8mL，上樣溶劑為0.4~0.6mL的水，流速為0.4~0.6mL/ min ;清洗溶劑為水，體積0.5~1.5mL，流速為4~6mL/min ;洗脫溶劑為甲醇，體積0.3~ 0 ? 7mL，流速 0 ? 10 ~0 ? 20mL/min。
[0008] (4)高效液相色譜-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定：采用加熱的電噴霧離子源 (HESI-II);毛細(xì)管溫度為300~400°C，鞘氣流速45~55L/min，輔助氣流速5~7L/min，吹掃 氣流速3~5L/min;噴霧電壓為3KV，透鏡電壓為50V;采用正離子模式采集數(shù)據(jù);進(jìn)樣前將色 譜柱平衡15~30min，在柱溫為25~35°C下重復(fù)進(jìn)同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)峰面積變化在土 10 %以內(nèi)，保留時(shí)間在± 5 %以內(nèi)，開始正式進(jìn)樣;進(jìn)樣系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為5~150ng/mL， 以標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣 品進(jìn)行定量，樣品溶液中藥物的響應(yīng)值在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。
[0009] 本發(fā)明中，所述的新煙堿類藥物包括吡蟲啉、噻蟲胺、啶蟲脒、氟啶蟲酰胺、噻蟲 嗪、噻蟲啉、呋蟲胺和烯啶蟲胺。
[0010] 優(yōu)選地，步驟(3)中活化劑甲醇和水的體積分別為lmL。
[0011] 優(yōu)選地，步驟⑷中采用的色譜柱為Agilent Polaris C-18,長(zhǎng)度為100mm，內(nèi)徑為 2 ? 1mm，填料粒徑為5ym。
[0012]優(yōu)選地，步驟(4)中采用梯度洗脫程序，流動(dòng)相為醋酸銨與甲醇的混合液。
[0013]優(yōu)選地，所述的梯度洗脫程序具體如下：時(shí)刻Omin:采用95wt%的醋酸銨和5wt% 的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為〇. 3mL/min;時(shí)刻2min:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇 混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min;時(shí)刻4min:采用5wt %的醋酸銨和95wt %的甲醇混合液 做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min;時(shí)刻8min:采用5wt %的醋酸銨和95wt %的甲醇混合液做流動(dòng) 相，流速為〇. 3mL/min;時(shí)刻9min:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流 速為0.3mL/min;時(shí)刻1 lmin:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為 0?3mL/min〇
[0014]優(yōu)選地，步驟(4)中所述的鞘氣、輔助氣和吹掃氣均為N2。
[0015]優(yōu)選地，步驟(4)中采集數(shù)據(jù)的掃描范圍為100-500m/z，一級(jí)全掃描的分辨率R = 70000〇
[0016]有益效果：（1)本發(fā)明采用高效、重復(fù)性好的在線固相萃取方法結(jié)合高效液相色譜 串聯(lián)靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑，可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中新煙堿類殺蟲 劑的定性和定量測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果靈敏可靠;且采用本方法，對(duì)樣品的前處理過程快速簡(jiǎn)便， 提高工作效率；（2)本方法中，根據(jù)新煙堿類藥物的特性，選擇適當(dāng)?shù)妮腿∪軇?、清洗劑和?脫劑以及適當(dāng)?shù)馁|(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)，提高檢測(cè)精度和可靠度；（3)本方法的自動(dòng)化程度高，有效 避免人為操作帶來的誤差。
【附圖說明】
[0017]圖1為各類新煙堿類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖；（其中：1、吡蟲啉;2、噻蟲嗪;3、噻蟲胺； 4、啶蟲脒;5、噻蟲啉;6、氟啶蟲酰胺;7、呋蟲胺;8、烯啶蟲胺）；
[0018] 圖2為采用本方法檢測(cè)含有新煙堿類殺蟲劑的陰性洋槐蜜樣品的色譜圖，（其中： 1、吡蟲啉；2、噻蟲嗪；3、噻蟲胺;4、啶蟲脒;5、噻蟲啉;6、氟啶蟲酰胺；7、呋蟲胺;8、烯啶蟲 胺)。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面通過附圖對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于 所述實(shí)施例。
[0020] 本發(fā)明所述的實(shí)例使用的質(zhì)譜儀為Thermo Fisher公司的Q-Exactive型高效液相 色譜-靜電場(chǎng)軌道講高分辨質(zhì)譜儀，數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)為美國(guó)Thermo Fisher公司的Xcalibur數(shù) 據(jù)處理系統(tǒng);試劑均為常規(guī)市售。
[0021] 實(shí)施例:一種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0022] (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將新煙堿類藥物標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成濃度為lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶 液，4°C保存;再用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度為lyg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0023] (2)待測(cè)樣處理:將待測(cè)蜂蜜樣品攪勻，并稱取lg置于50mL離心管中，加入pH為7.8 的磷酸鹽緩沖液15mL，渦旋，充分溶解均勻;置于超聲儀中超聲20min;過濾，取濾液至進(jìn)樣 小瓶；
[0024] (3)在線固相萃取:采用HLB萃取柱，用lmL的甲醇和lmL的水分別進(jìn)行活化，流速為 5mL/min;然后進(jìn)樣，上樣量為0.5ml，上樣溶劑為0.5ml的水，流速為0.5mL/min;清洗溶劑為 lmL的水，流速為5mL/min;洗脫溶劑為0.5mL的甲醇，流速為0.15mL/min;
[0025] (4)高效液相色譜-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定：采用加熱的電噴霧離子源 (HESI-n );毛細(xì)管溫度為350°C，鞘氣(N2)流速50L/min，輔助氣（N2)流速6L/min，吹掃氣 (N 2)流速3L/min;噴霧電壓為3KV，透鏡電壓為50V;采用正離子模式采集數(shù)據(jù)，一級(jí)全掃描 的分辨率R = 70000,掃描范圍：100-500m/z;采用的色譜柱為AgilentPolaris C-18,長(zhǎng)度為 100mm，內(nèi)徑為2.1mm，填料粒徑為5ym;進(jìn)樣前將色譜柱平衡15min，在柱溫為30°C下重復(fù)進(jìn) 同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)峰面積變化在±10%以內(nèi)，保留時(shí)間在±5%以內(nèi)，開始正式進(jìn)樣； 進(jìn)樣系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為5，10，20，50，100，150ng/mL，本過程中采用梯度洗脫程序，流動(dòng)相 為醋酸銨與甲醇的混合液；梯度洗脫程序具體如下：時(shí)刻Omin :采用95wt %的醋酸銨和 5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min;時(shí)刻2min:采用95wt %的醋酸銨和5wt % 的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為〇. 3mL/min;時(shí)刻4min:采用5wt%的醋酸銨和95wt%的甲醇 混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min;時(shí)刻8min:采用5wt %的醋酸銨和95wt %的甲醇混合液 做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min;時(shí)刻9min:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng) 相，流速為〇. 3mL/min;時(shí)刻1 lmin:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流 速為0.3mL/min以標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中藥物的響應(yīng)值在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。
[0026] 其中，高效液相色譜梯度洗脫程序見表1;新煙堿類藥物的中英文名稱及質(zhì)譜精確 質(zhì)量數(shù)(正離子)見表2;
[0027]表1高效液相色譜梯度洗脫程序
[0030]表2新煙堿類藥物的中英文名稱及質(zhì)譜精確質(zhì)量數(shù)(正離子）

[0032] 參考上表2數(shù)據(jù)和圖1曲線，樣品中是否存在某種藥物，需滿足如下條件:該樣品出 現(xiàn)的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間相差不超過± 2.5 % ;樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的精確質(zhì)量 數(shù)的偏差小于5 X 1(T6，則確定為樣品中含有該藥物；圖2為采用本方法檢測(cè)含有新煙堿類殺 蟲劑的陰性洋槐蜜樣品的色譜圖，由兩圖對(duì)比可知，對(duì)于含有各類新煙堿類藥品的蜂蜜樣 品，采用本方法的檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品的出峰位置基本一致，證明，采用本發(fā)明方法對(duì)蜂蜜中 新煙堿檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
[0033] 采用本發(fā)明方法對(duì)兩種典型的蜂蜜的陰性樣品加標(biāo)回收率范圍見表3;
[0034] 表3典型蜂蜜陰性樣品加標(biāo)回收率范圍
[0035]
[0036] 由表3數(shù)據(jù)可證明，采用本發(fā)明方法，對(duì)典型蜂蜜中的新煙堿類殺蟲劑的加標(biāo)回收 率可控制在一個(gè)較適宜且穩(wěn)定的范圍內(nèi)，證明本方法用于檢測(cè)蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的可 靠度高，適于推廣使用。
[0037] 如上所述，盡管參照特定的優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)表示和表述了本發(fā)明，但其不得解釋 為對(duì)本發(fā)明自身的限制。在不脫離所附權(quán)利要求定義的本發(fā)明的精神和范圍前提下，可對(duì) 其在形式上和細(xì)節(jié)上作出各種變化。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將新煙堿類藥物標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成濃度為0.8~1.2mg/mL的標(biāo)準(zhǔn) 溶液，2~6 °C保存;再用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度為0.8~1.2yg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 待測(cè)樣處理:將待測(cè)蜂蜜樣品攪勻，并稱取0.5~1.5g置于50mL離心管中，加入pH為 7~8的磷酸鹽緩沖液12~18mL，渦旋，充分溶解均勻;置于超聲儀中超聲15~30min;過濾， 取濾液至進(jìn)樣小瓶； (3) 在線固相萃取:采用HLB萃取柱，用甲醇和水分別進(jìn)行活化，流速為4~6mL/min;然 后進(jìn)樣，上樣量為〇. 3~0.8mL，上樣溶劑為0.4~0.6mL的水，流速為0.4~0.6mL/min;清洗 溶劑為水，體積〇 . 5~1.5mL，流速為4~6mL/min;洗脫溶劑為甲醇，體積0.3~0.7mL，流速 0·10~0.20mL/min; (4) 高效液相色譜-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定：采用加熱的電噴霧離子源(HESI-Π );毛細(xì)管溫度為300~400 °C，鞘氣流速45~55L/min，輔助氣流速5~7L/min，吹掃氣流速 3~5L/min;噴霧電壓為3KV，透鏡電壓為50V;采用正離子模式采集數(shù)據(jù);進(jìn)樣前將色譜柱平 衡15~30min，在柱溫為25~35°C下重復(fù)進(jìn)同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)峰面積變化在± 10 %以 內(nèi)，保留時(shí)間在±5%以內(nèi)，開始正式進(jìn)樣;進(jìn)樣系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為5~150ng/mL，以標(biāo)準(zhǔn) 溶液峰面積為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行 定量，樣品溶液中藥物的響應(yīng)值在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于:所述的 新煙堿類藥物包括吡蟲啉、噻蟲胺、啶蟲脒、氟啶蟲酰胺、噻蟲嗪、噻蟲啉、呋蟲胺和烯啶蟲 胺。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于：步驟 (3) 中活化劑甲醇和水的體積均為lmL。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于：步驟 (4) 中采用的色譜柱為Agilent Polaris C-18,長(zhǎng)度為100mm，內(nèi)徑為2.1mm，填料內(nèi)徑為5μ m〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于：步驟 (4)中采用梯度洗脫程序，流動(dòng)相為醋酸銨與甲醇的混合液。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于:所述的 梯度洗脫程序具體如下：時(shí)刻Omin:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相， 流速為〇. 3mL/min;時(shí)刻2min:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為 0.3mL/min;時(shí)刻4min:采用5wt %的醋酸銨和95wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/ min;時(shí)刻8min:采用5wt %的醋酸銨和95wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min;時(shí) 亥lj 9m i η :采用9 5wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/mi η;時(shí)刻 1 lmin:采用95wt %的醋酸銨和5wt %的甲醇混合液做流動(dòng)相，流速為0.3mL/min。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于：步驟 (4)中所述的鞘氣、輔助氣和吹掃氣均為N2。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂蜜中新煙堿類殺蟲劑的高效檢測(cè)方法，其特征在于：步驟 (4)中采集數(shù)據(jù)的掃描范圍為100-500m/z，一級(jí)全掃描的分辨率R = 70000。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK106053699SQ201610516529
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】張睿, 柳菡, 沈偉健, 丁濤, 趙增運(yùn), 吳斌, 沈崇鈺, 張曉燕, 陳磊, 費(fèi)曉慶, 劉蕓
【申請(qǐng)人】江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心