一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體快速檢測試紙條的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體快速檢測試紙條，包括背襯底板，該背襯底板上設(shè)置有硝酸纖維素膜、樣品結(jié)合墊和吸水膜，該樣品結(jié)合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸纖維素膜的兩端上；該樣品結(jié)合墊上包被有標(biāo)記物標(biāo)記的GAD抗原和鼠IgG，所述標(biāo)記物為膠體金、有色微球、熒光乳膠微球、時(shí)間分辨熒光乳膠納米微球、量子點(diǎn)中的一種；該硝酸纖維素膜上設(shè)有檢測線和質(zhì)控線，該檢測線包被有另一個表位的GAD抗原，該質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG。本實(shí)用新型具有反應(yīng)迅速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于谷氨酸脫羧酶抗體的臨床免疫檢驗(yàn)和科學(xué)研究中；且試紙條制作方便，可批量生產(chǎn)；體積小，便于攜帶。
【專利說明】
-種人血清中谷氨酸脫錢酶抗體快速檢測試紙條
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型屬于免疫層析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種人血清中谷氨酸脫簇酶抗 體快速檢測試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002] 谷氨酸脫簇酶(GAD)抗體在I型糖尿病不同的發(fā)病階段均可持續(xù)高水平存在。與 ICA和IAA相比，GAD抗體與成人晚發(fā)自身免疫性糖尿病(LADA)關(guān)系更密切，在檢出成人晚發(fā) 自身免疫性糖尿病時(shí)價(jià)值更大。糖尿病發(fā)病時(shí)GAD抗體的狀態(tài)是預(yù)測其臨床過程的理想指 標(biāo)，它可W將LADA與Π 型糖尿病區(qū)別開來，為正確分型提供確切的指標(biāo)，從而更好地指導(dǎo)治 療。GAD抗體檢測作為理想工具適用于大規(guī)模人群中I型糖尿病高危人群的篩查，需要有一 種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體快速檢測試紙條。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0003] 本實(shí)用新型的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了一種人血清中谷氨酸脫 簇酶抗體快速檢測試紙條。
[0004] 本實(shí)用新型解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
[0005] -種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條，包括背襯底板，該背襯底板上設(shè)置 有硝酸纖維素膜、樣品結(jié)合墊和吸水膜，該樣品結(jié)合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸纖維素膜 的兩端上;該樣品結(jié)合墊上包被有標(biāo)記物標(biāo)記的GAD抗原和鼠 IgG，所述標(biāo)記物為膠體金、有 色微球、巧光乳膠微球、時(shí)間分辨巧光乳膠納米微球、量子點(diǎn)中的一種;該硝酸纖維素膜上 設(shè)有檢測線和質(zhì)控線，該檢測線包被有另一個表位的GAD抗原，該質(zhì)控線包被有羊抗鼠 IgG。
[0006] -實(shí)施例中：所述巧光乳膠微球的巧光物質(zhì)為直接巧光物質(zhì)異硫氯酸巧光素、四 乙基羅丹明、四甲基異硫氯酸羅丹明、巧光素 C巧中的一種。
[0007] -實(shí)施例中:所述時(shí)間分辨巧光乳膠納米微球?yàn)殂~系元素巧光乳膠納米微球。
[000引一實(shí)施例中:所述銅系元素為館，鋪，衫或鋪中的一種。
[0009] 一實(shí)施例中:所述樣品結(jié)合墊為玻璃纖維素膜或聚醋膜。
[0010] -實(shí)施例中：所述樣品結(jié)合墊為玻璃纖維素膜或聚醋膜經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡 處理后干燥而得。
[0011] -實(shí)施例中:所述試紙條外還包裹有一殼體。
[0012] 本技術(shù)方案與【背景技術(shù)】相比，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0013] 1.傳統(tǒng)的檢測試紙條分別設(shè)有樣品墊和結(jié)合墊，血清/血漿等樣品首先與樣品墊 接觸，樣品墊對樣品進(jìn)行預(yù)處理，去除樣品中雜質(zhì)顆粒，調(diào)節(jié)樣品液抑值或粘度等，減緩樣 品滲透速度，有利于樣品的均勻分布;經(jīng)樣品墊預(yù)處理過后的均勻的樣品再流動至結(jié)合墊 上與標(biāo)記抗體發(fā)生結(jié)合，才能夠保證反應(yīng)的準(zhǔn)確性，如果不經(jīng)預(yù)處理，樣品在結(jié)合墊上的結(jié) 合量無法把握，且結(jié)合穩(wěn)定性也差;而本實(shí)用新型采用一個樣品結(jié)合墊代替?zhèn)鹘y(tǒng)的樣品墊 和結(jié)合墊，該樣品結(jié)合墊上準(zhǔn)確而均勻地分布有標(biāo)記抗體，既能保證樣品得到預(yù)處理，又能 保證樣品結(jié)合一定量的標(biāo)記抗體，保證了反應(yīng)的準(zhǔn)確性，經(jīng)檢測，靈敏度和特異性良好；同 時(shí)，也使得試紙條結(jié)構(gòu)和制備過程得到簡化。
[0014] 2.本實(shí)用新型的人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條，包被有標(biāo)記物標(biāo)記的 GAD抗原和鼠 IgG，所述標(biāo)記物為膠體金、有色微球、巧光乳膠微球、時(shí)間分辨巧光乳膠納米 微球、量子點(diǎn)中的一種，上述標(biāo)記物為巧光物質(zhì)標(biāo)記或有色物質(zhì)標(biāo)記，具有反應(yīng)迅速、靈敏 度高、特異性強(qiáng)、易于辨別、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于谷氨酸脫簇酶抗體的臨床免疫 檢驗(yàn)和科學(xué)研究中。
[0015] 3.本實(shí)用新型的試紙條制作方便，可批量生產(chǎn);體積小，便于攜帶。
【附圖說明】
[0016] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本實(shí)用新型作進(jìn)一步說明。
[0017] 圖1為本實(shí)用新型的人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018] 附圖標(biāo)記:樣品結(jié)合墊1;標(biāo)記物標(biāo)記的GAD抗原和鼠 IgG 2;硝酸纖維素膜3;檢測 線4;質(zhì)控線5;吸水膜6;背襯底板7。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面通過實(shí)施例具體說明本實(shí)用新型的內(nèi)容：
[0020] 請查閱圖1，一種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條，包括背襯底板7，該背襯 底板7上設(shè)置有硝酸纖維素膜3、樣品結(jié)合墊1和吸水膜6,該樣品結(jié)合墊1和吸水膜6分別疊 壓在硝酸纖維素膜3的兩端上；該樣品結(jié)合墊1上包被有標(biāo)記物標(biāo)記的GAD抗原和鼠 IgG 2， 所述標(biāo)記物為膠體金、有色微球、巧光乳膠微球、時(shí)間分辨巧光乳膠納米微球或量子點(diǎn)中的 一種;該硝酸纖維素膜3上設(shè)有檢測線4(Τ線)和質(zhì)控線5(C線），檢測線4(Τ線)包被有另一個 表位的GAD抗原，質(zhì)控線5(C線)包被有羊抗鼠 IgG。
[0021] 上述試紙條可W通過W下制備方法制備：
[0022] 1)硝酸纖維素膜(NC膜)處理
[0023] 將NC膜貼至背襯底板的制定位置，取TRIS緩沖液(5mM TRIS pH 7.8緩沖液)將另 一個表位的GAD抗原稀釋至Img/ml，用于制備T線；用0.05M的MES緩沖液將羊抗鼠 IgG抗體稀 釋至Img/ml，用于制備C線；按化1/cm劃液量，通過biodot劃膜儀將上述兩種稀釋后的GAD抗 原和羊抗鼠 IgG抗體均勻的劃至NC膜上制備T線和C線;將劃好的NC膜放置于37Γ干燥箱中， 干燥過夜。
[0024] 2)樣品結(jié)合墊的處理
[0025] 玻璃纖維素膜用含有表面活性劑的緩沖液(配方：100mMPB(pH7.4)，其中含有 1.5%NaCl，5%BSA、0.5%吐溫-20和5%薦糖)浸泡進(jìn)行預(yù)封閉后，50°C干燥過夜;將標(biāo)記物 標(biāo)記的GAD抗原和相同標(biāo)記物標(biāo)記的鼠 IgG抗體按照1:1的比例充分混合后，用0.05M的MES 緩沖液按照1:10的比例稀釋，通過Biodot儀器的air jet噴頭按照ΙΟμΙ/cm的量超聲噴霧至 干燥好的玻璃纖維素膜上，5(TC干燥過夜，制備得到樣品結(jié)合墊。
[0026] 其中，根據(jù)需要，所述標(biāo)記物可W為膠體金、有色微球、巧光乳膠微球、時(shí)間分辨巧 光乳膠納米微球或量子點(diǎn)中的一種;所述巧光乳膠微球的巧光物質(zhì)可W為直接巧光物質(zhì)異 硫氯酸巧光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氯酸羅丹明、巧光素切5中的一種;所述時(shí)間分辨 巧光乳膠納米微球?yàn)殂~系元素的巧光乳膠納米微球;所述銅系元素為館，鋪，衫或鋪中的一 種;本實(shí)施例之中，所述標(biāo)記物為有色微球。
[0027] 3)組裝
[0028] 將步驟2)得到的樣品結(jié)合墊固定疊壓在步驟1)得到的硝酸纖維素膜的一端，并將 吸水膜固定疊壓在硝酸纖維素膜的另一端，用裁膜儀按每條4mm的寬度進(jìn)行裁剪，并裝入層 析條殼體中，即得成品。
[0029] 本實(shí)用新型的試紙條利用雙抗原夾屯、法進(jìn)行檢測，方法如下：將樣品量取75化滴 加到樣品墊上，樣品中的GAD-Ab與樣品墊上標(biāo)記物標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗體-標(biāo)記抗原復(fù) 合物。經(jīng)層析原理，液體中的抗體-標(biāo)記抗原復(fù)合物和鼠 IgG依次與硝酸纖維素膜上的GAD抗 原(T線)和羊抗鼠抗體(C線）形成抗原-抗體-標(biāo)記抗原復(fù)合物和抗原-標(biāo)記抗體結(jié)合物。結(jié) 合有標(biāo)記抗原的T線將會呈現(xiàn)顏色或巧光，顏色越深或巧光強(qiáng)度越強(qiáng)說明血清中的GAD-Ab 濃度越高。質(zhì)控線表示此次層析過程有效。
[0030] 本實(shí)施例之中采用的標(biāo)記物是有色微球，如果用的是藍(lán)色微球就會呈現(xiàn)藍(lán)色，用 的是紅色微球就會呈現(xiàn)紅色;若標(biāo)記物為膠體金、巧光乳膠微球、時(shí)間分辨巧光乳膠納米微 球或量子點(diǎn)，其檢測原理與有色微球類似，若標(biāo)記物為膠體金，也可通過顏色變化用肉眼直 接判斷;若標(biāo)記物為巧光乳膠微球、時(shí)間分辨巧光乳膠納米微球或量子點(diǎn)，采用現(xiàn)有的巧光 分析儀器即可配套輔助閱讀。
[0031] 結(jié)果判定:用肉眼觀察，T線和C線同時(shí)顯色的樣本即為陽性樣本;T線未顯色而C線 顯色為陰性樣本;T線和C線均未顯色為無效檢測。
[0032] 實(shí)驗(yàn)例：同已上市產(chǎn)品檢測試劑盒臨床血樣測值對比
[0033] 采用本實(shí)用新型的一種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條與已上市GAD-Ab 檢測試劑盒同時(shí)檢測45份I型糖尿病和35份II型糖尿病人標(biāo)本，分別進(jìn)行測試，比較結(jié)果如 表1和2所示，說明本實(shí)用新型的試紙條在45份I型糖尿病樣本中的檢測靈敏度為100%，特 異性為93.3% ;在35份II型糖尿病樣本中的檢測靈敏度為100%，特異性為100%。
[0034] 表1 I型糖尿病測試結(jié)果對比
[0035]
[0036] 表2 II型糖尿病測試結(jié)果對比
[0037]
[0038] W上所述，僅為本實(shí)用新型較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本實(shí)用新型實(shí)施的 范圍，即依本實(shí)用新型專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本實(shí)用新 型涵蓋的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:包括背襯底板，該背襯底 板上設(shè)置有硝酸纖維素膜、樣品結(jié)合墊和吸水膜，該樣品結(jié)合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸 纖維素膜的兩端上;該樣品結(jié)合墊上包被有標(biāo)記物標(biāo)記的GAD抗原和鼠 IgG，所述標(biāo)記物為 膠體金、有色微球、焚光乳膠微球、時(shí)間分辨焚光乳膠納米微球、量子點(diǎn)中的一種;該硝酸纖 維素膜上設(shè)有檢測線和質(zhì)控線，該檢測線包被有另一個表位的GAD抗原，該質(zhì)控線包被有羊 抗鼠 IgG。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述熒光乳膠微球的熒光物質(zhì)為直接熒光物質(zhì)異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫 氰酸羅丹明、焚光素 Cy5中的一種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述時(shí)間分辨熒光乳膠納米微球?yàn)殍|系元素?zé)晒馊槟z納米微球。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述鑭系元素為銪，鉞，釤或鏑中的一種。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述樣品結(jié)合墊為玻璃纖維素膜或聚酯膜。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述樣品結(jié)合墊為玻璃纖維素膜或聚酯膜經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥而得。7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其 特征在于:所述試紙條外還包裹有一殼體。
【文檔編號】G01N33/58GK205484370SQ201521131186
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年12月30日
【發(fā)明人】許元峰, 袁新, 呂懷谷
【申請人】廈門依柯利斯醫(yī)療科技有限公司