白血病干細(xì)胞靶向配體及應(yīng)用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含氨基酸基序LR(S/T)的C型凝集素樣分子1(CLL1)特異性配體肽及其應(yīng)用方法，例如，用于診斷白血病和白血病干細(xì)胞(LSCs)存在的成像檢測(cè)，以及針對(duì)至少部分地由表達(dá)CLL1的LSCs介導(dǎo)的白血病的靶向治療。
【專利說(shuō)明】白血病干細(xì)胞靶向配體及應(yīng)用方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]根據(jù)35U.S.C.§ 119(e)，本申請(qǐng)要求于2011年6月9日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/506，058號(hào)的權(quán)益，為所有目地其通過(guò)引用全部并入本文。
[0003]發(fā)明領(lǐng)域
[0004]本發(fā)明涉及包含單獨(dú)的或綴合至效應(yīng)部分(effector moiety)的LR(S/T)氨基酸基序的肽和多肽，以及該類肽/多肽及其綴合物在治療和預(yù)防白血病，尤其是急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia 或 acute myelogenous leukemia, AML)中的用途。
[0005]發(fā)明背景
[0006]癌癥干細(xì)胞的概念與癌癥的管理極為相關(guān)[Pan, et al., FutureOncol (2006)2:723-731;和 Misaghian, et al.，Leukemia(2009)23:25-42]。在血液和實(shí)體惡性腫瘤中均確認(rèn)有癌癥干細(xì)胞，這表明癌癥干細(xì)胞的存在為大多數(shù)惡性腫瘤的共同特征。這些細(xì)胞能夠自我更新并再生出更多癌細(xì)胞。為了有效地治療和預(yù)防癌癥，必須減少或消除癌癥干細(xì)胞。然而，相比它們的子代癌細(xì)胞，癌癥干細(xì)胞表現(xiàn)出較高水平的化學(xué)抗性[Terpstra, et al., Blood (1996) 88:1944-1950;和 Copland, etal.，Blood(2006) 107:4532-4539]。本發(fā)明部分基于以下證明，即使用經(jīng)設(shè)計(jì)以高親合性和特異性結(jié)合急性骨髓性白血病(AML)干細(xì)胞(LSC)的載藥納米顆粒的可行性。
[0007]按目前的方案，LSC的化學(xué)抗性可通過(guò)高劑量化療以及隨后的骨髓移植來(lái)克服。然而，高劑量化療與嚴(yán)重的毒性和治療相關(guān)的高死亡率有關(guān)。由于并存病，許多患者不符合該治療的要求。對(duì)于診斷出的中值年齡為60-65歲的且通常與多種并存病有關(guān)的AML患者尤其如此。對(duì)于骨髓移植，由于被LSC污染通常不使用自體的骨髓或干細(xì)胞。同種異體的造血干細(xì)胞移植通常與嚴(yán)重的移植物抗宿主病有關(guān)，且一般不向老年患者提供。
[0008]在癌癥干細(xì)胞類型中，AML LSC得到了最好的表征。LSC上許多細(xì)胞表面分子為已知的。例如，已知C型凝集素樣分子I(CLLl)優(yōu)先在大多數(shù)AML LSC上表達(dá)。盡管CLLl也表達(dá)于⑶38⑴骨髓祖細(xì)胞上，但其不表達(dá)于⑶34(+) /⑶38(-)造血干細(xì)胞上[Bakker, et al., Cancer Res(2004)64:8443-8450;和 van Rhenen etal.,Blood (2007) 110:2659-2666] ο 已經(jīng)表明，CLLl 可為用于治療 AML 的潛在靶標(biāo)[Zhao, etal., Haematologica(2010)95:71-78]。
[0009]最近，研制出了一種生物相容性納米膠束藥物遞送系統(tǒng)，其由一種稱為樹(shù)狀聚合物(telodendrimer)的獨(dú)特兩親性聚合物組成[Xiao, et al., Biomaterials (2009) 30:6006-6016; Luo, et al., Bioconjug Chem(2010) 21:1216-1224]。樹(shù)狀聚合物由膽酸、賴氨酸和聚乙二醇(PEG)共價(jià)綴合在一起組成，其賦予了自組裝為具有能夠隔離許多種類藥物的疏水核心的水溶性球體的能力。膽酸是膽汁酸的主要成分，其具有表面兩親性結(jié)構(gòu):剛性類固醇骨架，其一個(gè)表面上具有4個(gè)親水基，且另一個(gè)表面上具有疏水甲基。賴氨酸為天然氨基酸。PEG為生物相容性的且已用于改善治療性藥物的藥代動(dòng)力學(xué)。該納米載體系統(tǒng)具有許多用于藥物遞送的誘人特征，如高藥物載荷能力、窄的多分散度、規(guī)整結(jié)構(gòu)、易于化學(xué)修飾、優(yōu)異的物理和化學(xué)穩(wěn)定性以及生物相容性。[0010]本發(fā)明部分地基于通過(guò)噬菌體展示文庫(kù)法發(fā)現(xiàn)了一系列特異性結(jié)合至CLLl的肽。CLLl-Ll為這些配體之一，其被用于修飾納米膠束的表面以形成我們稱為“LSC靶向性納米膠束”的靶向納米平臺(tái)。不同于主要位于血管外間隙且通過(guò)納米治療劑(nanotherapeutics)可及(主要通過(guò)提高的滲透性和保留效應(yīng))的實(shí)體瘤，LSC和白血病細(xì)胞主要位于血管和骨髓內(nèi)，通過(guò)靜脈內(nèi)給予納米治療劑對(duì)其直接可及。本文提供的數(shù)據(jù)證明，展示有CLLl-Ll的靶向納米膠束可結(jié)合至表達(dá)CLLl的細(xì)胞表面，并將所述納米膠束及其效應(yīng)物遞送至靶細(xì)胞內(nèi)。
[0011]發(fā)明概述
[0012]本發(fā)明提供了優(yōu)先或特異性地結(jié)合至C型凝集素樣分子I(CLLl)的肽，所述肽包含氨基酸基序LR(S/T)。所述肽可用于減少、抑制和/或預(yù)防表達(dá)CLLl的白血病干細(xì)胞的增殖或生長(zhǎng)。
[0013]因而，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含氨基酸序列基序LR(S/T)的肽，其中所述肽不超過(guò)10個(gè)氨基酸長(zhǎng)度且結(jié)合至C型凝集素樣分子I (CLLl)。在一些實(shí)施方案中，所述肽不超過(guò)9個(gè)氨基酸長(zhǎng)度。在一些實(shí)施方案中，所述肽不超過(guò)8個(gè)氨基酸長(zhǎng)度。在一些實(shí)施方案中，所述肽不超過(guò)7個(gè)氨基酸長(zhǎng)度。
[0014]對(duì)于所述肽的實(shí)施方案，在一些實(shí)施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7,其中:
[0015]X1為任何氨基酸；
[0016]X4*S*T;
[0017]X5 為 A、S 或 F ;`
[0018]X6 為 A、G 或 S;且
[0019]X7 為八、V、P 或 F。
[0020]在一些實(shí)施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7，其中:
[0021]X1為任何氨基酸；
[0022]X4 為 S 或 T ;
[0023]X5 為 A 或 S;
[0024]X6 為 A 或 G ;且
[0025]X7 為 A、V 或 P。
[0026]在一些實(shí)施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAV,其中:
[0027]X1為任何氨基酸；且
[0028]X4 為 S 或 T。
[0029]在一些實(shí)施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAX7，其中:
[0030]X1為任何氨基酸
[0031]X4 為 S 或 T ;且
[0032]X7SA或V。在一些實(shí)施方案中，X1 SP、D、L、T或A。
[0033]在一些實(shí)施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRSSGP,其中X1為任何氨基酸。在一些實(shí)施方案中，X1為V、S、P或T。
[0034]在一些實(shí)施方案中，X1為除半胱氨酸殘基外的任何氨基酸。
[0035]在一些實(shí)施方案中，所述肽選自PLRSAAA、DLRSAAV、LLRTAAV、LLRSAAV, TLRTAAV,ALRSAAV、VLRSSGP、SLRSSGP、PLRSSGP、TLRSSGP 和 PTPPFSF。在一些實(shí)施方案中，所述肽為DLRSAAV。在一些實(shí)施方案中，所述肽為CDLRSAAVC。
[0036]所述肽可被取代(例如，在一個(gè)或兩個(gè)氨基酸位點(diǎn))或修飾。例如，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如上述和本文描述的氨基酸序列的多肽或肽，其中:
[0037]i) 一個(gè)或多個(gè)所述氨基酸殘基為D-氨基酸；
[0038]ii)所述多肽或肽包含位于N-末端或C-末端或者N-末端和C-末端的保護(hù)基；
[0039]iii)所述多肽或肽為完全或部分逆反型(retro-1nverso)；
[0040]iv)所述多肽或肽包含2個(gè)或更多個(gè)重復(fù)，例如，3、4、5、6個(gè)或更多個(gè)重復(fù)；
[0041]V)所述多肽或肽為環(huán)化(circularized)的；
[0042]vi) 一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基連接至類肽(peptoid)骨架；
[0043]vii) 一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基為β氨基酸殘基；或
[0044]viii)所述多肽或肽用烴裝訂物(staple)來(lái)穩(wěn)定。
[0045]在一些實(shí)施方案中，所述肽結(jié)合至表達(dá)于白血病干細(xì)胞(LSCs)表面上的C型凝集素樣分子I (CLLl)。優(yōu)選地，所述肽不結(jié)合或不大量結(jié)合至正常血細(xì)胞或正常造血干細(xì)胞。
[0046]在一些實(shí)施方案中，所述肽在氨基和/或羧基末端還包含1-5個(gè)側(cè)翼氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述肽還包含位于氨基末端的半胱氨酸殘基和位于羧基端的半胱氨酸殘基。
[0047]在一些實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽(或其重復(fù))可嵌入或位于較長(zhǎng)的多肽序列內(nèi)，例如，融合序列或另外的非天然存在的多肽序列。在一些實(shí)施方案中，所述肽連接(例如，通過(guò)化學(xué)連接或融合)至一個(gè)或多個(gè)其他的多肽，例如，在氨基端和/或羧基端。
[0048]在相關(guān)的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了融合蛋白，其包含含有如上述和本文中描述的氨基酸序列的肽和第二多肽(其不同于所述肽)。在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽為免疫球蛋白例如IgG的Fe部分。在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽為人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4同種型的Fe區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽為細(xì)胞毒素。
[0049]在一些實(shí)施方案中，所述肽連接至治療性部分或可檢測(cè)標(biāo)記。例如，在一些實(shí)施方案中，所述可檢測(cè)標(biāo)記為成像標(biāo)記、珠子、染料、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光部分、量子點(diǎn)、納米顆粒、磁性粒子(例如，氧化鐵粒子)、金屬粒子(例如，金粒子)或放射性同位素(例如，3h、32p、1251、1231、nC、13N' 150、18F、82Rb、锝-99m (Tc_99m)、鉈-201)。在一些實(shí)施方案中，所述治療性部分為免疫球蛋白的Fe部分、細(xì)胞毒素、納米顆粒、脂質(zhì)體或化療劑。在不同的實(shí)施方案中，所述納米顆?？蔀榧{米膠束。在一些實(shí)施方案中，所述抗癌劑或化療劑被包封于脂質(zhì)體或納米顆粒內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述治療性部分為包封于納米顆?；蚣{米載體內(nèi)的化療劑或抗腫瘤劑。
[0050]在另一方面，本發(fā)明提供了納米顆?；蚣{米載體，其連接至一個(gè)或多個(gè)如本文描述的CLLl特異性肽。在不同的實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽共價(jià)結(jié)合至所述納米顆?；蚣{米載體。所述納米顆粒或納米載體還可包封或連接至效應(yīng)部分(例如，治療性部分或可檢測(cè)標(biāo)記)。在一些實(shí)施方案中，所述納米顆?；蚣{米載體包封有化療劑或抗腫瘤劑。在不同的實(shí)施方案中，所述納米顆粒或納米載體包含由兩親性樹(shù)狀聚合物例如聚乙二醇-嵌段-樹(shù)狀寡聚膽酸自組裝形成的納米顆粒。
[0051]在相關(guān)的方面，本發(fā)明提供了包含如本文描述的CLLl特異性多肽或肽配體和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽配制為納米顆粒。
[0052]在相關(guān)的方面，本發(fā)明提供了檢測(cè)表達(dá)C型凝集素樣分子I(CLLl)的白血病干細(xì)胞(LSC)存在的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括使LSC與連接至可檢測(cè)標(biāo)記的、如上述和本文中描述的肽接觸，和檢測(cè)所述肽與所述LSC的接觸。在不同的實(shí)施方案中，所述可檢測(cè)標(biāo)記可為珠子、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光部分、量子點(diǎn)、納米顆粒、磁性粒子、金屬粒子或放射性同位素。在一些實(shí)施方案中，所述LSC在體外。在一些實(shí)施方案中,所述LSC在體內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述LSC在血細(xì)胞群中。
[0053]在一些實(shí)施方案中，可檢測(cè)到所述CLLl特異性肽的結(jié)合信號(hào)，表明白血病和/或白血病干細(xì)胞存在。在一些實(shí)施方案中，不能檢測(cè)到所述CLLl-特異性肽的結(jié)合信號(hào)，表明白血病和/或白血病干細(xì)胞不存在。在一些實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽的結(jié)合信號(hào)大于一個(gè)閾值水平，表明白血病和/或白血病干細(xì)胞存在。在一些實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽的結(jié)合信號(hào)小于一個(gè)閾值水平，表明白血病和/或白血病干細(xì)胞不存在。在一些實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽的結(jié)合信號(hào)大于所述CLLl特異性肽與正常對(duì)照組織(例如，來(lái)自已知沒(méi)有患白血病的對(duì)象的血液)的結(jié)合信號(hào)，表明白血病和/或白血病干細(xì)胞存在。在一些實(shí)施方案中，所述CLLl特異性肽的結(jié)合信號(hào)約等于或小于所述CLLl特異性肽與正常對(duì)照組織(例如，來(lái)自已知沒(méi)有患白血病的對(duì)象的血液)的結(jié)合信號(hào)，表明白血病和/或白血病干細(xì)胞不存在。
[0054]在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了抑制、減少或防止表達(dá)C型凝集素樣分子I (CLLl)的白血病干細(xì)胞(LSC)生長(zhǎng)或增殖的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括使所述LSC與連接至治療性部分的、如上述和 本文中描述的肽接觸，其中所述肽結(jié)合至LSC，并且所述治療性部分可抑制或防止所述LSC生長(zhǎng)或增殖。在一些實(shí)施方案中，所述LSC在體外。在一些實(shí)施方案中，所述LSC在體內(nèi)。
[0055]在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了抑制、減少或防止有需要的對(duì)象的表達(dá)C型凝集素樣分子I(CLLl)的白血病干細(xì)胞(LSC)生長(zhǎng)或增殖的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括使所述LSC與連接至治療性部分的、如上述和本文中描述的肽接觸，其中所述肽結(jié)合至LSC，并且所述治療性部分的肽可抑制或防止所述LSC生長(zhǎng)或增殖。在一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象為哺乳動(dòng)物，例如，人、非人的靈長(zhǎng)類或犬。在一些實(shí)施方案中，將連接至所述治療性部分的所述肽對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行靜脈注射或骨髓內(nèi)給藥。在一些實(shí)施方案中，所述對(duì)象患有、懷疑患有急性骨髓性白血病(AML)或具有發(fā)展該疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
[0056]在一些實(shí)施方案中，所述治療性部分為免疫球蛋白的Fe部分、細(xì)胞毒素、納米顆粒、脂質(zhì)體或化療劑。
[0057]
[0058]術(shù)語(yǔ)“C型凝集素樣分子1”、“CLL1”、“CLEC12A”是指C型凝集素/C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域(CTL/CTLD)超家族的一個(gè)成員。該家族的成員共享共同的蛋白質(zhì)折疊子且具有不同的功能，如細(xì)胞粘附、細(xì)胞-細(xì)胞信號(hào)發(fā)送、糖蛋白轉(zhuǎn)換和在炎癥和免疫反應(yīng)中的作用。功能上，CLLl為粒細(xì)胞和單核細(xì)胞功能的負(fù)調(diào)節(jié)物。結(jié)構(gòu)上，CCLl是指核酸和多肽多態(tài)變體、等位基因、突變體和種間同系物，其:(I)具有的氨基酸序列與由CCLl核酸編碼的氨基酸序列有大于約90%的氨基酸序列同一性，例如，91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更大的氨基酸序列同一性，優(yōu)選在至少約25、50、100、200、400個(gè)或更多個(gè)氨基酸的區(qū)域上或在全長(zhǎng)上(參見(jiàn)，例如，GenBank登錄號(hào):NM_138337.5 — NP_612210.4(同種型I)；ΝΜ_201623.3 —ΝΡ_963917.2(同種型 2) ；NM_001207010.1 — ΝΡ_001193939.I (同種型 3)；(2)結(jié)合至抗體，例如，多克隆抗體，其針對(duì)包含CLLl多肽(例如，本文描述的CLLl多肽)的氨基酸序列或由CLLl核酸(例如，本文描述的CLLl多核苷酸)編碼的氨基酸序列及其保守修飾變體的免疫原產(chǎn)生；(3)在嚴(yán)格雜交條件下，可與對(duì)應(yīng)于編碼CLLl蛋白的核酸序列及其保守修飾變體的反義鏈特異性雜交；(4)具有的核酸序列與CLLl核酸(例如，如本文描述的CLLl多核苷酸和如本文描述的編碼CLLl多肽的CLLl多核苷酸)有大于約90%，優(yōu)選大于約91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的核苷酸序列同一性，優(yōu)選在至少約25、50、100、200、500、1000、2000個(gè)或更多個(gè)核苷酸的區(qū)域上或在全長(zhǎng)上。基于CLLl同系物的知識(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地確定較能容納取代的殘基位置。例如，在種間保守的氨基酸殘基對(duì)取代或缺失容納較少。類似地，在種間不保守的氨基酸殘基在保留CLLl蛋白功能的同時(shí)對(duì)取代或缺失容忍較多。
[0059]“毒性部分”為使嵌合分子對(duì)目標(biāo)細(xì)胞具有毒性的嵌合分子部分。
[0060]術(shù)語(yǔ)“效應(yīng)部分”或“治療性部分”是指預(yù)期對(duì)靶向部分(例如，本文描述的CLLl肽配體)所靶向的細(xì)胞具有效果或用于鑒定免疫綴合物的存在的嵌合分子部分。 [0061]術(shù)語(yǔ)“嵌合分子”包括關(guān)于效應(yīng)分子與本發(fā)明的結(jié)合CLLl肽的共價(jià)連接。
[0062]術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒素”通常包括關(guān)于相思豆毒素、蓖麻毒素、假單胞菌外毒素(PE)、白喉毒素(DT)、肉毒桿菌毒素或其修飾的毒素。例如，PE和DT為高毒化合物,其通常通過(guò)肝中毒導(dǎo)致死亡。然而，PE和DT可修飾為用作免疫毒素的形式，即通過(guò)移除該毒素的天然靶向組分(例如，PE的Ia結(jié)構(gòu)域或DT的B鏈)并用不同的靶向部分如本文描述的肽將其取代。
[0063]術(shù)語(yǔ)“接觸”包括關(guān)于放置為直接物理結(jié)合(association)。
[0064]如本文所用，“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”可互換使用，且包括關(guān)于氨基酸殘基的聚合物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“肽”以其最廣含義使用，指常規(guī)的肽(即含有L-氨基酸或D-氨基酸的短多肽)，以及保留期望功能活性的肽等同物、肽類似物和模擬肽。肽等同物可以不同于常規(guī)的肽，其通過(guò)以相關(guān)的有機(jī)酸(如PABA)、氨基酸等取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸，或者取代或修飾側(cè)鏈或功能基。所述術(shù)語(yǔ)適用于這樣的氨基酸聚合物，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基為對(duì)應(yīng)的天然存在的氨基酸和天然存在的氨基酸聚合物的人工化學(xué)類似物。所述術(shù)語(yǔ)也適用于包含保守氨基酸取代以便該蛋白保留其功能的聚合物。
[0065]除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“肽等同物”、“肽類似物”、“肽模擬物”和“模擬肽”可互換使用。肽類似物在醫(yī)藥行業(yè)通常用作非肽藥物，其具有類似于模板肽的性能。(Fauchere, J.(1986) Adv.Drug Res.15: 29 ; Veber and Freidinger (1985) TINSp.392;and Evans et al.(1987) J.Med.Chem30:1229)。肽類似物通常借助計(jì)算機(jī)化的分子模擬來(lái)研制。結(jié)構(gòu)上類似于治療上有用的肽的肽模擬物可用于產(chǎn)生等效的治療性或預(yù)防性效果。通常，模擬肽結(jié)構(gòu)上類似于模本(paradigm)多肽(例如，具有生物學(xué)或藥理活性的多肽)，如天然存在的受體結(jié)合多肽，但具有被選自下述的連接任選取代的一個(gè)或多個(gè)肽連接:一CH2NH—、— CH2S-, — CH2-CH2—、一CH=CH — (順式和反式)、一COCH2一、一CH(OH)CH2一和一CH2SO—，所述取代通過(guò)本領(lǐng)域已知的且進(jìn)一步描述于以下參考文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行:Spatola, A.F."Chemistry and Biochemistryof Amino Acids, Peptides, and Proteins,^B.Weinstein, eds., Marcel Dekker,NewYork, p.267 (1983) ; Spatola, A.F., Vega Data (Mar chi 98 3), Vol.1, Is sue 3，"PeptideBackbone Modifications"(綜述)；Morley, J.S.，Trends Pharm Sci (1980)pp.463-468 (綜述)；Hudson，D.et al., Int J Pept Prot Res (1979) 14:177-185 (—CH2NH-, CH2CH2-);Spatola, A.F.et al., Life Sci (1986) 38: 1243-1249 (-CH2S) ;Hann, M.M., JChem Soc Perkin Trans I (1982) 307-314 (—CH—CH—,順式和反式)；Almquist, R.G.et al., J Med Chem (1980) 23: 1392-1398 (— COCH2-—) ; Jennings-ffhite, C.et al., Tetrahedron Lett(1982) 23:2533(—COCH2—) ;Szelke, M.et al., EuropeanApp In.EP45665 (1982) CA: 97: 39405 (1982) (一 CH (OH) CH2-) ;Holladay, M.ff.etal., Tetrahedron Lett (1983) 24: 4401-4404 (—C(OH)CH2—);和 Hruby, V.J.，LifeSci (1982) 31:189-199 (-CH2-S-)。所述肽骨架的部分或全部也可被構(gòu)象受限的環(huán)烷基或芳基取代基所取代，以限制本文指定的功能性氨基酸側(cè)鏈的移動(dòng)性，如以下參考文獻(xiàn)中所述:1.Bondinell et al.Design of a potent and orally active nonpeptide plateletfibrinogen receptor(GPIIb/IIIa)antagonist.Bioorg Med Chem2:897(1994).2.Keenanet al.Discovery of potent nonpeptide vitronectin receptor(alpha v beta3)antagonists.J Med Chem40:2289(1997).3.Samanen et al.Potent, selective, orallyactive3-oxo-l, 4-benzodiazepine GPIIb/IIIa integrin antagonists.J MedChem39:4867(1996)。
[0066]本發(fā)明所述肽可通過(guò)已知方法制備，如本領(lǐng)域熟知的重組和合成方法。重組技術(shù)通常描述于:Sambrook, et al., Molecular Cloning:ALaboratory Manual, (3rd ed.)Vols.1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, (2001) ? 肽合成技術(shù)為大家所熟知，且包括以下文獻(xiàn)中所描述的那些技術(shù):Merrifield, J.Amer.Chem.Soc.85:2149-2456(1963)，Atherton, et al., Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, IRLPress (1989),和 Merrifield, Science232:341-347 (1986)。也參見(jiàn) Lam, et al., Nature (1991)354:82-84;Lam, et al., Chem Rev(1997)97:411-448;和 Zhang, et al., UrolOncol(2011)PMID:20888272。
[0067]術(shù)語(yǔ)“殘基”或“氨基酸殘基”或“氨基酸”包括關(guān)于整合至蛋白質(zhì)、多肽或肽(通稱“肽”)中的氨基酸。所述氨基酸可為天然存在的氨基酸，且除非另有限制，可包括能夠以與天然存在的氨基酸類似的方式發(fā)揮作用的已知的天然氨基酸類似物。
[0068]本文所指氨基酸和類似物以縮寫命名描述于如下表A中:
[0069]表A:氨基酸命名
【權(quán)利要求】
1.包含氨基酸序列基序LR(S/T)的肽，其中所述肽不超過(guò)10個(gè)氨基酸長(zhǎng)度且結(jié)合至C型凝集素樣分子I (CLLl)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7，其中: X1為任何氨基酸； X4為S或T ;
X5 為 A、S 或 F ; X6為A、G或S ;且 X7 為 A、V、P 或 F。
3.根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7,其中: X1為任何氨基酸； X4為S或T ; X5為A或S ; X6為A或G ;且 X7 為 A、V 或 P。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAX7，其中: X1為任何氨基酸； X4為S或T ;且 X7為A或V。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAV,其中: X1為任何氨基酸；且 父4為S或T。
6.根據(jù)權(quán)利要求4-5中任一項(xiàng)所述的肽，其中X1為P、D、L、T或A。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRSSGP,其中X1為任何氨基酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的肽，其中X1為V、S、P或T。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽選自PLRSAAA、DLRSAAV、LLRTAAV、LLRSAAV、TLRTAAV、ALRSAAV、VLRSSGP、SLRSSGP、PLRSSGP、TLRSSGP 和 PTPPFSF。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的肽，其中: i)一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基為D-氨基酸； ii)所述肽包含位于N-末端或C-末端或N-末端和C-末端的保護(hù)基； iii)所述肽為完全或部分逆反型； iv)所述肽包含2個(gè)或更多個(gè)重復(fù)；或 V)所述肽為環(huán)化的。
11.根據(jù)權(quán)利要求ι-?ο中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽結(jié)合至表達(dá)于白血病干細(xì)胞表面上的C型凝集素樣分子I (CLLl)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽不結(jié)合至正常血細(xì)胞或正常造血干細(xì)胞。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽還包含位于氨基端和/或羧基端的1-5個(gè)側(cè)翼氨基酸殘基。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽還包含位于氨基端的半胱氨酸殘基和位于羧基端的半胱氨酸殘基。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的肽，其中所述肽連接至治療性部分或可檢測(cè)標(biāo)記。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的肽，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記為珠子、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光部分、納米顆粒、磁性粒子、金屬粒子或放射性同位素。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的肽，其中所述治療性部分為免疫球蛋白的Fe部分、細(xì)胞毒素、納米顆粒、脂質(zhì)體或化療劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的肽，其中所述治療性部分為包封于納米顆粒或脂質(zhì)體內(nèi)的化療劑。
19.包含權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述肽的融合蛋白。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含融合至免疫球蛋白Fe部分的權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的肽。
21.—種納米載體或納米顆粒,其連接至一個(gè)或多個(gè)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的肽。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的納米載體或納米顆粒，其中所述納米顆?；蛑|(zhì)體包封有化療劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求21-22中任一項(xiàng)所述的納米載體或納米顆粒，其中所述納米載體或納米顆粒包括膽酸、賴氨酸和聚乙二醇(PEG)。
24.檢測(cè)表達(dá)C型凝集素樣分子I(CLLl)的白血病干細(xì)胞(LSC)存在的方法，包括使所述LSC與連接至可檢測(cè)標(biāo)記的權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的肽接觸，以及檢測(cè)所述肽與所述LSC的結(jié)合。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記選自珠子、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光部分、納米顆粒、磁性粒子、金屬粒子或放射性同位素。
26.根據(jù)權(quán)利要求24-25中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述LSC在體外。
27.根據(jù)權(quán)利要求24-25中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述LSC在體內(nèi)。
28.根據(jù)權(quán)利要求24-27中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述LSC在血細(xì)胞群中。
29.抑制、減少或防止有需要的對(duì)象的表達(dá)C型凝集素樣分子I(CLLl)的白血病干細(xì)胞(LSC)生長(zhǎng)或增殖的方法，包括使所述LSC與以下物質(zhì)接觸:連接至治療性部分的權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的肽、權(quán)利要求19-20中任一項(xiàng)所述的融合蛋白或權(quán)利要求21-23中任一項(xiàng)所述的納米顆?；蚣{米載體，其中所述肽結(jié)合至LSC且所述治療性部分抑制或阻止所述LSC的生長(zhǎng)或增殖。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述治療性部分為免疫球蛋白的Fe部分、細(xì)胞毒素、納米顆粒、脂質(zhì)體或化療劑。
31.根據(jù)權(quán)利要求29-30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述治療性部分為包封于納米顆粒內(nèi)的化療劑。
32.根據(jù)權(quán)利要求29-31中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象為人。
33.根據(jù)權(quán)利要求29-32中任一項(xiàng)所述的方法，其中將連接至所述治療性部分的所述肽對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行靜脈內(nèi)或骨髓內(nèi)給藥`。
【文檔編號(hào)】A61K38/08GK103764668SQ201280040039
【公開(kāi)日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2012年7月9日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月9日
【發(fā)明者】潘崇賢, 張洪勇 申請(qǐng)人:加利福尼亞大學(xué)董事會(huì)