一種包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸納米凝膠的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥劑學(xué)領(lǐng)域的一種納米凝膠緩釋微粒的制備技術(shù)，具體涉及一種包載 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸納米凝膠的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 口腔潰瘍是一種生活常見病，多發(fā)于舌尖、舌腹、頰粘膜處，伴隨間歇性、碰觸式刺 痛，嚴(yán)重影響病患的生活質(zhì)量。目前對(duì)于口腔潰瘍的治療尚缺乏有效方法，傳統(tǒng)的治療方 法著重于局部的止痛，而對(duì)于如何加快潰瘍面的愈合重視程度不夠。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng) 因子是一種多功能蛋白類生物活性物質(zhì)，對(duì)創(chuàng)面和神經(jīng)損傷均有較強(qiáng)的修復(fù)作用。利用堿 性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子治療口腔潰瘍已有報(bào)道。存在的突出問題是：1、堿性成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子在口腔環(huán)境中容易降解失活；2、隨著人體唾液的分泌，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在 潰瘍表面處會(huì)被迅速清除，限制了其治療效果。因此，如何保留堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子活 性，延長(zhǎng)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在潰瘍表面處的滯留時(shí)間是本發(fā)明所解決的關(guān)鍵問題。 殼聚糖是一種天然陽(yáng)離子聚多糖，具有資源量大、生物可降解、穩(wěn)定性好、生物親和性好、安 全無(wú)毒性等優(yōu)點(diǎn)，是開發(fā)生物醫(yī)用材料的良好資源。殼聚糖季銨鹽作為殼聚糖的水溶性衍 生物，在保留殼聚糖分子良好生物相容性的同時(shí)，具有良好的抑菌性、成膜和成膠性，是理 想的粘膜藥物輔料。有報(bào)道指出殼聚糖季銨鹽能夠與口腔粘膜粘液層蛋白發(fā)生靜電作用并 形成氫鍵，表現(xiàn)出良好的粘膜粘附性。本發(fā)明采用兩部法（離子交聯(lián)一一聚電解質(zhì)凝聚） 制備包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸復(fù)合納米凝膠，旨在長(zhǎng)時(shí)間維 持堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在口腔潰瘍部位的有效活性濃度，提高臨床治療效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì) 酸納米凝膠制備方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0004] 本發(fā)明采用兩步法合成目標(biāo)產(chǎn)物即包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨 鹽透明質(zhì)酸納米凝膠。其具體步驟是：
[0005] 步驟一：將殼聚糖季銨鹽溶解于去離子水中，再將堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液 加入該溶液中，攪拌30分鐘，控制轉(zhuǎn)速、殼聚糖季銨鹽濃度。
[0006] 步驟二（離子交聯(lián)法）：將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖季銨鹽/堿性成纖維細(xì) 胞生長(zhǎng)因子混合液中進(jìn)行離子交聯(lián)反應(yīng)，控制殼聚糖季銨鹽濃度、三聚磷酸鈉濃度以及三 聚磷酸鈉的滴加速度；
[0007] 步驟三（聚電解質(zhì)凝聚法）：向步驟二中發(fā)生離子交聯(lián)的殼聚糖季銨鹽溶液中， 加入透明質(zhì)酸鈉溶液，控制轉(zhuǎn)速、透明質(zhì)酸鈉的濃度和滴加速度。調(diào)節(jié)溶液的酸堿度至pH 4. 0 - 6. 0,最后將其分離純化，干燥得到包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透 明質(zhì)酸納米凝膠。
[0008] 本發(fā)明更具體的實(shí)施方案如下：
[0009]步驟一：將殼聚糖季銨鹽溶解于去離子水中，殼聚糖季銨鹽濃度為0. 3-0. 6%(w/ v);向殼聚糖季銨鹽溶液中加入濃度為2-5mg/mL的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液；
[0010] 步驟二：將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖季銨鹽溶液中進(jìn)行離子交聯(lián)反應(yīng)，其中 三聚磷酸鈉與殼聚糖季銨鹽游離氨基的摩爾比為〇. 1-0. 3 :1 ;滴加在20分鐘內(nèi)完成，室溫 下攪拌，攪拌速度是200轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)時(shí)間是30分鐘；
[0011] 步驟三：將透明質(zhì)酸鈉溶解于去離子水中，溶液濃度分別控制在〇. 3% -0. 5% (w/ v);將透明質(zhì)酸鈉溶液滴入第二步所得到的三聚磷酸鈉一一殼聚糖季銨鹽混合溶液中，其 添加量為透明質(zhì)酸鈉與殼聚糖的質(zhì)量比為1-1. 7:1，滴加在30分鐘內(nèi)完成，調(diào)節(jié)酸堿度至 pH4. 0-6. 0,室溫下攪拌，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)；15000轉(zhuǎn)/分鐘離 心1小時(shí)分離產(chǎn)物，干燥得到固體產(chǎn)品，即包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽 透明質(zhì)酸納米凝膠。
[0012] 本發(fā)明進(jìn)一步具體的實(shí)施方案如下：
[0013] 一種包載堿性成纖維生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸納米凝膠的制備方法，取 殼聚糖季按鹽30_60mg，溶于IOmL去離子水中，在攪拌條件下滴入IOmL2-5mg/mL堿性成纖 維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液，Iml0. 2-0. 5% (w/v)三聚磷酸鈉溶液，20分鐘滴完，室溫下200轉(zhuǎn)/ 分鐘攪拌30分鐘，在攪拌條件下滴加IOmL含有0. 3-0. 5 % (w/v)的透明質(zhì)酸鈉溶液，30分 鐘滴完，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至pH4. 0-6. 0,室溫下攪拌，200轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?小時(shí)，15000 轉(zhuǎn)/分離心1-2小時(shí)，冷凍干燥得到固體產(chǎn)物。
[0014] 所述透明質(zhì)酸分子量范圍10_50kDa。
[0015] 本發(fā)明具有操作方便、制備技術(shù)工藝簡(jiǎn)便和制造成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。所形成的包載 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸納米凝膠呈規(guī)則球形。本發(fā)明的重要意 義在于形成的核殼結(jié)構(gòu)的載藥納米凝膠對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的包載量高；具有良好 的藥物緩釋作用和粘膜粘附性，在醫(yī)藥、醫(yī)用材料以及口腔粘膜給藥等許多方面具有良好 的研宄和開發(fā)應(yīng)用前景，因此，該發(fā)明技術(shù)具有很好的經(jīng)濟(jì)開發(fā)潛力。本發(fā)明的包載堿性成 纖維生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸納米凝膠產(chǎn)品的平均粒徑在150-230nm;Zeta電 位為-28. 6--36. 7mV，包覆率 60-75 %。
[0016] 以下結(jié)合附表、附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做出進(jìn)一步說明。
【附圖說明】
[0017] 圖1為包載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的殼聚糖季銨鹽透明質(zhì)酸納米凝膠透射電 鏡照片。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 本發(fā)明采用殼聚糖季銨鹽、透明質(zhì)酸鈉和三聚磷酸鈉為原料，通過離子交聯(lián)、聚合 物凝聚法目標(biāo)產(chǎn)物。具體實(shí)施方案為：
[0019]步驟一：將殼聚糖季銨鹽溶解于去離子水中，殼聚糖季銨鹽濃度為0. 3%(w/v); 向殼聚糖季銨鹽溶液中加入濃度為2mg/mL的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液；
[0020] 步驟二：將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖季銨鹽溶液中進(jìn)行離子交聯(lián)反應(yīng)，其中 三聚磷酸鈉與殼聚糖季銨鹽游離氨基的摩爾為0.l-o. 3 :1 ;滴加在20分鐘內(nèi)完成，室溫下 攪拌，攪拌速度是200轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)時(shí)間是30分鐘；
[0021] 步驟三：將透明質(zhì)