甜菜堿銅絡(luò)合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物的制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及甜菜堿銅絡(luò)合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]銅是人體必需的微量元素，其代謝平衡對機(jī)體至關(guān)重要。臨床上，許多疾病與銅代謝紊亂有關(guān)，包括冠心病、肝硬化、糖尿病、腫瘤等。
[0003]學(xué)者們研究發(fā)現(xiàn)癌癥患者血清銅水平明顯高于正常人，而且對化療藥不敏感的乳腺癌、結(jié)腸癌及肺癌病人，其血清銅水平高于對化療藥敏感的病人。研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌病人血清總銅顯著高于正常人，而血清銅水平升高的主要原因是血清銅藍(lán)蛋白結(jié)合銅(緊密結(jié)合銅)升高。由此，許多學(xué)者認(rèn)為腫瘤病人體內(nèi)銅過剩，由銅產(chǎn)生的氧自由基損傷可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，因此提出了利用銅螯合劑或限銅飲食來控制腫瘤發(fā)展。有體外研究表明銅螯合劑可減少腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生成因子的產(chǎn)生，臨床上應(yīng)用可有效降低腫瘤病人血清銅藍(lán)蛋白結(jié)合銅水平。與此相反，許多學(xué)者實(shí)驗(yàn)證明，銅是具有抗腫瘤活性的金屬，實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)無機(jī)銅可抑制癌細(xì)胞增殖。
[0004]因此，我們認(rèn)為腫瘤病人血清銅升高，可能僅是腫瘤生長過程中體內(nèi)銅重新分布的一個(gè)中間環(huán)節(jié)，并不代表體內(nèi)總體銅水平的過剩，而有可能是機(jī)體銅匱乏時(shí)代償?shù)囊环N表現(xiàn)。我們對血清及組織銅測定方法進(jìn)行改進(jìn)后發(fā)現(xiàn)，肝癌及宮頸癌患者血清總銅增高，但非蛋白結(jié)合銅及可交換銅(即蛋白疏松結(jié)合銅)顯著低于正常人。該結(jié)果進(jìn)一步說明腫瘤病人體內(nèi)銅失衡狀態(tài)不能簡單地用總銅水平來衡量。
[0005]我們發(fā)現(xiàn)腫瘤病人體內(nèi)存在銅代謝紊亂，癌癥病人血清總銅顯著高于常人，血清總銅升高的主要原因是血清銅藍(lán)蛋白結(jié)合銅升高，而血清非蛋白結(jié)合銅及可交換銅顯著低于正常人。體外實(shí)驗(yàn)表明，氯化銅可顯著抑制肝癌細(xì)胞IfepG2增殖。X染色體連鎖的凋亡抑制基因(XIAP)是細(xì)胞內(nèi)銅的感受器，XIAP直接或間接影響細(xì)胞內(nèi)C0MMD1、ATP7A/ATP7B、CTR-1等銅轉(zhuǎn)運(yùn)體的蛋白表達(dá)及銅轉(zhuǎn)運(yùn)伴侶分子CCS的遞銅活性。XIAP過表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞株及腫瘤組織中，并被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞耐藥有關(guān)。由于銅可結(jié)合XIAP并促進(jìn)其降解，我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)腫瘤中XIAP過表達(dá)可能在腫瘤機(jī)體銅代謝失衡中發(fā)揮中心調(diào)節(jié)作用，而銅劑抑瘤機(jī)制可能與其結(jié)合并降解XIAP在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮抗瘤作用有關(guān)。
[0006]然而，氯化銅等無機(jī)銅劑具有一定的毒性，且抗腫瘤效果較差，限制了銅劑在抗腫瘤方面的應(yīng)用。因此，需要尋找具備低毒安全、高效抗腫瘤的銅劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供甜菜堿銅絡(luò)合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其制備的抗腫瘤藥物低毒安全且抗腫瘤效果好。采用的技術(shù)方案如下:
甜菜堿銅絡(luò)合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0008]優(yōu)選所述的甜菜堿銅絡(luò)合物為[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] Cl2。
[0009]所述腫瘤可為肝癌、肺癌、淋巴瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌、宮頸癌、胰腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤，特別是肝癌。
[0010]上述抗腫瘤藥物可為注射劑、口服液、片劑或膠囊。
[0011]甜菜堿銅絡(luò)合物是甜菜堿(BET)與銅形成的絡(luò)合物。甜菜堿是廣泛分布于自然界一種堿性物質(zhì)，無毒，物化性質(zhì)穩(wěn)定；使用甜菜堿與銅形成絡(luò)合物，可有效降低銅劑的毒性，顯著提高銅的抗癌作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，同時(shí)改善機(jī)體銅代謝失衡狀態(tài)。我們研究發(fā)現(xiàn)，甜菜堿銅絡(luò)合物安全低毒、理化性質(zhì)穩(wěn)定、制備簡單、協(xié)同銅劑的抗腫瘤效應(yīng)、能夠提高癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性、降低癌細(xì)胞的耐藥性、同時(shí)能夠改善機(jī)體銅代謝。
[0012]本發(fā)明具有以下有益效果:甜菜堿銅絡(luò)合物用于制備抗腫瘤藥物，由于甜菜堿銅絡(luò)合物可高效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞生長，表現(xiàn)出很強(qiáng)的腫瘤殺傷和抑制活性，而對正常細(xì)胞的毒性作用非常微弱，因此制備的抗腫瘤藥物(如抗肝癌藥物)具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性及低副作用，具有低毒安全且抗腫瘤效果好的優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0013]甜菜堿銅絡(luò)合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。該甜菜堿銅絡(luò)合物為[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] Cl2。
[0014]上述抗腫瘤藥物可為注射劑、口服液、片劑或膠囊。
[0015]上述甜菜堿銅絡(luò)合物[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] (:12的抗腫瘤活性研究:
一、體外實(shí)驗(yàn)
利用肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞，檢測藥物的抗腫瘤作用。HepG2細(xì)胞接種后，進(jìn)行不同的處理分組，設(shè)立對照組(不給予藥物)、氯化銅組(加入50 ymol/L的氯化銅)、甜菜堿組(加入50ymol/L的甜菜堿)、甜菜堿銅絡(luò)合物組(加入50ymol/L的甜菜堿銅絡(luò)合物[Cu2(BET)4C12] [Cu(BET)2C12]C12)，孵育48小時(shí)，收集細(xì)胞。然后對細(xì)胞進(jìn)行以下檢測:①Western-blot檢測細(xì)胞中XIAP的蛋白表達(dá)?’②RT-PCR檢測XIAP的mRNA表達(dá)，分析氯化銅的影響是在轉(zhuǎn)錄前還是轉(zhuǎn)錄后水平分光光度法檢測細(xì)胞勻漿中caspase-3，7，9活性；@ MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率。
[0016]使用Western-blot檢測!fepG2細(xì)胞中XIAP的表達(dá)情況，檢測表達(dá)下調(diào)效率，下調(diào)率(％)= (1 一給藥組細(xì)胞XIAP表達(dá)量/對照組細(xì)胞XIAP表達(dá)量)X 100%，下調(diào)率越高，表明藥物越能抑制ΠΑΡ表達(dá)及越高的抗腫瘤作用。XIAP蛋白下調(diào)率檢測結(jié)果為:氯化銅組27.5%，甜菜堿組5.2%，甜菜堿銅絡(luò)合物組46.2%。檢測結(jié)果表明甜菜堿銅絡(luò)合物[Cu2 (BET) 4C12] [Cu (BET) 2C12] Cl2ffl比其它藥物能夠顯著抑制XIAP表達(dá)，有更為有效的抗腫瘤作用。
[0017]使用RT-PCR檢測!fepG2細(xì)胞XIAP的mRNA表達(dá)情況，檢測表達(dá)下調(diào)效率，下調(diào)率(%)= (1 一給藥組細(xì)胞XIAP的mRNA表達(dá)量/對照組細(xì)胞XIAP的mRNA表達(dá)量)X 100%，下調(diào)率越高，表明藥物越能抑制XIAP表達(dá)及后續(xù)腫瘤生長狀況。XIAP的mRNA下調(diào)率檢測結(jié)果為:氯化銅組48.6%，甜菜堿組19.2%，甜菜堿銅