專利名稱：一種制備高純度麻櫟素a的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物活性成分的制備方法，具體地是一種從麻櫟鮮樹皮中制備麻櫟素A的方法。
背景技術：
麻櫟素A，屬鞣質類物質，分子式為C56H38O31，分子量為1206. 89，存在于殼斗科麻櫟Quercus acutissima Carruth.的鮮樹皮中。現(xiàn)代研究表明，麻櫟素A對黑素瘤(RPMI-7951)有細胞毒活性，其ED5tl為O. 61 μ g/ml ;對拓撲異構酶II呈抑制活性，IC50為O. 2 μ M。目前，國內對麻櫟素A的研究較少，尚處于起步階段，尚未見麻櫟素A的制備方法。因此，研究出一種制備高純度麻櫟素A的方法是非常必要的，對于擴大藥源以及麻櫟的綜合利用具有很重要的意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單，產品純度較高的麻櫟素A —種制備高純度麻櫟素A的方法。為解決上述技術問題，本發(fā)明采用下列技術方案
(1)超臨界二氧化碳流體萃取麻櫟鮮樹皮中的油脂類物質，殘留物用乙醇超聲提取后得到提取液；
(2)提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液；
(3)上大孔樹脂純化，水和乙醇水溶液洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得到濃縮液；
(4)濃縮液通過凝膠柱層析分離，用60%-80%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，靜置析晶，重結晶即得麻櫟素Α。所述超臨界萃取溫度為30-45°C，壓力為20-30MPa，時間為50_120min。所述乙醇為70-90%的乙醇溶液溶液，用量為5-10倍量(V/W)，超聲頻率為25-40KHZ，提取 2-3 次，每次 l_2h。所述明膠溶液濃度為3-6%，丙酮水溶液濃度為50-90%。所述大孔樹脂可選HPD-400或ADS-17型，洗脫劑為70%的乙醇水溶液。所述重結晶溶劑為80%乙醇溶液。綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點本工藝采用超臨界二氧化碳萃取技術脫除油脂類成分，能有效脫除葉中大部分油脂類雜質，條件溫和；萃取超聲波提取的方法提取麻櫟素A，提高了提取效率；70-90%的乙醇溶液作為提取溶劑，減少了多糖的溶出；采用大孔樹脂和凝膠柱分離麻櫟素A，成本低，分離效果好；本發(fā)明的方法在50°C以下進行，避免了鞣質類成分在常規(guī)熱回流提取過程中因溫度過高所引起的化學和結構的改變，因此本方法可得到純度較高的麻櫟素A，產品含量大于98%，且本方法提取周期短，方法安全，適合于工業(yè)化生產。下面將結合具體實施方式
對本發(fā)明做進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例I
麻櫟鮮樹皮粉碎，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為35°C，壓力為20MPa下萃取 lOOmin，殘留物加8L80%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為25KHz，提取3次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為3%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用50%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用4L水洗脫，再用4L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為3ml/min，收集富含麻櫟素A的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用65%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得麻櫟素A369mg，經HPLC檢測，其含量為98. 9%。實施例2
麻櫟鮮樹皮粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為45°C，壓力為30MPa下萃取50min，殘留物加5L70%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為35KHz，提取2次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為6%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用90%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用5L水洗脫，再用5L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為4. 5ml/min,收集富含麻櫟素A的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用60%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得麻櫟素A328mg，經HPLC檢測，其含量為98. 8%。實施例3
麻櫟鮮樹皮粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為40°C，壓力為30MPa下萃取60min，殘留物加10L70%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為40KHz，提取2次，每次2h，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為5%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LADS-17大孔樹脂柱，吸附完成后，先用3L水洗脫，再用6L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為3. 5ml/min，收集富含麻櫟素A的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上MCl-gel CHP-20P柱柱，用80%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得麻櫟素A354mg，經HPLC檢測，其含量為98. 5%。實施例4
麻櫟鮮樹皮粉碎，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為30°C，壓力為30MPa下萃取50min，殘留物加7L80%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為35KHz，提取3次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為5%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用50%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用6L水洗脫，再用3L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為4ml/min，收集富含麻櫟素A的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上Siiphadex LH-20柱，用70%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得麻櫟素A422mg，經HPLC檢測，其含量為98. 4%。實施例5
麻櫟鮮樹皮粉碎，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為35°C，壓力為20MPa下萃取120min，殘留物加6L90%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為30KHz，提取2次，每次2h，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為6%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用3L水洗脫，再用4L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為2. 5ml/min,收集富含麻櫟素A的洗 脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用65%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得麻櫟素A382mg，經HPLC檢測，其含量為99. 0%。
權利要求
1.I、一種制備高純度麻櫟素A的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)超臨界ニ氧化碳流體萃取麻櫟鮮樹皮中的油脂類物質，殘留物用こ醇超聲提取后得到提取液； (2)提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初歩純化液； (3)上大孔樹脂純化，水和こ醇水溶液洗脫，洗脫液減壓回收こ醇，得到濃縮液； (4)濃縮液通過凝膠柱層析分離，用60%-80%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，靜置析晶，重結晶即得麻櫟素A。
2.2、如權利要求I所述ー種制備高純度麻櫟素A的方法，其特征在于步驟(I)中所述超臨界萃取溫度為30-45°C，壓カ為20-30MPa，時間為50_120min。
3.3、如權利要求I所述ー種制備高純度麻櫟素A的方法，其特征在于步驟(I)中所述こ醇為70-90%的こ醇溶液溶液，用量為5-10倍量(V/W)，超聲頻率為25-40KHZ，提取2_3次，每次l-2h。
4.4、如權利要求I所述ー種制備高純度麻櫟素A的方法，其特征在于步驟(2)中所述明膠溶液濃度為3-6%，丙酮水溶液濃度為50-90%。
5.5、如權利要求I所述ー種制備高純度麻櫟素A的方法，其特征在于步驟(3)中所述大孔樹脂可選HPD-400或ADS-17型，洗脫劑為70%的こ醇水溶液。
6.6、如權利要求I所述ー種制備高純度麻櫟素A的方法，其特征在于步驟(4)中所述重結晶溶劑為80%こ醇溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備高純度麻櫟素A的方法。本方法是采用麻櫟鮮樹皮為原料。該工藝流程主要分為四部分(1)超臨界二氧化碳流體萃取麻櫟鮮樹皮中的油脂類物質，超聲提取后得到提取液；(2)提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液；(3)上大孔樹脂純化，水和乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮；(4)濃縮液通過凝膠柱層析分離，用60%-80%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，靜置析晶，重結晶即得麻櫟素A。本發(fā)明將為麻櫟素A的藥理活性及藥物制劑的深入研究奠定基礎。
文檔編號C07D493/22GK102659809SQ20121012273
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月25日 優(yōu)先權日2012年4月25日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司