專利名稱：一種生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法及其專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于植物細胞工程領域，具體涉及一種生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法及其專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
紫杉醇(I)作為臨床一線抗癌用藥，目前被廣泛用于卵巢癌、乳腺癌、肺癌等多種實體癌的治療。目前規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的途徑主要是從紅豆杉屬植物中直接提取或提取其半合成前體——10-去乙酰巴卡亭III (2)，再通
權(quán)利要求
1.一種基本培養(yǎng)基，其特征在于該培養(yǎng)基的配方為=NH4NO3 1100-1300mg, KNO3 1800-2000mg, KH2PO4 320_360mg，CaCl2 · 2H20 420_460mg，MgSO4 · 7H20 350_380mg， FeSO4 · 7H20 26_29mg, Na2-EDTA 36_38mg, MnSO4 · 4H20 2. 0-2. 5mg, H3BO3 0. 5-0. 7mg, KI 0. 7-0. 9mg, Na2MoO4 · 2H20 0. 02-0. 03mg, CuSO4 · 5H20 0. 002-0. 003mg, CoCl2 · 6H200.002-0. 003mg, Zn · Na-EDTA 12_17mg，鹽酸硫胺素 0. 4-0. 6mg,煙酸 0. 4-0. 6mg,鹽酸吡哆醇 O. 4-0. 6mg，甘氨酸 l_3mg,用水定容至 1L, pH5. 6-5. 8。
2.利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，其特征在于 該方法步驟如下1)無菌條件下，將紅豆杉的外植體在體積百分濃度70%的乙醇中消毒30s，再將其置于質(zhì)量百分濃度為10%的次氯酸鈉中殺菌20min，用無菌水沖洗3次，接種前將外植體切成長度為5_的小段，將其接種于愈傷組織誘導培養(yǎng)基中在24°C，黑暗條件下誘導愈傷組織；2)將愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中在24°C，黑暗條件下進行繼代培養(yǎng)。
3.按照權(quán)利要求2所述生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，其特征在于所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為在權(quán)利要求1所述的基本培養(yǎng)基的基礎上添加2，4-D l-7mg,蔗糖 20-50g，瓊脂 5-8g/L。
4.按照權(quán)利要求2所述生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，其特征在于所述繼代培養(yǎng)基為在權(quán)利要求1所述的基本培養(yǎng)基的基礎上添加2，4-D l-5mg,蔗糖20_50g，瓊脂 5_8g/L。
5.按照權(quán)利要求2所述生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，其特征在于所述紅豆杉為南方紅豆杉、云南紅豆杉或中華紅豆杉。
6.按照權(quán)利要求2所述生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，其特征在于所述外植體為莖、針葉或雄花。
7.按照權(quán)利要求2所述生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，其特征在于所述步驟2)中的繼代培養(yǎng)周期為3-4周，至少繼代4次。
全文摘要
一種生產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法及其專用培養(yǎng)基，用該培養(yǎng)方法及其專用培養(yǎng)基可以獲得產(chǎn)7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的愈傷組織，愈傷組織中7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的含量為0.005%-0.009%。本發(fā)明是第一次在紅豆杉植物中通過細胞工程方法獲得7-木糖-10-去乙酰紫杉醇。生產(chǎn)的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇可以作為原料通過簡單工藝轉(zhuǎn)化為紫杉醇。本發(fā)明解決了紫杉醇生產(chǎn)上的原料問題，易操作、周期短，成本低，保護了紅豆杉植物資源。
文檔編號C07H17/04GK103013903SQ201210566819
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月24日
發(fā)明者楊凌, 侯琨, 欒宏偉 申請人:中國科學院大連化學物理研究所