本發(fā)明涉及藥物化學
技術領域：
，具體地說，是苯并吲唑類衍生物及其制備方法、應用。
背景技術：
：腫瘤，特別是惡性腫瘤，已嚴重威脅人類的健康。世界衛(wèi)生組織(WHO)的發(fā)布的《全球癌癥報告2014》顯示，非洲、亞洲和中南美洲的發(fā)展中國家癌癥發(fā)病形勢最為嚴峻。2012年全世界共新增1400萬癌癥病例并有820萬人死亡。其中，中國新增307萬癌癥患者并造成約220萬人死亡，分別占全球總量的21.9％和26.8％。該報告預測全球癌癥病例將呈現迅猛增長態(tài)勢，由2012年的1400萬人，逐年遞增至2025年的1900萬人，到2035年將達到2400萬人。盡管抗腫瘤藥物為延長患者的生存時間以及改善其生命質量做出了很大貢獻，但大多數藥物均為細胞毒藥物，其缺乏選擇性會傷害大量的正常細胞，并且容易出現耐藥性，所以，腫瘤血管靶向藥物成為了研究熱點。微管由微管蛋白和微管結合蛋白構成，是構成細胞骨架的主要成分。微管有聚合和解聚的動力學特性，在保持細胞形態(tài)、細胞的分裂增殖、細胞器的組成與運輸及信號物質的傳導方面發(fā)揮重要作用。以微管為靶點的抗腫瘤藥物就是利用其動力學特性，或促進其解聚或抑制其聚合，從而達到直接影響細胞的有絲分裂，影響細胞的諸多正常生理功能，使細胞分裂停止于M期。研究表明微管存在3個不同的藥物結合位點：紫杉醇位點、長春新堿位點和秋水仙堿位點。由于秋水仙堿位點空腔體積較小且相應抑制劑的結構較為簡單，因而近年來關于其抑制劑的研究也備受關注。該位點最初發(fā)現的抑制劑秋水仙堿治療窗較窄，限制了其臨床應用。而二苯乙烯類天然產物抑制劑combretastatins的發(fā)現引起了研究者的極大關注，代表化合物CombretastatinA-4(CA-4)，表現出很高的微管聚合抑制作用和抗腫瘤活性，還表現出腫瘤血管阻斷作用。研究者對CA-4進行了大量的結構改造，目前有多個類似物進入臨床研究，顯示出良好的發(fā)展前景。其中CA-4P在2013年7月歐洲藥品管理局授予其治療卵巢癌的孤兒藥地位，目前CA-4P在未分化甲狀腺癌、神經內分泌瘤和卵巢癌上開展了臨床研究。中國專利文獻CN201510064131.0公開了一種取代苯亞甲基四氫萘酮類衍 生物，化學結構式為：其中，X表示CHOH或C＝O，R表示H、OH、F、Cl、CN、CONH2、NO2、CH3、OCH3、NH2中的任一種。但是關于本發(fā)明的苯并吲唑類衍生物及其制備方法、應用目前還未見報道。技術實現要素：本發(fā)明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種苯并吲唑類衍生物。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種苯并吲唑類衍生物的應用。本發(fā)明的另一的目的是，提供一種苯并吲唑類衍生物的制備方法。為實現上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是：式(I)所示的苯并吲唑類衍生物及其藥學上可接受的鹽，其中，R1選自氫、烷氧基、鹵素、硝基、氨基、氧取代物，取代基相同或不同，為單取代或多取代；R2選自氫、烷氧基，為單取代或多取代；R3選自氫、直鏈烷基、取代烷基、芳香基、羧酸、羧酸酯。優(yōu)選地，R1選自氫、甲氧基、鹵素、硝基、氨基、羥基。優(yōu)選地，R2為甲氧基。優(yōu)選地，R3選自氫、直鏈烷基、取代烷基、芳香基、羧酸、羧酸酯。優(yōu)選地，R1、R2、R3表示的基團如下所示：序號R1R2R3SC-13,4,5-三甲氧基7-甲氧基-HSC-23,4,5-三甲氧基7-甲氧基-CH3SC-33,4,5-三甲氧基7-甲氧基-CH2CH2OHSC-43,4,5-三甲氧基7-甲氧基-PhSC-53,4,5-三甲氧基7-甲氧基-CH2COOC2H5TCa-14-甲氧基6,7,8-三甲氧基-HTCa-24-甲氧基6,7,8-三甲氧基-CH3TCb-13-氟-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-HTCb-33-氟-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-CH2CH2OHTCb-43-氟-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-PhTCc-13-硝基-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-PhTCd-13-氨基-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-Ph優(yōu)選地，所述的苯并吲唑類衍生物為7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑。為實現上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術方案是：所述的苯并吲唑類衍生物及其藥學上可接受的鹽在制備微管蛋白聚合抑制劑中的應用。所述的苯并吲唑類衍生物及其藥學上可接受的鹽在制備治療腫瘤疾病藥物中的應用。所述的腫瘤疾病為白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、中樞神經系統(tǒng)腫瘤、黑色素瘤、卵巢癌、腎癌、前列腺癌或乳腺癌。為實現上述第三個目的，本發(fā)明采取的技術方案是：所述的苯并吲唑類衍生物的制備方法的合成路線為：其中，R1選自氫、直鏈烷基、取代烷基、芳香基、羧酸、羧酸酯。本發(fā)明優(yōu)點在于：1、本發(fā)明中的苯并吲唑類結構徹底解決了之前專利中化合物具有雙鍵結構，存在順反異構化而導致的化合物不穩(wěn)定的問題。2、本發(fā)明中的化合物具有更廣的抗瘤譜，其中SC1在美國國家癌癥研究所測試的60個細胞株篩選中都有非常高的活性，平均IC50值達到10nM級別。3、本發(fā)明中化合物TCd-1在初步的篩選中表現出比SC1更高的活性，達到pM級別。其取代基R2為氨基時，可以做成鹽酸鹽等，具有更好的水溶性和口服生物利用度。并可以進一步做成前藥形式，具備更好的成藥性。具備進一步開發(fā)的價值。附圖說明附圖1是化合物SC1在美國國家癌癥研究所測試的60個細胞株篩選結果。具體實施方式下面結合實施例對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細說明。本發(fā)明的化合物的合成通式如下：本發(fā)明的化合物的具體合成路線如下：試劑和條件：(a)LDA，3位取代的對甲氧基苯甲酰氯,無水四氫呋喃,-15℃；(b)R1-NH-NH2,乙醇，室溫；(c)NaOH,甲醇，室溫；(d)鐵粉，醋酸,70％乙醇,回流。相關化合物的合成方法如下：原料6-甲氧基-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(1)的合成參見文獻JMedChem2012,55,5720-5733.。原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)的合成參見專利《取代苯亞甲基四氫萘酮類衍生物及制備方法、應用》(申請?zhí)枺?01510064131.0)。實施例1：6-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(S-dk)將原料6-甲氧基-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(1)(5.68mmol，1.0equiv)溶入20mL無水THF中，氮氣保護，加冰鹽浴，緩慢滴加LDA(6.24mmol，1.1equiv)，攪拌4小時后加入3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯的THF溶液(6.24mmol，1.1equiv)，緩慢升至室溫攪拌，TLC監(jiān)測。反應完畢后冰浴下加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯萃取(2×100mL)，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮后用硅膠柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚洗脫)得產物為黃色固體，產率61％。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.77(s,2H),6.72(d,J＝2.3Hz,1H),6.66(d,J＝8.6Hz,1H),6.47(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),3.92(d,J＝6.2Hz,1H),3.88(s,3H),3.75(s,3H),3.69(s,6H),2.93(t,J＝6.8Hz,2H),2.68–2.52(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound371.1486(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires371.1489.實施例2：7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC1)在100mL燒瓶中依次加入乙醇、中間體S-dk和等當量的水合肼，攪拌過夜，濃縮后分離純化得SC1為白色固體。熔點172–173℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝8.5Hz,1H),6.84(s,2H),6.82(d,J＝2.5Hz,1H),6.64(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),3.92(s,3H),3.83(s,6H),3.79(s,3H),2.99(t,J＝7.2Hz,2H),2.83(t,J＝7.2Hz,2H)，13CNMR(150MHz,CDCl3)δ157.92,153.57,148.74,140.29,138.47,136.92,126.69,124.28,123.15,114.38,113.61,111.66,105.49,61.01,56.28,55.28,30.46,21.81.HRMS(ES+)m/zfound367.1653(M+H+)；C21H23N2O4(M+H+)requires367.1652.實施例3：7-甲氧基-2-甲基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC2)參照實施例2，將中間體S-dk和甲基肼反應得SC2為白色固體。熔點157 –158℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.33(d,J＝8.5Hz,1H),6.89(s,2H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),6.55(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.90(s,3H),3.84(s,6H),3.78(s,3H),3.03(t,J＝7.5Hz,2H),2.89(t,J＝7.3Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ157.84,153.78,138.74,136.76,125.73,123.66,114.42,111.74,106.95,61.05,56.37,55.26,36.66,30.34,21.92.HRMS(ES+)m/zfound381.1821(M+H+)；C22H25N2O4(M+H+)requires381.1809.實施例4：7-甲氧基-2-羥基乙基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC3)參照實施例2，將中間體S-dk和羥基乙基肼反應得SC3為白色固體。熔點143–144℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.86(d,J＝8.5Hz,1H),6.78(d,J＝2.6Hz,1H),6.63(s,2H),6.55(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),4.07–4.04(m,2H),3.97(d,J＝5.1Hz,2H),3.95(s,3H),3.84(s,6H),3.77(s,3H),3.01(t,J＝7.2Hz,2H),2.89(t,J＝7.2Hz,2H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ157.72,153.73,149.38,138.61,138.08,136.80,125.94,123.71,123.16,114.81,114.39,111.69,107.20,62.17,61.03,56.34,55.24,50.31,30.46,22.19.HRMS(ES+)m/zfound411.1910(M+H+)；C23H27N2O5(M+H+)requires411.1914.實施例5：7-甲氧基-2-苯基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC4)參照實施例2，將中間體S-dk和苯基肼反應得SC4為灰色固體。熔點142–143℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.30–7.20(m,5H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),6.83(d,J＝2.6Hz,1H),6.60(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H),6.52(s,2H),3.92(s,3H),3.79(s,3H),3.66(s,6H),3.06(t,J＝7.1Hz,2H),3.00–2.94(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound443.1969(M+H+)；C27H27N2O4(M+H+)requires443.1965.實施例6：2-(7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑-2-)乙酸乙酯(SC5)參照實施例2，將中間體S-dk和2-肼基乙酸乙酯反應得SC4為灰色固體。熔點118–119℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.79(d,J＝2.6Hz,1H),6.66(s,2H),6.56(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),4.70(s,2H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.95(s,3H),3.81(s,6H),3.77(s,3H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.91(t,J＝7.2Hz,2H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ168.71,157.77,153.67,150.06,138.62,138.38,136.94,125.80,123.78,123.19,115.21, 114.33,111.72,106.98,102.71,61.68,61.01,56.25,55.24,50.62,42.65,30.44,25.62,23.07,22.21,14.16,14.02.HRMS(ES+)m/zfound453.2023(M+H+)；C25H29N2O6(M+H+)requires453.2020.實施例7：2-(7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑-2-)乙酸(SC6)將2-(7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑-2-)乙酸乙酯(SC5)溶于乙醇中，加入5倍當量的NaOH水溶液，攪拌過夜，稀鹽酸中和至pH<7后用二氯甲烷萃取，有機層濃縮后薄層色譜制備得SC6為白色固體。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.78(d,J＝2.6Hz,1H),6.63(s,2H),6.57(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),4.74(s,2H),3.95(s,3H),3.82(s,6H),3.77(s,3H),3.12(m,2H),2.96(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound425.1699(M+H+)；C23H25N2O6(M+H+)requires425.1707.實施例8：5,6,7-三甲氧基-1-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(T-dk-a)參照實施例1，以原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)和4-甲氧基苯甲酰氯反應制備得T-dk-a為黃色固體。熔點86–87℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.51(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),6.06(s,1H),3.88(s,3H),3.88(s,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.29(s,3H),2.92(t,J＝6.9Hz,2H),2.61–2.53(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound371.1481(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires371.1489.實施例9：5,6,7-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(T-dk-b)參照實施例1，以原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)和3-氟-4-甲氧基苯甲酰氯反應制備得T-dk-b為黃色固體。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.32(dd,J＝11.7,1.9Hz,1H),7.30(d,J＝9.2Hz,1H),6.89(t,J＝8.4Hz,1H),6.05(s,1H),3.91(s,3H),3.89(s,3H),3.85(s,3H),3.33(s,3H),2.93(t,J＝6.9Hz,2H),2.61–2.52(m,2H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ197.21,180.59,152.02,150.51,150.38,149.72,149.65,139.64,128.69,128.66,127.86,125.91,120.28,116.75,116.62,111.92,108.89,107.78,60.72,60.52,55.86,55.09,33.81,19.47.實施例10：5,6,7-三甲氧基-1-(3-硝基-4-甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(T-dk-c)參照實施例1，以原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)和3-硝基-4- 甲氧基苯甲酰氯反應制備得T-dk-c為黃色固體。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝2.2Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,1H),6.04(s,1H),3.99(s,3H),3.90(s,3H),3.86(s,3H),3.36(s,3H),3.00–2.89(m,2H),2.64–2.54(m,2H).實施例11：6,7,8-三甲氧基-1-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCa-1)參照實施例2，將中間體T-dk-a和水合肼反應得TCa-1為棕色固體。熔點105–106℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝8.5Hz,2H),6.99(d,J＝8.5Hz,2H),6.70(s,1H),3.88(s,3H),3.86(s,6H),3.54(s,3H),3.00(t,J＝7.2Hz,2H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ160.13,151.63,151.43,140.45,129.88,126.55,123.49,121.13,114.20,113.39,103.08,60.98,60.95,55.75,55.41,22.10,21.73.HRMS(ES+)m/zfound367.1652(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires367.1662.實施例12：6,7,8-三甲氧基-1-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCa-2)參照實施例2，將中間體T-dk-a和甲基肼反應得TCa-2為棕色固體。熔點126–127℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.37(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝8.5Hz,2H),6.30(s,1H),3.88(s,3H),3.86(s,4H),3.83(s,3H),3.70(s,3H),3.42(s,3H),3.00(t,J＝7.4Hz,2H),2.85(t,J＝7.4Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ160.18,151.51,151.39,149.28,140.16,138.11,131.43,130.14,126.65,123.03,120.90,114.81,114.37,113.71,102.43,60.94,60.88,55.43,36.47,29.70,22.14,21.74.HRMS(ES+)m/zfound381.1805(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires381.1809.實施例13：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCb-1)參照實施例2，將中間體T-dk-b和水合肼反應得TCb-1為紫色固體。熔點147–148℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.38(dd,J＝11.8,2.0Hz,1H),7.35–7.30(m,1H),6.97(t,J＝8.5Hz,1H),6.70(s,1H),3.93(s,3H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.57(s,3H),3.01–2.92(m,2H),2.79–2.70(m,2H)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ152.93,151.67,151.44,151.30,147.98,147.91,140.48,126.34,124.70,120.92,116.47,116.34,113.56,113.28,103.11,61.00,60.98,56.28,55.77, 21.98,21.28.HRMS(ES+)m/zfound385.1564(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires385.1558.實施例14：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-羥基乙基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCb-3)參照實施例2，將中間體T-dk-b和羥基乙基肼反應得TCb-3為棕色固體。熔點150–151℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.22(dd,J＝11.4,2.0Hz,1H),7.20–7.16(m,1H),7.11(t,J＝8.4Hz,1H),6.25(s,1H),4.06–4.01(m,2H),3.97(s,3H),3.95(dd,J＝9.1,4.5Hz,2H),3.86(s,3H),3.84(s,3H),3.45(s,3H),2.99(t,J＝7.4Hz,2H),2.84(t,J＝7.4Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ153.17,151.69,151.49,149.42,148.73,148.66,140.75,137.58,126.76,125.39,122.39,122.34,121.07,118.20,118.08,115.35,113.79,102.68,61.77,60.95,60.90,56.42,55.50,50.35,21.77,21.45.HRMS(ES+)m/zfound429.1830(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires429.1820.實施例15：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-苯基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCb-4)參照實施例2，將中間體T-dk-b和苯肼反應得TCb-4為棕色固體。熔點159–160℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.32–7.28(m,2H),7.26–7.22(m,3H),7.13(dd,J＝11.6,2.0Hz,1H),7.09–7.05(m,1H),6.98(t,J＝8.5Hz,1H),6.40(s,1H),3.92(s,3H),3.89(s,3H),3.87(s,3H),3.48(s,3H),3.05(t,J＝7.3Hz,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ153.04,151.72,151.51,151.39,151.05,148.34,148.27,140.96,138.93,136.30,128.97,127.48,126.88,125.36,125.10,122.98,121.68,120.65,118.21,118.09,116.67,115.32,113.48,103.06,60.98,56.29,55.57,21.84,21.63.HRMS(ES+)m/zfound461.1870(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires461.1871.實施例16：6,7,8-三甲氧基-1-(3-硝基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCc-1)參照實施例2，將中間體T-dk-c和水合肼反應得TCc-1為棕色固體。熔點108–109℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.16(d,J＝2.2Hz,1H),7.84(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.16(d,J＝8.7Hz,1H),6.65(s,1H),4.02(s,3H),3.89(s,3H),3.88(s,3H),3.60(s,3H),3.01(t,J＝7.4Hz,2H),2.87–2.80(m,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ152.68,151.90,151.59,140.81,139.68,134.04,125.87, 125.43,124.97,120.86,114.05,113.62,102.98,61.00,56.70,55.89,21.89,21.04.實施例17：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCd-1)在10mL75％乙醇中加入醋酸，調至PH＝3～4，攪拌下加入鐵粉(90mg,1.6mmol)，加熱至90℃攪拌一小時。再加入化合物TCc-1(66mg,0.16mmol)，繼續(xù)攪拌30分鐘，反應完畢。反應液用無水碳酸鉀中和至PH≈8，硅藻土過濾，用乙酸乙酯洗滌。濾液用乙酸乙酯萃取，食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮并硅膠柱層析得黃色粉末TCd-1(41mg,67％yield)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.95(t,J＝5.4Hz,2H),6.84(s,1H),6.83(d,J＝8.1Hz,1H),4.19(s,2H),3.89(s,3H),3.87(s,3H),3.86(s,3H),3.58(s,3H),3.48(s,1H),3.02–2.92(m,2H),2.83–2.73(m,2H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ151.56,151.33,150.26,147.71,140.29,140.10,136.49,126.72,123.68,121.09,118.61,114.63,113.04,110.30,103.27,60.99,60.95,55.79,55.61,22.10,21.72.實施例18：目標物SC1-SC6對K562、HCT116細胞株的細胞毒作用.一、實驗材料和方法：1、實驗材料(一)實驗細胞株本實驗采用了人白血病細胞、人結腸癌細胞的細胞株作為篩選對象，該癌細胞株均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理研究室提供。1)K562(人白血病細胞)2)HT116(人腸癌細胞)(二)培養(yǎng)液為DMEM+10％FBS+雙抗，所用全自動酶標儀型號為：VarioskanFlash，生產廠商：Thermoscientific。進口96孔培養(yǎng)板等。2、試驗方法體外抗腫瘤活性采用MTT法。樣品配制：用DMSO(Merck)溶解成10mM后，加入PBS(-)配成1000μM的溶液或均勻的混懸液，然后用含DMSO的PBS(-)稀釋。實驗步驟如下：96孔板每孔加入濃度為4-5×104個/ml的細胞懸液100μl，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內。二、實驗結果：表1化合物SC1—SC6的腫瘤細胞增殖實驗注：該化合物為專利CN103130632A中的化合物1實施例19：目標物對Colo205細胞株的細胞毒作用.一、實驗材料和方法：1、實驗材料(一)實驗細胞株本實驗采用了人結腸癌細胞Colo205作為篩選對象，該癌細胞株均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理研究室提供。(二)培養(yǎng)液為DMEM+10％FBS+雙抗，所用全自動酶標儀型號為：VarioskanFlash，生產廠商：Thermoscientific。進口96孔培養(yǎng)板等。2、試驗方法體外抗腫瘤活性采用MTT法。MTT法。96孔板每孔加入濃度為5×104個/ml的細胞懸液100μl，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內。24h后，加入樣品液，10μl/孔，設三復孔，37℃，5％CO2作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培養(yǎng)箱內，溶解后用全波長多功能酶標儀測570nmOD值。二、實驗結果：表2目標化合物對人結腸癌細胞Colo205的體外增殖抑制作用注：該化合物為專利CN103130632A中的化合物1實驗例20：化合物SC1在美國國家癌癥研究所測試的60個細胞株篩選測試結果表明化合物SC1對白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、中樞神經系統(tǒng)腫瘤、黑色素瘤、卵巢癌、腎癌、前列腺癌以及乳腺癌都有非常好的效果，對所測的60個細胞株平均IC50值達到12.88nM。實驗例21：抑制微管蛋白聚合實驗一、實驗材料和方法：1、實驗材料(一)微管蛋白本實驗采用了牛微管蛋白作為篩選對象，生產廠家：Cytoskeleton。(二)緩沖液GeneralTubulinBuffer:80mMPIPESpH＝6.9,2mMMgCl2,0.5mMEGTA,生產廠家:Cytoskeleton。TubulinGlycerolBuffer:60％glycerol,生產廠家:Cytoskeleton。GTP：100mM,生產廠家:Cytoskeleton所用全自動酶標儀型號為：Synergy4，生產廠商：BioTek。進口96孔半面積培養(yǎng)板等。2、試驗方法采用文獻方法(CellBiochemistryandBiophysics,2003,38:1-21)，及微管蛋白試劑盒方法(CytoDYNAMIXScreen03)。樣品配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入緩沖液配成相應濃度的溶液或均勻的混懸液，然后用緩沖液稀釋。實驗步驟如下：在96孔培養(yǎng)板中每孔加入相應濃度為待測化合物10μl，置37℃酶標儀中，2min后，加入3mg/ml的微管蛋白液，100μl/孔，設雙復孔，37℃，作用1h，每分鐘測340nmOD值。二、實驗結果表3部分化合物抑制微管蛋白聚合的作用實驗結果表明，上述化合物均具有優(yōu)異的抑制微管蛋白聚合的作用，其中化合物SC1、SC2、Tca-1、Tcb-1和Tcd-1的活性與陽性對照藥CA-4相當，SC1、Tcd-1的微管蛋白抑制聚合活性甚至好于CA-4，值得作為抗腫瘤藥物進行深入研究。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁1 2 3