本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，涉及檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：結(jié)核病是主要經(jīng)呼吸道傳播的、嚴(yán)重危害我國和全世界的重要傳染病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織，全世界有17-20億的結(jié)核分枝桿菌感染者，每年至少200萬人死于本病(謝建平，結(jié)核分枝桿菌功能基因組研究的方法學(xué)，微生物通報(bào).2001.28(5):92-97)。因此，準(zhǔn)確篩檢感染者的方法在結(jié)核病的防治甚至最終的消滅中扮演極其重要的作用。現(xiàn)有的診斷技術(shù)對結(jié)核分枝桿菌感染者的診斷非常難。近幾十年來，臨床上采用結(jié)核菌素試驗(yàn)(tst)來診斷結(jié)核分枝桿菌感染者。但tst活性成份是純蛋白衍生物(purifiedproteinderivativeoftubercμlin，ppd)，是結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)上清液的粗提物，含有200多種成分，與卡介苗(bacilluscalmette-guerin，bcg)接種和環(huán)境分枝桿菌感染存在交叉反應(yīng)。tst檢測結(jié)果可被現(xiàn)在臨床廣泛使用的疫苗—卡介苗免疫所干擾[p.andersen，etal.lancet356(2000)1099-1104.]。從1921年及明卡介苗到現(xiàn)在為止，全世界已有35億人接種卡介苗。因此tst對感染者的診斷價(jià)值受到很大的影響，導(dǎo)致tst診斷的準(zhǔn)確性較低，因此我們無法根據(jù)其結(jié)果判斷是否真正存在結(jié)核分枝桿菌感染。對結(jié)核病病人的診斷技術(shù)中，痰涂片抗酸染色或痰菌培養(yǎng)，培養(yǎng)困難，耗時(shí)較長；肺部x射線檢查肺部病理改變，也僅在具有典型的臨床癥狀后才能診斷；其他血清學(xué)診斷方法和分子診斷方法缺乏特異性，假陽性率較高。有關(guān)研究人員指出，不同診斷性檢查方法的敏感性和特異性如下：分枝桿菌培養(yǎng)(分別為73％和100％)；pcr(分別為42％和100％)；胸部x線(分別為67％～77％和66％～76％)；結(jié)核菌素試驗(yàn)(分別為94％和20％)；血清學(xué)(分別為33％和87％)。由此可見，現(xiàn)有的分枝桿菌檢測方法的敏感性和特異性無法同時(shí)達(dá)到最優(yōu)。結(jié)核分枝桿菌感染人體后，首先會(huì)被人體的免疫系統(tǒng)識(shí)別，激活機(jī)體的t細(xì)胞免疫應(yīng)答，分泌產(chǎn)生γ干擾素(ifn-γ)，后者發(fā)揮抗結(jié)核感染作用。部分t細(xì)胞轉(zhuǎn)化為免疫記憶細(xì)胞，當(dāng)再次與結(jié)核分枝桿菌相遇后，會(huì)再次分泌產(chǎn)生ifn-γ，發(fā)揮抗結(jié)核感染作用?？乖禺惖拇碳ぎa(chǎn)生ifn-γ及其產(chǎn)生量與機(jī)體是否感染或發(fā)病密切相關(guān)。因此，如果采用結(jié)核分枝桿菌特異的抗原在體外刺激感染者和患者的t細(xì)胞，可誘導(dǎo)這些t細(xì)胞產(chǎn)生高水平的結(jié)核分枝桿菌特異的ifn-γ，而非結(jié)核分枝桿菌感染者或非結(jié)核病患者產(chǎn)生的ifn-γ的量與未用抗原刺激產(chǎn)生的量相近，從而實(shí)現(xiàn)診斷的目的。由此可見，尋找并發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原，對發(fā)展新一代的診斷試劑具有重要價(jià)值和意義。1996年，stover等通過減數(shù)雜交的方法確定了bcg在體外傳代過程中丟失的域，定義為缺失區(qū)(regionofdifference，rd)，rd區(qū)域存在于結(jié)核分枝桿菌中，而在bcg和大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌中缺失[程渝,李茂全.結(jié)核分枝桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)和檢驗(yàn)學(xué)分冊.2002；23(6)：342-343.]。其中，rd1區(qū)域編碼的早期分抗原靶6kd(earlysecretingantigentarget6kd，esat-6)和培養(yǎng)濾液蛋白10kd(cμltufiltrateprotein10kd，cfp-10)是兩種小分子量分泌蛋白，它們是t細(xì)胞最主要的抗原之一，可以誘導(dǎo)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)。對于兒童或者免疫低下樣本，有文獻(xiàn)報(bào)道，僅以esat-6和cfp-10或其多肽作為刺激原，其靈敏度約為73.5％-88.9％(孫琳，elispot檢測技術(shù)在兒童結(jié)核病診斷中的應(yīng)用，標(biāo)記免疫分析與臨床.2008.6:349-353；鐘華清，干擾素-γ釋放試驗(yàn)在兒童結(jié)核感染中的應(yīng)用價(jià)值，檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).2016.3:176-179；李海，應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法快速診斷兒童結(jié)核分枝桿菌感染的研究，中國婦幼保健，2012.11:1703-1706)。對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本，esat-6和cfp-10多肽及衍生物試劑盒結(jié)核分枝桿菌樣本檢出依然不高，出現(xiàn)假陰性，不能滿足臨床需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有檢測方法對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染結(jié)核分枝桿菌樣本的檢出率不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該特異性抗原多肽池特異性刺激結(jié)核分枝桿菌感染的新鮮全血，能特異性的分泌ifn-γ，增加檢測靈敏度。一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該抗原多肽池包括含有氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.26中所示的任八條多肽或任八條以上多肽的組合。如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述多肽是人工合成的或是天然分離的。如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述抗原多肽池還包括esat-6和cfp-10。優(yōu)選地，所述esat-6的氨基酸序列如seqidno.27所示，所述cfp-10的氨基酸序列如seqidno.28所示。如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述抗原多肽池還包括esat-6-cfp-10。優(yōu)選地，所述esat-6-cfp-10的氨基酸序列如seqidno.29所示。如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，該抗原多肽池包括與所述seqidno.1～seqidno.26中任一所示序列具有85％同源性的多肽。一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑盒，該試劑盒包括如上所述的抗原多肽池。一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑盒，優(yōu)選地，該試劑盒還包括ifn-γ的檢測試劑。如上所述的檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池的應(yīng)用，采用所述抗原多肽池作為刺激劑刺激全血，檢測產(chǎn)生的ifn-γ。采用本發(fā)明提供的抗原多肽池與ifn-γ的特異性抗原蛋白(esat6-cfp10，esat6和cfp10)，用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染后的全血樣本，具有以下特點(diǎn)：(1)免疫低下樣本陽性檢出率高，靈敏度高。針對現(xiàn)有檢測方法對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本或潛伏感染者的檢出不足，本發(fā)明提供用于敏感性和特異性高的結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該多肽池合并esat-6和cfp-10可實(shí)現(xiàn)對結(jié)核病病人或早期感染者或潛伏感染者(未出現(xiàn)結(jié)核病病癥)的快速、特異的檢測，在阻斷結(jié)核病的傳播和流行，以及對結(jié)核病的控制具有重大意義。(2)檢測用時(shí)短，操作方便，診斷快速。與傳統(tǒng)結(jié)核分枝桿菌檢測相比，利用本發(fā)明提供的多肽池合并ifn-γ的特異性抗原蛋白檢測用時(shí)短，診斷快速。傳統(tǒng)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)診斷需時(shí)間1-2月，tst檢測需要3天，本發(fā)明全部檢測時(shí)間在1-2天內(nèi)可完成。(3)對感染結(jié)核分枝桿菌能進(jìn)行早期檢測。由于結(jié)核分枝桿菌一旦感染人體，首先就被機(jī)體的免疫系統(tǒng)所識(shí)別，激活體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，發(fā)病時(shí)間在感染后1-2個(gè)月，因此，利用本發(fā)明提供的多肽池合并全血ifn-γ的特異性抗原蛋白的細(xì)胞免疫學(xué)檢測方法即可快速做出診斷，診斷出樣本是否感染結(jié)核分枝桿菌。而現(xiàn)有的技術(shù)中，x光片診斷只有在感染者肺部出現(xiàn)明顯的病理改變后才可做出診斷，這通常需要很長的時(shí)間?？乖贵w檢測也只有在疾病癥狀處于活動(dòng)期的情況下檢測，但環(huán)境中分枝桿菌廣泛存在，其與結(jié)核分枝桿菌的共同抗原，可干擾實(shí)驗(yàn)的診斷結(jié)果?？梢姡景l(fā)明對結(jié)核分枝桿菌新近感染或免疫低下者的早期檢測有重要意義，對結(jié)核病的控制和消滅具有積極的意義。本發(fā)明還提供了一種新的可用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測的檢測試劑，實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明可直接利用外周血進(jìn)行抗原刺激，無需分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測具有較高的靈敏度和特異性，有效避免假陰性，且操作簡便，成本較低，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。具體實(shí)施方式為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人根據(jù)計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行多肽預(yù)測，綜合優(yōu)選合適的多肽，通過大量試驗(yàn)研究驗(yàn)證，最終獲得氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.26所示的多肽，其中這些多肽的篩選研究是通過如下技術(shù)手段確定：1、單多肽刺激有效性篩選：將初步篩得的多肽配制成一定濃度的多肽溶液，刺激新鮮全血，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的多肽。2、多肽組合刺激效果：將篩選到有效的多肽隨機(jī)8-20個(gè)配制成混合多肽溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時(shí)，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)中進(jìn)行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。3、合并esat-6和cfp-10刺激效果：將篩選的有效混合多肽溶液合并esat-6和cfp-10配制成刺激劑溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時(shí)，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)中進(jìn)行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。4、合并esat-6-cfp-10刺激效果：將篩選的有效混合多肽溶液合并esat-6-cfp-10配制成刺激劑溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時(shí)，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)中進(jìn)行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。本發(fā)明中篩選的多肽經(jīng)驗(yàn)證均能特異性刺激結(jié)核分枝桿菌感染的病人新鮮全血特異性的分泌ifn-γ，具體為致病結(jié)核分枝桿菌的特異性蛋白質(zhì)：ag85b(seqidno.1～seqidno.6)、mpt649(seqidno.7～seqidno.10)、rv1985c(seqidno.11～seqidno.16)、rv1989c(seqidno.17～seqidno.21)、rv3425(seqidno.22～seqidno.26)，篩選的這些蛋白質(zhì)能針對cd8+淋巴細(xì)胞的結(jié)合位點(diǎn)的多肽，通過反復(fù)的臨床驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，這些多肽合并esat-6和cfp-10能提高檢測靈敏度，該合并刺激劑可特異性作用于結(jié)核分枝桿菌感染樣本的全血中的淋巴細(xì)胞表位，通過檢測全血中釋放的細(xì)胞因子ifn-γ，從而間接地反應(yīng)機(jī)體是否感染過結(jié)核分枝桿菌。該方法提高結(jié)核分枝桿菌感染樣本的檢出率，特別是新近感染樣本、兒童、免疫低下感染結(jié)核分枝桿菌樣本的檢出靈敏度，有效避免現(xiàn)有檢測技術(shù)中易出現(xiàn)的漏檢、錯(cuò)檢問題。以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些實(shí)施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法是按常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法；所用試劑如無特別說明均為市售購買產(chǎn)品。實(shí)施例1單個(gè)多肽刺激有效性篩選本發(fā)明的多肽序列，其氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.26所示，這些可通過人工合成的或是天然分離，本實(shí)施例及以下實(shí)施例中用的多肽是通過人工合成的。seqidno.1：rlwvycgngtpnelseqidno.2：lmigtaaavvlpglseqidno.3：vqfqsggnnspavyseqidno.4：mpvggqssfysdwyseqidno.5：saaiglsmagssamseqidno.6：pafewyyqsglsivseqidno.7：yqsaipprgtqavvseqidno.8：iqmsdpayninislseqidno.9：kslenyiaqtrdkfseqidno.10：mlvtavvllccsgvseqidno.11：rkafrraitrpthfseqidno.12：mvdpqldgpqlaalseqidno.13：kldspiiaritdtvseqidno.14：rlaaqtallesealseqidno.15：itiavnadsmatwfseqidno.16：rekpcrattagiplseqidno.17：llfpaiyladsaqaseqidno.18：avldlttpqareavseqidno.19：kmleaayrlhtidvseqidno.20：tayeqrtrpgqlqlseqidno.21：grwnppllfpaiylseqidno.22：relaysvettaeslseqidno.23：vswtrsalsdlprwseqidno.24：lsdlprwreppqiyseqidno.25：slffasgqlrelayseqidno.26：alsdlprwreppqi將制備的多肽用無菌低內(nèi)毒素(內(nèi)毒素應(yīng)小于2.5eu/μg)pbs溶解到濃度為250μg/ml。取10例臨床確診結(jié)核癥狀人群的新鮮血樣，10例無結(jié)核癥狀健康人群的新鮮血樣，(下同)，用已市售的γ干擾素檢測試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司)檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌。同時(shí)取多肽溶液20μl于無菌培養(yǎng)管中(多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時(shí)，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清檢測γ干擾素含量。結(jié)果表明，本發(fā)明所設(shè)計(jì)的如seqidno.1～seqidno.26所示的多肽對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本均無非特異性刺激。需要說明的是，與seqidno.1～seqidno.26中任一多肽具有85％同源性的多肽也可實(shí)現(xiàn)上述目的。實(shí)施例2合并刺激效果將任取8條多肽溶液合并esat-6和cfp-10配制成刺激劑溶液，其中，esat-6和cfp-10由大腸桿菌基因工程菌重組表達(dá)獲得，esat-6序列為seqidno.27：mteqqwnfagieaaasaiqgnvtsihslldegkqsltklaaawggsgseayqgvqqkwdatatelnnalqnlartiseagqamastegnvtgmfa；cfp-10序列為seqidno.28：maemktdaatlaqeagnferisgdlktqidqvestagslqgqwrgaagtaaqaavvrfqeaankqkqeldeistnirqagvqysradeeqqqalssqmgf。本實(shí)施例中僅列舉部分多肽的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，編號(hào)為刺激劑1～刺激劑4(刺激劑1：seqidno.1～seqidno.8+esat-6+cfp-10；刺激劑2：seqidno.6～seqidno.13+esat-6+cfp-10；刺激劑3：seqidno.11～seqidno.18+esat-6+cfp-10；刺激劑4：seqidno.19～seqidno.26+esat-6+cfp-10)，取結(jié)核分枝桿菌感染的陽性和未感染的陰性樣本進(jìn)行試驗(yàn)。取同實(shí)施例1中的20例全血樣本，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌。同時(shí)取刺激劑1～刺激劑4各20μl于無菌培養(yǎng)管中(各多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時(shí)，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測,檢測方法及試劑同實(shí)施例1，檢測結(jié)果見表1，其中，市售試劑盒為武漢海吉力生物科技有限公司的結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法),下同。表1.混合多肽合并esat-6和cfp-10刺激結(jié)果統(tǒng)計(jì)市售試劑盒刺激劑1刺激劑2刺激劑3刺激劑410陽性樣本檢出例數(shù)89910910陰性樣本檢出例數(shù)1010101010結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6和cfp-10用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染的全血，提高了檢測靈敏度，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。實(shí)施例3合并刺激效果將任取8條多肽溶液合并esat-6-cfp-10配制成刺激劑溶液，其中，esat-6-cfp-10由大腸桿菌基因工程菌重組表達(dá)獲得，esat-6-cfp-10序列為seqidno.29：mteqqwnfagieaaasaiqgnvtsihslldegkqsltklaaawggsgseayqgvqqkwdatatelnnalqnlartiseagqamastegnvtgmfanvamaemktdaatlaqeagnferisgdlktqidqvestagslqgqwrgaagtaaqaavvrfqeaankqkqeldeistnirqagvqysradeeqqqalssqmgf，編號(hào)為刺激劑5～刺激劑8(刺激劑5：seqidno.1～seqidno.8+esat-6-cfp-10；刺激劑6：seqidno.6～seqidno.13+esat-6-cfp-10；刺激劑7：seqidno.11～seqidno.18+esat-6-cfp-10；刺激劑8：seqidno.19～seqidno.26+esat-6-cfp-10)，取結(jié)核分枝桿菌陽性和陰性樣本進(jìn)行試驗(yàn)，配制成刺激劑溶液，取同實(shí)施例1中的20例全血樣本，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌。同時(shí)取刺激劑5～刺激劑8各20μl于無菌培養(yǎng)管中(各多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時(shí)，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。檢測方法同實(shí)施例2，檢測結(jié)果見表2。表2.混合多肽合并esat-6-cfp-10刺激結(jié)果市售試劑盒刺激劑5刺激劑6刺激劑7刺激劑810陽性樣本檢出例數(shù)899101010陰性樣本檢出例數(shù)1010101010結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6-cfp-10用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染的全血，提高了檢測靈敏度，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。實(shí)施例4合并混合多肽檢測靈敏度和特異性樣本：取20例臨床確診結(jié)核癥狀人群的新鮮血樣，20例無結(jié)核癥狀健康人群的新鮮血樣。采集上述樣本的全血樣本，分別用刺激劑9(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.6～seqidno.13，各100μg/ml))、刺激劑10(esat-6-cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.6～seqidno.13，各100μg/ml))、刺激劑11(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml))、刺激劑12(esat-6-cfp-10(10μg/ml))和刺激劑13(市售試劑盒：武漢海吉力生物科技有限公司的結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)各20μl于無菌培養(yǎng)管中，每管加入1ml新鮮采集全血刺激，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時(shí)，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。結(jié)果見表3。表3.合并混合多肽靈敏度和特異性檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6和cfp-10或esat-6-cfp-10用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染的全血，其檢測靈敏度可達(dá)95％，靈敏度和特異性較強(qiáng)，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。實(shí)施例5本發(fā)明的靈敏度和特異性檢測樣本：取100例臨床確診結(jié)核癥狀人群的新鮮血樣，其中65歲年齡及以上樣本21例，6歲以下年齡樣本數(shù)18例，hiv樣本51例，男56例，女44例；50例無結(jié)核癥狀健康人群的新鮮血樣，其中65歲年齡及以上樣本20例，6歲以下年齡樣本數(shù)7例，hiv樣本23例，男26例，女24例。采集上述樣本的全血樣本，分別用刺激劑(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.11～seqidno.18，各100μg/ml))和市售試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司的結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法))刺激劑各20μl于無菌培養(yǎng)管中，每管加入1ml新鮮采集全血刺激，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時(shí)，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用市售的γ干擾素檢測試劑盒檢測進(jìn)行檢測，市售試劑盒按其說明書進(jìn)行操作。檢測結(jié)果見表4和表5。表4.結(jié)核分枝桿菌感染樣本的酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)表5.健康樣本的酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6和cfp-10及其衍生物可提高對一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本檢出率，靈敏度和特異性較強(qiáng)，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。本發(fā)明對結(jié)核分枝桿菌新近感染或免疫低下者的早期檢測有重要意義，對結(jié)核病的控制和消滅具有積極的意義。sequencelisting<110>武漢海吉力生物科技有限公司<120>檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池及其應(yīng)用<130><160>29<170>patentinversion3.5<210>1<211>14<212>prt<213>人工合成<400>1argleutrpvaltyrcysglyasnglythrproasngluleu1510<210>2<211>14<212>prt<213>人工合成<400>2leumetileglythralaalaalavalvalleuproglyleu1510<210>3<211>14<212>prt<213>人工合成<400>3valglnpheglnserglyglyasnasnserproalavaltyr1510<210>4<211>14<212>prt<213>人工合成<400>4metprovalglyglyglnserserphetyrserasptrptyr1510<210>5<211>14<212>prt<213>人工合成<400>5seralaalaileglyleusermetalaglyserseralamet1510<210>6<211>14<212>prt<213>人工合成<400>6proalapheglutrptyrtyrglnserglyleuserileval1510<210>7<211>14<212>prt<213>人工合成<400>7tyrglnseralaileproproargglythrglnalavalval1510<210>8<211>14<212>prt<213>人工合成<400>8ileglnmetseraspproalatyrasnileasnileserleu1510<210>9<211>14<212>prt<213>人工合成<400>9lysserleugluasntyrilealaglnthrargasplysphe1510<210>10<211>14<212>prt<213>人工合成<400>10metleuvalthralavalvalleuleucyscysserglyval1510<210>11<211>14<212>prt<213>人工合成<400>11arglysalapheargargalailethrargprothrhisphe1510<210>12<211>14<212>prt<213>人工合成<400>12metvalaspproglnleuaspglyproglnleualaalaleu1510<210>13<211>14<212>prt<213>人工合成<400>13lysleuaspserproileilealaargilethraspthrval1510<210>14<211>14<212>prt<213>人工合成<400>14argleualaalaglnthralaleuleugluserglualaleu1510<210>15<211>14<212>prt<213>人工合成<400>15ilethrilealavalasnalaaspsermetalathrtrpphe1510<210>16<211>14<212>prt<213>人工合成<400>16argglulysprocysargalathrthralaglyileproleu1510<210>17<211>14<212>prt<213>人工合成<400>17leuleupheproalailetyrleualaaspseralaglnala1510<210>18<211>14<212>prt<213>人工合成<400>18alavalleuaspleuthrthrproglnalaargglualaval1510<210>19<211>14<212>prt<213>人工合成<400>19lysmetleuglualaalatyrargleuhisthrileaspval1510<210>20<211>14<212>prt<213>人工合成<400>20thralatyrgluglnargthrargproglyglnleuglnleu1510<210>21<211>14<212>prt<213>人工合成<400>21glyargtrpasnproproleuleupheproalailetyrleu1510<210>22<211>14<212>prt<213>人工合成<400>22arggluleualatyrservalgluthrthralagluserleu1510<210>23<211>14<212>prt<213>人工合成<400>23valsertrpthrargseralaleuseraspleuproargtrp1510<210>24<211>14<212>prt<213>人工合成<400>24leuseraspleuproargtrparggluproproglniletyr1510<210>25<211>14<212>prt<213>人工合成<400>25serleuphephealaserglyglnleuarggluleualatyr1510<210>26<211>14<212>prt<213>人工合成<400>26alaleuseraspleuproargtrparggluproproglnile1510<210>27<211>95<212>prt<213>esat-6<400>27metthrgluglnglntrpasnphealaglyileglualaalaalaser151015alaileglnglyasnvalthrserilehisserleuleuaspglugly202530lysglnserleuthrlysleualaalaalatrpglyglyserglyser354045glualatyrglnglyvalglnglnlystrpaspalathralathrglu505560leuasnasnalaleuglnasnleualaargthrileserglualagly65707580glnalametalaserthrgluglyasnvalthrglymetpheala859095<210>28<211>100<212>prt<213>cfp-10<400>28metalaglumetlysthraspalaalathrleualaglnglualagly151015asnphegluargileserglyaspleulysthrglnileaspglnval202530gluserthralaglyserleuglnglyglntrpargglyalaalagly354045thralaalaglnalaalavalvalargpheglnglualaalaasnlys505560glnlysglngluleuaspgluileserthrasnileargglnalagly65707580valglntyrserargalaaspglugluglnglnglnalaleuserser859095glnmetglyphe100<210>29<211>198<212>prt<213>esat-6-cfp-10<400>29metthrgluglnglntrpasnphealaglyileglualaalaalaser151015alaileglnglyasnvalthrserilehisserleuleuaspglugly202530lysglnserleuthrlysleualaalaalatrpglyglyserglyser354045glualatyrglnglyvalglnglnlystrpaspalathralathrglu505560leuasnasnalaleuglnasnleualaargthrileserglualagly65707580glnalametalaserthrgluglyasnvalthrglymetphealaasn859095valalametalaglumetlysthraspalaalathrleualaglnglu100105110alaglyasnphegluargileserglyaspleulysthrglnileasp115120125glnvalgluserthralaglyserleuglnglyglntrpargglyala130135140alaglythralaalaglnalaalavalvalargpheglnglualaala145150155160asnlysglnlysglngluleuaspgluileserthrasnilearggln165170175alaglyvalglntyrserargalaaspglugluglnglnglnalaleu180185190serserglnmetglyphe195當(dāng)前第1頁12