一種席夫堿鉑配合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及鉑（II)配合物，具體涉及一種席夫堿鉑（II)配合物及其制備方法和 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 近年來，癌癥已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類生命健康的主要疾病之一，在癌癥的最有效 治療過程中，鉑類抗癌藥物起著舉足輕重的作用，它們已經(jīng)成為癌癥化療中不可或缺的藥 物，然而，目前上市的鉑類藥物也存許多各種各樣的毒副作用，這些缺點限制了該類藥物更 廣泛的應(yīng)用，同時也促進了人們對鉑類抗癌藥物機理的深入研宄，通過尋找不同于經(jīng)典的 順鉑類藥物的可能的抗癌機理，對大量合成的具有新型結(jié)構(gòu)的抗癌鉑配合物進行深入研 宄，期望得到高效、低毒、水溶性好，選擇性高、與順鉑無交叉耐藥的候選藥物。
[0003] 眾所周知，以順鉑為主的傳統(tǒng)鉑類抗癌藥物的研宄大多是以DNA為作用靶點，然 而隨著生命科學(xué)技術(shù)的不斷深入，科學(xué)家們逐漸認(rèn)識到鉑配合物也可能通過作用于某些蛋 白抑制癌細胞的生長、繁殖。其中，蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPs)由于其活性異常與癌癥發(fā)生 和發(fā)展有著密切聯(lián)系，已經(jīng)成為目前抗癌藥物的一個新靶點。為此我們選擇具有較強生物 活性的席夫堿類化合物為配體合成結(jié)構(gòu)簡單的新型鉑（II)配合物，從全新的角度研宄了 該配合物對PTPs活性的抑制作用及其抗腫瘤效果，本發(fā)明鉑（II)配合物結(jié)構(gòu)在國內(nèi)外尚 未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種席夫堿鉑（II)配合物及其制備方法，以及該配合物 作為蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制劑的應(yīng)用，和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提供的一種席夫堿鉑（II)配合物，其化學(xué)式為：Pt[X-PMP] [DMS0]C1，其中 X-PMP = 4-X-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚（其中，X為Cl或者NO2)，其結(jié)構(gòu)式為：
[0006]
[0007] 本發(fā)明提供的一種席夫堿鉑（II)配合物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)合成4-X-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚配體（X為Cl或者NO2)(合成方法參 照：韓虹，山西大學(xué)碩士學(xué)位論文，2012，pll-pl2);
[0009] (2)合成 Pt (DMSO)2Cl2前體鉑配合物（合成方法參照：Jerold Η· Price，et. al. Inorganic Chemistry, 1972,11(6),1280-1284)；
[0010] (3)合成席夫堿鉑（II)配合物：按每毫摩爾反應(yīng)物加入50~IOOmL甲醇的量，將 4-X-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚配體溶于甲醇溶液中，向其中滴加摩爾量為該反應(yīng)物1~ 2倍的三乙胺，使其完全溶解，攪拌下，將與反應(yīng)物等摩爾量的Pt (DMSO) 2C12加入到上述反 應(yīng)溶液中，反應(yīng)溶液避光并且通N2保護，加熱回流反應(yīng)1~4小時，停止反應(yīng)，冷卻有沉淀 生成，抽濾，產(chǎn)物依次用水和甲醇各洗滌至少3次，真空干燥，得黃色固體粉末。
[0011] 步驟中所述的X為Cl或者no2。
[0012] 本發(fā)明制得的席夫堿鉑（II)配合物能夠有效地抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B，可以 用作高效的蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制劑；同時該類配合物具有較強的體外抑制腫瘤生長 的活性，在相同實驗條件下，抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖的能力強于順鉑，可以在制備抗腫 瘤藥物中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點和效果：本發(fā)明的席夫堿鉑（II)配合物制備方法簡單，原料易得， 成本較低，在一般化學(xué)實驗室均可完成，且生產(chǎn)過程對環(huán)境無污染；該配合物不僅能夠有效 地抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB活性，可作為高效的蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制劑，而且具有比 順鉑更強的抑制MCF-7細胞增殖的作用，可為腫瘤治療提供一種新的藥物開發(fā)途徑。
【附圖說明】
[0014] 圖1本發(fā)明席夫堿鉑（II)配合物抑制PTPlB活性的IC5tl值測定圖
[0015] 圖2本發(fā)明席夫堿鉑（II)配合物和順鉑分別對MCF-7細胞增殖的影響比較
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合附圖和實例對本發(fā)明作進一步說明。
[0017] 實施例1
[0018] 配合物的制備：
[0019] (1)配體4-X-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚（X為Cl或者NO2)按照文獻方法（韓 虹，山西大學(xué)碩士學(xué)位論文，2012, pll-pl2)制備。
[0020] (2)參 照文獻(Jerold H. Price, et. al. , Inorganic Chemistry, 1972, 11(6), 1280-1284)方法合成前體鉑配合物 Pt (DMSO) 2C12。
[0021] (3)合成本發(fā)明席夫堿鉑（II)配合物Pt[Cl-PMP] [DMS0]C1 :將 0· 5mmol (0· 116g)4-氯-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酷溶于50mL甲醇溶液，向其中滴加 0· 67mmol (100 μ L)三乙胺，使其完全溶解，攪拌下，將 0· 5mmol (0· 211g)的 Pt (DMSO)2Cl2 加入到上述反應(yīng)溶液中，反應(yīng)溶液避光并且通氮氣保護，加熱回流反應(yīng)1~4小時，停止反 應(yīng)后冷卻，抽濾，產(chǎn)物依次用蒸餾水和甲醇多次洗滌，真空干燥，得黃色固體粉末，產(chǎn)率約 為59%。元素分析測定結(jié)果為 ：C15H15Cl2N02PtS，括號內(nèi)為理論值（％) :C，33.58(33.40); H，2. 85 (2. 80) ;N, 2. 56 (2. 60)。部分紅外光譜數(shù)據(jù)（V /cm-1) : 3048 (C-H)，1608 (C = N)，1305 (C-O)，1126 (S = 0),668 (C-S) ,547 (Pt-N) ,450 (Pt-O);紫外光譜數(shù)據(jù)（λ/ nm):418, 307, 243。
[0022] 用0· 5mmol(0. 121g)4-硝基-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚代替 0. 5mmol (0. 116g)4-氯-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酷，在同樣條件下合成鉬（II)配合物 Pt[N02-PMP] [DMS0]C1，黃褐色固體產(chǎn)物，產(chǎn)率約為58%。元素分析結(jié)果按C15H15ClN 2O4PtS 計算：C，32. 91 (32. 76) ;H，2. 83 (2. 75) ;N，5. 14 (5. 09);部分紅外光譜數(shù)據(jù)（V / cnT1) :3035 (C-H)，1608 (C = N)，1321(00)，1132 (S = 0),704 (C-S)，562 (Pt-N), 443 (Pt-O); 紫外光譜數(shù)據(jù) UV ( λ /nm) : 414, 332, 204, 267。
[0023] 實施例2本發(fā)明配合物抑制PTPlB活性的測定
[0024] IC5tl即半數(shù)抑制濃度，是指被抑制酶的活性達到一半時所用抑制劑的濃度，IC 5Q值 的大小是抑制劑對酶活性抑制能力強弱的評判標(biāo)準(zhǔn)之一，該值越小表明抑制劑的抑制能力 就越強。IC 5tl測定實驗中以對硝基苯磷酸二鈉鹽（pNPP)為反應(yīng)底物，該底物在PTPlB催 化下易分解為黃色的對硝基苯酷（pNP)，而pNP在405nm處有較強紫外吸收，所以通過測定 該吸收值可以得知PTPlB作為催化劑已經(jīng)反應(yīng)的量，用該原理通過酶標(biāo)儀檢測得到一系列 405nm波長下的吸光度值，并利用Origin程序處理數(shù)據(jù)，擬合得到配合物抑制酶的IC 5tl值。
[0025] 具體的實驗步驟為：將83 μ L含PTPlB酶的MOPS緩沖溶液（50mM NaCl，20mM MOPS，pH = 7. 2)加入96孔板，再按照濃度梯度遞增依次加入10 μ L抑制劑，于37 °C恒 溫水浴鍋中反應(yīng)30min，然后用2yL pNPP(0. 1M)啟動反應(yīng)，待顏色梯度出現(xiàn)后用5yL Na0H(2mM)終止反應(yīng)，最后用酶標(biāo)儀測量其紫外吸收強度，處理數(shù)據(jù)得到配合物抑制 PTPlB活性的IC5tl值（附圖1)。從圖中可以看出本發(fā)明配合物Pt[Cl-PMP] [DMS0]C1和 Pt[N02-PMP] [DMS0]C1對PTPlB酶抑制的IC5tl值的范圍分別為0. 1~0. 5和3~7 μΜ，其 中Pt [Cl-PMP] [DMSO] Cl對PTPlB酶的抑制能力是順鉑（IC5tl為0· 6~3. 7 μ Μ)對PTPlB抑 制能力的6倍左右，由此可見，該類席夫堿配合物能夠有效地抑制PTPlB活性，而且不同結(jié) 構(gòu)的席夫堿鉑（II)配合物對PTPs活性的抑制能力不同。
[0026] 實施例3本發(fā)明席夫堿鉑配合物體外抗腫瘤活性測定
[0027] 將人乳腺癌細胞（1?^-7)在含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基中37°〇、5%〇)2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)，用MTT法檢測了本發(fā)明席夫堿鉑（II)配合物對腫瘤細胞MCF-7增殖的影響，同時 以順鉑為陽性對照，分析比較了相同條件下這兩種配合物與順鉑抑制MCF-7增殖的能力。 實驗取對數(shù)生長期的MCF-7細胞經(jīng)消化、離心收集后配制成ImL的細胞懸液，由血球計數(shù) 板測得細胞懸液內(nèi)的細胞個數(shù)，取適量體積的該細胞懸液將其稀釋成細胞密度約為I X KT4 個/mL的細胞懸液，均勻接種于96孔板，每孔200 μ L，將96孔板放置在CO2培養(yǎng)箱中孵 化，至細胞單層鋪滿孔低，加入7個濃度梯度的席夫堿鉑（II)配合物，每組設(shè)6個復(fù)孔。 細胞繼續(xù)在CO 2培養(yǎng)箱中孵化48小時后，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，然后每孔加入 20 μ LMTT (5mg/mL)溶液，繼續(xù)孵育4小時，小心吸去上清液，每孔加入150的DMSO溶液，振 蕩lOmin，待底部藍色結(jié)晶狀固體完全溶解，用酶標(biāo)儀測得各孔溶液490nm處的吸光度值A(chǔ)。 以藥物濃度為橫坐標(biāo)，細胞存活率為縱坐標(biāo)繪制細胞生長曲線。
[0028] 細胞存活率（％ ) = (A實驗組/A對照組）X 100
[0029] 附圖2為相同濃度梯度的席夫堿鉑（II)配合物（Pt [Cl-PMP] [DMSO] Cl和 Pt [NO2-PMP] [DMSO] Cl)和順鉑分別與MCF-7作用48小時后，它們抑制腫瘤細胞增殖情況的 比較，實驗結(jié)果表明，本發(fā)明席夫堿鉑（II)配合物對人乳腺癌細胞（MCF-7)有顯著的抑制 作用，它們抑制MCF-7細胞增殖的IC 5tl值分別為0. 31~0. 41和0. 26~0. 87 μΜ，抑制效 果明顯優(yōu)于順鉑（IC5tl= 1. 43~9. 56 μΜ)，因此，本發(fā)明的鉑類配合物可用作預(yù)防和治療 乳腺癌的潛在藥物。
【主權(quán)項】
1. 一種席夫堿鉑（II)配合物，其特征在于，結(jié)構(gòu)式為：2. 如權(quán)利要求1所述的一種席夫堿鉑（II)配合物的制備方法，其特征在于，包括如下 步驟： (1) 合成4-X-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚配體，X=C1或者N02; (2) 合成Pt(DMSO)2Cl，體鉑配合物； (3) 合成席夫堿鉑（II)配合物：稱取一定量反應(yīng)物4-X-2-[(苯基亞胺）甲基]-苯酚 溶于甲醇溶液中，向其中滴加摩爾量為該反應(yīng)物1~2倍的三乙胺，使其完全溶解，攪拌下， 將與反應(yīng)物等摩爾量的前體鉬配合物Pt(DMSO) 2(：12加入到上述反應(yīng)溶液中，反應(yīng)溶液避光 并且通氮氣保護，加熱回流反應(yīng)1~4小時，停止反應(yīng)，冷卻有沉淀生成，抽濾，產(chǎn)物依次用 水和甲醇各洗滌至少3次，真空干燥得固體粉末產(chǎn)品。3. 如權(quán)利要求1所述的席夫堿鉑（II)配合物作為蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的應(yīng) 用。4. 如權(quán)利要求1所述的席夫堿鉑（II)配合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種席夫堿鉑(II)配合物及其制備方法，以及該配合物的應(yīng)用。本發(fā)明席夫堿鉑(II)配合物化學(xué)式為：Pt[X-PMP][DMSO]Cl，其中X-PMP＝4-X-2-[(苯基亞胺)甲基]-苯酚(X＝Cl或者NO2)。其制備方法：稱取反應(yīng)物X-PMP溶于甲醇溶液中，向其中滴加摩爾量為該反應(yīng)物1～2倍的三乙胺，攪拌下，將與X-PMP等摩爾量的Pt(DMSO)2Cl2加入到上述反應(yīng)溶液中，反應(yīng)溶液避光且通氮氣保護，加熱回流反應(yīng)1～4小時，析出固體產(chǎn)物。本發(fā)明配合物制備方法簡單，原料易得，成本較低。生物活性實驗檢測表明，該配合物不僅能夠有效抑制可作為抗腫瘤藥物靶點的PTP1B活性，而且對乳腺癌細胞增殖有顯著的抑制作用，可在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。
【IPC分類】A61P35/00, C07F15/00
【公開號】CN104910212
【申請?zhí)枴緾N201510229474
【發(fā)明人】袁彩霞, 盧麗萍, 朱苗力, 吳艷波
【申請人】山西大學(xué)
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月7日