一種d?亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種D?亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用，其特征在于：用1,3?偶極環(huán)加成方法在D?亮氨酸取代去甲斑蝥素結構中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應導入色酮結構，合成含有色酮結構的吡唑類D?亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物對于腫瘤細胞株具有良好的抑制作用，其中對于白血病細胞具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業(yè)應用前景。
【專利說明】
一種D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用
技術領域：
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體是涉及一種含有色酮結構的吡唑類D-亮氨酸取代 去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用。
【背景技術】：
[0002] D-亮氨酸取代去甲斑蝥素，化學結構式如下：
[0003] Η ~
[0004] D-亮氨酸取代去甲斑蝥素 R = (R) _CH2CH (CH3) 2;
[0005] 1，3-偶極環(huán)加成反應以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物 最主要的方法，也是雜環(huán)藥物化學研究中較為活躍的一類反應。近幾年來，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關注。所以，無論是從藥理學還是從合 成角度考慮，這類雜環(huán)化合物都有很高的合成價值。

【發(fā)明內容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術方案如下：
[0008] -種D-亮氨酸取代去甲斑螯素衍牛物，其結構式如下：
[0009]
[0010]式中：I 〇[0011] 該化合物相關實驗數據如下：
[0012]
[0013] 〇
[0014]
【申請人】經研究發(fā)現:在D-亮氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎上導入了 色酮的結構可以改變藥理活性。通過進一步實驗確定:使用色酮衍生物在吡唑的結構上進 行取代，對D-亮氨酸取代去甲斑蝥素進行結構改造，制備的含色酮結構吡唑類D-亮氨酸取 代去甲斑蝥素衍生物，具有非常好的藥物活性。
[0015] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制備方法， 其特征在于，包括以下步驟：
[0016] (1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0017] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0018] (2)、D-亮氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0019] 將去甲去氫斑蝥素4.2克(25mmol)和D-亮氨酸3.28克(25mmo 1)加入經過分子篩干 燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和氯 化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋干， 用乙酸乙酯重結晶得白色固體產物(化合物3);
[0020] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0021] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得黃紅 色針狀產物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產物6-溴代色酮苯腙(化合物4);
[0022] (4)、導入色酮結構：
[0023] 將lmmol D-亮氨酸取代去甲斑蝥素和1. lmm〇16-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再 加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀 用甲醇重結晶，真空干燥后得到產物D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物(化合物5)。
[0024]本發(fā)明涉及的反應如下：
[0025]
[0026] 本發(fā)明的第三方面目的是提供一種D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫 瘤藥物方面的應用。通過實驗驗證:上述化合物，對于不同瘤株如人肝癌細胞、口腔癌細胞、 胃癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞、腸癌細胞等，具有抑制作用，其中對于HL60 (白血病細 胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗腫 瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應用前景。
[0027]本發(fā)明的有益效果如下：
[0028]
【申請人】通過研究發(fā)現:在D-亮氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎上導入 了色酮的結構，產生的衍生物，具有良好的藥物活性，經進一步實驗及分析，研究不同雜環(huán) 在同一分子中聚集而對藥理活性所產生的影響，用1，3-偶極環(huán)加成方法在D-亮氨酸取代去 甲斑蝥素結構中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應導入色酮結構，合成含有色酮結構 的吡唑類D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物在制備抗腫瘤藥物方面，具有非常好 的工業(yè)應用前景。
【具體實施方式】：
[0029] 以下結合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但實施例不應解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
[0030] 實施例1:
[0031] (1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0032] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1); [0033] (2)、D-亮氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0034] 將去甲去氫斑蝥素4.2克(25mmol)和D-亮氨酸3.28克(25mmo 1)加入經過分子篩干 燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和氯 化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋干， 用乙酸乙酯重結晶得白色固體產物(化合物3);
[0035] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0036]取2mmol的苯肼加入盛有10mL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩 慢滴加入20mL溶有2mmo 1 6-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴 鹽酸，有淡黃色沉淀出現。連續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色 沉淀顏色變深，抽濾得黃紅色針狀產物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產物6-溴代色酮 苯腙(化合物4)。
[0037] (4)、導入色酮結構：
[0038] 將lmmol D-亮氨酸取代去甲斑蝥素和1. lmm〇16-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再 加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀 用甲醇重結晶，真空干燥后得到產物(化合物5)。
[0039] 化合物5名稱:D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物；
[0040] 化學式:C3〇H25BrN3〇7;
[0041 ] 物化參數:黃色結晶，產率57 · 6%，πκ ρ · 128-130°C ;
[0042] 結構確認：
[0043] ΧΗ NMR(CD30D)5：7.34-7.18(m,8H,Ar-H) ,6.47(s, 1H,C = C-H) ,5.16(d, J = 9.60Hz,lH,H5) ,4.74(d,J= 17.60Hz, 1H,H4) ,4.56(d,J= 17.60Hz, 1H,HI) ,4.02(d,J = 9.60Hz,lH,H6),3.43(d ,J = 7.20Hz,lH,H3),3.30(d ,J = 7.20Hz,lH,H2),2.00-2.07(m,lH, CH), 1.30-1.35(m,lH,Hiof CH2), 1.58-1.70(m, lH,H2of CH2), 0.75-0.79(dd, 6H, J = 2.4Hz,6.8Hz,2CH3)；
[0044] IR 3415(N-C = 0) ,3085(ArH), 1700(C = 0), 1541(C = N), 1309(C-〇-C)cm_1 ；
[0045] m/e :618( 100.0% ), 620(97.5%)；
[0046] Anal.calcd.for C3〇H25BrN3〇7:C，58.19;H，4.07;N，6.75 〇
[0047] 應用實施例:采用MTT法檢測受試化合物對不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0048] 將上述實施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株（腫瘤細胞Bel-7402、KB、 SGC7901、H08901、HL-60、ECA109)為實驗對象，測試化合物（5)對于不同瘤株的體外抑制作 用:實驗采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法），活性用半數抑制濃度表示（IC 50)。
[0049] 具體實驗步驟如下：
[0050] 將化合物5用DMS0溶解，稀釋，腫瘤細胞Bel-7402(人肝癌細胞）、KB(口腔癌細胞）、 SGC7901(胃癌細胞）、H08901 (卵巢癌細胞）、HL-60(白血病細胞）、ECA109(腸癌細胞)在96孔 板上種入4000個/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μΜ，共 同于37°C、5 %C02細胞培養(yǎng)箱中孵育72小時，以DMS0(1 % )為空白對照。72小時后，加入終濃 度為0.25mg/mL的MTT，置于37 °C、5 % C02細胞培養(yǎng)箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入100μ 1 DMS0，用酶聯免疫儀于570nm處測定吸光度(0D值），所得數據用于計算IC5Q值。不同濃度的 受試化合物用96孔板進行粗篩，根據所得的抑制率，計算IC 5Q值，結果見下表。
[0051] 表1、D-亮氨酸取代去甲斑蝥素衍生物對六種腫瘤細胞株的IC5〇值。
[0052]
〇
[0053]通過上表數據可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對于多種腫瘤細胞株具有抑制作 用，其中對于HL60(白血病細胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨制備抗腫瘤藥物、也 可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應用前景。
【主權項】
1. 一種0 -亮氨酸取代去甲斑莖素衍生物，其結構式如下：2. -種0 -亮氨酸取代去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征在于，包括W下步驟:將 順下締二酸酢和乙酸反應合成去甲去氨斑莖素，去甲去氨斑莖素和0 -亮氨酸反應合成0 - 亮氨酸取代去甲斑莖素，然后采用6-漠代色酬與苯阱脫水反應合成6-漠代色酬苯腺，最后 將0 -亮氨酸取代去甲斑莖素和6-漠代色酬苯腺進行偶極加成反應，合成0 -亮氨酸取代去 甲斑莖素衍生物。3. 根據權利要求2所述的一種0 -亮氨酸取代去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征在 于，包括W下步驟： (1 )、去甲去氨斑莖素的合成： 將順下締二酸酢研細，加入乙酸，室溫條件下攬拌至溶解，滴入巧喃，室溫攬拌24~48小 時，巧喃與順下締二酸酢發(fā)生Diels-Alder反應，制得去甲去氨斑莖素； (2) 、0 -亮氨酸取代去甲斑莖素的合成： 將去甲去氨斑莖素4.2克和0 -亮氨酸3.28克加入經過分子篩干燥的DMF溶劑15毫升 中，攬拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙醋60毫升稀釋，飽和氯化錠溶液洗涂6次，每 次30毫升，有機相用無水硫酸儀干燥，過濾后的有機相減壓蒸饋旋干，用乙酸乙醋重結晶得 白色固體產物； (3) 、6-漠代色酬苯腺的合成： 取2mmol的苯阱加入盛有l(wèi)OmL四氨巧喃的燒瓶中，沸水浴回流攬拌至溶解，然后緩慢滴 加入20mL溶有2mmol 6-漠代色酬的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攬拌比，滴加10滴鹽酸， 有淡黃色沉淀出現;連續(xù)沸水浴回流攬拌化，停止水浴，加人20mL蒸饋水攬拌，淡黃色沉淀 顏色變深，抽濾得黃紅色針狀產物；用無水乙酸沖洗多次，真空干燥得產物6-漠代色酬苯 腺； (4) 、導入色酬結構： 將Immol 0 -亮氨酸取代去甲斑莖素和l.lmmoie-漠代色酬苯腺于20mL乙醇中，再加入 1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀用甲 醇重結晶，真空干燥后得到產物0 -亮氨酸取代去甲斑莖素衍生物。4. 一種0 -亮氨酸取代去甲斑莖素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應用。
【文檔編號】C07D493/22GK106083884SQ201610545166
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月6日
【發(fā)明人】鄧莉平, 王瑋, 陳國慶, 楊群, 高曉忠, 周玉波, 胡純琦, 吳春雷, 沈潤溥, 吳永華
【申請人】紹興文理學院