一種與人表皮生長(zhǎng)因子受體iii型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子及其應(yīng)用。本發(fā)明的核酸適配子其核苷酸序列如SEQIDN0:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的任意一種。本發(fā)明的與EGFRvIII特異性結(jié)合的核酸適配子僅特異性地結(jié)合U87A細(xì)胞系，而不與U87細(xì)胞系結(jié)合，因此可有效地應(yīng)用于制備診斷表達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞的傳感器或試劑盒，此外，還可以作為一個(gè)攜帶抗表達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞藥物或siRNA的載體進(jìn)入表達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞或組織中，具有靶向的作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種與人表皮生長(zhǎng)因子受體M I型突變體特異性結(jié)合的核 酸適配子及其應(yīng)用
[0001] 本發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)是申請(qǐng)日為：2013年05月07日，申請(qǐng)?zhí)枺?01310165292. X，發(fā)明 名稱(chēng)為：一種與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子及其應(yīng)用的分 案申請(qǐng)。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特 異性結(jié)合的核酸適配子及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0003] 指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技術(shù)是20世紀(jì)90年代初研制的一種新的組合化學(xué)技術(shù)，由美國(guó)的 Gold和Ellington等受組合化學(xué)等的啟發(fā),構(gòu)建的一種新型的體外篩選技術(shù)[η],通過(guò)該技 術(shù)篩選獲得的寡核苷酸被稱(chēng)為適配體（aptamer)。它通過(guò)在體外合成大容量的隨機(jī)寡核苷 酸文庫(kù)，結(jié)合體外PCR擴(kuò)增技術(shù)，與靶分子經(jīng)過(guò)多輪篩選，獲得高親和力、特異性強(qiáng)的寡核 苷酸適配子（aptamer)，其靶分子包括金屬離子、藥物、氨基酸、堿基類(lèi)似物、核苷酸和多肽 等，其中蛋白質(zhì)類(lèi)靶分子最多，包括酶、生長(zhǎng)因子、抗體、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞粘附分子和選擇素 等+ 5]。這種篩選方法具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，與其他組合化學(xué)庫(kù)如隨機(jī)肽庫(kù)、抗體庫(kù) 等文庫(kù)相比，從寡核苷酸文庫(kù)中篩選出的適配子具有更高的親和力和特異性，具有良好的 應(yīng)用前景。Cell-SELEX技術(shù)是在SELEX技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展來(lái)的，可以在篩選細(xì)胞特定靶分 子未知的條件下進(jìn)行篩選，大大提高了細(xì)胞篩選的效率和靶標(biāo)的范圍。與傳統(tǒng)的SELEX技 術(shù)相比，以完整細(xì)胞為靶分子的SELEX具有如下一些優(yōu)點(diǎn)：1)篩選的靶分子范圍廣，可以使 蛋白、肽、完整的細(xì)胞和細(xì)菌病原體，甚至在臨床的病理組織切片也可以直接作為靶分子進(jìn) 行篩選 [6] ;2)可以對(duì)多個(gè)靶分子同時(shí)進(jìn)行篩選，同步并行的篩選方法將大大的提高工作效 率，縮短篩選周期[7] ;3)細(xì)胞中的蛋白質(zhì)可以保持其天然的構(gòu)像，而非孤立的純化蛋白，因 此能夠更真實(shí)地反應(yīng)出蛋白的一些特性[8] ;4)消減策略的引進(jìn)使篩選到的適配體結(jié)合特 異性更強(qiáng)，通過(guò)反向SELEX篩選，可以有效減弱甚至消除既與靶分子結(jié)合又與靶分子類(lèi)似 物的結(jié)合的寡核苷酸配基，從而篩選出高度特異性結(jié)合靶分子的適配體 [9]。
[0004] 在腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)部存在許多相同的成分和差異分子，以完整 細(xì)胞為靶分子的SELEX技術(shù)可以篩選出能區(qū)別兩個(gè)高度同源但有微小差異的靶組織或完 整靶細(xì)胞的特異性寡核苷酸配基。篩選獲得的適配體不僅可以作腫瘤特異性診斷或?qū)蛑?療，而且還可以用于腫瘤特異性標(biāo)志物的鑒別和釣取 [1°]。因此應(yīng)用Cell-SELEX技術(shù)和消減 SELEX技術(shù)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的靶標(biāo)篩選和研究對(duì)膠質(zhì)瘤的臨床診斷和治療及腫瘤基礎(chǔ)研究有 很大的應(yīng)用價(jià)值和前景。
[0005] 膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)惡性腫瘤，由于腫瘤呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，傳統(tǒng)治療方法包括手術(shù)切 除、放疔和化療，其效果極為有限，神經(jīng)膠質(zhì)瘤在顱內(nèi)各種腫瘤中最為多見(jiàn)。神經(jīng)膠質(zhì)瘤簡(jiǎn) 稱(chēng)膠質(zhì)瘤，發(fā)生于神經(jīng)外胚層的腫瘤，可分為兩類(lèi)，一類(lèi)由間質(zhì)細(xì)胞形成，稱(chēng)為膠質(zhì)瘤；另 一類(lèi)由實(shí)質(zhì)細(xì)胞形成，稱(chēng)神經(jīng)元腫瘤。由于從病原學(xué)與形態(tài)學(xué)上還不能將這兩類(lèi)腫瘤完全 區(qū)別，起源于間質(zhì)細(xì)胞的膠質(zhì)瘤又比起源于實(shí)質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)元腫瘤常見(jiàn)得多，所以將神經(jīng) 元腫瘤包括在膠質(zhì)瘤中，統(tǒng)稱(chēng)為膠質(zhì)瘤。各型膠質(zhì)瘤中，以星形細(xì)胞瘤最多，其次為膠質(zhì)母 細(xì)胞瘤，其后依次為髓母細(xì)胞瘤、室管膜瘤、少枝膠質(zhì)瘤、松果體瘤、混合性膠質(zhì)瘤、脈絡(luò)叢 乳頭狀瘤、未分類(lèi)膠質(zhì)瘤及神經(jīng)元性腫瘤。各型膠質(zhì)瘤的好發(fā)部位不同，如星形細(xì)胞瘤成人 多見(jiàn)于大腦半球，兒童則多發(fā)在小腦；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤幾乎均發(fā)生于大腦半球；髓母細(xì)胞瘤 發(fā)生于小腦蚓部；室管膜瘤多見(jiàn)于第4腦室；少枝膠質(zhì)瘤大多發(fā)生于在腦半球。男性較多見(jiàn) 以腦膠質(zhì)瘤，特別是在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤，男性明顯多于女性。各型膠質(zhì)母 細(xì)胞瘤多見(jiàn)于中年，室管膜瘤多見(jiàn)于兒童及青年，髓母細(xì)胞瘤幾乎都發(fā)生在兒童。膠質(zhì)瘤大 多緩慢發(fā)病，自出現(xiàn)癥狀至就診時(shí)間一般為數(shù)周至數(shù)月，少數(shù)可達(dá)數(shù)年。膠質(zhì)瘤的診斷，根 據(jù)其生物學(xué)特征、年齡、性別、好發(fā)部位及臨床過(guò)程進(jìn)行分析，在病史及體征基礎(chǔ)上，采用電 生理、超聲波、放射性核素、放射學(xué)及核磁共振等輔助檢查，定位正確率幾乎是100%，定性 診斷正確率可在90%以上。星形性膠質(zhì)瘤在人類(lèi)腫瘤中是最?lèi)盒缘哪X腫瘤，雖然在美國(guó)它 的發(fā)病率在所有癌癥中所占比例僅僅1. 35% [11]，但是自診斷之后僅有12個(gè)月的存活期，使 得膠質(zhì)瘤成為了癌癥中最有侵略性的一種腦腫瘤[12]。膠質(zhì)瘤占所有腦腫瘤的70%，其中多 形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤預(yù)后極差，其五年存活率不到3% [12]。傳統(tǒng)的治療方法受到放射治療的 劑量、血腦屏障對(duì)藥物的不通透性等多種因素的影響，療效受到明顯限制 [13]。
[0006]表皮生長(zhǎng)因子受體（epidamal growth factor receptor, EGFR)在膠質(zhì)瘤等 多種惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)，并與腫瘤惡性程相關(guān)，然而EGFR表達(dá)也見(jiàn)于正常組織，并存在 多種EGFR突變體，限制了以EGFR為靶標(biāo)的抗腫瘤治療。EGFR基因擴(kuò)增、突變及重排 常見(jiàn)于GBM，可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和治療抗性。EGFRv III (epidamal growth factor rec印tor-variant III)是EGFR最常見(jiàn)的突變體，約占人類(lèi)GBM 50%，為EGFR的胞外區(qū)2-7 外顯子產(chǎn)生框內(nèi)缺失而形成，胞外段缺失了 267個(gè)氨基酸而喪失了與配體結(jié)合的能力，但 其胞內(nèi)段隔氨酸激酶仍然保持組成性激活，導(dǎo)致內(nèi)化和降解過(guò)程的減弱，產(chǎn)生持續(xù)的下游 信號(hào)傳導(dǎo)，致使其瘤性顯著增強(qiáng) [14'15]。這種突變體只在腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)，而在正常細(xì)胞中 不出現(xiàn)，因此是一個(gè)很好的腫瘤治療靶標(biāo) [14]。目前針對(duì)EGFRv III的靶向治療研究主要包括 開(kāi)發(fā)下游信號(hào)傳導(dǎo)分子特異性抑制劑、EGFRv III特異性抗體、腫瘤疫苗，EGFRv III特異性核 酶等[16, 17]。
[0007] 寡核苷酸適配子已經(jīng)有效的應(yīng)用于臨床靶標(biāo)治療[1&2° ]、檢測(cè)和診斷等[21%]。2005 年第一個(gè)適配子的藥物"Mucagen"已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)上市，諸如對(duì)核仁蛋白有特殊效果的適 配子AS1411應(yīng)用于臨床試驗(yàn)中[25]，目前核酸適配子在基礎(chǔ)研究、臨床研究、藥物開(kāi)發(fā)中的 應(yīng)用在不斷地增多 [26_29]。目前已有很多應(yīng)用Cell-SELEX方法篩選的適配子應(yīng)用在臨床的 例子，如Tang等用Cell-SELEX技術(shù)篩選出能識(shí)別牛痘病毒感染的A549細(xì)胞的核酸適配 子，它不僅能識(shí)別病毒感染的細(xì)胞，而且能識(shí)別細(xì)胞質(zhì)膜上的病毒修飾成分，該適配子的成 功開(kāi)發(fā)有助于對(duì)病毒感染細(xì)胞的分子標(biāo)志的理解 [3°]，有學(xué)者利用EGFR和其RNA適配子的 特異性結(jié)合將金納米粒傳遞到腫瘤細(xì)胞內(nèi)，為適配子作為運(yùn)載體的進(jìn)一步研究提供了證據(jù)
[31]，隨著SELEX技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的針對(duì)腫瘤細(xì)胞相關(guān)蛋白的核酸適配子已被篩選出， 并應(yīng)用于臨床腫瘤的診斷中[32]。寡核苷酸適配子而且在靶分子存在時(shí)，發(fā)生適應(yīng)性折疊， 與靶分子形成穩(wěn)定性復(fù)合物[33]。適配子有很多優(yōu)點(diǎn)：體外篩選易人工合成；靶分子范圍廣； 高親和力；高特異性；易于修飾；分子量小，穩(wěn)定性好，易保存運(yùn)輸[34^];應(yīng)用范圍廣，小至 RNA分子[4°]、細(xì)胞因子[41]，大到細(xì)胞[42]，都能篩選其適配子。SELEX技術(shù)發(fā)展迅速，出現(xiàn)了組 織切片 SELEX[43] (tissue slide-based SELEX)、復(fù)合革巴SELEX[44](com_plex target SELEX)、 基因組SELEX[45] (genomic SELEX)等很多形式，適配子的應(yīng)用將隨著SELEX技術(shù)的發(fā)展而更 加廣泛。
[0008] 188Re (錸，rhenium)具有非常優(yōu)良的核性質(zhì)，分別以79%和20%的幾率發(fā)射最大 能量為2. IlMeV和1.97MeV的β射線(xiàn)，同時(shí)伴隨有十分適于顯像的155keVY射線(xiàn)。其半衰 期為16. 9h，可防止高的β能量對(duì)骨髓等正常組織可能引起的損傷[46]，并可采用多次給藥 的方式以提高療效 [47]。雖然188Re和9°Υ具有類(lèi)似的β能量，但是并沒(méi)有觀察到像9°Υ那樣 沉積在骨髓中引起嚴(yán)重的骨髓抑制現(xiàn)象 [48]。因此188Re是理想的治療用放射性核素[49_52]。 目前很多有關(guān) 188Re標(biāo)記的成功應(yīng)用在臨床的例子，如段小藝等[53]研究了 188Re誘導(dǎo)乳腺 癌ER-75-30細(xì)胞凋亡及其與bcl-2和bax基因表達(dá)的關(guān)系，結(jié)果表明 188Re能誘導(dǎo)乳腺癌 ER-75-30細(xì)胞凋亡；邊惠潔等[54]探討188Re-P射線(xiàn)內(nèi)照射對(duì)人肝癌細(xì)胞HCC的細(xì)胞周期 阻斷及誘導(dǎo)凋亡的作用，結(jié)果顯示 188Re導(dǎo)致的HCC細(xì)胞死亡具有典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特 征；王明智等[55]觀察了不同輻射劑量 188Re對(duì)食管癌ECA109細(xì)胞的輻射作用，發(fā)現(xiàn)低輻射 劑量（0· 1?7. OGy)的188Re具有細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，較高劑量（>8Gy)表現(xiàn)出對(duì)ECA109細(xì) 胞明顯滅活效應(yīng)。 188Re標(biāo)記的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物可縮小腫瘤體積，延長(zhǎng)荷瘤動(dòng)物生存時(shí)間。動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)表明，荷瘤鼠內(nèi)或胸膜內(nèi)注射7. 4MBq188Re直接標(biāo)記的生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物RC-160療效 顯著[56]。小鼠靜脈注射11?33MBq另一種生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物 188Re_P2045后，腫瘤的生長(zhǎng)收 到明顯的抑制[57]。又有研究表明利用磁性納米微粒作為腫瘤治療藥物的載體可將 188Re及 標(biāo)記藥物定向引入病灶，提高療效[58]。也有很多例子表明瘤內(nèi)注射188Re標(biāo)記的藥物在裸鼠 荷瘤動(dòng)物模型上對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有一直作用，如閔小峰等 [59]將188Re-硫化錸混懸液注射到荷瘤 小鼠肉瘤中，約80%?90%放射性積聚于腫瘤內(nèi)，有效的抑制腫瘤生長(zhǎng)，并無(wú)明顯的副作 用，對(duì)骨髓無(wú)明顯的影響；于俊峰等 [6°]瘤內(nèi)注射治療肝癌的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明188Re在腫瘤內(nèi)滯 穩(wěn)定性良好； 188Re的放射性在腫瘤內(nèi)的高保持率表明腫瘤內(nèi)直接注射核素188Re制劑將是 一種很有希望的肝癌治療方法[ 61]。Macugen(Pegaptanibsodium)是目前唯一通過(guò)FDA批準(zhǔn) 在臨床使用的適配子藥物。此藥經(jīng)過(guò)美國(guó)Eyetech和Pfizer制藥公司15年的研制，于2004 年12月獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，選擇性拮抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)，用于治療年齡依賴(lài) 性黃斑變性，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病及視網(wǎng)膜靜脈閉塞性有治療作用 [62]。最近有研究表明，適 配子在阿爾茨海默病、腦腫瘤、重癥肌無(wú)力等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病上有很前景的應(yīng)用。諸多例 子表明 188Re藥物或者核酸技術(shù)及臨床應(yīng)用已經(jīng)很成熟，適配子在基礎(chǔ)研究、疾病診療與新 藥研發(fā)等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體 (EGFRvIII)特異性結(jié)合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
[0010] 本發(fā)明的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體（EGFRvIII)特異性結(jié)合的核酸適 配子或其化學(xué)修飾物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4所示的任意一種。
[0011] 所述的化學(xué)修飾物是在上述核酸適配子中包括的至少一個(gè)核苷酸的核糖2'位上 的羥基被氫原子、氟原子、-0-?；桶被腥我庖环N所取代，以及在3'端或5'端加入FCM、 FITC、biotin的任意修飾。
[0012] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié) 合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物在制備診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的 腫瘤細(xì)胞的傳感器或試劑盒中的應(yīng)用。
[0013] 所述的腫瘤細(xì)胞，優(yōu)選為人星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞。
[0014] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié) 合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物作為藥物遞送載體在制備抗過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體 III型突變體的腫瘤細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 所述的腫瘤細(xì)胞，優(yōu)選為人星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞。
[0016] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體 的腫瘤細(xì)胞的傳感器，其特征在于，所述的傳感器上固定有與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型 突變體特異性結(jié)合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
[0017] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體 的腫瘤細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中含有與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突 變體特異性結(jié)合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
[0018] 本發(fā)明的第六個(gè)目的是提供一種過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的腫 瘤細(xì)胞的特異性的藥物遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述的藥物遞送系統(tǒng)包含與人表皮生長(zhǎng)因 子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
[0019] 本發(fā)明首先針對(duì)過(guò)表達(dá)EGFR的U87-EGFRV III細(xì)胞，應(yīng)用Cell-SELEX技術(shù)篩選適 配子，并對(duì)其與細(xì)胞的特異性結(jié)合進(jìn)行鑒定，然后發(fā)現(xiàn)所篩選的適配子具有一定的特異性， 而且結(jié)合部位在細(xì)胞核外部位，最后我們篩選到了特異性及其他方面比較好的4個(gè)適配子 U2、U8、U19、U31，其核苷酸序列分別如 SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3 和 SEQ ID N0:4所示。經(jīng)過(guò)共聚焦顯微鏡檢測(cè)4個(gè)適配子U2、U8、U19、U31能與U87 Λ細(xì)胞系有特異 性結(jié)合，與U87細(xì)胞系沒(méi)有結(jié)合，再經(jīng)Pull-down實(shí)驗(yàn)和免疫印跡法鑒定，這4個(gè)適配子U2、 U8、U19、U31可特異性結(jié)合EGFRvIII蛋白。再通過(guò)在荷瘤裸鼠動(dòng)物模型上對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑 瘤效果研究說(shuō)明4個(gè)適配子U2、U8、U19、U31具有抑瘤效果。再經(jīng)放射性 188Re標(biāo)記檢測(cè)其 生物學(xué)分布、代謝性及靶向性說(shuō)明其和U87 △細(xì)胞系特異性結(jié)合且親和力較強(qiáng)。
[0020] 本發(fā)明的與EGFRvIII特異性結(jié)合的核酸適配子僅特異性地結(jié)合U87 Λ細(xì)胞系，而 不與U87細(xì)胞系結(jié)合，因此可有效地應(yīng)用于制備診斷表達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞的傳感器或 試劑盒，此外，還可以作為一個(gè)攜帶抑制EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞藥物或siRNA的載體進(jìn)入表 達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞或組織中，具有靶向的作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1是本發(fā)明的特異性地結(jié)合過(guò)表達(dá)EGFRvIII膠質(zhì)瘤細(xì)胞或組織的適配子的篩 選過(guò)程的示意圖，第四輪引入反篩細(xì)胞U87MG，靶細(xì)胞結(jié)合的文庫(kù)被加熱裂解下來(lái)作為PCR 擴(kuò)增的dsDNA ;
[0022] 圖2是PCR擴(kuò)增雙鏈dsDNA和鏈霉親和素磁珠分離單鏈ssDNA目的條帶，其中A : PCR擴(kuò)增雙鏈 dsDNA 聚丙烯酰胺電泳圖，I :pUC18DNA/Mspl/Marker ;2 :8cycle ;3 :10cycle ; 4 :12cycle ;5 :14cycle ;6 :16cycle ;7 :18cycle。B :鏈霉親和素磁珠分離單鏈 ssDNA 尿素 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳圖；1 :3μ L ;2 :2μ L ;3 :1μ L ;4 :5μ L :5 :原庫(kù)ssDNA ;6:Marker.
[0023] 圖3是根據(jù)圖1所示的示意圖，在Cell-SELEX法第11輪中所篩選的適配子的測(cè) 序結(jié)果；
[0024] 圖4篩選過(guò)程中文庫(kù)富集情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的第3、第5、第11輪文庫(kù)的富集 情況；
[0025] 圖5是Cell-SELEX各輪篩選的ssDNA亞文庫(kù)對(duì)U87 Λ細(xì)胞系和U87細(xì)胞系的結(jié) 合力流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果圖；
[0026] 圖6是FITC標(biāo)記的適配子U2、U8、U19、U31對(duì)U87細(xì)胞系和U87A細(xì)胞系的 結(jié)合特異性及結(jié)合位點(diǎn)共聚焦顯微鏡檢測(cè)結(jié)果圖；U2A圖.FITC標(biāo)記的適配子U2和靶 細(xì)胞U87-EGFRvIII結(jié)合圖；U2B圖.FITC標(biāo)記適配子U2和反篩細(xì)胞U87-MG結(jié)合圖；U8A 圖.FITC標(biāo)記適配子U8和靶細(xì)胞U87-EGFRv III結(jié)合圖；U8B圖.FITC標(biāo)記適配子U8和 反篩細(xì)胞U87-MG結(jié)合圖；U19A圖.FITC標(biāo)記適配子U19和靶細(xì)胞U87-EGFRv III結(jié)合圖； U19B圖.FITC標(biāo)記適配子U19和反篩細(xì)胞U87-MG結(jié)合圖；U31A圖.FITC標(biāo)記適配子U31 和靶細(xì)胞U87-EGFRv III結(jié)合圖；U31B圖.FITC標(biāo)記適配子U31和反篩細(xì)胞U87-MG結(jié)合圖； GNA圖.FITC標(biāo)記原庫(kù)GN(初始ssDNA文庫(kù)，以下同）和靶細(xì)胞U87-EGFRv III結(jié)合圖；GNB 圖.FITC標(biāo)記原庫(kù)GN和反篩細(xì)胞U87-MG結(jié)合圖；
[0027] 圖7生物素標(biāo)記適配子特異性鑒定靶蛋白；1:原庫(kù)GN釣取的反篩細(xì)胞U87MG 蛋白；2:原庫(kù)GN釣取的靶細(xì)胞U87-EGFRvIII87MG蛋白；3:適配子U2釣取的靶細(xì)胞 U87-EGFRV III蛋白；4:適配子U8釣取的靶細(xì)胞U87-EGFRV III蛋白；5:適配子U2釣取的反 篩細(xì)胞U87MG蛋白；6:適配子U8釣取的反篩細(xì)胞U87MG蛋白；
[0028] 圖8是裸鼠荷瘤模型的建立；A:種植U87-EGFRV III細(xì)胞懸浮液前的裸鼠；B:種植 U87-EGFRV III細(xì)胞懸浮液兩周后的裸鼠。
[0029] 圖9是適配子體內(nèi)給藥結(jié)束后各組腫瘤組織；A:無(wú)任何處理的空白對(duì)照組；B:轉(zhuǎn) 染試劑Invivo jet-PEI?治療組；C:轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的原庫(kù)GN治療組； D:轉(zhuǎn)染試劑Invivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組。
[0030] 圖10適配子體內(nèi)給藥前后的腫瘤體積統(tǒng)計(jì)結(jié)果；A:第一次給藥時(shí)各組腫瘤體積 大小統(tǒng)計(jì)，P值大于〇. 05 ;B:剝離的腫瘤體積.Blank :無(wú)任何處理的空白對(duì)照組；Reagent : In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染試劑治療組；GN:轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的原庫(kù)GN治療 組；AptU2:轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組與轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組比較P值小于0· 001 :與轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI? 轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組比較P值小于0. 05.
[0031] 圖11是適配子體內(nèi)給藥結(jié)束后腫瘤重量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果；Blank:無(wú)任何處理的空白 對(duì)照組；Reagent:轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?治療組；GN:轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn) 染的原庫(kù)GN治療組；AptU2 :轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組.*林：與 轉(zhuǎn)染試劑In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組比較P值小于0.001 與轉(zhuǎn)染試劑 In vivo jet-PEI?轉(zhuǎn)染的適配子U2治療組比較P值小于0.01.
[0032] 圖12是188Re標(biāo)記適配子給藥后的腫瘤組織體積改變；A:第一次給藥時(shí)各組腫 瘤體積大小統(tǒng)計(jì)，P值大于〇. 05 ;B:剝離的腫瘤體積.Blank :無(wú)任何處理的空白對(duì)照組； Radionuclide :瘤內(nèi)注射游離的核素188Re對(duì)照組；188Re-GN :瘤內(nèi)注射188Re標(biāo)記的原庫(kù)GN 對(duì)照組；188Re_U2 :瘤內(nèi)注射188Re標(biāo)記的適配子U2治療組.與無(wú)任何處理的空白對(duì)照組 比較P值小于〇. 01 :與游離的核素188Re對(duì)照組比較P值小于0. 01 :與188Re標(biāo)記的原 庫(kù)GN對(duì)照組比較P值小于0. OL
[0033] 圖13是188Re標(biāo)記適配子給藥后剝離的腫瘤組織重量（n = 9) ;Blank :無(wú)任何處理 的空白對(duì)照組；Radionuclide :瘤內(nèi)注射游離的核素188Re對(duì)照組；188Re-GN :瘤內(nèi)注射188Re 標(biāo)記的原庫(kù)GN對(duì)照組；188Re-U2 :瘤內(nèi)注射188Re標(biāo)記的適配子U2治療組.與無(wú)任何處 理的空白對(duì)照組比較P值小于0. 01 :與游離的核素188Re對(duì)照組比較P值小于0. 01 :與 188Re標(biāo)記的原庫(kù)GN對(duì)照組比較P值小于0. 01.
[0034] 圖14是SPECT顯影檢測(cè)標(biāo)記率；A:展開(kāi)劑為丙酮溶液；B:展開(kāi)劑為生理鹽水溶 液；C:展開(kāi)劑為乙醇：氨水：水=2:1:5的混合溶液；
[0035] 圖15是188Re標(biāo)記適配子尾靜脈給藥的靶向性檢測(cè)；A:裸鼠尾靜脈注射游離核素 188Re ;B:裸鼠尾靜脈注射188Re標(biāo)記的原庫(kù)GN ;C:裸鼠尾靜脈注射188Re標(biāo)記的適配子U2 ;
[0036] 圖16是188Re標(biāo)記適配子瘤內(nèi)給藥的代謝性檢測(cè)；A:在裸鼠瘤內(nèi)注射 188Re標(biāo)記的 原庫(kù)GN和游離核素188Re半小時(shí)后，體內(nèi)的SPECT顯影情況；B:在裸鼠瘤內(nèi)注射 188Re標(biāo)記 的原庫(kù)GN和游離核素188Re三小時(shí)后，體內(nèi)的SPECT顯影情況；
[0037] 圖17是離體器官188Re的分布情況；A:圖上半部分：離體器官實(shí)物擺放位置；圖下 半部分：尾靜脈注射 188Re標(biāo)記的適配子U2在各個(gè)離體器官188Re的SPECT顯影情況；B:圖 上半部分：離體器官實(shí)物擺放位置；圖下半部分：尾靜脈注射游離核素 188Re在各個(gè)離體器 官188Re的SPECT顯影情況；C:圖上半部分：離體器官實(shí)物擺放位置；圖下半部分：尾靜脈注 射 188Re標(biāo)記的原庫(kù)GN在各個(gè)離體器官188Re的SPECT顯影情況.

【具體實(shí)施方式】
[0038] 以下實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。若未特別指 明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0039] 本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明中所用的主要術(shù)語(yǔ)的定義如下。
[0040] 本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)"核酸適配子"是指以高的親和力特異性地識(shí)別其靶標(biāo)的小單 鏈寡核苷酸。
[0041] 本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)"樣品"是指待分析的可能包括膠質(zhì)瘤的標(biāo)記的組合物。樣品 的實(shí)例包括膠質(zhì)瘤細(xì)胞系、膠質(zhì)瘤組織、血液、血清、血漿、唾液、痰、尿液。
[0042] 本發(fā)明使用的詞語(yǔ)"U87 Λ細(xì)胞"是指穩(wěn)定過(guò)表達(dá)EGFRvIII型突變體的U87細(xì)胞 株。
[0043] 適配子的核苷酸總數(shù)為<100nt。如果適配子的核苷酸數(shù)量少，則適配子的化學(xué)合 成和大量生產(chǎn)將比較容易且具有成本優(yōu)勢(shì)。此外，適配子將容易被化學(xué)修飾，在體內(nèi)高度穩(wěn) 定且毒性低。除此之外，包括在適配子在內(nèi)的各核苷酸可包括一個(gè)或者多個(gè)相同或不同的 化學(xué)修飾，例如可在核糖的2'位進(jìn)行任何原子或基團(tuán)的核苷酸取代。
[0044] 因此，另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種診斷膠質(zhì)瘤的組合物，所述組合物包含上述本 發(fā)明的核酸適配子。
[0045] 本發(fā)明涉及一種用核酸適配子來(lái)定量檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面EGFRvIII的表達(dá)。例如， 通過(guò)將生物素綴合到核酸適配子的末端，使標(biāo)記了的核酸適配子與固定在酶聯(lián)板上的來(lái)自 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的蛋白樣品進(jìn)行反應(yīng)，然后用鏈霉親和素-HRP的二抗與生物素標(biāo)記的適配 子反應(yīng)，通過(guò)顯色即可定量檢測(cè)到腫瘤蛋白樣品中EGFRvIII的表達(dá)量。
[0046] 膠質(zhì)瘤的新的生物標(biāo)記可通過(guò)分析結(jié)合到核酸適配子的樣品物質(zhì)而檢測(cè)。因此， 在又一方面，本發(fā)明涉及一種用核酸適配子來(lái)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞特異的表面生物標(biāo)記的方 法。例如，通過(guò)將生物素綴合到核酸適配子的末端，使核酸適配子與來(lái)自膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的膜 提取蛋白樣品結(jié)合，并用鏈霉親和素綴合的磁性顆粒沉淀適配子，然后用質(zhì)譜法分析適配 子，來(lái)檢測(cè)特異性地結(jié)合適配子的表面生物標(biāo)記。
[0047] 同時(shí)，特異性地結(jié)合膠質(zhì)瘤細(xì)胞或其組織的核酸適配子可固定在常規(guī)的支持物 上，如磁珠、顆粒、試紙條，從而提供可用于診斷膠質(zhì)瘤的檢測(cè)傳感器。因此，本發(fā)明的另一 個(gè)方面涉及一種診斷膠質(zhì)瘤的傳感器，所述傳感器上固定有與膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87 △或組織的 特異性地結(jié)合的核酸適配子。
[0048] 上述固定支持無(wú)包括至少一個(gè)實(shí)質(zhì)上是固相支持物，可通過(guò)任何常規(guī)的化學(xué)結(jié)合 方法將核酸適配子固定到所述的固相支持物上。例如，可通過(guò)將生物素綴合到核酸適配子 的末端形成綴合物，從而將綴合物固定到支持物的表面上，并將鏈霉親和素固定到支持物 的表上以誘導(dǎo)固定在支持物表面上的蛋白鏈霉素和生物素之間的相互作用。
[0049] 同時(shí)，本發(fā)明的方法可以以試劑盒的形式提供出來(lái)，以增加可攜帶性。具體地，在 另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的膠質(zhì)瘤細(xì)胞的 試劑盒，所述試劑盒包含與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的的核酸適配子。如果需要的 話(huà)，膠質(zhì)瘤的診斷試劑盒可包括緩沖液和用于進(jìn)行檢測(cè)和分析的容器。診斷試劑盒可以是 瓶、注射器類(lèi)似的形式，該試劑盒可本分或全部由塑料、紙等類(lèi)似物形成。傳感器容器可裝 配有或全部或部分可分離的蓋子，碩鼠蓋子可以是容器的原始部件或可以是通過(guò)機(jī)械、粘 著或其他方式附著與容器。容器也可以裝配有塞子并通過(guò)注射針來(lái)接觸內(nèi)含物。檢測(cè)試劑 盒可包括外包裝，外包裝可包括有關(guān)組分用途的說(shuō)明。
[0050] 另一方面，本發(fā)明涉及一種新的能介導(dǎo)其他藥物或SiRNA或病毒的細(xì)胞傳遞或跨 膜轉(zhuǎn)運(yùn)的載體，如上所述的與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適 配子。例如，將藥物與如上所述的與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的 核酸適配子通過(guò)共價(jià)鍵或者其他介質(zhì)稱(chēng)合在一起，加入表達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞或組織 中，適配子特異識(shí)別受體并且被內(nèi)吞進(jìn)入胞內(nèi)，由此將藥物或siRNA攜帶進(jìn)入細(xì)胞，達(dá)到一 個(gè)靶向治療的目標(biāo)?；蛘?，也可以將適配子、藥物、高分子材料組合在一起，高分子材料包裹 藥物和與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子的組合體，從而 滿(mǎn)足通過(guò)血腦屏障的需要，進(jìn)入腦內(nèi)組織時(shí)，與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特 異性結(jié)合的核酸適配子和藥物的復(fù)合物釋放出來(lái)，適配子識(shí)別靶蛋白，從而將藥物運(yùn)抵目 標(biāo)。
[0051] 因此，可以以本發(fā)明的與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核 酸適配子來(lái)遞送抗癌藥物或者siRNA((Chu et al. 2006)、（Zhou et al. 2011)、（Zhou&Rossi 2008)、）
[0052] 本發(fā)明的與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子可 以其藥物上可接受的鹽的形式用于藥物組合物中。此外，本發(fā)明的與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因 子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子可單獨(dú)使用或與其他藥學(xué)活性化合物結(jié)合使 用。
[0053] 根據(jù)本發(fā)明的與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配 子的特性，結(jié)合藥學(xué)高分子材料，可以開(kāi)發(fā)新的劑型。如，納米乳、包合物、緩釋膠囊、脂質(zhì)體 等形式。開(kāi)發(fā)利于透過(guò)血腦屏障的油包水型納米乳需要水、油、乳化劑和助乳化劑等，其中 天然乳化劑包括多糖類(lèi)如阿拉伯膠、白蛋白、大豆磷脂、卵磷脂和膽固醇等，合成乳化劑分 離子型和非離子型兩類(lèi)，常用的非離子型乳化劑如脂肪酸山梨坦（親油性）、聚山梨酯（親 水性）等，而助乳化劑?？捎脕?lái)調(diào)節(jié)乳化劑的HLB值，并形成更小的乳滴。常用的助乳化劑 有正丁醇、乙二醇、丙二醇、甘油等。開(kāi)發(fā)穩(wěn)定的包合物，用的材料如β-環(huán)糊精、淀粉、纖維 素等等，使與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子不易被血液 中的核酸酶所降解，使藥物達(dá)到緩釋的作用。
[0054] 可根據(jù)患者的狀況和體重、疾病的嚴(yán)重度、藥物的類(lèi)型和給藥途徑及周期來(lái)適用 地選擇本發(fā)明組合物的優(yōu)選劑量和劑型，達(dá)到個(gè)體化臨床用藥的目的。本發(fā)明的組合物可 通過(guò)多種途徑給藥與哺乳動(dòng)物，包括小鼠、大鼠等。給藥途徑為：口服，注射、鞘內(nèi)或腦血管 給藥等。
[0055] 實(shí)施例1 :
[0056] 實(shí)驗(yàn)一、制備與過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體（EGFRvIII)的膠質(zhì)瘤細(xì) 胞系（U87A)特異性結(jié)合的核酸適配子，篩選過(guò)程如圖1所示，在11輪測(cè)序結(jié)果如圖3所 /Jn 〇
[0057] 1、設(shè)計(jì)并合成初始ssDNA文庫(kù)和用于PCR擴(kuò)增的引物
[0058] 設(shè)計(jì)并合成長(zhǎng)度為76個(gè)堿基的ssDNA初始GN庫(kù)：5' -ATCCAGAGTGACGCAGCA (MO) TGGACACGGTGGCTTAGT-3'，初始ssDNA文庫(kù)兩端是固定序列，中間是40個(gè)隨機(jī)序列，N代表 A，T，C，G四個(gè)隨機(jī)堿基。
[0059] 設(shè)計(jì)并合成用于擴(kuò)增出dsDNA雙鏈的引物：
[0060] 5'-FITC-Pnl :5'-ATCCAGAGTGACGCAGCA-3' ；
[0061] 5' -Biotin-Pn2 :5'-ACTAAGCCACCGTGTCCA-3'
[0062] 上述初始ssDNA文庫(kù)和引物均由生物公司合成。
[0063] 用PCR法，以引物5' -FITC-Pnl和引物5'-Biotin-Pn2為引物，以生物公司合成的 初始ssDNA文庫(kù)為模板擴(kuò)增出dsDNA雙鏈（PCR產(chǎn)物），大量擴(kuò)增后，應(yīng)用鏈霉親和素磁珠分 離法獲得ssDNA亞文庫(kù)或者適配子，雙鏈與單鏈的分子量均為76bp，結(jié)果如圖2所示。
[0064] 2、鏈親和素磁珠分離法制備單鏈ssDNA
[0065] 大約按照Iml的步驟1的PCR產(chǎn)物：150ul的鏈霉親和素磁珠量的比例，將鏈霉親 和素磁珠注入柱子中，磁珠上下墊篩板以更好的過(guò)濾PCR產(chǎn)物。讓磁珠自然狀態(tài)下沉淀，但 不能讓磁珠里沒(méi)有液體溶解；用0. 5 XD-PBS洗滌5次，此步操作應(yīng)該用注射管輕輕的吹氣 趕走柱子中的氣泡，尤其是出口處不能有氣泡；室溫下，將PCR產(chǎn)物循環(huán)經(jīng)過(guò)磁珠過(guò)濾3次， 其中一條帶生物素標(biāo)記的鏈與鏈霉親和素磁珠結(jié)合，此步可以人工用注射針管加壓，控制 速度為1滴/每3秒；0. 5ml D-PBS洗滌鏈霉親和素磁珠5次，加入0. 2M的NaOH 400 μ 1于 37°C溫箱中自然過(guò)濾30-40min,另一條帶FITC標(biāo)記的鏈被裂解下來(lái),下面接收過(guò)濾樣品的 EP管中用1/10體積40 μ 1的10%乙酸中和；接收完裂解樣品之后加1/10體積的3mol/L NaAc (PH5. 2)，1/100體積的lmol/L MgCl2和2倍體積的無(wú)水乙醇，于-20°C冰箱沉淀過(guò)夜； 14, OOOrpm 4°C離心 30min，棄上清，70% 乙醇 Iml 溶解洗滌，于 14, OOOrpm 4°C離心 30min， 棄液體倒置晾干，溶于少量的三蒸水中，作為下一輪篩選的亞文庫(kù)（ssDNA文庫(kù)）；紫外分光 光度計(jì)測(cè)8如嫩濃度，711尿素8%變性凝膠檢測(cè)得到的^0嫩。
[0066] 3、細(xì)胞selex篩選適配子
[0067] (1)以U87 Λ為靶細(xì)胞篩選前三輪
[0068] a、將步驟2的一定濃度的ssDNA文庫(kù)溶解于一定量的鮭精DNA和酵母tRNA，各種 具體用量見(jiàn)表1，于95°C變性IOmin后立即置于冰上5min，在冰上冷卻時(shí)加入500 μ 1的結(jié) 合緩沖液（1L PBS緩沖液中含5mmol MgCl2、0. 05g鮭魚(yú)精DNA、Ig BSA和4. 5g葡萄糖），室 溫放置30min左右，之后用于篩選（第一輪篩選ssDNA文庫(kù)用量為1，OOOpmol,以后每一輪 依次為800pmol、200pmol、150pmol遞減），在前三輪的篩選沒(méi)有引入反篩細(xì)胞U87MG細(xì)胞；
[0069] 表 1

【權(quán)利要求】
1. 一種與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子或其化學(xué)修飾 物，其特征在于，所述的核酸適配子的核苷酸序列如SEQ ID N0:2所示。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配 子或其化學(xué)修飾物，其特征在于，所述的化學(xué)修飾物是在權(quán)利要求1所述的核酸適配子中 包括的至少一個(gè)核苷酸的核糖2'位上的羥基被氫原子、氟原子、-O-?；桶被腥我庖?種所取代，以及在3'端或5'端加入FCM、FITC、biotin的任意修飾。
3. 權(quán)利要求1所述的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子或 其化學(xué)修飾物在制備診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的腫瘤細(xì)胞的傳感器 或試劑盒中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞為人星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞。
5. 權(quán)利要求1所述的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié)合的核酸適配子或 其化學(xué)修飾物作為藥物遞送載體在制備抗過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的腫 瘤細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞為人星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞。
7. -種診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的腫瘤細(xì)胞的傳感器，其特征在 于，所述的傳感器固定有權(quán)利要求1所述的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié) 合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
8. -種診斷過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的腫瘤細(xì)胞的試劑盒，其特征在 于，所述的試劑盒中含有權(quán)利要求1所述的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體特異性結(jié) 合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
9. 一種過(guò)表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體的腫瘤細(xì)胞的特異性的藥物遞送系 統(tǒng)，其特征在于，所述的藥物遞送系統(tǒng)包含權(quán)利要求1所述的與人表皮生長(zhǎng)因子受體III型 突變體特異性結(jié)合的核酸適配子或其化學(xué)修飾物。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104212800SQ201410419307
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2013年5月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月7日
【發(fā)明者】張興梅, 伍錫棟, 譚燕, 梁惠玉, 高天明 申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)