專利名稱：特異性結(jié)合人因子VII/VIIa的核酸及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)人因子Vll/VIIa特異的配體的鑒定領(lǐng)域，并也涉及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的用途，這些配體旨在特別純化和檢測(cè)該蛋白質(zhì)。
現(xiàn)有技術(shù)因子VII (FVII)是維生素K依賴性糖蛋白，其活化形式(FVIIa)在鈣和組織因子存在下通過(guò)激活因子X(jué)和因子IX參與血凝固過(guò)程。FVII以406個(gè)氨基酸殘基的單肽鏈形式分泌，其分子量約為50kDa。維生素K依賴性糖蛋白FVIIa因此在血凝固機(jī)理中起重要作用，導(dǎo)致血凝塊形成。FVIIa具有這樣的優(yōu)點(diǎn)，其在組織損傷引起出血后釋放的組織因子存在下，甚至在因子 VIII或IX缺失下能夠局部起作用。為此，F(xiàn)VIIa已經(jīng)多年用于校正表現(xiàn)為出血的某些凝血功能障礙。FVII用于治療患有血友病的患者，其因子VIII (A型血友病)或因子IX(B型血友病)缺陷，并也治療具有其他凝固因子缺陷的患者，例如遺傳性FVII缺陷的患者。在中風(fēng)的治療中也推薦FVII。因此有必要具有可注射的FVIIa濃縮劑。獲得FVIIa濃縮劑的最古老方法在于通過(guò)分級(jí)分離從血漿蛋白中純化FVIIa。文件EP 0346241為此描述了吸附后洗脫血漿蛋白分級(jí)分離的副產(chǎn)物獲得的富含F(xiàn)VIIa級(jí)分的制備物，其含有FVII和FVIIa以及其他蛋白質(zhì)，如因子IX(FIX)、X(FX)和II (FII)，包括 PPSB (P =凝血酶原或FII，P =前轉(zhuǎn)變素或FVII，S =司徒因子X(jué)或FX，B =抗血友病因子 B或FIX)。該方法的缺點(diǎn)是所獲得的FVII仍然含有痕量的其他凝血因子。同樣，文件EP 0547932描述了用于產(chǎn)生基本不含維生素K依賴性因子和FVII的高純度FVIIa濃縮劑的方法。不管其純度，通過(guò)該方法獲得的FVII具有殘留的血栓形成活性。在20世紀(jì)80年代，分離了編碼人因子VII的DNA(Hagen等(1986) ；Proc. Natl. Acad. Sci. USA ；Apr 83(8) :M12_6)，并且在BHK(幼侖鼠腎)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)相應(yīng)的蛋白質(zhì)(文件EP 0200421)。申請(qǐng)人提交的專利申請(qǐng)F(tuán)R 0604872也描述了 FVIIa在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中的生產(chǎn)。這些生產(chǎn)方法使得能夠獲得這樣的蛋白質(zhì)，其在病毒或其他致病體污染方面是安全的。此外，該方法使得能夠獲得這樣的蛋白質(zhì)，其一級(jí)序列，即多個(gè)氨基酸之間的相同連接與人的一級(jí)序列相同。然而，不管因子Vll/VIIa的最初來(lái)源，實(shí)現(xiàn)的方法產(chǎn)生了富含人因子Vll/VIIa的組合物，其含有污染物質(zhì)。對(duì)于從人血漿中純化因子Vll/VIIa的方法，有利的是具有尤其沒(méi)有，或基本沒(méi)有殘留血栓形成活性的終產(chǎn)物。對(duì)于獲得純化的重組人因子Vll/VIIa的方法，至關(guān)重要的是具有尤其沒(méi)有或基本沒(méi)有不想要的細(xì)胞蛋白質(zhì)的終產(chǎn)物。具體而言，對(duì)于從來(lái)自轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物的生物液體中純化的人因子Vll/VIIa的組合物，重要的是具有沒(méi)有或基本沒(méi)有這些轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物天然產(chǎn)生的因子Vll/VIIa并且能夠在人中具有免疫原性的終產(chǎn)物。為了實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)，必須具有從包含所述因子Vll/VIIa的樣品中純化人因子VII/ VIIa的有效且特定方法，其可容易且可重復(fù)地產(chǎn)生所述人因子Vll/VIIa。發(fā)明概述本發(fā)明提供了長(zhǎng)度為至少15個(gè)核苷酸并且特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的單鏈核酸。本發(fā)明還涉及多種化合物，其特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa，并且在其結(jié)構(gòu)中包含上文定義的至少一種核酸。其還涉及如上文定義的核酸或化合物與(ii)人因子Vll/VIIa之間的復(fù)合體。本發(fā)明還涉及用于固定人因子Vll/VIIa的基質(zhì)，其特征在于包含固體基質(zhì)材料， 其上移植了如上文定義的多種核酸或化合物。本發(fā)明的目標(biāo)也是用于在基質(zhì)上固定人因子Vll/VIIa的方法，其包括這樣的步驟，其中使包含人因子Vll/VIIa的樣品與如上文定義的基質(zhì)接觸。本發(fā)明還涉及用于純化人因子Vll/VIIa的方法，其包括以下步驟a)使包含人因子Vll/VIIa的樣品與如上文定義的核酸或基質(zhì)接觸，以在(i)所述核酸或所述基質(zhì)與(ii)人因子Vll/VIIa之間形成復(fù)合體，和b)從步驟a)形成的復(fù)合體中釋放人因子Vll/VIIa并回收純化的人因子VII/ Vila。本發(fā)明還涉及用于檢測(cè)樣品中人因子Vll/VIIa存在的方法，其包括以下步驟a)使如上文定義的核酸或基質(zhì)與所述樣品接觸；和b)檢測(cè)(i)所述核酸或所述基質(zhì)與(ii)因子Vll/VIIa之間復(fù)合體的形成。本發(fā)明還涉及如上文定義的核酸的預(yù)防性或治療性醫(yī)學(xué)用途。附圖簡(jiǎn)述

圖1闡明了用于本發(fā)明核酸(Mapt2)折疊的模型的計(jì)算結(jié)果。根據(jù)與獲得圖1 中表示的結(jié)構(gòu)相同的那些參數(shù)，使用mFold計(jì)算機(jī)程序，即以下條件(i)具有線性序列的 DNA, (ii)折疊溫度:25°C, (iii)離子條件[Na+] 150mM ； [Mg++] :4mM, (iv)校正類型寡聚物，(ν)百分比次優(yōu)性數(shù)目2，(vi)所計(jì)算的折疊數(shù)目的上限50，(vii)兩個(gè)堿基對(duì)之間的最大距離無(wú)限制，和(viii)其他參數(shù)使用默認(rèn)值。圖2闡明了根據(jù)在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，本發(fā)明的多種核酸(Mapt2、 Mapt3和Mapt7)與基質(zhì)上固定的人血漿因子VII的結(jié)合曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸 共振信號(hào)，以任意的共振單位表示。圖3闡明了在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，以多種濃度使用的人血漿因子 VII與基質(zhì)上固定的本發(fā)明核酸(Mapt2)的結(jié)合曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸共振信號(hào)，以任意的共振單位表示。曲線由圖的頂部到底部表示，曲線1" [FVII]"濃度為 500nM的純化的人血漿FVII ；曲線2〃 [FVII]‘‘濃度為250nM的純化的人血漿FVII ；曲線 3" [FVII]“濃度為125ηΜ的純化的人血漿FVII ；曲線4" [FVII]“濃度為62. 5ηΜ的純化的人血漿FVII ；更低的曲線各濃度為62、125、250和500ηΜ的純化的免疫球蛋白制劑。圖4闡明了在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，⑴重組人因子VII與基質(zhì)上固定的本發(fā)明核酸(Mapt2)的結(jié)合曲線；然后(ii)抗人FVII單克隆抗體與(i)中形成的固定化核酸/FVII復(fù)合體的結(jié)合曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸共振信號(hào)，以任意的共振單位表示。圖5闡明了在隨時(shí)間流逝順序注射人血漿因子VII的情況下，其上固定本發(fā)明核酸(Mapt2)的基質(zhì)的飽和曲線。根據(jù)表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試。X軸時(shí)間，以秒表示； Y軸共振信號(hào)，以任意的共振單位表示。頂部曲線濃度為500nM的純化人FVII獲得的信號(hào)。圖6闡明了在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，人血漿因子VII與基質(zhì)上固定的本發(fā)明核酸(Mapt2)的結(jié)合動(dòng)力學(xué)曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸共振信號(hào)，以任意的共振單位表示。圖7闡明了在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，多種來(lái)源的因子VII蛋白質(zhì)與基質(zhì)上固定的本發(fā)明核酸(Mapt2)的結(jié)合曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸共振信號(hào)，以任意的共振單位表示。圖8闡明了在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，人血漿因子VII和兔重組因子VII 與基質(zhì)上固定的本發(fā)明核酸(Mapt2)的結(jié)合曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸共振信號(hào)， 以任意的共振單位表示。圖9闡明了特異結(jié)合人因子Vll/VIIa的化合物結(jié)構(gòu)，其包含偶聯(lián)PEG間隔鏈的本發(fā)明的適體(Mapt2)，所述間隔鏈本身偶聯(lián)生物素分子。圖10闡明了在SELEX類型過(guò)程的實(shí)施循環(huán)結(jié)束時(shí)選擇的特異性結(jié)合人因子VII/ VIIa的多個(gè)適體的比對(duì)。圖10中表示的序列從圖頂部到底部分別是序列SEQ ID No. 87到 SEQ ID No. 100。圖11闡明了在用于純化在兔乳中產(chǎn)生的重組人因子VII的方法實(shí)現(xiàn)過(guò)程中獲得的色譜圖，該方法使用親和基質(zhì)，其中固定抗人FVII核適體。X軸時(shí)間；Y軸2 納米處的吸光度值(OD)。圖12闡明了在表面等離振子共振技術(shù)的測(cè)試中，一系列本發(fā)明27個(gè)核適體與基質(zhì)上固定的人血漿因子VII的結(jié)合曲線。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸共振信號(hào)，以任意共振單位表示。圖13闡明了測(cè)試的各27個(gè)適體穩(wěn)定結(jié)合信號(hào)的各自值。X軸測(cè)試的各27個(gè)適體；Y軸共振信號(hào)，以任意共振單位表示。圖14表示^Onm處的吸光度測(cè)量值作為時(shí)間函數(shù)的曲線。圖15表示SDS PAGE電泳凝膠的圖，其中泳道1對(duì)應(yīng)起始產(chǎn)物級(jí)分，泳道2對(duì)應(yīng)洗脫級(jí)分。圖16表示固定的適體Mapt2與轉(zhuǎn)基因兔乳中產(chǎn)生的重組人因子VII的結(jié)合曲線。 箭頭對(duì)應(yīng)多次注射的時(shí)間，圖16中從左到右分別是1 重組因子VII的注射；2 含有IM NaCl的緩沖液的注射；3 含有2M NaCl的緩沖液的注射；4 含有3M NaCl的緩沖液的注射； 5 :50mM Tris, IOmMEDTA的緩沖液的注射。X軸時(shí)間，以秒表示；Y軸應(yīng)答信號(hào)值，以任意單位(RU)表示。圖17表示固定的適體Mapt2與轉(zhuǎn)基因兔乳中產(chǎn)生的重組人因子VII的結(jié)合曲線。 箭頭對(duì)應(yīng)多次注射的時(shí)間，圖17中從左到右分別是1 :50%丙二醇；2 =IOmM EDTA。發(fā)明詳述
本發(fā)明提供能夠特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的新工具，其尺寸小并且易于廉價(jià)地合成，并且其可用于使用此類工具的全部應(yīng)用領(lǐng)域，包括用于純化人因子Vll/VIIa，檢測(cè)人因子Vll/VIIa并用作旨在預(yù)防或治療凝血功能障礙的藥物的活性成分。更尤其是，申請(qǐng)人已經(jīng)構(gòu)建了能夠特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的單鏈核酸家族， 其具有許多共有結(jié)構(gòu)特征，稍后將在本說(shuō)明書中詳細(xì)說(shuō)明所述結(jié)構(gòu)特征。如稍后詳細(xì)說(shuō)明，能夠特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的本發(fā)明的核酸家族由單鏈核酸，優(yōu)選DNA類型的單鏈核酸組成，因核苷酸序列提供的某些結(jié)構(gòu)特征，其能夠采取這樣的空間構(gòu)象，所述空間構(gòu)象促進(jìn)向所述核酸賦予其與因子Vll/VIIa的上述結(jié)合性質(zhì)。一般地，本發(fā)明的核酸也可稱為核苷酸“適體”，參考本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的術(shù)語(yǔ)來(lái)表示該類型的分子?，F(xiàn)有技術(shù)中早已知道參與血液凝固途徑的能夠結(jié)合多種蛋白質(zhì)的核適體，包括結(jié)合血管假性血友病因子的適體(PCT申請(qǐng)?zhí)朩O 2008/150495)、結(jié)合α凝血酶(歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?EP 1972693)或凝血酶(Zhao 等，2008，Anal Chem，第 80 卷(19) :7586-7593)的適體、結(jié)合因子 IX/IXa 的適體(Subash 等，2006，Thromb Haemost，第 95 卷767-771 ；Howard 等，2007，Atherioscl Thromb Vasc Biol，第 27 卷:722-727 ；PCT 申請(qǐng)?zhí)?W02002/096926 ； 美國(guó)專利號(hào)US 7，312，325)，以及結(jié)合因子X(jué)Aa的適體(PCT申請(qǐng)?zhí)朩O 2002/096926 ；美國(guó)專利號(hào) US 7,312,325)。已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)中描述了結(jié)合人因子Vll/VIIa的核適體(Rusconi等，2000， Thromb Haemost，第 84 卷(5) :841-848 ;Layzer 等，2007，Spring，第 17 卷1-11)。本發(fā)明的主題是長(zhǎng)度為至少15個(gè)核苷酸并且特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸。在本說(shuō)明書中，特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的單鏈核酸也可表示為“核適體”、“適體”、“結(jié)合人因子Vll/VIIa的適體”或者“抗人FVII/VIIa適體”。術(shù)語(yǔ)“人因子Vll/VIIa”包括天然來(lái)源的人因子Vll/VIIa和重組人因子VII/ Vila。為本說(shuō)明書目的，參考其氨基酸序列考慮人因子Vll/VIIa，即不依賴這樣的事實(shí)，該蛋白質(zhì)是糖基化的或非糖基化的，并且如果所述蛋白質(zhì)是糖基化的，并不考慮其糖基化類型。如隨后還會(huì)更詳細(xì)地闡明，特異性結(jié)合本發(fā)明人因子Vll/VIIa的核酸的某些實(shí)施方案具有多個(gè)共有的結(jié)構(gòu)特征，其中包括這樣的序列，其從5’末端到3’末端連續(xù)包含 (i)長(zhǎng)度為大約20個(gè)核苷酸的恒定特異核苷酸序列，接著是(ii)長(zhǎng)度為大約40到50個(gè)核苷酸的可變核苷酸序列，接著是(iii)長(zhǎng)度是大約20個(gè)核苷酸的恒定特定核苷酸序列。詳細(xì)說(shuō)明了可變核苷酸序列(ii)彼此可具有非常高的核苷酸序列同一性。申請(qǐng)人:因此構(gòu)建了特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核適體家族，其已經(jīng)能夠在⑴ 共有結(jié)構(gòu)特征和(ii)共有功能特征之間顯示相關(guān)性的存在。從結(jié)構(gòu)觀點(diǎn)上看，特異性結(jié)合本發(fā)明人因子Vll/VIIa的核酸或核適體家族包含與以下通式(I)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸5' -[SEQ ID No. 1]x_[SEQ ID No. X]-[SEQ ID No. 2]y-3' (I)，其中，-" SEQ ID No. X"由選自序列 SEQ ID No. 3 到 SEQ ID No. 85 和 SEQ IDNo. 87 到SEQ ID No. 100的核酸組成，-〃 χ"是等于0或1的整數(shù)，并且-〃 y〃是等于0或1的整數(shù)。在一些實(shí)施方案中，序列SEQ ID No. X 的核酸具有 15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49 或50個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。在其他實(shí)施方案中，序列SEQ ID似]的核酸具有43、44、45、46、47、48或49個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。在一些優(yōu)選的其他實(shí)施方案中，序列SEQ ID似]的核酸具有43、44或45個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。如上文早已經(jīng)提及，通式(I)的核酸長(zhǎng)度為至少15個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施方案中，通式(I)的核酸長(zhǎng)度為至少15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、 49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、 74、75、76、77、78、79、80或81個(gè)核苷酸，其包括具有準(zhǔn)確地每一特定長(zhǎng)度的核酸。在用于獲得通式(I)的適體的方法的一些實(shí)施方案中，為了構(gòu)建特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的目的核酸家族而進(jìn)行的連續(xù)選擇循環(huán)已經(jīng)導(dǎo)致在每一連續(xù)選擇步驟中分離并表征核適體集合和子集，其在5’和3’末端分別包含序列SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2， 在結(jié)構(gòu)上組幀(framing)可變序列SEQ ID No. X。在本發(fā)明核適體的主要家族中，所有可變序列SEQ ID No. X彼此具有至少40%的核苷酸序列同一性。這表示，對(duì)于序列SEQ ID 似]，保留結(jié)合人因子￥11八11&的性質(zhì)的結(jié)構(gòu)限制很少是分別在這些核適體5’和3’末端定位的序列的結(jié)構(gòu)限制。當(dāng)整數(shù)“X”等于0并且整數(shù)“y”等于1時(shí)，本發(fā)明的核適體包括這樣的核酸，其包含與以下通式(I-I)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸5' -[SEQ ID No. X]-[SEQ ID No. 2]-3' (I-I) 當(dāng)整數(shù)“X”等于1并且整數(shù)“y”等于0時(shí)，本發(fā)明的核適體包括這樣的核酸，其包含與以下通式(1-2)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸5' -[SEQ ID No. 1]-[SEQ ID No. X]-3' (1-2)。當(dāng)整數(shù)“X”等于0并且整數(shù)“y”等于0時(shí)，本發(fā)明的核適體包括這樣的核酸，其包含與以下通式(1-3)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸5，_[SEQ ID No. X]-3' (1—3)。上文的核適體因此包括這樣的核酸，其包含與選自序列SEQ ID No. 3至SEQ ID No. 85和SEQ ID No. 87至SEQ ID No. 100的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。—般地，與第二個(gè)多核苷酸或核酸具有至少40%核苷酸同一性的第一個(gè)核苷酸與所述第二個(gè)多核苷酸或核酸具有至少41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%,51 %,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%, 65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%, 80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%, 95%,96%,97%,98%^ 100% 的核苷酸同一性。在包含序列SEQ ID No. X的本發(fā)明核酸的一些實(shí)施方案中，所述序列SEQ ID No. X 選自這樣的核酸，其具有與序列SEQ ID No. 3至SEQ ID No. 85和SEQ ID No. 87至SEQ ID No. 100中至少之一具有至少40%的核苷酸同一性的序列的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。在包含序列SEQ ID No. X的本發(fā)明核酸的一些實(shí)施方案中，所述序列SEQ ID No. X 選自與序列 SEQ ID No. 3 至 SEQ ID No. 85和 SEQ ID No. 87 至 SEQ ID No. 100 中至少之一具有至少 41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、 55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%, 70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%, 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 100% 的核苷酸同一性的核酸。由上述可得到，本發(fā)明包括具有上文定義的通式(I)系列的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸的單鏈核酸家族。為本發(fā)明目的，通過(guò)比較窗比較以最佳方式比對(duì)的兩條序列來(lái)確定兩條核酸序列之間的“百分比同一性”。比較窗內(nèi)的部分核苷酸序列與參考序列(其不包含這些添加或缺失)相比因此包含添加或缺失(例如，空位)，以這樣一種方式在兩條序列之間獲得最佳比對(duì)。通過(guò)測(cè)定在所比較的兩條序列上觀察到的相同核堿基的數(shù)量，然后用兩個(gè)核堿基之間具有同一性的位置數(shù)量除以比較窗中位置的總數(shù)，然后將結(jié)果乘以100計(jì)算百分比同一性，以獲得兩條序列彼此之間的百分比核苷酸同一性?？墒褂靡阎惴ㄍㄟ^(guò)計(jì)算機(jī)進(jìn)行用于比較的序列的最佳比對(duì)。完全優(yōu)選地，使用CLUSTAL W軟件(版本1. 82)測(cè)定百分比序列同一性，參數(shù)設(shè)置如下(I)CPU MODE = Clustalff mp ； (2)ALIGNMENT = " full " ； (3)0UTPUTF0RMAT =〃 aln w/numbers" ； (4)OUTPUTORDER = " aligned" ； (5)COLOR ALIGNMENT = 〃 no"； (6) KTUP (字大小)=〃默認(rèn)〃 ；(7) WINDOW LENGTH ="默認(rèn)〃 ；(8) SCORE TYPE = "百分比“；(9) T0PDIAG =“默認(rèn)“；(10) PAIRGAP =“默認(rèn)“；(11) PHYLOGENETI CTREE/TREE TYPE = “ none" ； (12)MATRIX = 〃 默認(rèn)〃 ；(13)GAP OPEN =“默認(rèn)〃 ；(14)END GAPS =“ 默認(rèn)〃 ；(15) GAP EXTENSION =〃 默認(rèn)〃 ；(16) GAP DISTANCES =〃 默認(rèn)〃 ；(17) TREE TYPE =〃 cladogram"，和(18) TREE GRAPH DISTANCES =〃 隱藏〃。在圖1表示的本發(fā)明核酸結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地測(cè)定可能系列核苷酸的有限數(shù)目的集合內(nèi)序列SEQ ID No.X的可能的特定序列。作為闡明，并且對(duì)于本發(fā)明核適體的一些實(shí)施方案，在通式(I)的核適體上述結(jié)構(gòu)定義的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員例如通過(guò)數(shù)字計(jì)算機(jī)可容易地自動(dòng)產(chǎn)生所有可能的序列 SEQ ID No. X，所述數(shù)字計(jì)算機(jī)的內(nèi)存裝載了合適的指令集合。適當(dāng)時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員然后可以通過(guò)所述數(shù)字計(jì)算機(jī)分別自動(dòng)測(cè)定(i)空間結(jié)構(gòu)模型與圖1的核適體空間結(jié)構(gòu)模型相似或相同的那些序列，和(ii)核適體的結(jié)構(gòu)不同于圖1的核適體的那些序列。
與圖1的核適體具有相似或相同空間結(jié)構(gòu)的核適體包括這樣的適體，其包含之前已經(jīng)為該核適體描述的系列的環(huán)和莖。為了測(cè)定通式(I)的核酸的空間結(jié)構(gòu)，本領(lǐng)域技術(shù)人員在核苷酸序列描述基礎(chǔ)上使用 ZukeH2003，Nucleic Acids Research, Vol. 231(13) :3406-3413)描述的mFold
計(jì)算機(jī)程序特別產(chǎn)生結(jié)構(gòu)模型，也可在以下網(wǎng)址使用所述mFeld 計(jì)算機(jī)程序:httP// mfold. bioinfo. rpi. edu/0優(yōu)選地，根據(jù)與用于獲得圖1表示的結(jié)構(gòu)的參數(shù)相同的參數(shù)使用mFold計(jì)算機(jī)程序，即以下條件⑴具有線性序列的DNA，(ii)折疊溫度25°C，(iii)離子條件[Na+] 150mM ； [Mg++] :4mM, (iv)校正類型寡聚物，(ν)百分比次優(yōu)性數(shù)目2，(vi)所計(jì)算的折疊數(shù)目的上限50，(vii)兩個(gè)堿基對(duì)之間的最大距離沒(méi)有限制和(viii)使用其他參數(shù)的默認(rèn)值。本領(lǐng)域的技術(shù)人員然后進(jìn)行(i)圖1的適體的結(jié)構(gòu)模型和(ii)剛剛已經(jīng)產(chǎn)生的通式(I)的適體的結(jié)構(gòu)模型之間的比較步驟，如果其結(jié)構(gòu)模型與圖1表示的適體的結(jié)構(gòu)模型相同或相似，那么他們肯定選擇剛剛已經(jīng)產(chǎn)生的通式(I)的適體。無(wú)論如何，為了驗(yàn)證新產(chǎn)生的通式(I)的適體的正向選擇，本領(lǐng)域技術(shù)人員例如根據(jù)本說(shuō)明書，尤其是實(shí)施例中詳細(xì)說(shuō)明的方法之一可驗(yàn)證其人因子Vll/VIIa結(jié)合性質(zhì)。在本發(fā)明核適體的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核適體包含與通式(I)的核酸具有至少80%的核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸，其包括這樣的適體，所述適體包含與通式(I)的所述核酸具有至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、 89%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%^ 100 % 核苷酸同一性的多核苷酸的15個(gè)連續(xù)核苷酸。在通式(I)的核酸的優(yōu)選實(shí)施方案中，序列SEQ ID No. X與序列SEQID No. 3至 SEQ ID No. 85和SEQ ID No. 87至SEQ ID No. 100中至少之一具有至少80%的核苷酸同一性，其包含與序歹Ij SEQ ID No. 3 至 SEQ IDNo. 85 和 SEQ ID No. 87 至 SEQ ID No. 100 中至少之一具有至少 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或100%核苷酸同一性的序列。在通式(I)的核酸的其他優(yōu)選實(shí)施方案中，序列SEQ ID No. X選自序列SEQ ID No. 3 至 SEQ ID No. 85 和 SEQ ID No. 87 至 SEQ ID No. 100。在通式(I)的核酸的其他優(yōu)選實(shí)施方案中，序列SEQ ID No.X選自序列SEQ ID Nos.3、5、6、10、11、14、15、16、17、19、20、23、24、25、27、28、29、30、32、33、34、35、36、37、38、 39 禾口 40。根據(jù)本發(fā)明，結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸由與人因子Vll/VIIa接觸時(shí)能夠與其形成復(fù)合體的單鏈核酸組成。結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸因此包括這樣的核酸，在分別使所述核酸和蛋白質(zhì)配偶體接觸的初始步驟后可檢測(cè)與人因子Vll/VIIa形成復(fù)合體的所述核酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)例如實(shí)施表面等離振子共振檢測(cè)技術(shù)，包括如實(shí)施例中闡明的Bmeere 技術(shù)容易地進(jìn)行檢測(cè)與結(jié)合人因子vn/viia的核酸形成的復(fù)合體。本領(lǐng)域技術(shù)人員也可通過(guò)實(shí)施例中闡明的ELISA類型的常規(guī)技術(shù)容易地檢測(cè)目的核酸與人因子 Vll/VIIa之間復(fù)合體的形成。
如實(shí)施例中闡明，通式⑴的核酸具有結(jié)合任何類型的人因子Vll/VIIa的強(qiáng)大能力。尤其是，通式(I)的核酸結(jié)合天然的人因子Vll/VIIa以及重組的人因子Vll/VIIa。不希望受任何理論約束，申請(qǐng)人認(rèn)為實(shí)施例中呈現(xiàn)的結(jié)果顯示本發(fā)明通式(I)的核酸具有結(jié)合不同糖基化類型的人因子Vll/VIIa的強(qiáng)大能力。換言之，申請(qǐng)人認(rèn)為通式 (I)的核酸不僅能夠有效結(jié)合天然來(lái)源(包括人血漿)的因子Vll/VIIa，還結(jié)合轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，優(yōu)選多個(gè)物種(包括兔)的轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生的重組人因子Vll/VIIa，其糖基化類型與血漿中天然產(chǎn)生的人因子Vll/VIIa的糖基化類型可以不同，甚至輕微不同。根據(jù)本發(fā)明，“特異性”結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸由具有結(jié)合人因子Vll/VIIa 能力的核酸組成，所述能力比其結(jié)合任何其他蛋白質(zhì)(包括非人哺乳動(dòng)物基因組編碼的因子VII/VIIa，如兔因子Vll/VIIa)的能力強(qiáng)大。為本說(shuō)明書目的，第一個(gè)核酸具有結(jié)合人因子VII/VIIa的能力，當(dāng)使用任何一種上述技術(shù)檢測(cè)結(jié)合時(shí)其比第二個(gè)核酸的能力強(qiáng)大，并且在相同的檢測(cè)條件下，與利用第二個(gè)核酸獲得的值相比，利用第一個(gè)核酸獲得統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著更高的結(jié)合信號(hào)值。作為闡明，如在實(shí)施例中，當(dāng)用于檢測(cè)結(jié)合的技術(shù)是Biaeere 技術(shù)時(shí)，第一個(gè)核酸具有結(jié)合人因子VII/ VIIa的能力，不管表示的測(cè)量單位如何，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)核酸的共振信號(hào)值統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著高于為第二個(gè)核酸測(cè)量的共振信號(hào)值時(shí)，第一個(gè)核酸比第二個(gè)核酸的能力更高。兩個(gè)“統(tǒng)計(jì)學(xué)上”不同的測(cè)量值包括兩個(gè)值，在所述兩個(gè)值之間具有比使用的檢測(cè)結(jié)合技術(shù)的測(cè)量誤差更大的差異。如實(shí)施例闡明，檢測(cè)本發(fā)明核酸特異性結(jié)合人因子VII/VIIa的能力。一般地，通式(I)的核酸對(duì)人因子VII/VIIa具有至多500nM，更多至多200nM的解
離常數(shù)值。已經(jīng)顯示通式⑴的核酸具有結(jié)合人因子VII/VIIa的能力，該能力比其結(jié)合來(lái)自非人哺乳動(dòng)物的任何因子VII/VIIa的能力顯著更強(qiáng)。尤其是，盡管通式(I)的核酸具有結(jié)合任何類型人因子VII/VIIa(包括天然的或重組的)的強(qiáng)大能力，其結(jié)合非人哺乳動(dòng)物的基因組編碼的因子VII/VIIa(包括兔因子VII/VIIa)的能力弱或沒(méi)有能力。在實(shí)施例中闡明了通式(I)的核酸的這個(gè)有利特征，尤其是具有序列SEQ ID No. 86的核酸，其由通式(I)的核酸組成，其中序列SEQ ID No. X由序列SEQ ID No. 85組成，并且在圖9中表示了其與PEG和生物素偶聯(lián)后的結(jié)構(gòu)。因此，對(duì)于序列SEQ ID No. 86的通式(I)的核酸，根據(jù)Biaeore 技術(shù)已經(jīng)測(cè)定結(jié)合人因子VII/VIIa的能力值(表述為解離常數(shù)Kd)約為ΙΟΟηΜ。此外，通式(I)的所述核酸具有結(jié)合人血漿因子VII/VIIa和例如轉(zhuǎn)基因兔中產(chǎn)生的重組人因子VII/VIIa的能力， 其數(shù)量級(jí)相同。實(shí)施例中也已經(jīng)顯示，通式(I)的核酸與人因子VII/VIIa之間的復(fù)合體是化學(xué)計(jì)量的，即通式(I)的核酸的分子數(shù)與復(fù)合的人因子VII/VIIa的分子數(shù)的比值大約是1 1， 并且可以更具體是1 1。因此，根據(jù)另一方面，通式(I)的核酸“特異性”結(jié)合人因子VII/VIIa的能力也可分別表述為人因子VII/VIIa和非人因子VII/VIIa的解離常數(shù)Kd的比值。根據(jù)本發(fā)明通式(I)的核酸的另一特征，所述核酸特異性結(jié)合人因子VII/VIIa的能力也可以通過(guò)以下條件(A)來(lái)表示
人Kd/非人 Kd < 0.01(A)，其中，“人Kd”是通式(I)的核酸對(duì)人因子Vll/VIIa的解離常數(shù)，以摩爾單位表示，并且“非人Kd”是通式(I)的所述核酸對(duì)非人因子Vll/VIIa的解離常數(shù)，以相同的摩
爾單位表示。因此，對(duì)于特異性結(jié)合本發(fā)明人因子Vll/VIIa的核酸，人Kd/非人Kd比值優(yōu)選低于0.01，更好低于0. 001。本發(fā)明通式(I)的核酸與人因子Vll/VIIa的結(jié)合特異性的這些特征闡明，本發(fā)明的適體核酸可有利地用于區(qū)分人因子Vll/VIIa和來(lái)自非人哺乳動(dòng)物的因子Vll/VIIa，例如兔因子Vll/VIIa。尤其是，本發(fā)明通式(I)的核酸有利地用于純化人因子Vll/VIIa的的方法中，包括從能夠含有來(lái)自非人哺乳動(dòng)物的因子Vll/VIIa的復(fù)雜起始材料純化。尤其是，通式(I) 的核酸可以用于在來(lái)自對(duì)人因子Vll/VIIa轉(zhuǎn)基因的兔的生物液中純化重組因子Vll/VIIa 的方法中，所述生物液能夠含有兔天然產(chǎn)生的因子Vll/VIIa。如實(shí)施例中闡明，通式(I)的核酸的另一特征是其在與人因子Vll/VIIa的復(fù)合體中通過(guò)所述復(fù)合體與金屬-陽(yáng)離子-螯合劑溫育釋放人因子Vll/VIIa的能力。尤其已經(jīng)顯示通過(guò)使與金屬-陽(yáng)離子-螯合劑如EDTA接觸從所述復(fù)合體中釋放與通式(I)的核酸復(fù)合的因子Vll/VIIa的分子。因此，根據(jù)另一方面，可通過(guò)使與金屬-陽(yáng)離子-螯合劑接觸，包括使與EDTA接觸解離本發(fā)明通式(I)的核酸與人因子Vll/VIIa的結(jié)合。本發(fā)明通式(I)的核酸的這個(gè)額外特征對(duì)所述核酸在用于純化人因子Vll/VIIa 的方法中尤其有利。尤其是，在該純化應(yīng)用中，然后可通過(guò)簡(jiǎn)單地使與金屬-陽(yáng)離子-螯合劑接觸或溫育以純化形式回收在與通式(I)的核酸的復(fù)合體中固定的人因子Vll/VIIa，因此不需要使用已知至少部分變性人因子Vll/VIIa的物質(zhì)，如酸性條件或尿素。對(duì)于其在純化人因子Vll/VIIa的方法中的用途，本發(fā)明通式(I)的核酸優(yōu)選固定在固體基質(zhì)上。所述固體基質(zhì)包括固體顆粒、層析基質(zhì)等。在各種類型的固體基質(zhì)上固定目的核酸的技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。固體基質(zhì)可以是來(lái)自瓊脂糖或纖維素的凝膠或合成凝膠，如丙烯酰胺、甲基丙烯酸酯或聚苯乙烯衍生物組成的親和層析柱，或芯片，如適合于表面等離振子共振的芯片、 膜，如聚酰胺、聚丙烯腈或聚酯膜，或磁珠或順磁珠。對(duì)于其在純化人因子Vll/VIIa的方法中的用途，本發(fā)明通式(I)的核酸優(yōu)選包括在化學(xué)結(jié)構(gòu)中，所述化學(xué)結(jié)構(gòu)也包含間隔工具，并且在適當(dāng)時(shí)包含用于在固體基質(zhì)上固定的工具。因此，本發(fā)明還涉及特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的化合物，其特征在于其具有以下通式(II)[SPAC]-[NUCL] (II)，其中:-[SPAC]表示間隔鏈，禾口-[NUCL]表示特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸，其包含與通式(I)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
上述化合物組成了純化人因子Vll/VIIa的工具的特定實(shí)施方案。通式(II)的化合物中表示為[SPAC]的“間隔鏈”可以是任何已知類型。所述間隔鏈的功能是在物理空間上將核酸[NUCL]與其上固定所述化合物的固體基質(zhì)表面間隔開(kāi)， 并允許核酸[NUCL]相對(duì)于其可以固定的固體基質(zhì)表面進(jìn)行相對(duì)遷移。因?yàn)樗龉腆w基質(zhì)與通式(I)的核酸太接近，間隔鏈限制或防止位阻阻礙所述核酸與人因子Vll/VIIa的分子 (其將與所述核酸接觸)之間的結(jié)合事件。在通式(II)的化合物中，間隔鏈優(yōu)先結(jié)合核酸[NUCL]的5'末端或3'末端。有利地，間隔鏈結(jié)合適體的一端和固體基質(zhì)。使用間隔鏈的這種構(gòu)造具有不直接在固體基質(zhì)上固定適體的優(yōu)勢(shì)。優(yōu)選地，間隔鏈?zhǔn)欠翘禺惖墓押塑账峄蚓垡叶?PEG)。當(dāng)間隔鏈由非特異的寡核苷酸組成時(shí)，所述寡核苷酸長(zhǎng)度有利地包含至少5個(gè)核苷酸，優(yōu)選5 到15個(gè)核苷酸。在其中間隔鏈由聚乙二醇組成的通式(II)的化合物的實(shí)施方案中，所述間隔鏈包括PEG(ClS)類型的聚乙二醇。為了將適體直接固定在固體基質(zhì)上，或間隔鏈上，可利用多種化學(xué)基團(tuán)，如用于共價(jià)固定所述核酸的基團(tuán)，例如巰基、胺或能夠與固體基質(zhì)上存在的化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)的任何其他基團(tuán)來(lái)化學(xué)修飾核酸[NUCL]。在一些實(shí)施方案中，適當(dāng)時(shí)在利用一個(gè)或多個(gè)合適的化學(xué)基團(tuán)修飾所述間隔鏈后，間隔鏈本身能夠固定在固體基質(zhì)上。在其他實(shí)施方案中，間隔鏈結(jié)合化合物，其允許包含核適體的目的化合物固定在移動(dòng)基質(zhì)上。因此，本發(fā)明還涉及特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的化合物，其特征在于具有以下通式(III)[FIX]-[SPAC]-[NUCL] (III)，其中:-[FIX]表示用于在基質(zhì)上固定的化合物，-[SPAC]表示間隔鏈，禾口-[NUCL]表示特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸，其包含與通式(I)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。上文通式(III)的化合物組成了用于純化人因子Vll/VIIa的工具的實(shí)施方案。用于純化通式(II)或通式(III)的人因子Vll/VIIa的所述工具優(yōu)先是結(jié)合固體基質(zhì)的形式。在通式(III)的化合物中，化合物[FIX]由選自(i)能夠與固體基質(zhì)的表面材料形成一個(gè)或多個(gè)共價(jià)鍵的化合物和(ii)能夠通過(guò)弱的非共價(jià)鍵，包括氫鍵、靜電力或范德華力在固體基質(zhì)上特異性結(jié)合的化合物組成。第一種類型的化合物[FIX]包括雙功能偶聯(lián)劑，如戊二醛、SIAB或SMCC。Hermanson G. T. (1996,Bioconjugate techniques,San Diego :Academic Press, PP 239-242)描述的化合物SIAB是具有以下通式(I)的化合物
權(quán)利要求
1.特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸，所述核酸包含與以下通式(I)的核酸具有至少 40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸5' -[SEQ ID No. 1]χ-[SEQ ID No. X]-[SEQ ID No. 2]y-3' (I)， 其中，-"SEQ ID No. X"由選自序列 SEQ ID No. 3 到 SEQ ID No. 85 和 SEQ IDNo. 87 到 SEQ ID No. 100的核酸組成，-"χ"是等于0或1的整數(shù)，并且 y"是等于0或1的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的核酸，其特征在于序列SEQID No. X選自與序列SEQID No. 3至SEQ ID No. 85和SEQ ID No. 87至SEQ ID No. 100至少一個(gè)具有至少40%的核苷酸同一性，更好至少80%核苷酸同一性的核酸。
3.權(quán)利要求2的核酸，其特征在于序列SEQID No. X選自序列SEQID No. 3至SEQ ID No.85 和 SEQ ID No. 87 至 SEQ ID No. 100。
4.權(quán)利要求1至3中一項(xiàng)的核酸，其特征在于它包含與選自序列SEQIDNo. 3至SEQ ID No. 85和SEQ ID No. 87至SEQ ID No. 100的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
5.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的核酸，其特征在于它包含序列SEQID No. 86。
6.權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的核酸，其特征在于它具有特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的能力，所述能力通過(guò)以下條件(A)表示人 Kd/非人 Kd < 0.01(A)， 其中，-“人Kd”是通式(I)的核酸對(duì)人因子Vll/VIIa的解離常數(shù)，以摩爾單位估計(jì)，并且 -“非人Kd”是通式⑴的所述核酸對(duì)非人因子Vll/VIIa的解離常數(shù)，以相同的摩爾單位表示。
7.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的核酸，其特征在于它對(duì)人因子Vll/VIIa具有至多500nM， 更好至多200nM的解離常數(shù)值。
8.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的核酸，其特征在于其與人因子Vll/VIIa的結(jié)合可通過(guò)與金屬-陽(yáng)離子-螯合劑接觸解離。
9.特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的化合物，其特征在于它具有以下通式(II) [SPAC]-[NUCL] (II)，其中:-[SPAC]表示間隔鏈，并且-[NUCL]表示特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸，其包含與權(quán)利要求1定義的通式 (I)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
10.特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的化合物，其特征在于它具有以下通式(III) [FIX]-[SPAC]-[NUCL] (III)，其中:-[FIX]表示用于在基質(zhì)上固定的化合物， -[SPAC]表示間隔鏈，并且-[NUCL]表示特異性結(jié)合人因子Vll/VIIa的核酸，其包含與權(quán)利要求1定義的通式 (I)的核酸具有至少40%核苷酸同一性的多核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
11.(i)權(quán)利要求1至8的一項(xiàng)中的核酸或權(quán)利要求9和10中任一項(xiàng)的化合物與(ii) 人因子Vll/VIIa之間的復(fù)合體。
12.用于固定人因子Vll/VIIa的基質(zhì)，其特征在于它包含固體基質(zhì)材料，其上移植了權(quán)利要求1至8的一項(xiàng)中的多種核酸或權(quán)利要求9和10中任一項(xiàng)的化合物。
13.用于在基質(zhì)上固定人因子Vll/VIIa的方法，其包括這樣的步驟，其中使包含人因子Vll/VIIa的樣品與權(quán)利要求12的基質(zhì)接觸。
14.用于純化人因子Vll/VIIa的方法，其包括以下步驟a)使包含人因子Vll/VIIa的樣品與權(quán)利要求1至8的一項(xiàng)的核酸或權(quán)利要求9和10 任一項(xiàng)的化合物或權(quán)利要求12的基質(zhì)接觸，以便在(i)所述核酸、或所述化合物、或所述基質(zhì)與(ii)人因子Vll/VIIa之間形成復(fù)合體，和b)從步驟a)形成的復(fù)合體中釋放人因子Vll/VIIa并回收純化的人因子Vll/VIIa。
15.權(quán)利要求14的方法，其包括利用洗滌緩沖液洗滌親和基質(zhì)的步驟a’)。
16.用于檢測(cè)樣品中人因子Vll/VIIa存在的方法，其包括以下步驟a)使權(quán)利要求1至8的一項(xiàng)的核酸、或權(quán)利要求9和10中任一項(xiàng)的化合物或權(quán)利要求 12的基質(zhì)與所述樣品接觸，和b)檢測(cè)(i)所述核酸或所述化合物或所述基質(zhì)與(ii)因子Vll/VIIa之間復(fù)合體的形成。
17.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的核酸與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑的組合。
18.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的核酸，其用作藥物。
19.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的核酸用于生產(chǎn)治療凝血功能障礙的藥物的用途。
20.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的核酸用于治療疾病的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及特異性結(jié)合人因子VII/VIIa的包含至少15個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的核酸。
文檔編號(hào)A61P7/04GK102365293SQ201080014904
公開(kāi)日2012年2月29日 申請(qǐng)日期2010年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月19日
發(fā)明者F·迪康熱, G·佩雷 申請(qǐng)人:Lfb 生物技術(shù)公司