專利名稱：一種桑白皮總黃酮的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種桑白皮總黃酮的純化方法。
背景技術(shù)：
桑白皮(Cortex Mori)為桑科植物桑屬植物Γ Morus alba LI)的干燥根皮,性甘、寒，歸肺經(jīng)，有瀉肺平喘、利水消腫之功效。桑白皮主要含多種黃酮類成分，包括摩魯新L.、桑根白皮素(Morusin)、環(huán)桑素、桑酮。環(huán)桑烯等。文獻(xiàn)報(bào)道其總黃酮具有利尿、降壓、降糖、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗癌及抗HIV等作用。桑白皮通常采用乙醇溶液提取獲得總黃酮粗提物，該粗提物中總黃酮的含量較低，還不能達(dá)到使用要求。目前，有用聚酰胺來純化桑白皮總黃酮的報(bào)道，但聚酰胺的死吸附嚴(yán)重、不易洗脫，總黃酮的損失很大，并且用聚酰胺純化后的總黃酮含量為33. 5%，也是遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到藥品注冊管理辦法規(guī)定的有效部位含量占提取物的50%以上的規(guī)定。大孔吸附樹脂是一種具有多孔性的高分子分離材料，具有穩(wěn)定性高、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、操作簡便、成本較低、可反復(fù)使用等特點(diǎn)。大孔吸附樹脂主要是通過物理作用從溶液中有選擇性地吸附有機(jī)物質(zhì)，從而達(dá)到分離純化的目的。大孔樹脂純化技術(shù)是中藥制藥工業(yè)中頗具發(fā)展前景的實(shí)用新技術(shù)之一，已被成功地應(yīng)用于黃酮類、皂苷類、生物堿類等藥物的提取分離，在葛根、銀杏黃酮純化中運(yùn)用比較廣泛
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有桑白皮總黃酮提取物中總黃酮含量低的缺陷，提供一種桑白皮總黃酮的純化方法，純化后，總黃酮的含量可達(dá)53. 6%。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明桑白皮總黃酮的純化方法取桑白皮總黃酮粗提物，用乙醇溶液溶解為相當(dāng)于原生藥O. 5 lg/Ι的粗提物溶液，調(diào)整pH為5 6，以1. 5 2. 5BV/h的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積< 2BV，吸附完成后先用8 12BV蒸餾水洗脫，再用50 95%的乙醇溶液以I 1. 5BV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物。優(yōu)選的，上述桑白皮總黃酮的純化方法為取桑白皮總黃酮粗提物，用70%乙醇溶液溶解為相當(dāng)于原生藥O. 7g/l的粗提物溶液，調(diào)整pH為5 6，以2BV/h的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積< 2BV，吸附完成后先用IOBV蒸餾水洗脫，然后用70%的乙醇溶液以lBV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物。優(yōu)選的，前述純化方法中所用的大孔樹脂為弱極性大孔樹脂，優(yōu)選AB-8型大孔樹脂。上述技術(shù)方案是通過如下的實(shí)驗(yàn)篩選出來的1、材料與儀器 1.1材料
藥材桑白皮(Cortex ifori)，購于貴州圣濟(jì)堂公司，經(jīng)貴州大學(xué)廖海民教授鑒定為桑科植物桑屬植物Γalba LI)的干燥根皮。標(biāo)準(zhǔn)品摩魯新L (自制)，經(jīng)HPLC的C
譜、H譜、紅外、紫外鑒定為單一化合物，純度為98%以上。大孔樹脂AB-8、D101、S_8。1. 2主要儀器與設(shè)備
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A :上海亞榮生化儀器廠；SHB-95型循環(huán)水式多用真空泵鞏義市英峪予華儀器廠；DJ-200A電子天枰莆田市秀嶼區(qū)亞太電子天平廠；SP--2100型可見分光光度計(jì)上海光譜儀器有限公司.
2、方法
2.1摩魯新L標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及回歸方程
準(zhǔn)確稱取經(jīng)105°C干燥至恒量的摩魯新L. 28. 7mg,無水乙醇60°C水浴加熱溶解，室溫冷卻后轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，無水乙醇定容，搖勻，得O. 574mg/ml的對照品溶液，備用。精密吸取上述的摩魯新L對照品溶液O. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0,1. 2ml,分別置于
10.0ml容量瓶中，再分別向其中加入3% (重量)A1C13水溶液O. 5ml進(jìn)行顯色，無水乙醇定容，同時(shí)設(shè)空白對照組(不加顯色劑)，溶液搖勻放置30min，在波長為401nm處空白對照組校零后測定A值。數(shù)據(jù)處理得回歸方程A = 10. 727C-0. 0307 (R2=O. 9996)。表明其濃度在O. 0116 mg/ml O. 0696 mg/ml范圍有良好的線性線性關(guān)系。2. 2樹脂預(yù)處理
取DlOl、S-8、AB-8用95%乙醇浸泡24h，然后濕法裝柱，95%乙醇洗脫，量取一定量洗脫液與等量蒸餾水混合不渾濁后再用蒸餾水洗至無醇味，再依次用2. 5 BV的3%Na0H水溶液浸泡3h后洗脫、用4BV的蒸餾水洗至中性，再用2. 5 BV的3%鹽酸水溶液浸泡3h后洗脫、最后用蒸餾水洗脫至PH為中性，從柱子中倒出樹脂裝瓶子密封備用。2.3樹脂的靜態(tài)吸附與解吸性能考察 2. 3.1靜態(tài)吸附
稱取一定量經(jīng)預(yù)處理過的D101、AB-8及S-8 (均相當(dāng)于2. O g干重)，分別置入150 ml具塞錐形瓶中，各精密加入20 ml供試品溶液。置30°C恒溫?fù)u床中振搖，于10min，20min，40min, lh，2h，3h，4h，12h吸取上清液2ml，測定黃酮含量。按下式計(jì)算各樹脂室溫下的吸附值 Q(mg/g)和吸附率 E(%)，公式 Q = (C0V0 -C1V1)/ ME = (C0-C1) / C。X 100%。式中 Q-吸附量(mg/g), Cc1-吸附前樣品液的起始濃度(mg/ml),
V0-吸附前樣品液的起始體積(ml)，C1-吸附后樣品液的剩余濃度(mg/ml)，
V1-吸附殘液體積(ml)，M-樹脂質(zhì)量(g)。2. 3.1靜態(tài)解析
將上述3種吸附飽和的樹脂2. Og,分別裝入3個(gè)150ml具塞錐形瓶中，各精密加入20ml70%乙醇。置30°C恒溫?fù)u床中振搖24小時(shí)以上，讓其充分解析，取解析液測定起濃度，根據(jù)公式D (解吸率)=C2/ (C0 - C1) XlOO % (C1-吸附飽和時(shí)質(zhì)量濃度(mg/ ml), C2-洗脫液質(zhì)量濃度；計(jì)算解析率，結(jié)果如表I所示。表I幾種樹脂的靜態(tài)吸附量，吸附率，解析量與解析率
權(quán)利要求
1.一種桑白皮總黃酮的純化方法，其特征在于取桑白皮總黃酮粗提物，用乙醇溶液溶解為相當(dāng)于原生藥O. 5 lg/Ι的粗提物溶液，調(diào)整pH為5 6，以1. 5 2. 5BV/h的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積< 2BV，吸附完成后先用8 12BV蒸餾水洗脫，再用50 95%的乙醇溶液以I 1. 5BV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮， 干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物。
2.按照權(quán)利要求1所述桑白皮總黃酮的純化方法，其特征在于取桑白皮總黃酮粗提物，用70%乙醇溶液溶解為相當(dāng)于原生藥O. 7g/l的粗提物溶液，調(diào)整pH為5 6，以2BV/h 的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積< 2BV，吸附完成后先用IOBV蒸餾水洗脫，然后用70%的乙醇溶液以lBV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物。
3.按照權(quán)利要求1或2所述桑白皮總黃酮的純化方法，其特征在于所述大孔樹脂為弱極性大孔樹脂。
4.按照權(quán)利要求3所述桑白皮總黃酮的純化方法，其特征在于所述弱極性大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種桑白皮總黃酮的純化方法取桑白皮總黃酮粗提物，溶解為相當(dāng)于原生藥0.5～1g/l的粗提物溶液，調(diào)整pH為5～6，以1.5～2.5BV/h的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積≤2BV，吸附完成后先用8～12BV蒸餾水洗脫，再用50～95%的乙醇溶液以1～1.5BV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物，提取物中桑白皮總黃酮的含量可達(dá)53%以上，滿足藥品注冊管理辦法規(guī)定的有效部位含量占提取物的50%以上的規(guī)定，可直接應(yīng)用于藥品的制備。
文檔編號(hào)A61P3/10GK103027951SQ201110302498
公開日2013年4月10日 申請日期2011年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月9日
發(fā)明者周英 申請人:貴州大學(xué)