50 μΜ DS-201 (相當于細胞膜內(nèi)側(cè)給藥)，可以使BKca通道開放概率(通道活性)增加5.4?173.2倍(+40mV膜電位，10nM Ca2+)。
[0058]DS-201在重組表達人源血管平滑肌HEK-293細胞的全細胞構(gòu)型實驗:實驗方案與分析方法與豬冠狀動脈平滑肌細胞全細胞構(gòu)型實驗一致。結(jié)果如圖5所示。在實驗浴液中(相當于細胞膜外側(cè)給藥)加入120 μ M DS-201，不能激活HEK-293細胞上BKca。在+40mV膜電位，BKcJt觀電流幅值加藥前后分別為555pA和378pA，通道電流被抑制31.9%。
[0059]DS-201在重組表達人源血管平滑肌BKeJ^HEK-293細胞的細胞貼附式構(gòu)型:實驗方案與分析方法與豬冠狀動脈平滑肌細胞貼附式構(gòu)型實驗一致。結(jié)果如圖6所示。在實驗浴液中(相當于細胞膜外側(cè)給藥)加入120 μ M DS-201，不能激活ΗΕΚ-293細胞上81(&通道，加入120 μ M DS-201前后通道開放概率分別是0.014和0.010 (+40mV膜電位，?OCa2+)，通道開放概率被抑制28.6%。圖5和圖6的結(jié)果表明在細胞膜外側(cè)給藥的情況下，DS-201不激活BKGa通道，高濃度的DS-201抑制BK Ga通道。
[0060]DS-201在重組表達人源血管平滑肌HEK-293細胞的細胞膜內(nèi)面向外式構(gòu)型實驗:實驗方案與分析方法與豬冠狀動脈平滑肌細胞內(nèi)面向外式構(gòu)型實驗一致。結(jié)果如圖7所示。表明浴液中(相當于細胞膜內(nèi)側(cè)給藥)加入40?120 μ M DS-201能明顯激活BKca通道。+40mV膜電位，?OCa2+下，加入40、80、120 μ M的DS-201前和后通道開放概率分別是 0.044 和 0.103,0.148,0.156，通道開放概率分別增加 130.0%,236.4%,254.5%0
[0061]圖1?圖7的結(jié)果表明，若要選擇性獲得DS-201在細胞膜內(nèi)側(cè)的激活效應(yīng)，必須設(shè)計新的投藥系統(tǒng)，將DS-201原藥直接投入細胞。
[0062](3)DS-201脂質(zhì)體的生物學活性試驗
[0063]在重組表達人源血管平滑肌HEK-293細胞全細胞構(gòu)型下DS-201脂質(zhì)體實驗:在Iml實驗浴液中加入DS-201的脂質(zhì)體20 μ I (相當于細胞膜外側(cè)加入DS-201脂質(zhì)體)，觀察DS-201脂質(zhì)體藥物激活BKea的情況，結(jié)果見圖8。由圖8可知，DS-201脂質(zhì)體能明顯增加BKca全細胞電流。+40mV膜電位下，BK Ca宏觀電流從642.5pA增加到1218.4pA，增加了 208.3%o
[0064]在重組表達人源血管平滑肌HEK-293細胞細胞貼附式構(gòu)型下DS-201脂質(zhì)體實驗:在Iml實驗浴液中加入DS-201脂質(zhì)體20 μ I (相當于細胞膜外側(cè)加入DS-201脂質(zhì)體，浴液約含DS-201 4 μ Μ)，觀察脂質(zhì)體藥物激活^(&的情況。結(jié)果如圖9所示，表明DS-201脂質(zhì)體能明顯增加細胞貼附式構(gòu)型下的BKca單通道電流。+40mV膜電位下，BKc^道開放概率從0.022增加到0.067，增加了 340.6%0
[0065]圖8和圖9的實驗結(jié)果表明，將DS-201按照本發(fā)明所述的方法制備成DS-201脂質(zhì)體，可將DS-201原藥遞送到細胞膜內(nèi)側(cè)發(fā)揮出明顯激活BKJ勺作用，藥物利用度高，藥物療效顯著增大。
[0066](4)DS_201脂質(zhì)體的包封率實驗
[0067]本發(fā)明所述DS-201脂質(zhì)體包封率的測定包括如下步驟:
[0068]①精密量取DS-201脂質(zhì)體0.5ml于離心管中，15000g，4°C離心15min，收集上清液，用高效液相色譜法(HPLC)測定游離DS-201濃度(C游離)；
[0069]②精密量取DS-201脂質(zhì)體0.5ml于離心管中，加入10% TritonX-1OO 20μ1，充分渦旋振蕩混勻，同樣也用HPLC測定總量DS-201濃度(C,& )；
[0070]③DS-2Ol 脂質(zhì)體的包封率 EE% = (1-Ciss /C總)X 100%。
[0071]按上述步驟測得實施例1的包封率為66.66% (4°C貯存30天后的包封率)。
[0072]實施例2
[0073](I)分別稱取丹參酮II A磺酸鈉0.24mg、大豆磷脂24mg、膽固醇6mg ；
[0074](2)將大豆磷脂溶解于氯仿中，配制成磷脂的氯仿溶液，磷脂的氯仿溶液中磷脂的濃度為10mg/ml ;將膽固醇溶解于氯仿中，配制成膽固醇的氯仿溶液，膽固醇的氯仿溶液中膽固醇的濃度為9mg/ml ;將葡萄糖溶解于去離子水中，配制成質(zhì)量百分數(shù)為5%的等滲葡萄糖溶液；將丹參酮II A磺酸鈉溶解于等滲葡萄糖溶液中，配制成丹參酮II A磺酸鈉的葡萄糖溶液，丹參酮II A磺酸鈉的葡萄糖溶液中丹參酮II A磺酸鈉的濃度為200 μ mol/L ；
[0075](3)將磷脂的氯仿溶液和膽固醇的氯仿溶液加入到茄形燒瓶中，在30°C水浴中超聲4min，超聲功率為120W ;然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，水浴溫度設(shè)置為20°C，轉(zhuǎn)速為4rpm，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1.5h，使其完全除去殘留的氯仿，在瓶底形成乳白色薄膜；
[0076](4)將丹參酮II A磺酸鈉的葡萄糖溶液加入到茄形燒瓶中，在搖床上振蕩25min，使薄膜溶脹水合，得到脂質(zhì)體混懸液；當電筒的一束平行光線透過時可觀察到丁達爾現(xiàn)象；
[0077](5)對步驟(4)得到的脂質(zhì)體混懸液進行探頭超聲，探頭超聲的功率為80W，采用循環(huán)超聲，每次超聲22s，間隔8s，循環(huán)40次，形成橙色透明液體；采用0.22ym—次性針式過濾器過濾，收集濾液，得到丹參酮II A磺酸鈉脂質(zhì)體，避光3?5°C貯存。
[0078]按上述包封率測定步驟得到實施例2的包封率結(jié)果60.31% (4°C貯存30天后的包封率)。
[0079]在重組表達人源血管平滑肌HEK-293細胞細胞貼附式構(gòu)型下DS-201脂質(zhì)體實驗:實驗方法同實施例1。在Iml實驗浴液中加入DS-201的脂質(zhì)體20 μ I (相當于細胞膜外側(cè)加入DS-201脂質(zhì)體)，觀察脂質(zhì)體藥物激活ΒΚ。^情況，結(jié)果顯示DS-201脂質(zhì)體能明顯增加細胞貼附式構(gòu)型下的BKca單通道電流。+40mV膜電位下，BK &通道開放概率增加了 203.9%o
[0080]實施例3
[0081](I)分別稱取丹參酮II A磺酸鈉0.29mg、大豆磷脂24mg、膽固醇6mg;
[0082](2)將大豆磷脂溶解于氯仿中，配制成磷脂的氯仿溶液，磷脂的氯仿溶液中磷脂的濃度為9mg/ml ;將膽固醇溶解于氯仿中，配制成膽固醇的氯仿溶液，膽固醇的氯仿溶液中膽固醇的濃度為10mg/ml ;將葡萄糖溶解于去離子水中，配制成質(zhì)量百分數(shù)為5%的等滲葡萄糖溶液；將丹參酮II A磺酸鈉溶解于等滲葡萄糖溶液中，配制成丹參酮II A磺酸鈉的葡萄糖溶液，丹參酮II A磺酸鈉的葡萄糖溶液中丹參酮II A磺酸鈉的濃度為150 μ mol/L ；
[0083](3)將磷脂的氯仿溶液和膽固醇的氯仿溶液加入到茄形燒瓶中，在20°C水浴中超聲5min，超聲功率為200W ;然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，水浴溫度設(shè)置為25 V，轉(zhuǎn)速為8rpm，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)3h，使其完全除去殘留的氯仿，在瓶底形成乳白色薄膜；
[0084](4)將丹參酮II A磺酸鈉的葡萄糖溶液加入到茄形燒瓶中，在搖床上振蕩35min，使薄膜溶脹水合，得到脂質(zhì)體混懸液；當電筒的一束平行光線透過時可觀察到丁達爾現(xiàn)象；
[0085](5)對步驟(4)得到的脂質(zhì)體混懸液進行探頭超聲，探頭超聲的功率為120W，采用循環(huán)超聲，每次超聲18s，間隔10s，循環(huán)60次，形成橙色透明液體；采用0.22 μm —次性針式過濾器過濾，收集濾液，得到丹參酮II A磺酸鈉脂質(zhì)體，避光3?5°C貯存。
[0086]按上述包封率測定步驟得到實施例3的包封率為52.81 % (4°C貯存30天后的包封率)。
[0087]在重組表達人源血管平滑肌HEK-293細胞細胞貼附式構(gòu)型下DS-201脂質(zhì)體實驗:實驗方法同實施例1。在Iml實驗浴液中加入DS-201的脂質(zhì)體20 μ I (相當于細胞膜外側(cè)加入DS-201脂質(zhì)體)，觀察脂質(zhì)體藥物激活ΒΚ。^情況，結(jié)果顯示DS-201脂質(zhì)體能明顯增加細胞貼附式構(gòu)型下的BKca單通道電流。+40mV膜電位下，BK &通道開放概率增加了 114.6%。
[0088]實施例4
[0089](I)分別稱取丹參酮II A磺酸鈉0.33mg、大豆磷脂27mg、膽固醇6mg ;
[0090](2)將大豆磷脂溶解于氯仿中，配制成磷脂的氯仿溶液，磷脂的氯仿溶液中磷脂的濃度為12mg/ml ;將膽固醇溶