一種生物堿二聚體及其制備方法與作為抗病毒劑的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物堿二聚體（alkaloid dimer)化合物及其制備方法與應(yīng)用，特 別是涉及一種對單純皰瘆I型病毒（HSV-I)和腸道病毒71 (EV71)具有極強(qiáng)的抑制作用的 生物堿二聚體及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 單純皰瘆I型病毒是一種包裹著的DNA病毒，具有高發(fā)病率，潛伏期長，嗜神經(jīng)組 織的特點(diǎn)，潛伏于周圍神經(jīng)系統(tǒng)，主要感染兒童，免疫力低下者以及器官移植者，一旦受到 外界適當(dāng)刺激就會大規(guī)模爆發(fā)，引發(fā)腦炎和角膜炎，嚴(yán)重者能致人死亡。目前臨床上抗病毒 藥物主要是核苷類抗生素，如阿昔洛韋，但近年來耐藥性感染人群迅速增加。腸道病毒71 是一種小的單正鏈RNA病毒，是引起兒童手足口病主要病原體，能夠引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng) 并發(fā)癥，導(dǎo)致嬰兒和兒童不可逆的腦功能損傷甚至死亡。目前沒有對EV71有效的疫苗和藥 物，臨床治療以對癥、支持治療為主。它們已經(jīng)對人類的健康尤其是兒童的健康造成嚴(yán)重的 影響。因此，尋找新的抗病毒藥物尤其是結(jié)構(gòu)新穎的抗病毒藥物已成為亟待解決的課題。 海洋微生物獨(dú)特的生存環(huán)境（高壓、高鹽、缺氧、避光等），促使海洋微生物產(chǎn)生大量結(jié)構(gòu)新 穎、具有抗病毒活性的化合物，為尋找潛在的抗病毒藥物提供了重要來源。但是關(guān)于海洋微 生物來源的具有抗HSV-I和EV71活性的化合物的報道還相當(dāng)少，尤其是具有潛在開發(fā)成為 手性藥物的海洋來源化合物的報道。
【發(fā)明內(nèi)容】

【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種式I結(jié)構(gòu)的生物堿二聚體，，其特征在于具有式I的結(jié)構(gòu)式為
2. 權(quán)利要求1所述的式I化合物的制備方法，其特征在于先在菌種培養(yǎng)基中對真菌 Pestalotiopsis sp. (ZJ-2009-7-6)進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再在發(fā)酵培養(yǎng)基中對該真菌進(jìn)行發(fā)酵 培養(yǎng)，將所得菌絲體用氯仿-甲醇混合液（I : 1)浸提3次減壓濃縮后，用乙酸乙酯萃取3 次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏分別進(jìn)行正相硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析后， 再經(jīng)HPLC高效液相制備色譜，將所得洗脫液濃縮，得到式I化合物；其中所述菌種培養(yǎng)基中 含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、瓊脂、粗海鹽、水；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有大米、粗海鹽、水、 溴化鉀、氯化鈣；所述的色譜分離為正相硅膠柱色譜分離、凝膠柱層析分離和高效液相色譜 分咼。
3. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述菌種培養(yǎng)基優(yōu)選含有葡萄糖 0· 1% -5.0%、酵母膏 0.01 % -1%、蛋白胨 0.01 % -1%、瓊脂 0· 1% -3.0%、氯化鈉 0. 05% -5%，其余為水，上述百分含量均為重量百分比，培養(yǎng)溫度優(yōu)選為0-30°C，培養(yǎng)時間 優(yōu)選為3-15天。
4. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)選含有大米 1.0% -80. 0% (重量百分比，下同）、氯化鈉0.05% -5%，氯化鈣0.01 % -5%，溴化鉀 0. 01 % -5%，其余為水，培養(yǎng)溫度優(yōu)選為0-30°C，培養(yǎng)時間優(yōu)選為20-100天。
5. 如權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于所述的正相硅膠柱層析采用的 固定相為200-300目硅膠，流動相為體積比為50% -100%的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑； 所述Sephadex LH-20凝膠柱層析采用的流動相為體積比為氯仿：甲醇=I : 1的混合 溶劑；所述HPLC高效液相制備色譜中采用的色譜柱為Kromasil 10 X 250mm，5 μ m，流速為 1. 0-5. OmL/min，流動相為體積比20 % -70 %的甲醇-水混合溶劑。手性拆分，優(yōu)選Kromasi I 系列手性柱，Kromasil 10X250mm，5 μπι，流速優(yōu)選為L 0-5. OmL/min，流動相優(yōu)選體積比為 40% -95%的無水乙醇-正己烷混合溶劑。
6. 權(quán)利要求1所述的式I化合物為晶體，其特征在于該晶體的空間群為P-1，晶胞 參數(shù)為 a= 9.7492(19) A，b= 10.793(2) A,c= 12.316(3) A, α = 106.75(3)。，β = 97.22(3)。，γ = 95.45(3)°，V =Ι219·4(4)Α3, Z = 2, Dc=L 358g/cm3, F (OOO) = 532， μ = 0. 106mm_1〇
7. 權(quán)利要求6所述晶體的制備方法，其特征在于將式I化合物溶于甲醇、乙醇、水、四氫 呋喃或丙酮中的任一種或幾種，靜置緩慢結(jié)晶即可得到式I化合物的晶體。
8. 如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于靜置緩慢結(jié)晶的條件為在0-30°C下，靜 置1-30天。
9. 一種抗病毒劑，其特征在于其含有權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽作為有效成分。
10. -種抗病毒劑，其特征在于其含有權(quán)利要求6所述的晶體作為有效成分。
11. 權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗病毒劑中的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求7所述的晶體在制備抗病毒劑中的應(yīng)用。
【專利摘要】一種生物堿二聚體及其制備方法與作為抗病毒劑的應(yīng)用，制備時先對真菌Pestalotiopsis sp.(ZJ-2009-7-6)進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再對該真菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將所得菌絲體用氯仿-甲醇混合液(1∶1)浸提3次減壓濃縮后，用乙酸乙酯萃取3次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏依次進(jìn)行正相硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析、HPLC高效液相色譜，即得式I化合物。本發(fā)明提供一種抗病毒劑，其特征在于以式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分，用于預(yù)防和/或治療由單純皰疹I(lǐng)型病毒(HSV-1)和/或腸道病毒71(EV71)引起的疾病。CGMCC NO.696020121217
【IPC分類】C07D498-20, A61P31-20, A61P31-22, C12R1-645, A61K31-499, C12P17-18
【公開號】CN104876945
【申請?zhí)枴緾N201510201548
【發(fā)明人】邵長倫, 王長云, 賈彥來, 管菲菲, 王翠芳, 魏美燕
【申請人】中國海洋大學(xué)
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年4月22日