處在檢測窗中；所述 外殼上蓋檢測窗右側(cè)空白處可作為用于記錄數(shù)據(jù)的記錄面。
[0048] 本實(shí)施例免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒的制備方法，包括以下操作 步驟：
[0049] 1)制備緩沖液:取熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體15ng，加入60μ1，ρΗ=6.5、 磷酸鹽濃度為80mmol/L的磷酸鹽緩沖液中，混合均勻，即得緩沖液；
[0050] 2)制備試劑卡:取硝酸纖維素膜，標(biāo)記出檢測線和質(zhì)控線，然后在檢測線上噴點(diǎn)包 被鼠抗人核基質(zhì)蛋白22抗體，在質(zhì)控線上噴點(diǎn)包被羊抗兔抗體，然后將硝酸纖維素膜、玻璃 纖維素膜、吸水紙、濾血膜依次搭接在塑料墊板上，并切割成所需寬度，然后裝入由上蓋和 下蓋連接在一起形成的外殼中，即得所述的試劑卡;其中外殼上蓋上設(shè)置有血樣孔和檢測 窗，所述血樣孔的位置對應(yīng)濾血膜的位置，所述檢測窗的位置對應(yīng)檢測線和質(zhì)控線的位置， 使檢測線和質(zhì)控線處在檢測窗中，所述外殼上蓋檢測窗右側(cè)空白處可作為記錄數(shù)據(jù)的記錄 面；
[0051] 3)將步驟1)制備的緩沖液、步驟2)制備的試劑卡，組裝，即得所述的免疫熒光層析 法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒。
[0052]本實(shí)施例試劑盒儲存在4~8°C環(huán)境下。
[0053] 實(shí)施例3
[0054] 本實(shí)施免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，包括緩沖液和試劑卡；
[0055]其中緩沖液為含有0.92ngAU熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體的pH=7.0、磷 酸鹽濃度為50mmol/L的磷酸鹽緩沖液;其中熒光標(biāo)記采用的熒光素的激發(fā)光波長為652nm， 發(fā)射光波長為668nm;
[0056]所述試劑卡包括試紙條，所述試紙條寬度為6mm，包括塑料墊板，塑料墊板上設(shè)置 硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上左右間隔l〇mm設(shè)置檢測線和質(zhì)控線，檢測線左側(cè)硝酸纖維 素膜上設(shè)置玻璃纖維素膜，質(zhì)控線右側(cè)硝酸纖維素膜上設(shè)置吸水紙，玻璃纖維素膜上設(shè)置 濾血膜;所述檢測線上每厘米包被160ng鼠抗人核基質(zhì)蛋白22抗體;所述質(zhì)控線上每厘米包 被l.Oyg羊抗兔抗體；
[0057] 所述試劑卡還包括外殼，所述外殼包括連接在一起的上蓋和下蓋，所述上蓋上設(shè) 置有血樣孔和檢測窗;所述血樣孔的位置對應(yīng)濾血膜的位置;所述檢測窗的位置對應(yīng)檢測 線和質(zhì)控線的位置，使檢測線和質(zhì)控線處在檢測窗中；所述外殼上蓋檢測窗右側(cè)空白處可 作為用于記錄數(shù)據(jù)的記錄面。
[0058] 本實(shí)施例免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒的制備方法，包括以下操作 步驟：
[0059] 1)制備緩沖液:取熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體55ng，加入60μ1，ρΗ=7.3、 磷酸鹽濃度為30mmol/L的磷酸鹽緩沖液中，混合均勻，即得緩沖液；
[0060] 2)制備試劑卡:取硝酸纖維素膜，標(biāo)記出檢測線和質(zhì)控線，然后在檢測線上噴點(diǎn)包 被鼠抗人核基質(zhì)蛋白22抗體，在質(zhì)控線上噴點(diǎn)包被羊抗兔抗體，然后將硝酸纖維素膜、玻璃 纖維素膜、吸水紙、濾血膜依次搭接在塑料墊板上，并切割成所需寬度，然后裝入由上蓋和 下蓋連接在一起形成的外殼中，即得所述的試劑卡;其中外殼上蓋上設(shè)置有血樣孔和檢測 窗，所述血樣孔的位置對應(yīng)濾血膜的位置，所述檢測窗的位置對應(yīng)檢測線和質(zhì)控線的位置， 使檢測線和質(zhì)控線處在檢測窗中，所述外殼上蓋檢測窗右側(cè)空白處可作為記錄數(shù)據(jù)的記錄 面；
[0061] 3)將步驟1)制備的緩沖液、步驟2)制備的試劑卡，組裝，即得所述的免疫熒光層析 法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒。
[0062]本實(shí)施例試劑盒儲存在4~8°C環(huán)境下。
[0063] 實(shí)施例4
[0064] 上述實(shí)施例1~3提供的試劑盒的使用方法，具體操作步驟為：
[0065] I:肝素結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)處理:取5000U核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)品加入lml的無核基質(zhì) 蛋白22的正常人新鮮尿液中，制成母液；用無核基質(zhì)蛋白22的新鮮尿液將該母液分別稀釋 成87U/ml、130U/ml、80U/ml、40U/ml、20U/ml、1 OU/ml、5U/ml、2 · 5U/ml、0 · 5U/ml 的核基質(zhì)蛋 白22標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0066] Π :取緩沖液，室溫下平衡15分鐘，取步驟I制備的各濃度的核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)溶 液各100μΙ分別加入到60μ1平衡后的緩沖液中，混合均勻后通過血樣孔加入到試劑卡的濾 血膜上，室溫水平放置10~15min后，將試劑卡插入熒光免疫讀數(shù)儀，設(shè)定激發(fā)光波長為 652nm，發(fā)射光波長為668nm，讀取不同濃度核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)品的熒光值，每個濃度核基質(zhì) 蛋白22標(biāo)準(zhǔn)溶液各測定5次，并計(jì)算熒光值的平均值;將熒光值的平均值為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的 核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值為橫坐標(biāo)做回歸曲線，得出回歸曲線方程，得到熒光值和 核基質(zhì)蛋白22濃度的關(guān)系式；
[0067] m:取緩沖液6〇μL，室溫下平衡15分鐘，取待測樣品100μΙ加入到平衡后的緩沖液 中，混合均勻后通過血樣孔加入到試劑卡的濾血膜上，室溫水平放置15min，將試劑卡插入 熒光免疫讀數(shù)儀，設(shè)定激發(fā)光波長為652nm，發(fā)射光波長為668nm，讀取待測樣品的熒光值， 將該熒光值帶入步驟Π 得到的關(guān)系式中，計(jì)算得到待測樣品核基質(zhì)蛋白22的濃度。
[0068] 試驗(yàn)例
[0069] 1、使用實(shí)施例1提供的試劑盒采用實(shí)施例4所述的方法分別測定濃度為30U/ml、 82U/ml、138U/ml的核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)品，每個標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)測試5次，計(jì)算的得到實(shí)施例1提 供的試劑盒檢測核基質(zhì)蛋白22濃度的相對偏差< 9%，同樣標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)測試所得結(jié)果的變 異系數(shù)CVS 10%，表明本發(fā)明試劑盒準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好。
[0070] 2、使用實(shí)施例1提供的試劑盒采用實(shí)施例4所述的方法分別測定從醫(yī)院取來的15 例健康人的尿液樣本和15例病人尿液樣本中核基質(zhì)蛋白22的濃度(U/ml)，其結(jié)果如下表1 所示：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，包括緩沖液和試劑 卡； 所述緩沖液為含有〇. 25~0.92ng/yl熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體的磷酸鹽緩 沖液； 所述試劑卡包括試紙條，所述試紙條包括塑料墊板，塑料墊板上設(shè)置硝酸纖維素膜，硝 酸纖維素膜上左右間隔設(shè)置檢測線和質(zhì)控線，檢測線左側(cè)硝酸纖維素膜上設(shè)置玻璃纖維素 膜，質(zhì)控線右側(cè)硝酸纖維素膜上設(shè)置吸水紙，玻璃纖維素膜上設(shè)置濾血膜;所述檢測線上包 被鼠抗人核基質(zhì)蛋白22抗體;所述質(zhì)控線上包被羊抗兔抗體。2. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 試劑卡還包括外殼，所述外殼包括連接在一起的上蓋和下蓋，所述上蓋上設(shè)置有血樣孔和 檢測窗;所述血樣孔的位置對應(yīng)濾血膜的位置;所述檢測窗的位置對應(yīng)檢測線和質(zhì)控線的 位置，使檢測線和質(zhì)控線處在檢測窗中。3. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 檢測線上鼠抗人核基質(zhì)蛋白22抗體的包被量為50~160ng/cm。4. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 質(zhì)控線上羊抗兔抗體的包被量為0.3~1. Oyg/cm。5. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 磷酸緩沖液的pH=6.5~7.3，磷酸鹽濃度為30~80mmol/L。6. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 檢測線和質(zhì)控線之間的間隔距離為5mm~10mm。7. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 試紙條的寬度為3mm~6mm。8. 如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體采用的熒光素的激發(fā)光波長為652nm，發(fā)射光波長為 668nm〇9. 如權(quán)利要求8所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒，其特征在于，所述 試劑盒的使用方法的操作步驟包括： I:取不同濃度的核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)品加入到緩沖液中，混合均勻后加入到試劑卡的濾 血膜上，室溫水平放置10~15min后，將試劑卡插入熒光免疫讀數(shù)儀，設(shè)定激發(fā)光波長為 652nm，發(fā)射光波長為668nm，讀取不同濃度核基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)品的熒光值，并將熒光值與核 基質(zhì)蛋白22標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值進(jìn)行線性分析，繪制熒光值和核基質(zhì)蛋白22濃度值標(biāo)準(zhǔn)曲線， 得到熒光值和核基質(zhì)蛋白22的濃度關(guān)系式； Π :取待測樣品加入到緩沖液中，混合均勻后加入到試劑卡的濾血膜上，室溫水平放置 10~15min，將試劑卡插入焚光免疫讀數(shù)儀，設(shè)定激發(fā)光波長為652nm，發(fā)射光波長為668nm， 讀取待測樣品的熒光值，將該熒光值帶入步驟I得到的關(guān)系式中，計(jì)算得到待測樣品核基質(zhì) 蛋白22的濃度。10. -種如權(quán)利要求1所述的免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒的制備方法， 其特征在于，包括以下操作步驟： 1)制備緩沖液:取熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體加入磷酸鹽緩沖液中，混合均 勻，即得緩沖液； 2) 制備試劑卡:取硝酸纖維素膜，標(biāo)記出檢測線和質(zhì)控線，然后在檢測線上包被鼠抗人 核基質(zhì)蛋白22抗體，在質(zhì)控線上包被羊抗兔抗體，然后將硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜、吸 水紙、濾血膜依次搭接在塑料墊板上，并切割成所需寬度的試劑卡； 3) 將步驟1)制備的緩沖液、步驟2)制備的試劑卡，組裝，即得所述的免疫熒光層析法檢 測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒。
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)療用品技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種免疫熒光層析法檢測核基質(zhì)蛋白22用試劑盒及其制備方法。該試劑盒，包括緩沖液和試劑卡；緩沖液為含有0.25～0.92ng/μl熒光標(biāo)記的兔抗人核基質(zhì)蛋白22抗體的磷酸鹽緩沖液；試劑卡包括塑料墊板，塑料墊板上設(shè)置硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上左右間隔設(shè)置檢測線和質(zhì)控線，檢測線左側(cè)硝酸纖維素膜上設(shè)置玻璃纖維素膜，質(zhì)控線右側(cè)硝酸纖維素膜上設(shè)置吸水紙，玻璃纖維素膜上設(shè)置濾血膜；檢測線上包被鼠抗人核基質(zhì)蛋白22抗體；質(zhì)控線上包被羊抗兔抗體。該試劑盒線性范圍好，檢測靈敏度高，重復(fù)性和準(zhǔn)確度高。
【IPC分類】G01N33/68
【公開號】CN105572387
【申請?zhí)枴緾N201610053411
【發(fā)明人】王嘎, 程自卿, 王輝武
【申請人】河南生生醫(yī)療器械有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月26日