專利名稱：海南地不容總生物堿提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種海南地不容總生物堿提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
海南地不容(Stephania hainanensis H. S. Lo et Y. Tsoong)為防己科千金藤屬山烏龜亞屬植物。又名金不換、山烏龜、一文錢，其塊根入藥，味苦，性寒，有小毒。有清熱解毒、截瘧、鎮(zhèn)痛的功能，用于癰疽腫毒、喉閉、瘧疾、胃痛。海南地不容中的生物堿成分，根據(jù)已有研究成果顯示含克班寧、脫氫克班寧、氧代克班寧、延胡索乙素、巴馬汀、I-紫堇單酚堿、異斯庫來堿、d—斯蒂酚靈堿、高阿莫林堿、粉防己堿、千金藤定堿、青風(fēng)藤堿、防己諾林堿等，其主要活性成分防己諾林堿(Fangchinoline)具有抗炎、鎮(zhèn)痛、降壓、抗腫瘤、抗血小板聚集作用；延胡索乙素(Tetrahydropalmatine)是一種活性強的生物堿,現(xiàn)代藥理研究表明其能抑制神經(jīng)中樞，有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠、安神作用；粉防己堿(Tetrandrine)為雙芐基異喹啉類生物堿，對心臟有負(fù)性肌力、負(fù)性頻率和負(fù)性傳導(dǎo)作用，其降壓時無反射性心率增快，并有肌松、解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎作用。巴馬汀(Palmatine)具有廣譜抗細(xì)菌感染、抗病毒作用，可以明顯增加白細(xì)胞吞噬細(xì)菌的能力。由于成癮性小，并具有類似與嗎啡的鎮(zhèn)痛作用，防己科千金藤屬部分藥用植物已應(yīng)用于中藥戒毒領(lǐng)域并取得了一定成效[張嚴(yán)，徐羽，崔箭，等.彝藥金不換戒毒作用的有效成分確定[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2007，16 (4) :361]。目前對海南地不容生物堿的提取，文獻(xiàn)報道的有甲醇浸泡，超聲輔助提取[黃建明，郭濟賢，段更利.RP-HPLC法測定千金藤屬植物中7種生物活性生物堿[J].藥學(xué)學(xué)報，1998，33 (7) :528]，或95%乙醇冷浸滲漉，有機溶劑分段萃取得不同有效部位[方圣鼎，徐學(xué)健，陳燃，鐘義.千金藤屬生物堿的研究VI海南地不容中的生物堿[J].中草藥，1987，18 (4) :2-5]，均用于海南地不容生物堿成分的分析，而非制備用。申請?zhí)枮?00810025776. 3的專利文獻(xiàn)提到一種金不換(廣西地不容、小花地不容或桂南地不容的干燥塊根)總生物堿的制備方法取藥材粗粉，加入乙醇滲漉或回流，減壓回收乙醇后的到的稠膏用酸溶，過濾，濾液過大孔樹脂柱或強酸性陽離子交換樹脂，洗脫液減壓回收溶劑，濃縮，干燥，即得。申請?zhí)枮?00710301389. 3的專利文獻(xiàn)公開了一種金不換(Stephania)戒毒作用有效成分的提取方法金不換塊根粉碎，50 90%酸性乙醇溶液回流提取，提取液在溫度為60 80°C條件下減壓濃縮的稠膏，稠膏在相同條件下減壓干燥得干浸膏粉，然后以氯仿醋酸乙酯對干浸膏粉回流提取，合并提取液并減壓回收至干即得。申請?zhí)枮?00810119399. X的專利文獻(xiàn)公開了山烏龜(Stephania delavayi Diels)提取物的新用途，其中涉及的提取物制備方法如下用水和/或有機溶劑如甲醇乙醇石油醚氯仿等在溫度為60 100°C條件下回流提取。上述制備方法均涉及到乙醇回流提取，而地不容中的生物堿活性成分延胡索乙素易受光照和溫度的影響，脫氫氧化為結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的巴馬汀，加熱回流過程可能造成其損失，導(dǎo)致藥效活性的降低。目前，對海南地不容總生物堿的研究報道較少，制備出純度較高，藥效活性較大的海南地不容總堿提取物對開發(fā)海南熱帶藥用植物資源具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種純度較高、藥效活性較大的海南地不容總生物堿提取物。 本發(fā)明的另一目的是提供一種海南地不容總生物堿提取物的制備方法。本發(fā)明以海南地不容的塊根為原料，采用酸水冷浸，超聲輔助提取的方式提取，具體步驟如下(I)原料準(zhǔn)備將海南地不容塊根去除泥沙，切片后陰涼處風(fēng)干或低溫烘干，粉碎，作為加工的原料。⑵浸泡原料加入3 15倍體積、濃度為0. 01 10%的鹽酸或硫酸溶液浸泡I 72小時。⑶超聲超聲提取I 4次，每次15 45分鐘。⑷過濾提取液過濾后合并，進(jìn)行下一步處理。過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用澄清劑。(5)純化提取液用同等濃度的酸水稀釋I 5倍后(上樣濃度為0. I lmg/ml，以總生物堿量計)過強酸性陽離子交換樹脂柱，流速0. 5 5ml/min，水洗脫至無多糖反應(yīng)；再用2 12%氨水乙醇洗脫，收集洗脫液，合并。(6)干燥將洗脫液減壓回收溶劑至干，即得海南地不容總生物堿提取物。上述方法所制備的提取物可以加入各種輔料和藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)上常規(guī)的賦形劑、粘合劑、稀釋劑、填充劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑
坐寸o上述方法所制備的提取物可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備多種劑型，如注射液、片劑、粉劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、膏劑、霜劑、散劑等。本發(fā)明總堿提取物含量測定可采用以下方法中的一種或兩種I.總生物堿含量測定精密稱取延胡索乙素對照品約2mg，置IOOml棕色容量瓶中，用枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(PH = 4)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2、3、4、5、6、7ml置分液漏斗中，各加入溴甲酚綠2ml，枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(ph = 4)分別為6、5、4、3、2、lml,氯仿IOml,充分振搖后,靜置Ih,取氯仿層于412nm處測定吸光度值。以延胡索乙素對照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取海南地不容總堿提取物約5mg，置50ml棕色容量瓶中，用枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH = 4)溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取Iml置分液漏斗中，加入溴甲酚綠2ml，枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(ph = 4)7ml，氯仿10ml，充分振搖后，靜置lh，取氯仿層于412nm處測定吸光度值，依線性方程計算即得。2.巴馬汀、延胡索乙素、防己諾林堿含量測定色譜條件色譜柱Hypersil_C180DS2(4. 6mmX 250mm, 5 u m);流動相甲醇-0. I %三乙胺，流速=ImL mi n—1 ;柱溫25 °C ;檢測波長28 Inm ;進(jìn)樣量10u I0線性關(guān)系分別精密吸取鹽酸巴馬汀對照品溶液(濃度為5，10，15，20，25，30iil，延胡索乙素對照品溶液(濃度為 0. 0326mg 111^)3,5,10,15,20,25 u 1，防己諾林堿對照品溶液(濃度為0. 48mg mL—1) 3，5，10，15，20 u 1，在上述色譜條件下依次進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取海南地不容總堿提取物約25mg，置50ml量瓶中，加入甲醇超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45iim微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。以IOiU進(jìn)樣，測定相應(yīng)峰面積，計算含量。本發(fā)明海南地不容總堿提取物中總堿的重量百分含量為70% 80%，巴馬汀的重量百分含量為20 30%,延胡索乙素的重量百分含量為3 5%,防己諾林堿的重量百分含量為40 50%。以下是相關(guān)藥效學(xué)實驗I、海南地不容對醋酸致小鼠炎性疼痛的作用方法昆明小鼠50只，體重18 22g，雌雄各半，隨機分為5組，分別為陽性對照組(阿司匹林0. 2g/kg)、溶劑對照組(0. 5% CMC-Na)海南地不容總堿6mg/kg、12mg/kg、24mg/kg三個劑量組，灌胃給藥，0. 4ml/10g體重，連續(xù)5天，末次給藥后I. Oh腹腔注射0. 6%醋酸
0.2ml/只，記錄15分鐘內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，并計算抑制率。結(jié)果如表I所示，海南地不容總堿高、中劑量組和陽性對照組對醋酸所致的炎性疼痛均有明顯的抑制作用，差異顯著，而相對于給藥劑量來說，給藥組的高、中劑量組給藥量分別小于陽性對照組的1/8和1/16，表明海南地不容總堿的鎮(zhèn)痛作用較阿斯匹林更為顯著。表I海南地不容對醋酸致小鼠炎性疼痛作用
組別劑量(mg/kg) 扭體次數(shù)抑制率(％)
陽性對照組20014.8 + 13.1 *56.85
溶劑對照組----34.3 ±18.12
給藥高劑量組2415.1 ±11.47 *55.98
給藥中劑量組1219.4 ±11.32**43.44
給藥低劑量組627.9± 14.7818.66與溶劑對照組比較，*p < 0. 02，林p < 0. 052、海南地不容總堿對二甲苯之小鼠耳廓腫脹急性炎癥的作用方法昆明小鼠50只，體重18 22g，雄性，隨機分為5組，分別為陽性對照組(阿司匹林0. 2g/kg)、溶劑對照組(0. 5% CMC-Na)海南地不容總堿6mg/kg、12mg/kg、24mg/kg三個劑量組，灌胃給藥，0. 4ml/10g體重，連續(xù)5天，末次給藥后I. OhdfO. Iml 二甲苯均勻涂于小鼠右耳兩面致炎，左耳不涂作為對照。致腫I. Oh脫頸椎處死小鼠。用直徑8_的打孔器于兩耳同一部位取材，稱重。計算兩者的重量差及抑制率。結(jié)果如表2所示，海南地不容總堿高、中劑量組和陽性對照組對二甲苯所致的耳廓腫脹均有明顯的抑制作用，差異顯著，而相對于給藥劑量來說，給藥組的高、中劑量組給藥量分別小于陽性對照組的1/8和1/16，表明海南地不容總堿的抗炎作用遠(yuǎn)勝于阿斯匹林。表2海南地不容總堿對二甲苯之小鼠耳廓腫脹的作用(n = 10)
權(quán)利要求
1.海南地不容總生物堿提取物制備方法，包括 (1)原料準(zhǔn)備 將海南地不容塊根去除泥沙，切片后陰涼處風(fēng)干或低溫烘干，粉碎，作為加工的原料。
(2)浸泡 原料加入3 15倍體積，濃度為O. Ol 10%的鹽酸或硫酸溶液浸泡I 72小吋。
(3)超聲提取I 4次。
(4)過濾 提取液過濾后合并，進(jìn)行下一歩處理。
(5)純化 提取液用同等濃度的酸水稀釋I 5倍后(上樣濃度為O. I lmg/ml，以總生物堿量計)過強酸性陽離子交換樹脂柱，水洗脫至無多糖反應(yīng)；再用2 12%氨水こ醇洗脫，收集洗脫液，合并。
(6)干燥 將洗脫液回收溶劑至干，即得海南地不容總生物堿提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海南地不容總生物堿提取物，其特征在于該提取物由黎藥海南地不容塊根中提取獲得，并含有以下生物堿成分防己諾林堿、延胡索こ素、巴馬汀、粉防已堿等。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海南地不容總生物堿提取物，其特征在于總生物堿類成分總合以重量計為5 100%。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海南地不容總生物堿提取物，其特征在于其生物堿類成分還包括與某些酸如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸或甲酸、醋酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸等有機酸形成的鹽，以及與鈉、鉀、鈣、鐵、鋁、鋅、銅、鉻、鍶等金屬離子形成的金屬鹽或絡(luò)合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求I 4所述的海南地不容總生物堿提取物，其特征在于，所述的提取液通過酸水提取法或由甲醇、こ醇等溶劑提取，回收溶劑后溶于適當(dāng)濃度的酸水液得到。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、5所述的海南地不容總生物堿提取物制備方法，其特征在于，所述的陽離子交換樹脂可以是強酸性、弱酸性、大孔型、凝膠型等任何ー種類型，如001X3、001 X 7、D072等，優(yōu)選強酸性陽離子交換樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求I 4所述的海南地不容總生物堿提取物的應(yīng)用，其特征在于，該提取物可以單獨或與其他任何中西藥物或食物按任意比例配伍，制備成任何劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種從海南地不容塊根種提取得到的總生物堿提取物及其制備方法。其制備過程如下原料(海南地不容干燥塊根)-粉碎-加入適量0.01～10％的鹽酸或硫酸浸泡-超聲提取1～4次-過濾-強酸性陽離子交換樹脂純化-回收溶劑至于-海南地不容總生物堿提取物。該提取物主要包括左旋四氫巴馬汀、巴馬汀、防己諾林堿、粉防已堿等有效成分，海南地不容總生物堿的重量百分含量大于或等于70％，巴馬汀的重量百分含量大于或等于20％，防己諾林堿的重量百分含量大于或等于40％。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，至今未見對海南地不容總生物堿提取制備工藝的報道，本法操作流程簡單，產(chǎn)品純度較高，藥效作用明顯，適用于工業(yè)化生產(chǎn)和當(dāng)?shù)睾Ｄ系夭蝗菟幉馁Y源的開發(fā)利用。
文檔編號A61P29/00GK102670720SQ20111007136
公開日2012年9月19日 申請日期2011年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月16日
發(fā)明者朱毅 申請人:朱毅