氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥及相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥及相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。氨丁三醇能夠作為治療高尿酸血癥、泌尿系尿酸結(jié)石以及痛風(fēng)藥物應(yīng)用，成人每天使用的劑量為1～7g，用藥方式為靜脈滴注。本發(fā)明采用氨丁三醇促進(jìn)尿酸溶解排泄，由于氨丁三醇是有機(jī)氨基堿，不存在無機(jī)陽離子，能夠避免或削弱無機(jī)陽離子的抑制作用，故其促進(jìn)尿酸溶解及排泄效果優(yōu)于碳酸氫鈉，能夠用于治療高尿酸血癥、防治泌尿系尿酸結(jié)石和痛風(fēng)。另外，氨丁三醇為外來物質(zhì)，機(jī)體不會(huì)產(chǎn)生氨丁三醇物質(zhì)，因此用藥過程中，體內(nèi)氨丁三醇的濃度較碳酸氫鈉更好控制。
【專利說明】
氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥及相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于氨丁三醇新用途領(lǐng)域，尤其涉及氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥及相 關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 痛風(fēng)(gout)是長(zhǎng)期嘌呤代謝障礙、血尿酸增高引起的代謝性疾病，是一種古老的 疾病，在歐洲和北美較為多見。高尿酸血癥是痛風(fēng)的重要生化基礎(chǔ)，盡管痛風(fēng)的患病率遠(yuǎn)低 于高尿酸血癥。自20世紀(jì)50年代以后，日本、臺(tái)灣等地區(qū)經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展，痛風(fēng)及高尿酸血癥 患病逐漸增加。我國在20世紀(jì)80年代后的患病情況也有明顯的上升趨勢(shì)，且男性高于女性， 如2006年山東沿海地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查顯示高尿酸血癥的男性患病率為18.32%，痛風(fēng)為 1.94%。因此高尿酸血癥和痛風(fēng)已成為了我國的常見病和多發(fā)病。
[0003] 高尿酸血癥和痛風(fēng)的主要危害是因?yàn)槟蛩峄蚰蛩岢练e而導(dǎo)致急慢性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng) 腎病和尿酸性腎石病。嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量、勞動(dòng)能力，甚至導(dǎo)致腎功能衰竭危害生命。 因此對(duì)尚尿酸血癥和痛風(fēng)的防治一直是臨床關(guān)注的焦點(diǎn)之一。
[0004]尚尿酸血癥是痛風(fēng)的基礎(chǔ)，因此降低尿酸則可以有效防治痛風(fēng)；盡管尚尿酸血癥 的病因尚不完全清楚。人類的尿酸酶基因?yàn)榧倩颍荒鼙磉_(dá)尿酸酶，因此尿酸就成了嘌呤 類物質(zhì)的代謝終產(chǎn)物；由于尿酸在體內(nèi)環(huán)境的溶解度為70yg/mL(420yM)，血液、尿液或其他 體液高于此濃度很容易形成尿酸沉淀(痛風(fēng)）。
[0005] 根據(jù)目前的認(rèn)識(shí)，高尿酸血癥的形成大體歸納為尿酸來源過多和/或排泄過少。尿 酸的來源增多包括內(nèi)源性嘌呤類物質(zhì)的生成過多（如HPRT酶缺乏不能重復(fù)利用次黃嘌呤， 黃嘌呤氧化酶活性過高尿酸生成過多）和/或外源性嘌呤類物質(zhì)攝入過多。尿酸的腎臟排泄 占到總排泄量的2/3,其中以腎小管分泌最為重要。
[0006] 因此，目前防治高尿酸血癥的策略主要有三個(gè)，即減少攝入，抑制內(nèi)源性合成，以 及促進(jìn)腎臟排泄。對(duì)于促進(jìn)腎臟排泄來說，目前用的策略主要是堿化尿液(碳酸氫鈉)和抑 制尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(如苯溴馬隆等）。
[0007] 氨丁三醇，分子式為C4HnN03,為白色結(jié)晶；無臭，味微甜而帶苦，易溶于水。氨丁三 醇在我國有注射劑上市，是臨床用于治療代謝性酸中毒和呼吸性酸中毒的藥物，給藥后能 中和機(jī)體的揮發(fā)性酸(主要碳酸，二氧化碳)和代謝性酸(非揮發(fā)酸，如乳酸、酮酸等），中和 之后經(jīng)腎臟排泄。但該藥副作用較多，且有些比較嚴(yán)重，糾正代謝性酸中毒時(shí)不是首選藥。 另外，氨丁三醇刺激性較強(qiáng)，靜滴時(shí)，若漏于血管外，可引起組織壞死，并可引起血栓形成或 靜脈炎。大量快速滴入時(shí)，會(huì)導(dǎo)致呼吸中樞抑制，甚至使呼吸停止。本品還可引起低血糖、低 血壓、惡心、嘔吐等不良反應(yīng)。慢性呼吸性酸血癥及腎性酸血癥（如因腎小管排堿過度的腎 小管酸中毒)患者禁用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥及相關(guān)疾 病藥物中的應(yīng)用。臨床在用的藥物氨丁三醇注射液具有促尿酸溶解和排泄作用的新功能， 其效果優(yōu)于現(xiàn)有堿性藥物碳酸氫鈉。
[0009] 本發(fā)明提供氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明還提供氨丁三醇在作為治療或預(yù)防泌尿系尿酸結(jié)石藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明還提供氨丁三醇在作為治療或預(yù)防痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
[0012] 所述氨丁三醇成人每天使用的劑量為1~7g，可以根據(jù)不同人體體內(nèi)高尿酸血癥 情況自行調(diào)節(jié);若高尿酸血癥伴有代謝性酸中毒或呼吸性酸中毒，可將每日使用劑量調(diào)整 至7~llg〇
[0013] 所述氨丁三醇的給藥方式為靜脈滴注為最好，但也可以采用口服或注射。
[0014] 由于高尿酸是泌尿系尿酸結(jié)石、痛風(fēng)的基礎(chǔ)，促進(jìn)血液、尿液中的尿酸溶解排泄， 也能治療或預(yù)防痛風(fēng)、泌尿系尿酸結(jié)石。
[0015] 由于高尿酸血癥、痛風(fēng)病患者的血液、尿液中含有大量尿酸，理論上講，藥物堿性 越強(qiáng)，使用量越大(在身體允許范圍內(nèi)），尿酸的溶解度會(huì)越高，越容易排泄，但由于尿液中 的成分較為復(fù)雜以及尿酸本身性質(zhì)的原因，藥物的堿性并非影響尿酸溶解的唯一因素。
[0016] 本發(fā)明研究結(jié)果顯示，尿液中的無機(jī)金屬陽離子如〇82+，他+，1(+身 2+，順4+等會(huì)抑制 尿酸的溶解、排泄，堿性因素會(huì)促進(jìn)尿酸溶解，因此金屬陽離子和堿性因素成為一對(duì)矛盾 體。當(dāng)服用堿性藥物碳酸氫鈉后，增加的陽離子Na+會(huì)進(jìn)一步對(duì)抗HC〇3lf咸化尿液、血液，促進(jìn) 尿酸溶解排泄作用，當(dāng)碳酸氫鈉超過一定劑量后甚至?xí)档湍蛩岬娜芙舛?。特別地，體內(nèi)也 存在碳酸氫鈉，而且在尿液中有很大的波動(dòng)，這樣的話，如果碳酸氫鈉服用較少，排尿酸效 果不佳，服用較多則可能反而加重尿酸在泌尿系統(tǒng)的沉積，鈉鹽的攝入也會(huì)加重心血管和 腎臟負(fù)擔(dān)。故為克服碳酸氫鈉帶來的缺點(diǎn)，本發(fā)明采用氨丁三醇促進(jìn)尿酸溶解排泄。由于氨 丁三醇是有機(jī)氨基堿，不存在無機(jī)陽離子，能夠避免或削弱無機(jī)陽離子的抑制作用，故其促 進(jìn)尿酸溶解效果優(yōu)于碳酸氫鈉，能夠用于治療高尿酸血癥及痛風(fēng)等病的防治。本發(fā)明又通 過模擬尿液試驗(yàn)，動(dòng)物試驗(yàn)得到了治療高尿酸血癥的濃度或參考劑量范圍。
[0017] -直以來，由于氨丁三醇在治療代謝性酸中毒等疾病不良反應(yīng)較多，故在治療高 尿酸血癥及相關(guān)疾病方面，一直未見報(bào)道。代謝性酸中毒的主流認(rèn)識(shí)一般不包含尿酸，也從 未見尿酸性酸中毒臨床報(bào)道。本發(fā)明將氨丁三醇用于高尿酸血癥及相關(guān)疾病的治療，其在 使用方面不同于酸中毒的使用。用氨丁三醇治療代謝性酸中毒或呼吸性酸中毒是要全身性 地中和體內(nèi)的酸，每天的劑量是7.2-10.8克；而用于泌尿系尿酸溶解和排泄顯然不需要這 么大的劑量，合理地減少用藥劑量將有利于減少不良反應(yīng)。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明采用氨丁三醇促進(jìn)尿酸溶解 排泄。由于氨丁三醇是有機(jī)氨基堿，不存在無機(jī)陽離子，能夠削弱無機(jī)陽離子的抑制作用， 故其促進(jìn)尿酸溶解及排泄效果優(yōu)于碳酸氫鈉，能夠用于治療高尿酸血癥、防治泌尿系尿酸 結(jié)石和痛風(fēng)。另外，氨丁三醇為外來物質(zhì)，機(jī)體不會(huì)產(chǎn)生氨丁三醇物質(zhì)，因此用藥過程中，體 內(nèi)氨丁三醇的濃度較碳酸氫鈉更好控制。
【附圖說明】
[0019] 圖1為尿酸在不同堿性介質(zhì)中的溶解度變化曲線圖；
[0020] 圖2為尿酸在不同近中性介質(zhì)中的溶解度變化曲線圖；
[0021] 圖3為尿酸在四種氨基酸介質(zhì)中的溶解度變化曲線圖；
[0022] 圖4為尿酸在碳酸鹽介質(zhì)中的溶解度變化曲線圖；
[0023] 圖5為非離子型中性物質(zhì)對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度變化曲線圖；
[0024] 圖6為近中性陽離子對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度變化曲線圖；
[0025] 圖7為近中性陰離子對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度變化曲線圖；
[0026] 圖8為尿酸在氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液中的溶解度變化曲線圖；
[0027] 圖9為尿酸在氯化鈉氨丁三醇等摩爾混合溶液和氯化鈉碳酸氫鈉等摩爾混合溶液 中的溶解度曲線圖；
[0028]圖10為尿酸在150mM氯化鈉氨丁三醇混合溶液(氨丁三醇為梯度濃度）和150mM氯 化鈉碳酸氫鈉混合溶液(碳酸氫鈉為梯度濃度）中的溶解度曲線圖；
[0029]圖11為尿酸在氯化鉀氨丁三醇等摩爾混合溶液和氯化鉀碳酸氫鈉等摩爾混合溶 液中的溶解度曲線圖；
[0030] 圖12為尿酸在5mM氯化鉀氨丁三醇混合溶液(氨丁三醇為梯度濃度)和5mM氯化鉀 碳酸氫鈉混合溶液(碳酸氫鈉為梯度濃度）中的溶解度曲線圖；
[0031] 圖13為尿酸在氯化鎂氨丁三醇等摩爾混合溶液和氯化鎂碳酸氫鈉等摩爾混合溶 液中的溶解度曲線圖；
[0032]圖14為尿酸在5mM氯化鎂氨丁三醇混合溶液(氨丁三醇為梯度濃度)和5mM氯化鎂 碳酸氫鈉混合溶液(碳酸氫鈉為梯度濃度）中的溶解度曲線圖；
[0033]圖15為尿酸在氯化鈣氨丁三醇等摩爾混合溶液和氯化鈣碳酸氫鈉等摩爾混合溶 液中的溶解度曲線圖；
[0034]圖16為尿酸在5mM氯化鈣氨丁三醇混合溶液(氨丁三醇為梯度濃度)和5mM氯化鈣 碳酸氫鈉混合溶液(碳酸氫鈉為梯度濃度）中的溶解度曲線圖；
[0035]圖17為尿酸在氯化銨氨丁三醇等摩爾混合溶液和氯化銨碳酸氫鈉等摩爾混合溶 液中的溶解度曲線圖；
[0036]圖18為尿酸在35mM氯化銨氨丁三醇混合溶液(氨丁三醇為梯度濃度)和35mM氯化 銨碳酸氫鈉混合溶液(碳酸氫鈉為梯度濃度）中的溶解度曲線圖；
[0037]圖19為尿酸在70mM氯化銨氨丁三醇混合溶液(氨丁三醇為梯度濃度)和70mM氯化 銨碳酸氫鈉混合溶液(碳酸氫鈉為梯度濃度）中的溶解度曲線圖；
[0038]圖20為氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸在無氯化銨模擬尿液中溶解度影響曲線圖；
[0039] 圖21為氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸在含35mM氯化銨模擬尿液中溶解度影響曲線 圖；
[0040] 圖22為氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸在含70mM氯化銨模擬尿液中溶解度影響曲線 圖；
[0041] 圖23為家兔腎臟示意圖，其中A-D分別為正常腎臟、模型組腎臟、造模后碳酸氫鈉 治療組腎臟和造模后氨丁三醇治療組腎臟。
【具體實(shí)施方式】
[0042] 實(shí)施例1尿酸在不同堿性介質(zhì)的溶解度變化
[0043] 分別配制1M的氫氧化鈉(NaOH)、氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NAHC03)、N-乙基乙二 胺(NEEDA)、磷酸氫二鈉(Na2HP〇4)和醋酸鈉(NaAc)溶液。然后按照2倍梯度在帶蓋塑料透明 試管中依次稀釋得不同濃度（1~700mM)的堿性溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃 度的堿性溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉 末(配成飽和溶液），確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速 離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200iiL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè) 292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng) 稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18_20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖1。
[0044]從圖1可見，有機(jī)堿氨丁三醇和N-乙基乙二胺對(duì)尿酸的溶解性較好(或在高位輕度 回落），而無機(jī)堿(特別是碳酸鈉和碳酸氫鈉）只在一定范圍內(nèi)能促進(jìn)溶解，但高于一定濃度 后反而明顯不利于尿酸的溶解。因此，堿性是尿酸溶解的有利因素，不是唯一因素;如等摩 爾濃度的最強(qiáng)堿氫氧化鈉對(duì)尿酸的溶解性并不高于相應(yīng)濃度的氨丁三醇。
[0045]實(shí)施例2尿酸在不同近中性介質(zhì)中的溶解度變化
[0046] 分別配制1M的尿素(urea)、葡萄糖(glucose)、氯化鈉(NaCl)、硫酸鈉(Na2S〇4)、硝 酸鈉（NaN03)、氯化鉀（KC1)、氯化鈣（CaCl2)、氯化鎂(MgCl2)、硫酸鎂(MgSCk)和氯化銨 (NH 4C1)溶液。然后按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液（1~ 700mM)，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末， 連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末 (沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96 孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液若超出讀數(shù)范 圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18_20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖2。
[0047] 從圖2可見，不同濃度的近中性溶液對(duì)尿酸的溶解度有一定影響，但較小，遠(yuǎn)不如 堿性溶液。
[0048] 實(shí)施例3尿酸在四種氨基酸介質(zhì)中的溶解度變化
[0049]分別配制1M的精氨酸(arginine)、賴氨酸（lysine)、甘氨酸（glysine)和組氨酸 (histidine)溶液。然后按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液(1 ~700mM)，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸（分析純)粉 末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸 粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200此加入到透紫外 的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出 讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見 圖3。
[0050] 從圖3可見，不同濃度的氨基酸溶液對(duì)尿酸的溶解度影響不同，其中精氨酸的堿性 最強(qiáng)，在一定范圍內(nèi)（200mM內(nèi)）溶解尿酸的能力最強(qiáng)，與氨丁三醇(Tris)相比，溶解尿酸的 能力稍弱。
[0051] 實(shí)施例4尿酸在不同碳酸鹽介質(zhì)中的溶解度變化
[0052] 分別配制1M的碳酸氫鈉(NaHC03)、碳酸氫銨(NH4HC03)、碳酸氫鉀(KHC0 3)、碳酸鈉 (Na2C03)和碳酸胍(G-C03)溶液。然后按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同 濃度的溶液(1~700mM)，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸 (分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未 溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加 入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清 液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn) 行，結(jié)果參見圖4。
[0053] 從圖4可見，不同濃度的碳酸鹽溶液對(duì)尿酸的溶解度影響不同，其中碳酸胍是碳酸 的有機(jī)堿鹽，促進(jìn)尿酸的溶解能力一直存在劑量相關(guān)性。雖然碳酸鈉的堿性要強(qiáng)于碳酸氫 鈉、碳酸氫鉀和碳酸氫銨，但在一定范圍內(nèi)同等摩爾濃度下的促尿酸溶解能力并不好。對(duì)于 碳酸氫鹽來說，碳酸氫銨超過10mM就不能再促進(jìn)尿酸溶解，反而不利于尿酸溶解;這種現(xiàn)象 也發(fā)生在60mM的碳酸氫鈉和120mM的碳酸氫鉀。這實(shí)際上也表明，陽離子對(duì)尿酸的溶解存在 較大的影響。
[0054] 實(shí)施例5非離子型中性物質(zhì)對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度影響
[0055] 分別配制1M的碳酸氫鈉(NaHC03)、尿素(urea)和葡萄糖(glucose)溶液。然后再將 1M碳酸氫鈉溶液分別和1M的尿素或1M葡萄糖等體積混合，得等摩爾比的碳酸氫鈉尿素溶液 (NaHC03+urea( 1:1))和碳酸氫鈉葡萄糖溶液(NaHC03+gluc〇se( 1:1))。然后按照2倍梯度在 帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度 的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確 保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離 心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù) 光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí) 驗(yàn)操作在18_20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖5。
[0056] 從圖5可見，將尿素或葡萄糖與碳酸氫鈉等摩爾混合后，在該混合溶液中，尿酸溶 解度的影響幾乎和在碳酸氫鈉溶液中沒有差別，由此說明中性的非離子型化學(xué)物質(zhì)對(duì)尿酸 在碳酸氫鈉的溶解度幾乎沒有影響。
[0057] 實(shí)施例6近中性陽離子對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度影響
[0058] 分別配制1M的碳酸氫鈉(NaHC03)、氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KC1)、鹽酸胍(G-CL)、氯 化鈣(CaCl2)、氯化鎂(MgCl2)和氯化銨(NH4C1)溶液。然后再將1M碳酸氫鈉溶液分別和1M的 氯化鈉（NaCl)、氯化鉀（KC1)、鹽酸胍(G-CL)、氯化鈣（CaCl 2)、氯化鎂(MgCl2)或氯化銨 (NH4C1)溶液等體積混合，得等摩爾比的碳酸氫鈉氯化鈉溶液(NaHC0 3+NaCl)、碳酸氫鈉氯化 鉀溶液(NaHC03+KCl)、碳酸氫鈉鹽酸胍溶液(NaHC0 3+G-CL)、碳酸氫鈉氯化鈣溶液(NaHC03+ CaCl2)、碳酸氫鈉氯化鎂溶液(NaHC0 3+MgCl2)和碳酸氫鈉氯化銨溶液(NaHC03+NH4Cl)。然后 按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為 lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ) 充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī) 上10，OOOrpm離心5分鐘，取上清液200此加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處 的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后 再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖6。
[0059]以上均為碳酸氫鈉和等摩爾濃度鹽的混合物，其中鹽的陰離子部分相同，均為氯 離子;不同的是陽離子部分。從圖6可見，不同的近中性陽離子的確對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的 溶解度存在不同影響，其中以鈣離子影響最大，鉀離子的影響最小。
[0060]實(shí)施例7近中性陰離子對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度影響。
[0061 ] 分別配制1M的碳酸氫鈉(NaHC〇3)、氯化鈉(NaCl)、硝酸鈉(NaN〇3)、醋酸鈉(NaAc)和 0.5M硫酸鈉（Na2S〇4)溶液。然后再將1M碳酸氫鈉溶液分別和1M的氯化鈉(NaCl)、硝酸鈉 (NaN0 3)、醋酸鈉(NaAc)或0.5M硫酸鈉(Na2S〇4)等體積混合，得碳酸氫鈉氯化鈉溶液(NaHC03 +NaCl)、碳酸氫鈉硝酸鈉溶液(NaHC03+NaN03)、碳酸氫鈉醋酸鈉溶液(NaHC0 3+NaAc)和碳酸 氫鈉硫酸鈉溶液(NaHC03+l/2Na2S〇4);以上溶液中碳酸氫鈉和不同鈉鹽是等摩爾比（按鈉離 子計(jì)）。然后按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的 最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上， 中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于 高速離心機(jī)上10, OOOrpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢 測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適 當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18_20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖7。
[0062] 以上均為碳酸氫鈉和等濃度陽離子鹽的混合物，其中鹽的陽離子部分相同，均為 鈉離子;不同的是陽離子部分。從圖7可見，不同的陰離子對(duì)尿酸在碳酸氫鈉中的溶解度影 響是相同的。
[0063] 實(shí)施例8氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸的溶解度影響
[0064] 分別配制1M的氨丁三醇(Tris)和碳酸氫鈉(NaHC03)溶液。然后再將1M的氨丁三醇 和碳酸氫鈉溶液等體積混合，得氨丁三醇碳酸氫鈉溶液(Tris-NaHC03)。然后將以上溶液按 照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為 lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ) 充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī) 上10，OOOrpm離心5分鐘，取上清液200此加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處 的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后 再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖8。
[0065]從圖8可見，氨丁三醇對(duì)尿酸的溶解能力很強(qiáng)，而碳酸氫鈉則弱很多；將氨丁三醇 和碳酸氫鈉等摩爾混合后，氨丁三醇溶解尿酸的能力有所下降，但也比單純的碳酸氫鈉強(qiáng) 很多，尤其是在60mM以下。
[0066]實(shí)施例9氯化鈉對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉溶解尿酸能力的影響。
[0067] 分別配制1M的氨丁三醇（Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和氯化鈉(NaCl)溶液。然后再 將1M的氯化鈉和氨丁三醇或碳酸氫鈉溶液等體積混合，得氨丁三醇氯化鈉溶液（Tris-NaCl)和碳酸氫鈉氯化鈉溶液(NaHC03-NaCl)。然后將以上溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透 明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加 入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試 管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取 上清液200yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算 尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖9。從圖9可見，等摩爾比的氨丁三醇氯化鈉溶液對(duì)尿酸的溶解 能力強(qiáng)于碳酸氫鈉氯化鈉溶液。
[0068] 另分別配制1M的氨丁三醇（Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和300mM氯化鈉(NaCl)溶液。 然后將氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度 的溶液，然后將不同濃度的氨丁三醇溶液或碳酸氫鈉溶液再與300mM的氯化鈉等體積混合， 得氨丁三醇150mM氯化鈉溶液(Tris-150mM NaCl)和碳酸氫鈉150mM氯化鈉溶液(NaH⑶3-150mMNaCl)。每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉 末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸 粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200此加入到透紫外 的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出 讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見 圖10。從圖10可見，氨丁三醇150mM氯化鈉溶液對(duì)尿酸的溶解能力強(qiáng)于碳酸氫鈉150mM氯化 鈉溶液。
[0069] 實(shí)施例10氯化鉀對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉溶解尿酸能力的影響。
[0070] 分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC〇3)和氯化鉀(KC1)溶液。然后再將 1M的氯化鉀和氨丁三醇或碳酸氫鈉溶液等體積混合，得氨丁三醇氯化鉀溶液(Tris-KCl)和 碳酸氫鈉氯化鉀溶液(NaHC0 3-KCl)。然后將以上溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中 依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的 尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可 見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200 yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量； 上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán) 境進(jìn)行，結(jié)果參見圖11。從圖11可見，等摩爾比的氨丁三醇氯化鉀溶液對(duì)尿酸的溶解能力強(qiáng) 于碳酸氫鈉氯化鉀溶液。
[0071] 另分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC〇3)和10mM氯化鉀(KC1)溶液。然 后將氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的 溶液，然后再將不同濃度的氨丁三醇溶液或碳酸氫鈉溶液再與10mM的氯化鉀等體積混合， 得氨丁三醇5mM氯化鉀溶液（Tris-5mM KC1)和碳酸氫鈉5mM氯化鉀鈉溶液（NaH⑶3-5mM KC1)。每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連 續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末 (沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96 孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù) 范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖 12。從圖12可見，氨丁三醇5mM氯化鉀溶液對(duì)尿酸的溶解能力強(qiáng)于碳酸氫鈉5mM氯化鉀溶液。
[0072] 實(shí)施例11氯化鎂對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉溶解尿酸能力的影響。
[0073] 分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和氯化鎂(MgCl2)溶液。然后再 將1M的氯化鎂和氨丁三醇或碳酸氫鈉溶液等體積混合，得氨丁三醇氯化鎂溶液（Tris-MgCl2)和碳酸氫鈉氯化鎂溶液(NaHC0 3_MgCl2)。然后將以上溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透 明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加 入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試 管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取 上清液200yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算 尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖13。從圖13可見，等摩爾比的氨丁三醇氯化鎂溶液對(duì)尿酸的溶 解能力在低濃度(小于5mM時(shí))略強(qiáng)于碳酸氫鈉氯化鎂溶液，在高濃度(大于5mM時(shí))略低于碳 酸氫鈉氯化鎂溶液，但總體上看影響均較小(對(duì)比圖14)。
[0074]另分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和10mM氯化鎂(MgCl2)溶液。 然后將氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度 的溶液，然后再將不同濃度的氨丁三醇溶液或碳酸氫鈉溶液再與10mM的氯化鎂等體積混 合，得氨丁三醇5mM氯化鎂溶液（Tris-5mM MgCl2)和碳酸氫鈉5mM氯化鎂溶液(NaHC03-5mM MgCl2)。每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末， 連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末 (沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96 孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù) 范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖 14。從圖14可見，氨丁三醇5mM氯化鎂溶液對(duì)尿酸的溶解能力強(qiáng)于碳酸氫鈉5mM氯化鎂溶液。
[0075]實(shí)施例12氯化鈣對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉溶解尿酸能力的影響。
[0076] 分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和氯化鈣(CaCl2)溶液。然后再 將1M的氯化鈣和氨丁三醇或碳酸氫鈉溶液等體積混合，得氨丁三醇氯化鈣溶液（Tris-CaCl2)和碳酸氫鈉氯化鈣溶液(NaHC0 3-CaCl2)。然后將以上溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透 明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加 入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試 管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取 上清液200yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算 尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖15。從圖15可見，等摩爾比的氨丁三醇氯化鈣溶液對(duì)尿酸的溶 解能力在低濃度(小于3mM時(shí))略強(qiáng)于碳酸氫鈉氯化媽溶液，在高濃度(大于3mM時(shí))略低于碳 酸氫鈉氯化鈣溶液，但總體上看影響均較小(對(duì)比圖16)。
[0077]另分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和10mM氯化鈣(CaCl2)溶液。 然后將氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度 的溶液，然后再將不同濃度的氨丁三醇溶液或碳酸氫鈉溶液再與10mM的氯化鈣等體積混 合，得氨丁三醇5mM氯化鈣溶液（Tris-5mM CaCl2)和碳酸氫鈉5mM氯化鈣溶液(NaHC03-5mM CaCl2)。每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末， 連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末 (沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96 孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù) 范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖 16。從圖16可見，氨丁三醇5mM氯化鈣溶液對(duì)尿酸的溶解能力強(qiáng)于碳酸氫鈉5mM氯化鈣溶液。
[0078]實(shí)施例13氯化銨對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉溶解尿酸能力的影響 [0079] 分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和氯化銨(NH4C1)溶液。然后再 將1M的氯化銨和氨丁三醇或碳酸氫鈉溶液等體積混合，得氨丁三醇氯化銨溶液（Tris- NH4C1)和碳酸氫鈉氯化銨溶液(NaHC03-NH4Cl)。然后將以上溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透 明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液，每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加 入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試 管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取 上清液200yL加入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算 尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖17。從圖17可見，等摩爾比的氨丁三醇氯化銨溶液對(duì)尿酸的溶 解能力在低濃度(小于10mM時(shí))強(qiáng)于碳酸氫鈉氯化銨溶液，在高濃度(大于10mM時(shí))則影響較 為復(fù)雜。
[0080] 另分別配制1M的氨丁三醇(TriS)、碳酸氫鈉(NaHC〇3)和70mM氯化銨(NH4C1)溶液。 然后將氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度 的溶液，然后再將不同濃度的氨丁三醇溶液或碳酸氫鈉溶液再與70mM的氯化銨等體積混 合，得氨丁三醇35mM氯化銨溶液（Tris-35mM NH4C1)和碳酸氫鈉35mM氯化銨溶液(NaHC03-35mM NH4CI)。每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純） 粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿 酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200此加入到透紫 外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超 出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參 見圖18。從圖18可見，35mM氯化銨對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸的溶解影響較為復(fù)雜，總體 上看，當(dāng)氨丁三醇溶液濃度小于5mM時(shí)，尿酸溶解度大于相應(yīng)濃度的碳酸氫鈉。
[0081 ] 另再分別配制1M的氨丁三醇(Tris)、碳酸氫鈉(NaHC03)和140mM氯化銨(NH4C1)溶 液。然后將氨丁三醇和碳酸氫鈉溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同 濃度的溶液，然后再將不同濃度的氨丁三醇溶液或碳酸氫鈉溶液再與140mM的氯化銨等體 積混合，得氨丁三醇70mM氯化銨溶液（Tris-70mM NH4C1)和碳酸氫鈉70mM氯化銨溶液 (NaHC03-70mM NH4C1)。每個(gè)試管的最終體積為lmL。在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸 (分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未 溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200此加 入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清 液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn) 行，結(jié)果參見圖19。從圖19可見，70mM氯化銨對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸的溶解影響較更 為復(fù)雜，總體上看，當(dāng)氨丁三醇溶液濃度小于3mM時(shí)，尿酸溶解度大于相應(yīng)濃度的碳酸氫鈉。
[0082] 該實(shí)施例表明銨離子對(duì)尿酸有較大的不利影響，根據(jù)資料，尿液中的銨離子濃度 最多有可能達(dá)到70mM。由于碳酸氫鈉可由內(nèi)源性產(chǎn)生，在尿液中的濃度很難控制，容易導(dǎo)致 碳酸氫鈉濃度過高而不利于泌尿系的尿酸溶解;相比之下，氨丁三醇為外源性物質(zhì)，在尿液 中的濃度具有更好的調(diào)節(jié)性。
[0083] 實(shí)施例14模擬尿液對(duì)氨丁三醇和碳酸氫鈉溶解尿酸能力的影響
[0084] 從上面的實(shí)施例可以看到，除堿性外，陽離子是影響尿酸溶解度的重要因素。根據(jù) 尿液中的可能離子變化，銨離子的影響是最大的，因?yàn)槟蛞褐械匿@離子最高可達(dá)70mM甚至 更多，而其他主要離子如鉀、鈣、鎂、鈉離子都在血清水平附近波動(dòng)。為了能直接模擬尿液， 考察氨丁三醇和碳酸氫鈉對(duì)尿酸在模擬尿液中的影響，特固定鈉離子、鉀離子、鈣離子和鎂 離子的濃度，銨離子設(shè)0、35和70mM三個(gè)梯度。
[0085] 分別配制1M的氨丁三醇(Tr i s)和碳酸氫鈉(NaHC03)溶液。然后分別將這兩種溶液 按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液。另配制2倍urine溶液(模 擬尿液），該溶液含300mM氯化鈉、10mM氯化鉀、10mM氯化鈣和10mM氯化鎂。另再配制2倍 NaHC〇3_urine溶液，該溶液含60mM碳酸氫鈉、300mM氯化鈉、10mM氯化鉀、10mM氯化媽和10mM 氯化鎂。隨后將不同梯度濃度的氨丁三醇溶液分別與2倍urine溶液或2倍NaHC0 3-urine溶 液等體積混合，分別得1'1^8-111'；[116-01111順401溶液和1'1'18-似11(1)3 -111'；[116-0111]\1顯4〇1溶液。 同時(shí)也將不同梯度濃度的碳酸氫鈉溶液與2倍urine溶液等體積混合得NaHC03-urine-0mM NH4CI溶液。每個(gè)試管的最終體積為lmL，然后在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸（分析 純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的 尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透 紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果 超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果 參見圖20。從圖20可見，在OmM銨離子模擬尿液，只要有氨丁三醇的存在，對(duì)尿酸的溶解度就 明顯增大，表明氨丁三醇在模擬無銨尿液中，其增溶尿酸的能力是明顯的。
[0086]另分別配制1M的氨丁三醇(Tris)和碳酸氫鈉(NaHC03)溶液。然后分別將這兩種溶 液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液。另配制2倍urine-35mM NH4C1溶液，該溶液含300mM氯化鈉、10mM氯化鉀、10mM氯化鈣、10mM氯化鎂和70mM氯化銨。另 再配制2倍NaHC0 3-urine-35mM NH4C1溶液，該溶液含60mM碳酸氫鈉、300mM氯化鈉、10mM氯化 鉀、1 OmM氯化鈣、1 OmM氯化鎂和70mM氯化銨。隨后將不同梯度濃度的氨丁三醇溶液分別與2 倍urine_35mM NH4CI溶液或2倍NaHC〇3-urine_35mM NH4CI溶液等體積混合，分別得Tris-urine_35mM NH4CI溶液和Tris-NaHC〇3-urine-35mM NH4CI溶液。同時(shí)也將不同梯度濃度的 碳酸氫鈉溶液與2倍111'；[116-35111]\1顯4〇1溶液等體積混合得似]^〇3 -111'；[116-35111]\1順4〇1溶液。 每個(gè)試管的最終體積為lmL，然后在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸(分析純)粉末，連續(xù) 振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未溶解的尿酸粉末(沉 淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200yL加入到透紫外的96孔 板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清液如果超出讀數(shù)范 圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18_20°C的環(huán)境進(jìn)行，結(jié)果參見圖21。 從圖21可見，在35mM銨離子模擬尿液，只要有氨丁三醇不超過100mM，就能明顯增加尿酸的 溶解度，表明氨丁三醇在含35mM銨離子的模擬尿液中，其增溶尿酸的能力也是明顯的。 [0087]另外，分別再配制1M的氨丁三醇（Tris)和碳酸氫鈉(NaHC03)溶液。然后分別將這 兩種溶液按照2倍梯度在帶蓋塑料透明試管中依次稀釋得不同濃度的溶液。另配制2倍 urine-70mM NH4C1溶液，該溶液含300mM氯化鈉、10mM氯化鉀、10mM氯化鈣、10mM氯化鎂和 140mM氯化銨。另再配制2倍NaHC0 3-urine-70mM NH4C1溶液，該溶液含60mM碳酸氫鈉、300mM 氯化鈉、1 OmM氯化鉀、1 OmM氯化鈣、1 OmM氯化鎂和140mM氯化銨。隨后將不同梯度濃度的氨丁 三醇溶液分別與2倍urine-70mM NH4C1溶液或2倍NaHC03-urine-70mM NH4C1溶液等體積混 合，分別得Tris-urine-70mM NH4C1 溶液和Tris-NaHC03-urine-70mM NH4C1 溶液。同時(shí)也將 不同梯度濃度的碳酸氫鈉溶液與2倍urine-70mM NH4C1溶液等體積混合得NaHC03-urine- 70mM NH4C1溶液。每個(gè)試管的最終體積為lmL，然后在不同濃度的溶液中加入足量的尿酸 (分析純)粉末，連續(xù)振搖4小時(shí)以上，中途適當(dāng)補(bǔ)充尿酸粉末，確保檢測(cè)前試管中有可見未 溶解的尿酸粉末(沉淀）。檢測(cè)前置于高速離心機(jī)上l〇,〇〇〇rpm離心5分鐘，取上清液200此加 入到透紫外的96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)292nm處的光密度，根據(jù)光密度計(jì)算尿酸含量;上清 液如果超出讀數(shù)范圍則可用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作在18-20°C的環(huán)境進(jìn) 行，結(jié)果參見圖22。從圖22可見，在70mM銨離子模擬尿液中，只要氨丁三醇不超過50mM，就能 明顯增加尿酸的溶解度，表明氨丁三醇在含70mM銨離子的模擬尿液中，其增溶尿酸的能力 也是明顯的。
[0088]為了精確控制溶液中的物質(zhì)，在氨丁二醇促尿液中尿酸溶解的實(shí)施不例方面米用 模擬尿液，根據(jù)已有知識(shí)控制尿液中的主要物質(zhì)濃度。
[0089] 實(shí)施例15氨丁三醇注射液降低高尿酸血癥家兔的血清尿酸水平并保護(hù)腎臟
[0090] 取32只健康雄性家兔，體重1.5-2.0公斤/只，分為4組，即正常對(duì)照組、高尿酸血癥 模型組、碳酸氫鈉治療組和氨丁三醇治療組。正常對(duì)照組常規(guī)飲食，飼養(yǎng)5天，第5天烏拉坦 (lg/kg)麻醉，取血和腎臟；高尿酸血癥模型組腹腔注射腺嘌呤（200mg/kg)和氧嗪酸鉀 (50mg/kg)混懸液，每天一次，造模5天，末次給藥后用烏拉坦（lg/kg)麻醉動(dòng)物，末次給藥后 0.5-1小時(shí)耳緣靜脈滴注氯化鈉注射液(6.8mL/kg，半小時(shí)內(nèi)滴完）；碳酸氫鈉治療組每天腹 腔注射腺噪呤(200mg/kg)和氧嗪酸鉀(50mg/kg)混懸液，連續(xù)5天，末次造模給藥后用烏拉 坦（lg/kg)麻醉動(dòng)物，末次造模給藥0.5-1小時(shí)耳緣靜脈滴注碳酸氫鈉注射液(5%，4.6mL/ kg，即2.72mmol/kg，半小時(shí)內(nèi)滴完）；氨丁三醇治療組每天腹腔注射腺噪呤(200mg/kg)和氧 嗪酸鉀(50mg/kg)混懸液，連續(xù)5天，末次造模給藥后用烏拉坦（lg/kg)麻醉動(dòng)物，末次造模 給藥0.5-1小時(shí)耳緣靜脈滴注氨丁三醇注射液(3.6 %，9.2mL/kg，即2.72mmol/kg，半小時(shí)內(nèi) 滴完）。第5天完成靜脈滴注后8小時(shí)，所有家兔在麻醉狀態(tài)下剪開后肢皮膚行股靜脈取血， 待血液凝固后于4°C3000rpm離心5分鐘取血清，用尿酸檢測(cè)試劑盒(鎢藍(lán)法)檢測(cè)血清尿酸 含量。結(jié)果參見表1。然后將動(dòng)物處死，摘取各組動(dòng)物腎臟，拍照觀察，見圖23。
[0091] 表1各組家兔血清尿酸水平(均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差）
[0093]在實(shí)施例15中，腺嘌呤是尿酸前體，能代謝能轉(zhuǎn)化成尿酸;家兔能表達(dá)尿酸酶，氧 嗪酸鉀則是尿酸酶抑制劑，使生成的尿酸不易在體內(nèi)降解。從表1中可以看出，碳酸氫鈉注 射液和氨丁三醇注射液均能降低血清尿酸，但同等摩爾劑量下的氨丁三醇注射液降低尿酸 的作用更強(qiáng)大。家兔藥物使用劑量越為人的3.3倍，上述家兔的劑量相當(dāng)于成人(體重70kg) 的劑量7g。
[0094]解剖分離出家兔腎臟，從圖23可見，正常家兔腎臟表面光滑并有光澤;模型組家兔 腎臟腫脹，可見大量結(jié)晶（尿酸）；碳酸氫鈉治療組腎臟也腫脹，表面仍可見白色結(jié)晶，但程 度較模型組輕;氨丁三醇治療組腎臟的腫脹程度較模型組輕，但腎臟表面未見明顯結(jié)晶。表 明同等劑量下，氨丁三醇對(duì)尿酸的排泄作用和對(duì)腎臟的保護(hù)作用強(qiáng)于碳酸氫鈉。
[0095]另外用同樣的方法設(shè)置正常組、模型組、碳酸氫鈉治療組和氨丁三醇治療。用腺嘌 呤和氧嗪酸鉀造模5天，第5天給予家兔靜脈滴注3.6 %三丁胺醇注射液1.3 lml/kg (0.391]11]1〇1/1^，相當(dāng)于成人劑量1〖）或給予家兔靜脈滴注5%碳酸氫鈉注射液0.651]11/1^ (0.39mmol/kg)，氨丁三醇注射液的降尿酸作用仍強(qiáng)于碳酸氫鈉注射液，見表2。
[0096]表2各組家兔血清尿酸水平(均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差）
[0098]以上實(shí)施例表明碳酸氫鈉攝入增加的同時(shí)也增加了金屬陽離子攝入，而金屬陽離 子的存在又會(huì)不利于尿酸的溶解。實(shí)際上，在純粹的碳酸氫鈉溶液中，溶解尿酸的最佳濃度 在60mM左右，過高或過低的碳酸氫鈉濃度均不利于尿酸溶解。因此，堿性是溶解尿酸的一個(gè) 重要因素，但不是唯一因素。比如，較碳酸氫鈉堿性更強(qiáng)的碳酸鈉在60mM濃度內(nèi)，其促尿酸 溶解能力還不如碳酸氫鈉。究其原因是因?yàn)榻饘訇栯x子對(duì)尿酸存在抑制作用，金屬鈉離子 濃度增加后會(huì)對(duì)抗堿性對(duì)尿酸的溶解作用。所以，使用碳酸氫鈉促尿酸溶解排泄存在一定 的風(fēng)險(xiǎn)，可能還會(huì)加重尿酸在泌尿系的沉積，因?yàn)樵谕鈦硖妓釟溻c的攝入下，尿液的碳酸氫 鈉濃度是有可能的超過60mM的。特別地，高尿酸患者的腎臟負(fù)擔(dān)本來就較重，再大量攝入金 屬鹽(碳酸氫鈉)勢(shì)必會(huì)加重腎臟負(fù)擔(dān)和心血管負(fù)擔(dān)。因此，增加堿性，排除或減少金屬離子 的不利作用在溶解和排泄尿酸中是同等重要的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 氨丁三醇在作為治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用。2. 氨丁三醇在作為治療或預(yù)防泌尿系尿酸結(jié)石藥物中的應(yīng)用。3. 氨丁三醇在作為治療或預(yù)防痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求1~3任一所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氨丁三醇成人每天使用的劑量 為1~7g〇5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氨丁三醇的給藥方式為靜脈滴注。
【文檔編號(hào)】A61P19/06GK105853401SQ201610340128
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月20日
【發(fā)明人】段為鋼, 高志毅, 殷華, 云宇
【申請(qǐng)人】云南中醫(yī)學(xué)院