Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在預防或治療胰腺纖維化藥物中的應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有預防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在預防或治 療胰腺纖維化藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 胰腺纖維化是各種原因所致慢性胰腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學特點，表現為大量成纖維細胞增生和富含連接組織的細胞外基質。是多種原因導致胰 腺損傷修復的結果，近期發(fā)現胰腺星狀細胞和多種細胞因子與胰腺纖維化有關，胰腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗胰腺纖維化藥物。
[0003] 胰腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中 尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2012年發(fā)表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗胰腺纖維化活性進行了 評價，其具有抗胰腺纖維化活性。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質量百分數分別為80%和20%。
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0008] 藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗胰腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物Virosaine A的制備
[0011] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法 D
[0013] 實施例2Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(235mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏 度攪拌Shdh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后 對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0015] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d，J=9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0016] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s)，79.95(s)，74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0019] 實施例3Virosaine A的0_(哌嗪基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0mmol)，碘化鉀（168mg，1 .Ommol)和無水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應 結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物III的淡棕色固體(123.2mg，71 % )。
[0021] MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.90(s，lH)，4.04(s，lH)，3.59(s，lH)，3.50(s，2H)， 3.40(d，J=65.9Hz，lH)，2.64(s，4H)，2.54(s，2H)，2.31(s，4H)，2.22(s，lH)，1.62(s，2H)， 1.56(s，lH)，1.43(s，2H)，0.97(s，lH).
[0022] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.84(s)，106.72(s)，79.94(s)，74.33(s)，66.72(d， J=9.2Hz),54.45(s),54.16(s),45.25(s),44.20(s),35.56(s),25.86(s),21.87(s).
[0023] HRMS(ESI):m/z[M+H].calcd for Ci8H26N3〇4:348.1923;found:348.1927。
[0026] 實施例4Virosaine A的0_(咪唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0027] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5 ? Ommo 1)，碘化鉀（2 5 2mg，1 ? 5mmo 1)和咪唑（8 7 Omg，1 Ommo 1)，混合物加熱回流2h。反應結束 后將反應液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:0.3，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物IV的淡棕色固體(144. lmg，71 % )。
[0028] XH NMR(500MHz,DMS0-d6)87.86(s,lH),7.12(s,lH),6.71(s,lH),5.99(s,lH), 4.09(s,lH),3.89(d,J=16.4Hz,2H),3.80(s,2H),3.58(s,lH),3.35(s,lH),2.31(s,lH), 1.68(s,lH),1.58(s,2H),1.44(s,2H).
[0029] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)13C 匪R(125MHz，Common 匪R Solvents)Sl71.82(s), 139.64(s),128.67(s),119.31(s),106.70(s),79.92(s),74.31(s),67.61(s),66.66(s), 44.20(s),43.75(s),35.52(s),25.85(s),21.86(s).
[0030] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci7H2〇N3〇4:330.1454;found:330.1458。
[0032 ]實施例5組合物抗胰腺纖維化活性 [0033] 1 材料
[0034] 1 ? 1動物Wistar大鼠，雄性，體重180-200g。
[0035] 1.2組合物劑量:0.911^/1^。
[0036] 組合物的制備：將研磨之后過200目網的80mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網的20mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0037] 2實驗方法
[0038] 2.1造模方法:Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現 胰臟腺細胞減少，間質內脂肪及結締組織的增生。
[0039] 2.2分組及給藥方法
[0040]模型大鼠隨機分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0041] 2.3檢測指標
[0042] 2.3.1實驗結束時取胰臟稱重。
[0043] 2.3.2胰臟羥脯氨酸含量測定取10011^樣本在水中勻漿，110°(：1(^11(：1中水解20小 時。HC1用氮氣揮發(fā)，水解產物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml枸櫞酸磷酸緩沖液 (0.15M枸櫞酸加0.6M磷酸氫二鈉)和0.5ml溶于9M磷酸的1M過碘酸混合。加1.75ml提取緩沖 液(5份甲苯:5份2-甲基-卜丙醇:2份1-丙醇），震蕩30min，離心。組織相(0.6ml)與Ehrlich, s試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-輕-1-脯氨酸制作標準曲線計算濃度，含量 以ug/g組織表示。
[0044] 2.3.3組織學檢查胰臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[0045] 3 結果
[0046] 3.1組合物對大鼠胰臟臟器系數的影響
[0047] 實驗結束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和胰臟重并計算其與體重的比值(胰臟 臟器系數），結果見表1。組合物對胰臟臟器系數的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物III和化合物IV對胰臟臟器系數的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0048]表 1
[0050] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0051] 3.2胰臟羥脯氨酸含量測定
[0052] 實驗結束時，對各組大鼠進行肺部羥脯氨酸含量測定，結果如表2。組合物對羥脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異?；衔颕II和化合物IV對羥脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0053] 表 2
[0055] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0056] 3.3組織學檢查
[0057]實驗結束時，將大鼠處死、解剖;標本常規(guī)包埋、固定、HE染色，鏡檢。
[0058]結果:模型組第60天可見胰導管周圍嚴重炎癥反應;嗜中粒細胞核淋巴細胞浸潤， 間質水腫，出血以及偶見胰泡細胞壞死;胰泡細胞消失位置及胰泡間出現纖維化。
[0059] 組合物可減少炎癥反應和纖維化。評分結果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0060] 表 3
[0062] *表示p〈0.05,與模型組比較;空白對照組的炎癥細胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0063] 結論:本發(fā)明通過組合物對大鼠胰腺纖維化的影響，證實了組合物具有抗胰腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗胰腺纖維化的藥物。
[0064] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0065] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0066] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0067] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質量百分數分別為80%和20%，2. 如權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質量百分數分別為80%和20%充分混合。3. -種如權利要求1所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用。4. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的胰臟臟器系數下降。5. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的羥脯氨酸含量升高。6. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的炎癥細胞浸潤升高。
【文檔編號】A61P1/18GK105853427SQ201610278424
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】蔣登旭
【申請人】鎮(zhèn)江瑪珂蕘生物醫(yī)藥科技有限公司